CC BY
97
УДК 615.014.425-322:616.36-097.5
ИССЛЕДОВАНИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ БИОМАССЫ СПИРУЛИНЫ И ШРОТА КОСТОЧЕК ГРАНАТА
© 2009 Е.А. Грибанова1, П.П. Пурыгин2, С.В. Первушкин3, М.О. Тархова4, А.В. Дубищев3 Самарский государственный университет путей сообщения
2 Самарский государственный университет 3 Самарский государственный медицинский университет 4 ООО «НЕОФИТ» г. Самара Статья принята 07.10.2009 г.
В данной работе проведено исследование гепатопротекторного эффекта биомассы спирулины, шрота косточек граната и их совместной композиции в соотношении 1:1.
Ключевые слова: гепатопротектор, биомасса спирулины, шрот косточек граната
Воздействие экологических факторов на здоровье человека в последние десятилетия все больше привлекает внимание ученых самых разных специальностей. Этому способствует распространение эндемических заболеваний, которые провоцируются техногенным загрязнением биосферы большим количеством химических соединений, поступающих с промышленными отходами, выхлопными газами автотранспорта, бытовым мусором, ядохимикатами и другими соединениями [1, 6]. Наиболее остро в настоящее время стоит вопрос о заболеваниях органов пищеварения и особенно печени. Широкая распространенность острых и хронических заболеваний печени, ранняя инвалидизация лиц трудоспособного возраста ставят поражения печени на одно из первых мест среди заболеваний желудочно-кишечного тракта. В общей сложности 20-30% населения страдает заболеваниями печени [10]. При патологии печени имеет место избыточное образование продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ). Уровень ПОЛ также зависит от функции противоперекисной защиты. Установлено, что такими антиоксидантными системами в организме являются ферменты, такие как катала-за, супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза, глутатионредуктаза [6].
Ассортимент лекарственных средств, применяемых в комплексной терапии заболеваний печени многообразен. Однако гепатопротекторов -препаратов, направленных на восстановление гомеостаза в печени, повышение устойчивости органа к действию патогенных факторов, нормализацию функциональной активности и стимуляцию репаративно-регенерационных процессов в печени, сравнительно немного, и ни один из них не
Грибанова Екатерина Александровна, аспирант. E-mail: [email protected]
Пурыгин Петр Петрович, доктор химических наук, профессор, заведующий кафедрой органической, биоорганической и медицинской химии. E-mail: [email protected]
Первушкин Сергей Васильевич, доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой фармацевтической технологии. E-mail: [email protected]
Тархова Марина Олеговна, главный технолог Дубищев Алексей Владимирович, доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой фармакологии
удовлетворяет в полной мере [5, 11]. В настоящее время особый интерес представляют гепато-протекторы растительного происхождения. В связи с этим цель нашего исследования состояла в изучении гепатопротекторного действия биомассы спирулины, шрота косточек граната и их композиции в соотношении 1:1.
Для воспроизведения токсического поражения печени нами был выбран четыреххлористый углерод. Его введение в организм вызывает повреждение печени. При хроническом отравлении наблюдается увеличение печени и повышение уровня аминотрансфераз и ПОЛ. Поэтому нами было проведено введение четыреххлористого углерода крысам в виде масляного раствора в дозе 2,0 г/кг веса животного [8]. Для растворения четыреххлористого углерода использовалось абрикосовое масло, 50% масляный раствор четыреххлористого углерода вводился крысам внутримышечно ежедневно в течение 6-ти дней. Исследование гепатопротекторного действия биомассы спирулины и шрота косточек граната и их композиции осуществляли на 80 белых лабораторных крысах-самцах массой 240-260 г. В эксперименте участвовали половозрелые крысы одного месяца рождения с целью свести к минимуму возрастные различия ферментов. Крыс содержали в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и пище. Животные были разбиты на 8 групп, по 10 крыс в каждой (табл. 1).
Все группы животных были вовлечены в эксперимент одновременно, что исключает влияние внешних температурных, климатических и иных факторов на разницу активности ферментов у опытных и контрольных групп. Все образцы вводили однократно в желудок с помощью зонда в виде суспензии, приготовленной на воде очищенной в дозе 10 мг/100г массы животного, объемом 1 мл ежедневно в течение 6 дней параллельно с введением четыреххлористого углерода. Выбор доз обусловлен литературными данными [8]. На седьмой день крысы забивались в соответствии с этическими нормами под эфирным наркозом, методом декапитации, затем проводили извлечение печени. После извлечения печень промывали физиологическим раствором и сразу замораживали. Гомогенат из печени готовился механическим измельчением ткани печени массой 1 г с 9 мл трис-буфера (рН 7,4), со скоростью 5000
об/мин в сосуде с двойными стенками, постоянно охлаждаемым проточной водой [10]. Для проведения анализа токсического поражения нами исследовались следующие показатели: масса печени, активность каталазы, активность аланина-минотрансферазы и аспартатаминотрансферазы, а
Средства коррекции экологического неблагополучия
также количество малонового диальдегида (МДА). Определение вышеуказанных параметров проводили по стандартным методикам [7]. Данные изучаемых нами показателей поражения представлены в таблицах.
