CC BY
112
ФАРМАКОЛОГИЯ
УДК 615.07:615.453.6
И. Е. Смехова, В. Ц. Болотова, Ю. М. Перова
ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКВИВАЛЕНТНОСТИ ДЖЕНЕРИКОВ ТРИМЕТАЗИДИНА МЕТОДАМИ IN VITRO И IN VIVO
ГОУ ВПО «Санкт-Петербургская химико-фармацевтическая академия»
В настоящее время в России зарегистрировано 13 тыс. лекарственных средств (ЛС), среди которых воспроизведённые (дженерики) составляют до 90%. Дженерики, вне зависимости от фирмы-производителя, должны отвечать всем требованиям, предъявляемым к оригинальным лекарственным препаратам (ЛП) по надлежащему качеству, эффективности и безопасности. С целью обеспечения взаимозаменяемости при фармакотерапии дженерики должны быть фармацевтически, биологически и терапевтически эквивалентны оригинальному препарату или препарату сравнения.
Биоэквивалентность определяют методами in vivo (фармакокинетические, фарма-кодинамические, клинические испытания) и в некоторых случаях — методом in vitro. В настоящее время в РФ используются только методы in vivo, которые являются дорогостоящими и продолжительными. Рекомендательные документы ВОЗ (2006), Европейского медицинского агентства (2010), США, а также МЗ Украины (2007) допускают определение взаимозаменяемости дженериков на основании оценки их биофармацев-тических свойств и эквивалентности профилей растворения по так называемой процедуре биовэйвер (biowaiver) [1, 2].
При выборе для испытания биоэквивалентности метода in vitro необходимо учитывать следующие положения: растворимость и проницаемость лекарственного вещества (ЛВ) через биомембраны, его высвобождение из ЛП в различных условиях, вспомогательные вещества (ВВ), входящие в состав ЛП, а также риск для больных в случае некорректного решения об отказе от испытаний биоэквивалентности in vivo.
Дженерики широко назначаются для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, занимающих лидирующую позицию среди опасных болезней XX и XXI вв. Одним из препаратов, оказывающих антиангинальное, антигипоксическое и кардиопротек-тивное действие, является триметазидин — ингибитор окисления жирных кислот. Назначается в комплексной терапии заболеваний сердечно-сосудистой системы. Триметазидин выпускается в форме таблеток, покрытых оболочкой (п/о), капсул и таблеток с модифицированным высвобождением. В РФ зарегистрировано около 20 дженериков
© И. Е. Смехова, В. Ц. Болотова, Ю. М. Перова, 2011
триметазидина. В связи с вышесказанным актуальна оценка эквивалентности таблеток и капсул триметазидина, выпускаемых различными предприятиями.
Цель настоящей работы — исследование методами in vitro и in vivo эквивалентности дженериков таблеток триметазидина, представленных на фармацевтическом рынке РФ.
Материалы и методы. Объектами исследования являлись зарегистрированные в РФ «Триметазидин» таблетки, покрытые оболочкой, 20 мг, шести отечественных (условно обозначенные как Т1, Т2, Т3, Т4, Т5, Т6) и двух зарубежных (обозначенные Т8, Т9) производителей и «Триметазидин» капсулы, 20 мг, отечественного производителя (Т7) (далее — таблетки и капсулы триметазидина). Препарат сравнения — «Меда-рум 20» — таблетки, п/о, производства ЗАО ФП «Оболенское», РФ (условно обозначенные Т1). Все препараты соответствовали требованиям действующих нормативных документов (НД) и фармакопейных статей предприятий-изготовителей.
Исследование по тесту «Растворение» проводили на приборе «Erweka» DT6 (Германия) на аппарате «вращающаяся корзинка» при скорости вращения 100 об/мин. Эквивалентность методом in vitro определяли в соответствии с рекомендациями [2], в средах объемом 900 мл с различными значениями рН: 0,1 М растворе кислоты хлористо-водородной (НС1), рН 1,2, ацетатном буферном (АБ), рН 4,5 и фосфатном буферном (ФБ), рН 6,8 растворах. Испытание проводили на 12 таблетках каждого ЛП. Для построения кривых высвобождения через 5, 15, 30, 45 и 60 мин после начала испытания отбирали пробы объемом 10 мл, фильтровали через бумажный фильтр типа «белая лента». Отобранный объем восполняли соответствующей средой растворения.
