CC BY
16
17. Вологдина, И. В. Качество жизни и тревожно-депрессивные нарушения у больных пожилого возраста с фибрилляцией предсердий / И. В. Вологдина, Б. А. Минько, М. П. Крылова, Е. Г. Порошина // Вестник Межнационального центра исследования качества жизни. -2016. - № 27-28. - С. 37-43.
18. Игнатова, И. А. Показатели качества жизни у слабослышащих мигрантов Крайнего Севера в период реадаптации к новым климатическим условиям / И. А. Игнатова, Р. А. Яскевич, С. Н. Шилов, Л. И. Покидышева // Российская оториноларингология. - 2013. -№ 6 (67). - С. 66-71.
19. Филимонова, Л. А. Психосоматические проблемы пациентов старших возрастных групп с артериальной гипертонией / Л. А. Филимонова, Е. Л. Давыдов, Р. А. Яскевич // Современные проблемы науки и образования. - 2016. - № 3. - С. 106.
20. Wan, C. The hypertension scale of the system of Quality of Life Instruments for Chronic Diseases, QLICD-HY: a development and validation study / C. Wan [et al.] // Int J Nurs Stud. - 2012. - Vol. 49. - № 4. - P. 465-480.
21. Кадырова, Д. А. Качество жизни больных пожилого и старческого возраста с артериальной гипертонией / Д. А. Кадырова. Д. Т. Сафохонов, Ф. С. Ганиева, Г. А. Ишанкулова // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2014. - № 3. - С. 58-61.
22. Yaskevich, R. A. Estimation of the quality of life in elderly migrants of the Far North in the period of readaptation to new climatic conditions / R. A. Yaskevich [et al.] // Advances in Gerontology. - 2014. - Т. 4. - № 3. - С. 213-217.
© Алексеев И. А., 2018
УДК 616-07:[616.381-002.3:611.018.5]
ИССЛЕДОВАНИЕ ФЕНОТИПА В-ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ КАК ОДНОГО ИЗ КРИТЕРИЕВ ПРОГНОЗА ИСХОДА РАСПРОСТРАНЁННОГО ГНОЙНОГО ПЕРИТОНИТА
В. Д. Беленюк, И. И. Гвоздев, А. В. Мошев
Обособленное подразделение Федерального исследовательского центра «Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук» «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера»
Распространённый гнойный перитонит по-прежнему остаётся одним из тяжелейших заболеваний абдоминальной хирургии. Тяжесть течения перитонита определяется не только основным патологическим процессом, но и во многом зависит от изменений, происходящих в системе иммунитета, важным компонентом которой являются В-лимфоциты. В данном исследовании показано, что в зависимости от исхода заболевания скорость и эффективность реализации В-клеточного иммунного ответа сильно варьируется. Это объясняется выраженностью процессов системной воспалительной реакции, которые по ряду источников в значительной степени подавляют адаптивный иммунный ответ.
Ключевые слова: перитонит, В-лимфоциты, периферическая кровь, проточная цитометрия, иммунная система.
Введение. Одним из наиболее проблемных заболеваний абдоминальной хирургии является распространённый гнойный перитонит (РГП), летальность при котором может варьироваться в пределах от 10 до 30 %, а при генерализации воспаления и развитии полиорганной недостаточности достигать 80-90 % [1; 2]. Согласно многочисленным литературным источникам, как правило, тяжесть течения РГП не только определяется характером течения основного патологического процесса и адекватностью проводимого лечения, но и во многом зависит от изменений, происходящих в системе иммунитета, одним из важнейших компонентов которой являются В-лимфоциты [1; 3; 4]. В-лимфоциты продуцируют иммуноглобулины, необходимые для борьбы с инфицированием, и, хотя основная роль в развитии противовоспалительного ответа при РГП отводится макрофагальному звену, нельзя утверждать, что значением В-лимфоцитов можно пренебречь [1; 3; 5]. На сегодняшний день установлено, что существует целый ряд малых субпопуляций В-лимфоцитов, которые невозможно зафиксировать классическими методами исследования, а на фоне сложных систем внутренних взаимосвязей иммунной системы их изучение может предоставить новый материал, более полно определяющий механизмы реагирования иммунитета на тяжёлые гнойно-септические заболевания [6; 7].
