CC BY
96. Content-Specific Interpretation Bias in Children with Varying Levels of Anxiety: The Role of Gender and Age / L. Mobach, M. Rinck, E.S. Becker [et al.] // Child Psychiatry & Human Development. - 2019.
7. Going global by adapting local: a review of recent human adaptation / S. Fan, M.E. Hansen, Y. Lo, S.A. Tishkoff // Science. - 2016. - 354. - P. 54-59.
8. Murray L. The development of anxiety disorders in childhood: an integrative review / L. Murray, C. Creswell, P. Cooper // Psychological Medicine. - 2009. - 39(9). - P. 1413-1423.
9. Psychometric properties of the Child Anxiety Life Interference Scale - Preschool Version / T.J. Gil-bertson, A.J. Morgan, R.M. Rapee [et al.] // Journal of Anxiety Disorders. - 2017. - 52. - P. 62-71.
10. Research Review: Is anxiety associated with negative interpretations of ambiguity in children and adolescents? A systematic review and meta-analysis / S. Stuijfzand, C. Creswell, A.P. Field [et al.] // The Journal of Child Psychology and Psychiatry. - 2017.
11. Stassart C. The role of parental anxiety sensitivity and learning experiences in children's anxiety sensitivity / C. Stassart, B. Dardenne, A.M. Etienne // The British journal of developmental psychology. -
2017. - 35 (3). - P. 359-375.
12. Weger M. High anxiety trait: A vulnerable phenotype for stress-induced depression / M. Weger, C. Sandi // Neuroscience & Biobehavioral Reviews. -
2018. - 87. - P. 27-37.
ИССЛЕДОВАНИЕ ЛЕЧЕБНОГО ДЕЙСТВИЯ КАПЕЛЬ ПЛЕТНЕВА №1 (ПРЕПАРАТА №1) НА МОДЕЛИ ЩЕЛОЧНОГО ОЖОГА ГЛАЗА У КРОЛИКОВ
Плетнев В.В.
Кандидат медицинских наук, докторант, Старший научный сотрудник Федерального государственного бюджетного учреждения «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации
STUDY OF THE THERAPEUTIC EFFECT OF PLETNEV DROPS NO. 1 (DRUG NO. 1) ON THE MODEL OF ALKALINE EYE BURN IN RABBITS
Pletnev V.
Candidate of medical Sciences, doctoral student, Senior researcher of Federal state budgetary institution "National medical research center of cardiology" of the Ministry of health of the Russian Federation
Аннотация
Проведенные исследования показали, что препарат №1 в дозе 0,05 мл/кг в разведении 1:15 стерильным физиологическим раствором, при инсталляции в оба глаза кроликов 2 раза в день в течение 30 суток после щелочного ожога обладает противовоспалительным, ранозаживляющим и ангиопротекторным действием. Под влиянием препарата .№1 в испытуемой дозе наблюдается стимуляция репаративных процессов в роговице, что проявляется ускорением восстановления дефектов переднего эпителия и стромы, уменьшением частоты образования глубоких дефектов, снижением степени выраженности воспалительной реакции и васкуляризации, торможением формирования помутнения ее меньшей интенсивности и площади.
Abstract
Studies have shown that the drug No. 1 at a dose of 0.05 ml / kg in 1:15 dilution with a sterile saline solution, when instilled into both eyes of rabbits 2 times a day for 30 days after an alkaline burn has an anti-inflammatory, wound-healing and angioprotective effects. Under the influence of the drug No. 1 in the test dose, there is a stimulation of reparative processes in the cornea, which is manifested by accelerating the recovery of defects in the anterior epithelium and stroma, reducing the frequency of formation of deep defects, reducing the severity of the inflammatory reaction and vascularization, inhibiting the formation of turbidity of its lower intensity and area.
Ключевые слова: ожог глаза, капли Плетнева №1, доктор Плетнев.
Keywords: burn the eyes, Pletnev drops No. 1, doctor Pletnev.
Введение. В настоящее время ожоги составляют до 40% всех повреждений глаз, более 40% пострадавших становятся инвалидами, не способными вернуться к прежней профессии. При значительном повреждении в результате ожога в глазу развивается сложный многокомпонентный патологический процесс, захватывающий все структуры глаза - роговицу, конъюнктиву, склеру и сосуды. Во многих случаях возникает ряд тяжелых осложнений с неблагоприятным исходом, несмотря на активную патогенетическую терапию.
В условиях мирного времени ожоги составляют до 10% всех повреждений глазного яблока и
его придатков. До 75% приходится на ожоги кислотами и щелочами.