Таблица 1. Группы экспериментальных животных
Объекты исследования Номера групп
1 2 3 4 5 6 7 8
вода очищенная
СС14 + + + +
суспензия биомассы спирулины + +
суспензия шрота граната + +
суспензия биомассы спирулины и шрота граната в соотношении 1:1 + +
При исследовании токсического влияния че-тыреххлористого углерода и гепатопротекторного действия микроводоросли спирулины платенсис и шрота граната, а также их комбинации установлено, что в группах, вводимым яд, печень значительно увеличилась (табл. 2). Также нами исследовалось влияние вышеуказанных образцов на активность каталазы в крови опытных крыс
(табл. 3). В контрольной группе крыс, которой вводили четыреххлористый углерод, произошло увеличение массы печени относительно контроля на 48,62%, при этом в группе животных, принимавших помимо четыреххлористого углерода суспензию биомассы спирулины, печень увеличилась на 22,18%, суспензию гранатового шрота -на 29,95%, а композицию 30,08%.
Таблица 2. Изменение массы печени опытных крыс (г)
Контроль Спирулина Шрот Композиция
7,98±0,30 8,18±0,27 9,03±0,32 8,32±0,33
Контроль + ССЦ Спирулина + ССЦ Шрот + СС14 Композиция + СС14
11,86±0,29 9,95±0,371 11,42±0,391 10,72±0,351
телями животных контрольной группы, принимавшей четыреххлористый углерод
Таблица 3. Активность каталазы в крови опытных крыс (мкат/л)
Контроль Спирулина Шрот Композиция
51,37±2,51 56,63±2,41 52,44±2,39 55,21±2,45
Контроль + СС14 Спирулина + СС14 Шрот + СС14 Композиция + СС14
174,27±5,37 123,22±6,97г 183,35±6,84г 157,55±5,44г
Таким образом, в группе крыс, принимавшей воду очищенную на фоне введения четыреххлористого углерода, наблюдалось увеличение уровня активности каталазы на 239,24% относительно контроля, в группе, принимавшей помимо четыреххлористого углерода суспензию биомассы спирулины, активность каталазы возросла на 129,63%, суспензию гранатового шрота - на 254,84%, а композицию - на 199,22%. Была отмечена также тенденция к увеличению активности аспартатаминотрансферазы (табл. 4) и ала-нинаминотрансферазы (табл. 5) в тканях печени. Активность аспартатаминотрансферазы в группе крыс, принимавших только четыреххлористый углерод, возросла примерно в 7 раз, суспензию биомассы спирулины и четыреххлористый углерод - примерно в 4 раза, суспензию гранатового шрота и четыреххлористый углерод - примерно в 5,5 раз, а композицию и четыреххлористый углерод - в 5 раза. В группе крыс, принимавшей воду очищенную, вводимый четыреххлористый углерод активность аланинаминотрансферазы
возросла на 43,11%, в группе, принимавшей помимо яда, суспензию биомассы спирулины - на 18,73%, суспензию шрота граната - на 50,00%, а композицию - на 23,37%. Также отмечается тенденция к возрастанию концентрации малонового диальдегида (табл. 6). В группе крыс, принимавшей воду очищенную, вводимый четыреххлористый углерод концентрация малонового диальдегида возросла на 91,01%, в группе, принимавшей помимо яда, суспензию биомассы спирулины -на 34,13%, суспензию шрота граната - на 120,63%, а композиции - на 45,50%.
Вывод: экспериментально доказано, что биомасса спирулины обладает выраженным гепато-протекторным действием, шрот косточек граната гепатопротектором не является, а композиция на основе указанных выше растительных объектов усугубляет действие четыреххлористого углерода на ткани печени.