Целью нашего исследования являлась оценка фенотипического состава В-лимфоцитов периферической крови у людей в динамике лечения РГП, а также определение возможности применения параметров фенотипи-ческого состава В-лимфоцитов для прогнозирования исхода течения РГП.
Материалы и методы исследования. На базе Красноярского краевого гнойно-септического центра Краевой клинической больницы № 1 обследовано 32 пациента с острыми хирургическими заболеваниями и травмами органов брюшной полости, осложнившимися РГП. Возраст пациентов составлял 25-65 лет (средний возраст составил 49,6 лет). Забор крови при РГП производили перед операцией (1 день), а также на 7-й, 14-й и 24-й сутки послеоперационного периода. В качестве контроля обследовано 38 относительно здоровых людей аналогичного возрастного диапазона. Забор крови контрольной группы осуществлялся в Красноярском краевом центре крови № 1. Все пациенты были разделены на три группы в зависимости от исхода: 1-я группа - больные с благоприятным исходом (n = 21); 2-я группа - больные с неблагоприятным исходом (n = 11); 3-я группа - контроль (n = 38).
Иммунофенотипирование лейкоцитов проводили методом проточной цитометрии с использованием прямой пятицветной иммунофлуоресценции цельной периферической крови. Для разделения В-лимфоцитов на популяции и субпопуляции использовали следующие антитела компании Beckman Coulter, США: CD5-FITC, CD23-PE, CD19-ECD, CD27-PC5, CD45-PC7, CD38-PE. Пробоподготовку осуществляли по стандартной методике. Лизис эритроцитов проводили по безотмывочной технологии с использованием реагента VerasLyse (Beckman Coulter, США). Анализ окрашенных клеток проводили на проточном цитофлуориметре Cytomics FC-500 (BeckmanCoulter, USA). В каждой пробе анализировали не менее 50 000 лимфоцитов.
Выборку описывали с помощью подсчёта медианы (Me) и интерквартильного размаха в виде 25 и 75 про-центилей (С25 и С75) в программе Statistica 8.0. Достоверность различий между показателями контрольной и опытных групп оценивали по непараметрическому критерию Mann-Whitney. Достоверность различий в динамике лечения определяли по критерию Wilcoxon.
Результаты
В первой группе на первые сутки лечения количество В-клеток оставалось на уровне контрольной группы (рис. 1). К 7-м суткам было зафиксировано незначительное снижение количества В-клеток относительно контрольных значений. К 14-м суткам фиксировалось достоверное снижение количества общих В-лимфоцитов. К 21-м суткам содержание В-лимфоцитов в периферической крови достигло минимальных значений за весь период наблюдения.
Во второй группе на первые сутки лечения количество В-клеток оставалось на уровне контрольной группы (рис. 1). К 7-м суткам было зафиксировано достоверное повышение количества В-лимфоцитов относительно как контрольной группы, так и группы с благоприятным исходом РГП. К 14-м суткам фиксировалась динамика к снижению количества клеток, достоверных различий в этот период не фиксировалось. К 21-м суткам содержание В-лимфоцитов в периферической крови снова достигло уровня контрольной группы. %
30 -
25
20
15
10
5
II II 11 н
I I I п
1 сутки
7 сутки 14 сутки
I Контроль ■ Группа 1 ■ Группа 2
21 сутки
0
Рис. 1. Динамика количества лимфоцитов
В первой группе на первые сутки лечения количество наивных В-лимфоцитов оставалось на уровне контрольной группы (рис. 2). К 7-м суткам было зафиксировано достоверное снижение количества наивных В-лимфоцитов относительно контрольных значений. К 14-м суткам достоверное снижение количества наивных В-лимфоцитов продолжилось и к 21-м суткам достигло минимальных значений за весь период наблюдения.
Во второй группе на первые сутки лечения количество наивных В-клеток оставалось на уровне контрольной группы (рис. 2). К 7-м суткам было зафиксировано достоверное повышение количества наивных В-лимфоцитов относительно группы с благоприятным исходом РГП, достоверных различий с контрольной группой зафиксировано не было. К 14-м суткам отмечалась динамика к снижению количества наивных В-лимфоцитов. Однако по-прежнему сохранилось достоверное повышение количества исследуемых клеток относительно группы с благоприятным исходом. К 21-м суткам содержание наивных В-лимфоцитов в периферической крови снова достигло уровня контрольной группы.