При щелочных ожогах растворяется тканевой белок и возникает колликвационный некроз, быстро проникающий в глубину тканей и в полость глаза, поражая его внутренние оболочки.
В этой связи является актуальным изучение противовоспалительного, ранозаживляющего и ан-гиопротекторного действия препарата №1 на модели щелочного ожога роговицы глаза у кроликов.
Препарат №1 является комплексным растительным препаратом внутриаптечного изготовления, запатентованным в России (Патент РФ на
изобретение №2466734 от 26.09.2011), для получения которого используется трава хвоща полевого -Herba Equiseti arvensis, семейство хвощевые -Equisetaceae.
Целью исследования являлось экспериментальное изучение противовоспалительных, раноза-живляющих и ангиопротекторных свойств препарата №1 на модели щелочного ожога роговицы глаза у кроликов.
Материалы и методы исследования. Исследование противовоспалительного, ранозаживляю-щего и ангиопротекторного действия препарата №1 на модели щелочного ожога роговицы глаза у кроликов проведено в лаборатории пластической хирургии отдела травм и реконструктивной хирургии глаза ФГБУ «НМИЦ глазных болезней им. Гельм-гольца» Минздрава России (руководитель отдела д.м.н., проф. Р.А. Гундорова) в соответствии с требованиями Руководства по проведению доклинических исследований лекарственных средств от 2012 года [2].
Исследование проведено на 30 кроликах (60 глаз) шиншилла (самцы и самки, масса тела 2,0-2,5 кг). Для изучения влияния препарата №1 на течение ожоговой болезни глаз использовали модель тяжелого химического ожога роговицы [Ченцова Е.В., 1996].
Все манипуляции проводили под местной анестезией роговицы 0,5% раствором дикаина и общей - подкожным введением 5% раствора кетамина (из расчета 50 мг/кг веса), 0,5% раствором реланиума (из расчета 2 мг/кг веса) и 1% раствора димедрола (из расчета 1 мг/кг веса).
Из стерильной хлопчатобумажной ткани выкраивались диски диаметром 7 мм. Непосредственно перед проведением эксперимента диски помещали в ванночку с 10% раствором NaOH на 5 минут. После равномерного пропитывания излишки щелочи удаляли путем переноса дисков на стенки ванночки. После анестезии диски, пропитанные щелочным раствором, укладывали строго по центру роговицы при помощи анатомического пинцета. Через 40 секунд диски удаляли, а поверхность глаза промывали 20 мл стерильным физиологическим раствором в течение 30 секунд.
Сразу после нанесения ожога 10% NaOH на все роговицы глаз кроликов опытной группы инстил-лировали препарат №1 в дозе 0,05 мл/кг в разведении 1:15 стерильным физиологическим раствором, а животным контрольной группы - изотонический раствор 0,9% NaCl.
Клиническую оценку состояния глаз животных проводили на 1, 3, 7, 14, 22, 30 и 60 сутки по степени воспалительной реакции, площади дефекта эпителия и стромы, интенсивности помутнения роговицы и степени неоваскуляризации роговицы с помощью фокального и бокового освещения и биомикроскопии с флюоресцеиновой пробой и фоторегистрацией.
Степень выраженности воспалительной реакции оценивали по бальной системе [Ченцова Е.В., 1996].
Диаметр дефекта эпителия измеряли по горизонтальному и вертикальному меридианам после окраски флюоресцеином [Ченцова Е.В., 1996].
Дефект стромы оценивали на площади и глубине с помощью биомикроскопии по схеме Вен-ворта [Wenwort J.S., 1993].
Степень неоваскуляризации роговицы определяли биомикроскопией: измеряли длину сосудов от
лимба к центру роговицы [Ченцова Е.В., 1996]. Измерения проводили с помощью калибровочной шкалы, встроенной в окуляр микроскопа.
Интенсивность помутнения роговицы оценивали по шкале прозрачности Войно-Ясенецкого, которая представляет собой 10 расположенных в ряд дисков, цвет которых от одного конца ее к другому переходит от черного к почти белому; черный кружок соответствует 1-ой наибольшей степени прозрачности, почти белый соответствует 10-ой наименьшей степени прозрачности [Войно-Ясе-нецкий В.В., 1979].
На 1, 3, 7, 14, 22, 30 и 60 сутки наблюдения животных выводили из эксперимента под каллипсоло-вым наркозом методом воздушной эмболии ушной вены, после чего производили энуклеацию глазных яблок по обычной хирургической методике для проведения морфологических исследований.