Таблица 4. Активность аспартатаминотрансферазы в печени крыс (мкмоль/с-л)
Контроль Спирулина Шрот Композиция
0,285±0,012 0,351±0,011 0,366 ±0,013 0,355±0,010
Контроль + ССЦ Спирулина + СС14 Шрот + СС14 Композиция + СС14
1,989±0,067 1,439±0,0421 1,993±0,0541 1,793±0,0611
Таблица 5. Активность аланинаминтрансферазы в печени крыс (мкмоль/с-л)
Контроль Спирулина Шрот Композиция
1,596±0,058 1,613±0,074 1,725±0,066 1,682±0,061
Контроль + СС14 Спирулина + СС14 Шрот + СС14 Композиция + СС14
2,284±0,076 1,912±0,0721 2,523±0,0811 2,055±0,0691
Таблица 6. Концентрация малонового диальдегида в печени крыс (мкмоль/л)
Контроль Спирулина Шрот Композиция
3,78±0,57 3,92±0,55 4,17 ±0,47 4,05±0,49
Контроль + СС14 Спирулина + СС14 Шрот + СС14 Композиция + СС14
7,22±0,45 5,21±0,481 8,73±0,521 5,77±0,401
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
1. Арзамасцев, А.П. Оценка показателей антиокси-дантной активности препаратов на основе лекарственного растительного сырья / А.П. Арзамасцев, Е.И. Шкарина, Т.В. Максимова // Хим.-фармац. журн. - 1999. - Т. 33, № 11. - С. 17-20.
2. Барабой, В.А. Перекисное окисление и стресс / В.А. Барабой, И.И. Брехман, В.Г. Глотан // Сибирская наука, 1992. - 148 с.
3. Брейдо, В.В. Роль активации процессов перекисно-го окисления липидов в прогрессировании поражений печени при алкоголизме / В.В. Брейдо // Вопросы клинической гепатологии. Караганда. -1991. - С. 20-23.
4. Виноградова, Л.Ф. Теоретические и экспериментальные основы применения антиоксидантов при токсических и аллергических поражениях печени / Л.Ф. Виноградова // Тезисы докладов IV Рос. нац. Конгресса «Человек и лекарство». - М., 1997. - С. 200.
5. Венгеровский, А.И. Влияние гепатопротекторов, содержащих полифенолы, на течение экспериментального хронического гепатита / А.И. Венгеров-
ский [и др.] // Хим.-фарм. журнал. - 1996. - Т. 30, №2. - С. 13-14. '
6. Лекарственные растения в гепатологии / В. Ф. Корсун [и др.]. - М.: Русский врач, 2005. - 274 с.
7. Колб, В.Г. Клиническая биохимия / В.Г. Колб, B.C. Камышников // Минск, 1976. - С. 150-171.
8. Бунатян, Н.Д. Природные антиоксиданты - как гепатопротекторы / Н.Д. Бунятян [и др.] // Эксп. и клин. фарм. - 1999. - Т. 62, № 3. - С. 64-67.
9. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под общ. ред. Р.У. Хабриева. - 2-е изд., пе-рераб. и доп. // М.: Медицина, 2005. - 832 с.
10. Венгеровский, А.И. Совместное применение пред-низолона и гепатопротекторов, содержащих фос-фолипиды, при экспериментальном хроническом гепатите / А.И. Венгеровский [и др.] // Эксп. и клинич. фармакология. - 1999. - Т. 62, №2. - С. 28-31.
11. Dhiman, R.K. Herbal medicines for liver diseases / R.K. Dhiman, Y.K Chawla // Dig. Dis. Sci. - 2005 Oct. - V. 50 (10). - P.1807-1812.
RESEARCH THE HEPATOPROTECTIVE ACTIVITY OF SPIRULINA BIOMASS AND POMEGRANATE EXTRACTION CAKE
© 2008 E.A. Gribanova1, P.P. Purygin2, S.V. Pervushkin3, M.O. Tarhova4, A.V. Dubishchev3
1 Samara State Transport University
2 Samara State University 3 Samara State Medical University 4 Open Company «NEOPHYT», Samara Article is received 2009/10/07
In the given work it is carried out research of hepatoprotective effect of spirulina biomass, pomegranate extraction cake and their joint composition in the ratio 1:1.
Key words: hepatoprotector, spirulina biomass, pomegranate extraction cake
Ekaterina Gribanova, Graduate Student. E-mail: [email protected] Petr Purygin, Doctor of Chemistry, Professor, Head of the Organic, Bioorganic and Medical Chemistry Department E-mail: [email protected]
Sergey Pervushkin, Doctor of Pharmacy, Professor, Head of the Pharmaceutical Technology Department. E-mail: [email protected] Marina Tarhova, Main Technologist
Aleksey Dubischev, Doctor of Biology, Professor, Head of the Pharmacology Department