Определение содержания вещества, перешедшего в среду растворения, проводили методом УФ спектрофотометрии. Оптическую плотность измеряли в максимумах поглощения при длинах волн 232 нм (в среде ФБ и НС1) или 270 нм (в среде АБ). В качестве раствора сравнения использовали соответствующую среду растворения. Для каждого испытания готовили раствор стандартного образца триметазидина.
Для установления подобия полученных кривых рассчитывали коэффициент подобия (f2) по формуле (1) [2]:
где п — число точек времени, R и T — значения растворения препарата сравнения и дженерика (в %) за время t.
Антигипоксическое действие таблеток триметазидина оценивали на трех моделях гипоксии: острой гистотоксической, гемической и гиперкапнической в гермообъеме на 300 белых беспородных мышах-самцах, массой тела 20-25 г, полученных из питомника «Рапполово» РАМН. Водные суспензии исследуемых таблеток вводили перорально в дозе 6,7 мг/кг. Регистрировали продолжительность жизни и выживаемость мышей. Контрольным животным тем же путем и в те же сроки вводили равный объем воды очищенной.
Для сравнения влияния дженериков триметазидина на продолжительность жизни мышей рассчитывали взвешенную среднюю по формуле (2):
(1)
где X, — продолжительность жизни; Х — средняя величина, показывающая, во сколько раз продолжительность жизни превышает контроль; — повторяемость индивидуальных значений.
Для оценки антигипоксической активности препаратов, используя методы статистических обработок, определяли усредненную интегральную активность (Е УИА) по формуле (3):
Рис. 1. Эффективность дженерика Т1 на трех моделях гипоксических состояний
где а — расстояние от точки на оси «геми-ческая гипоксия» до точки на оси «гипоксия с гиперкапнией в гермообъеме» (рис. 1); b — расстояние от точки на оси «гемическая гипоксия» до точки на оси «гистотоксическая гипоксия»; с — расстояние от точки на оси «гистотоксическая гипоксия» до точки на оси «гипоксия с гиперкапнией в гермообъеме».
Результаты и обсуждение. В соответствии с международными НД оценка биоэквивалентности дженериков таблеток с немедленным высвобождением методом in vitro по процедуре биовэйвер возможна при соответствии ЛП ряду требований [1, 2]: ЛВ должны иметь определенные растворимость и проницаемость, широкий терапевтический индекс. В состав таблеток должны входить ВВ, обычно используемые в исследуемой лекарственной форме, хорошо изученные, не влияющие на всасывание ЛВ и на моторику желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Профили растворения таблеток дженерика и препарата сравнения должны быть подобны в трех средах со значениями рН, имитирующими рН различных отделов ЖКТ.
В соответствии со свойствами растворимости и проницаемости, триметазидин относится к III классу по биофармацевтической классификации [3]. У него высокий терапевтический индекс, его не назначают по критическим показаниям. В состав исследуемых ЛП входят хорошо изученные, широко используемые ВВ [4, 5]. Таким образом, объект исследования удовлетворяет критериям возможности проведения процедуры биовэйвер согласно рекомендациям международных документов.
Установлено, что в средах с рН 1,2; 4,5 и 6,8 из таблеток производителей Т1, Т2, Т3, Т5 и Т9, а также капсул Т7 к 15 мин высвободилось более 85% триметазидина. Полученные результаты позволяют сделать вывод об эквивалентности кинетики растворения препаратов этих производителей без математической оценки. В то же время, дженерики производителей Т4, Т6, Т8 нельзя считать взаимозаменяемыми с таблетками триметазидина производителя Т1 в соответствии со значениями коэффициентов подобия, которые не укладывались в необходимые пределы (50-100) (табл. 1).