Оценку развития ожога и течения репаратив-ных процессов глаз животных после щелочного ожога проводили по следующим параметрам: количество слоев переднего эпителия и степень его диф-ференцировки, архитектоника волокнистых компонентов стромы и ее клеточный состав, толщина роговицы, прорастание кровеносных сосудов и их диаметр, степень разреженности заднего эпителия роговицы.
Результаты и обсуждение. Исследования проведены на 2-х группах кроликов шиншилла (30 животных (60 глаз), самцы и самки, масса тела 2,0-2,5 кг) по 15 животных (30 глаз) в каждой: 1 группа -контроль; 2 группа - препарат №1.
Препарат №1 в дозе 0,05 мл/кг в разведении 1:15 стерильным физиологическим раствором (СФР) инсталлировали в оба глаза животных 2 раза в день в течение 30 суток после нанесения ожога. В оба глаза контрольных животных инстиллировали СФР 2 раза в день в течение 30 суток.
В предварительных исследованиях переднего отдела глаз опытной группы кроликов признаков выраженного местно-раздражающего действия и специфической токсико-аллергической реакции на введение препарата №1 (блефарит, реакция конъюнктивы, аллергические инфильтраты в лимбе или роговице) не наблюдалось.
1-3-е сутки эксперимента. На всех глазах контрольной и опытной групп наблюдалась одинаковая воспалительная реакция в 2 балла, сопровождавшаяся слизистым отделяемым, смешанной инъекцией конъюнктивы, перифокальным отеком роговицы до 1-2 мм.
При морфологическом исследовании, через 1 сутки после моделирования тяжелого щелочного ожога роговицы, на гистологических препаратах контрольной и опытной групп в области повреждения наблюдалась сходная морфологическая картина: отсутствие переднего эпителия, бесклеточ-ность стромальной ткани роговицы и ее расслоение в центральной и парацентральной областях. В некоторых случаях отмечалось присутствие единичных эозинофильных лейкоцитов в поверхностных слоях центральной области роговицы.
В контрольной группе поверхность роговой оболочки в парацентральной области имела значительные глубокие неровности, образованные в результате разволокнения пластин соединительной ткани стромы. Количество фибробластов в области, прилежащей к повреждению, было заметно меньше, чем на других участках. Задний эпителий
(эндотелий) отсутствовал в центральной части роговицы в результате его десквамации (чешуйчатое отслаивание эпителия с поверхности органа) после ожога.
В лимбальной области в этот период наблюдалось расширение кровеносных сосудов, причем наиболее выраженное расширение их диаметра до 8,3 мкм отмечалось в контроле. В то время как, в опытной группе максимальный диаметр сосудов составлял 4,6 мкм.
В опытной группе отмечалось увеличение количества фибробластов в лимбальной области и их активная миграция в область повреждения.
3-е сутки эксперимента. Десквамация (отслаивание) переднего эпителия центральной оптической области роговицы происходила в результате продолжающейся местной воспалительной реакции, которая выражалась увеличением количества лимфоцитов и лейкоцитов, разволокнением стромы и ее отечностью.
В парацентральной области роговицы обеих групп определялись участки мигрировавших из прилежащих областей эпителиоцитов с расстоянием между центрами их ядер в среднем 16,6 мкм. Поверхность роговицы в контроле в этой области отличалась значительными неровностями, образованными в результате отека, нарушения слоистости стромы.
В опытной группе наблюдалась незначительная поверхностная волнообразность стромы и сохранение слоистости в подлежащих слоях. В строме парацентральной области роговицы выявлялось значительное увеличение количества лимфоцитов и полиморфноядерных клеток, мигрировавших из лимбальных сосудов роговицы, причем этот показатель в контроле в 2 раза превышал их число в опытной группе.
7-е сутки эксперимента. В клинической картине контрольной и опытной групп выявились существенные различия. У 56% контрольных глаз к этому сроку отмечались выраженная смешанная инъекция конъюнктивы, обильное слизисто-гной-ное отделяемое, выраженный перифокальный отек роговицы, гипопион (скопление гноя в передней камере глазного яблока, который в силу тяжести спускается вниз в радужно-роговичный угол и образует здесь характерную желтоватую полоску полулунной формы с верхней горизонтальной границей), воспалительная реакция в 3 балла, а у 44% глаз сохранялась картина воспалительной реакции в 2 балла.