В первой группе на первые сутки лечения количество В-клеток памяти оставалось на уровне контрольной группы (рис. 3). На 7-е и 14-е сутки фиксировалось незначительное снижение количества исследуемых В-лимфоцитов. К 21-м суткам было зафиксировано достоверное снижение количества В-клеток памяти относительно контрольных значений. Во второй группе в ходе всего периода наблюдение количество В-клеток памяти в периферической крови сохранялось на уровне контрольной группы.
% 35
30
25
20
15
10
0
1 т
™ прц
1 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки
■ Контроль ■ Группа 1 ■ Группа 2 Рис. 2. Динамика количества наивных лимфоцитов
%
6
ш
1 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки ■ Контроль ■ Группа 1 ■ Группа 2
5
5
4
3
2
1
0
Рис. 3. Динамика количества В-клеток памяти
При оценке количества В1-клеток в первой группе на первые сутки лечения фиксировалось достоверное снижение относительно контрольной группы (рис. 4). На 7-е и 14-е сутки количество В1-лимфоцитов оставалось достоверно ниже в сравнении с контрольной группой. На 21-е сутки достоверных различий в количестве В1-клеток в периферической крови зафиксировано не было. Во второй группе на первые сутки лечения количество В1-клеток было достоверно снижено относительно контрольной группы. На 7-е и 14-е сутки достоверных различий в количестве В1-лимфоцитов с контрольной группой не обнаруживалось. К 21-м суткам снова фиксировалось снижение количества В1-лимфоцитов в периферической крови в сравнении с контрольной группой.
В первой группе на первые сутки лечения количество В2-лимфоцитов оставалось на уровне контрольной группы (рис. 1). К 7-м суткам также не было зафиксировано достоверных изменений количества В2-лимфоцитов относительно контрольных значений. К 14-м суткам достоверно снизилось количество В2-лимфоцитов относительно контроля. Уровень В2-клеток к 21-м суткам достигло минимальных значений за весь период наблюдения.
Во второй группе на первые сутки лечения количество В2-клеток оставалось на уровне контрольной группы (рис. 1). К 7-м суткам было зафиксировано повышение количества В2-лимфоцитов относительно группы с благоприятным исходом РГП, достоверных различий с контрольной группой зафиксировано не было. На 14-е и 21-е сутки достоверных изменений количества В2-клеток зафиксировано не было.
% 35
30
25
20
15
т
т Т т ........I т
1ВИП 1 ! ИН 1 1П
10
5
0
1 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки
■ Контроль ■ Группа 1 ■ Группа 2
Рис. 4. Динамика количества В1-клеток
%
4
3,5
2,5
1,5
1
0,5
III II I I I I
II "11 П I г
III 1111
1 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки
■ Контроль ■ Группа 1 ■ Группа 2
3
2
Рис. 5. Динамика количества В2-клеток
Заключение
Изменение количества В-лимфоцитов в группах с РГП в ходе лечения заметно варьировалось. В первой группе отмечается постепенное снижение количества В-лимфоцитов в русле крови. Во второй группе, напротив, временно фиксируется накопление В-клеток в клеточном русле, и лишь к концу лечения их уровень начинает снижаться. Подобная картина может объясняться процессами миграции В-лимфоцитов: так, в первой группе налицо более ранняя активация адаптивного иммунного ответа в сравнении со второй группой, где этот процесс сильно затянулся. Согласно литературным данным, синдром системной воспалительной реакции, сопровождающий развитие РГП, оказывает ярко выраженное супрессорное воздействие на адаптивный иммунитет, что мы и зафиксировали на примере В-клеток. Выраженные различия между группами с благоприятным и неблагоприятным исходами коснулись в основном наивных В2-лимфоцитов, остальные популяции хотя и снижались в обеих группах, но эти изменения были слабо выраженными. В то же время наше исследование показало, что более поздняя активация и, как следствие, запоздалое увеличение количества В-лимфоцитов в периферической крови является крайне неблагоприятным показателем; данный факт может применяться для прогноза исхода заболевания.
Библиографический список
1. Беленюк, В. Д. Исследование фенотипического состава лимфоцитов у больных распространённым гнойным перитонитом в зависимости от степени тяжести / В. Д. Беленюк [и др.] // Российский иммунологический журнал. - 2015. - Т. 9. - № 2(1) (18). - С. 193-195.