У 13,3% контрольных глаз определялась перфорация роговицы, причем в 6 случаях из них - с выпадением внутренних оболочек. Десцеметоцеле (небольшое полупрозрачное выпячивание задней пограничной пластинки роговицы, образующейся в том участке дефекта роговицы, где оказались разрушенными все остальные ее слои), занимающее более половины площади роговицы, сформировалось у 56% глаз, дефект стромы по глубине и по площади в 3 балла. В остальных 44% случаев наблюдался глубокий дефект роговицы без десце-метоцеле, соответствующий 2 баллам. Диаметр эпителиального дефекта был равен исходной величине - 7 мм.
На глазах кроликов опытной группы на 7 сутки после начала лечения отмечалась менее выраженная воспалительная реакция по сравнению с контролем. У 30,7% глаз наблюдалась незначительная
смешанная инъекция конъюнктивы, скудное отделяемое, отсутствие перифокального отека роговицы (1 балл), в 12% случаев определялась воспалительная реакция в 3 балла, а в 57,3% случаев сохранялась воспалительная реакция в 2 балла.
В опытной группе перфорация роговицы не наблюдалась, десцеметоцеле сформировалось у 32,3% глаз с дефектом стромы, занимающим не более У площади роговицы (1 балл).
Поверхностный дефект стромы составил 1 балл, дефект стромы по глубине в 3 балла - у 17,3% глаз. Длина новообразованных сосудов составляла в среднем 2 мм (1 балл).
При морфологическом исследовании глаз на 7 сутки эксперимента в центральной оптической области роговицы контрольной группы наблюдалось отсутствие переднего и заднего эпителия, значительное деструктивное разволокнение стромы, массовая лейкоцитарная инфильтрация.
В парацентральной области этой группы отмечалась выраженная васкуляризация передней трети роговой оболочки. Лимбальный эпителий состоял из 4 слоев эпителиоцитов.
В опытной группе животных происходила неравномерная эпитализация роговицы, однако наблюдались участки отторжения новообразованного эпителия. В глубоких слоях парацентральной области роговицы отмечалась волнообразность стромальных пластин без нарушения слоистости.
Толщина роговой оболочки в центральной оптической области обеих групп имела значительную вариабельность, с выраженной тенденцией к изъязвлению и отеку стромы в контроле. Эндотелий центральной оптической области в опытной группе глаз восстанавливался с расстоянием между эндо-телиоцитами в среднем 8,3 мкм. В опытной группе лимбальный эпителий имел до 8 слоев эпителиоци-тов, в то время как в контроле - до 4 слоев.
Таким образом, уже на 7 сутки применения препарата №1 в дозе 0,05 мл/кг в разведении 1:15 СФР, в виде глазных капель, наблюдалась воспалительная реакция в опытной группе менее выраженная по сравнению с контролем. Появилась тенденция к уменьшению площади и глубины эрозии и изъязвления пораженной роговицы.
60-е сутки эксперимента. У контрольных животных в 12% случаев глаз сохранялась персисти-рующая эрозия роговицы. У остальных 88% контрольных глаз сформировалось бельмо с помутнением, превышающим зону ожогового поражения на 1-2 мм и соответствующее 10 баллам по шкале Войно-Ясенецкого. Васкуляризация роговицы в большинстве контрольных глаз соответствовала 3 баллам, воспалительная реакция - 1 баллу.
У всех животных опытной группы к 60 суткам применения препарата №1 наблюдалось купирование воспалительного процесса и полное закрытие эпителиального дефекта глаз. Отмечалось формирование умеренного помутнения, не превышающего зону ожогового поражения соответствующее в среднем 5-7 баллам по шкале Войно-Ясенецкого. В ряде случаев площадь помутнения уменьшилась в 2 раза. Степень васкуляризации роговицы в большинстве случаев соответствовала 1 баллу.
На 60 сутки применения препарата №1 в дозе 0,05 мл/кг в разведении 1:15 СФР, в виде глазных капель, в опытной группе отмечалось формирование помутнения меньшей интенсивности (5-7 баллов) по сравнению с контролем (10 баллов). У всех
кроликов наблюдалось полное закрытие эпителиального дефекта роговицы глаз, в то время как в контроле у 12% глаз сохранялась персистирующая эрозия. Степень васкуляризации и воспалительной реакции более выражена в контрольной группе глаз.
При морфологическом исследовании глаз на 60 сутки эксперимента в контроле в ряде случаев наблюдалось отсутствие переднего эпителия на значительной площади поверхности центральной оптической области роговицы. В остальных случаях центральная оптическая область имела эпителий в 2-3 слоя.
В зоне ожогового повреждения формировался грубый соединительнотканный рубец, значительно меняющий архитектонику волокнистых структур стромы.
Плотные пучки коллагеновых волокон распределялись в разных направлениях, нарушая пластинчатое строение роговицы. Среди клеточных элементов отмечались характерные для соединительной ткани фибробласты. В участках роговицы, лишенных эпителия наблюдались лимфоциты.
Наблюдалось относительное восстановление эндотелиального пласта.
У животных опытной группы наблюдалось заметное восстановление пластинчатости стромы, отсутствие клеток воспалительного ряда, регенерация переднего эпителия до 5 слоев с признаками диф-ференцировки.
Передний эпителий в области повреждения плотно прилегал к стромальной поверхности, образуя новые прочные эпителиально-стромальные взаимоотношения.
В кроликов опытной группы отмечалось восстановление нормальной толщины роговицы в центральной оптической области и целостность эндотелия.
При анализе результатов, можно отметить, что щелочной ожог отличается глубиной тканевых повреждений роговицы, медленным восстановлением эпителиального слоя и его барьерных функций. В строме лизирование некротически измененных тканей сменялось заместительной фиброплазией, ведущей к рубцовому перерождению роговичной ткани.
Отмечалось истончение заднего эпителия, ядра клеток при этом бледные с нечеткими границами, на значительном протяжении не дифференцированы, что свидетельствует о тяжести щелочного ожога, более длительном тяжелом его воздействии на окружающие ткани.
Таким образом, препарат №1 в дозе 0,05 мл/кг в разведении 1:15 СФР, при инсталляции в оба глаза животных 2 раза в день в течение 30 суток, обладает выраженным противовоспалительным, ранозаживляющим и ангиопротекторным действием. Препарат №1 в испытуемой дозе способствует регенерации поврежденного эпителия, восстановлению прозрачности роговой оболочки и нормального количества фибробластов.
Заключение. Проведенные исследования показали, что препарат №1 в дозе 0,05 мл/кг в разве-
дении 1:15 стерильным физиологическим раствором, при инстилляции в оба глаза кроликов 2 раза в день в течение 30 суток после щелочного ожога обладает противовоспалительным, ранозаживляю-щим и ангиопротекторным действием. Под влиянием препарата в испытуемой дозе наблюдается стимуляция репаративных процессов в роговице, что проявляется ускорением восстановления дефектов переднего эпителия и стромы, уменьшением частоты образования глубоких дефектов, снижением степени выраженности воспалительной реакции и васкуляризации, торможением формирования помутнения ее меньшей интенсивности и площади.
При морфологическом исследовании влияния препарата №1 в испытанной дозе на орган зрения кроликов на модели щелочного ожога роговицы установлено, что восстановление переднего эпителия роговицы кролика происходит к 30 суткам после ожога в опытной группе и только частичная ее регенерация к 60 суткам в контроле. К концу эксперимента наблюдалось восстановление прочных эпителиально-стромальных взаимоотношений в опытной группе по сравнению с контролем, обусловленных формированием нормальной архитектоники волокнистых компонентов межклеточного вещества. В лимбальной зоне роговицы глаза у кроликов опытной группы по сравнению с контролем, отмечалась более выраженная пролиферативная активность, выражающаяся в увеличении слоистости лимбальных эпителиоцитов. Уже к 7 суткам эксперимента; задний эпителий роговицы в опытной группе начинал восстанавливаться и только к 30 суткам в контрольной группе. В течение 60-дневного наблюдения в контроле отмечалась значительная васкуляризация роговицы, характеризующаяся образованием большого количества крупных кровеносных сосудов в центральной оптической и па-рацентральной областях роговицы, чего не наблюдалось в опытной группе. При этом восстановление целостности роговой оболочки переднего и заднего эпителия, а также стромы роговицы наблюдалось к 30 суткам эксперимента в опытной группе и только к 60 суткам в контроле. Следует отметить, что продуктивная стадия воспаления, выраженная в пролиферации и миграции фибробластов, перестройке межклеточного вещества стромы, дифференци-ровке эпителиоцитов переднего эпителия, в течение эксперимента в опытной группе происходили заметно активнее и быстрее по сравнению с контролем. В то время как, воспалительная реакция тканей (миграция лейкоцитов, наличие кровеносных сосудов, рыхлость волокнистых компонентов стромы) в течение эксперимента была существенно слабее в опытной группе по сравнению с контролем.
Список литературы
1. Войно-Ясенецкий В.В. Разрастание и изменчивость тканей глаза при его заболеваниях и травмах. - Киев, 1979. - 184с.
2. Миронов, А.Н., Бунатян, Н.Д. и др. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. - М.: Гриф и К. - 2012. -944 с.