2. Борисов, А. Г. Изменение фенотипа клеток врождённого иммунитета у больных с политравмой в динамике использования вакцины для профилактики синегнойной палочки / А. Г. Борисов [и др.] // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2016. - Т. 21. - № 3. -С. 124-129.
3. Борисов, А. Г. Типы иммунного реагирования при распространённом гнойном перитоните (с комментарием) / А. Г. Борисов [и др.] // Хирургия. Журнал им. Н. И. Пирогова. - 2016. - № 9. - С. 28-34.
4. Черданцев, Д. В. Современный подход к лечению пациентов с распространённым гнойным перитонитом / Д. В. Черданцев [и др.] // Сибирское медицинское обозрение. - 2016. - № 6 (102). - С. 24-35.
5. Куртасова, Л. М. Мониторинг течения аллергического воспаления у больных атопической бронхиальной астмой / Л. М. Куртасова, А. А. Савченко, А. Р. Шмидт // Пульмонология. - 2003. - № 5. - С. 47-52.
6. Кудрявцев, И. В. Определение основных субпопуляций цитотоксических Т-лимфоцитов методом многоцветной проточной цитометрии / И. В. Кудрявцев [и др.] // Медицинская иммунология. - 2015. - Т. 17. - № 6. - С. 525-538.
7. Куртасова, Л. М. Основы метаболической иммунореабилитации детей с атопическим дерматитом / Л. М. Куртасова, В. Т. Манчук, А. А. Савченко. - Красноярск: ГУПП «Сибирь», 2002. - 153 с.
© Беленюк В. Д., Гвоздев И. И., Мошев А. В., 2018 УДК 616.381-002.3:611.018.5
АКТИВНОСТЬ НАД(Ф)-ЗАВИСИМЫХ ДЕГИДРОГЕНАЗ НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ В НОРМЕ И ПРИ РАСПРОСТРАНЁННОМ ГНОЙНОМ ПЕРИТОНИТЕ
И. И. Гвоздев1, В. Д. Беленюк1, Д. Ш. Курбанов2, В. А. Шапкина2, А. В. Мошев1
'Обособленное подразделение Федерального исследовательского центра «Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук» «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера» 2Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого
Статья посвящена исследованию активности НАД(Ф)-зависимых дегидрогеназ нейтрофильных гранулоцитов крови больных с распространённым гнойным перитонитом. Показано, что в нейтрофилах больных распространённым гнойным перитонитом наблюдается повышение интенсивности реакций цикла трикарбоновых кислот, дыхательной цепи и синтеза белка. При этом отмечается, что активность аэробных реакций лактатдегидрогеназы и катаболизма аминокислот была сниженна относительно контрольных значений. Ключевые слова: перитонит, воспаление, нейтрофильные гранулоциты, метаболизм.
Введение. Воспаление является типовым патологическим процессом, развивающимся при большинстве заболеваний, которым организм отвечает на самые различные воздействия. Нейтрофильные гранулоциты, являясь ключевыми клетками воспаления, представляют собой высокореактивное звено в иммунной системе [1; 2]. Они первыми мобилизуются в очаг воспаления, от их фагоцитарной активности во многом зависит эффективность противомикробной защиты организма [3; 4]. Воспринимая многочисленные сигналы о дестабилизации внутренней среды, нейтрофилы модулируют свои функции, нацеленные на её восстановление. Активированные нейтрофилы сами становятся мощными эффекторами пусковых и регуляторных механизмов каскадных реакций, обеспечивающих развитие воспаления. Это связано с тем, что нейтрофильные гранулоциты способны не только в качестве эффекторов продуцировать цитотоксические молекулы, но и как регуляторные клетки синтезировать широкий спектр различных цитокинов [5; 6; 7].
На сегодняшний день не вызывает сомнений тот факт, что в основе функциональных проявлений клеток иммунной системы лежат их метаболические реакции. Нарушение метаболического статуса обусловливает недостаточную реакцию клеток иммунной системы. Исследование метаболических параметров, с учётом их высокой информативности для характеристики функционального состояния клеток иммунной системы, позволит улучшить диагностику иммунных нарушений, оценить прогноз течения заболевания и правильно выбрать тактику иммунокорригирующей терапии [8; 9].