Таблица 1. Коэффициенты подобия (/2) профилей растворения дженериков триметазидина
(препарат сравнения — Т1)
Производитель (усл. обозначен.) Т4 Т6 Т8
Среда растворения НС1 АБ ФБ НС1 АБ ФБ НС1 АБ ФБ
Значениеf (50-І00) 52,70 45,27 50,05 23,0І 48,47 48,96 3І,84 53,47 4І,90
Подобие Да Нет Да Нет Нет Нет Нет Да Нет
Для подтверждения результатов, полученных методом in vitro, нами были проведены исследования in vivo. Обобщенные результаты антигипоксической активности препаратов триметазидина, полученные на трех моделях гипоксии, представлены в таблице 2. Было установлено, что ЛП производителей Т4 и Т8 не влияли на прирост продолжительности жизни животных на двух моделях гипоксии, производителя Т9 — на одной. Максимальный прирост продолжительности жизни, независимо от модели гипоксии, наблюдали после введения таблеток производителей ТІ, Т6 и капсул Т7.
Таблица 2. Влияние дженериков триметазидина на изменение продолжительности жизни животных (результаты представлены относительно контроля, который принят за 1,00)
ЛП (условное обозначение) Модели гипоксии
гемическая гистотоксическая гипоксия с гиперкапнией в гермообъеме взвешенная средняя
Контроль І,00 ± 0,00 І,00 ± 0,00 І,00 ± 0,00 І,00 ± 0,00
ТІ І,64 ± 0,64* І,70 ± 0,70* І,56 ± 0,56* І,63 ± 0,07*
Т2 І,3І ± 0,3І* І,6І ± 0,6І* І,22 ± 0,22* І,38 ± 0,20*
Т3 І,06 ± 0,06 І,23 ± 0,23* І,42 ± 0,4І* І,24 ± 0,І9
Т4 І,93 ± 0,93* І,00 ± 0,00 І,00 ± 0,00 І,3І ± 0,54*
Т5 І,43 ± 0,43* І,І2 ±0,І2 І,37 ± 0,37* І,3І ± 0,ІІ*
Т6 І,54 ± 0,54* І,77 ± 0,77* І,4І ± 0,4І* І,57 ± 0,І8*
Т7 І,26 ± 0,26 2,03 ± І,03* І,53 ± 0,53* І,6І ± 0,39*
Т8 І,43 ± 0,43* І,00 ± 0,00 І,00 ± 0,00 І,І4 ± 0,25
Т9 0,98 ± 0,02 І,76 ± 0,76* І,6І ± 0,6І* І,45 ± 0,4І*
Примечание: * — отличия от контроля статистически значимы.
Для оценки антигипоксической активности ЛП строили график (на рис. 1 приведен пример для таблеток производителя Т1), отражающий эффективность дженериков на трех моделях гипоксических состояний, и рассчитывали £ УИА (формула 3). Сравнительная антигипоксическая активность препаратов представлена на рис. 2.
І0І
Т5; 2,83
Рис. 2. Сравнительная антигипоксическая характеристика дженериков триметазидина
Максимальный антигипоксический эффект наблюдался после введения таблеток производителя Т1 и капсул Т7. Близкими по антигипоксической активности были дженерики производителей Т2, Т3, Т5, Т9, что согласуется с результатами, полученными в опытах in vitro.
Вывод. Показана возможность проведения процедуры биовэйвер для таблеток триметазидина пяти производителей (Т1, Т2, Т3, Т5 и Т9) на основании установленной без математической оценки эквивалентности профилей растворения в трех средах. Результаты исследования in vitro подтверждены данными, полученными при изучении антигипоксической активности препаратов in vivo.
Литература
1. Guidelines on the investigation of bioequivalence. CPMP/EWP/QWP/1401/98 Rev. 1/ Corr *. — EMEA, 27 p. (2010).
2. Multisource (Generic) Pharmaceutical Products: Guidelines on Registration Requirements to Establish Interchangeability // WHO Technical Report Series. 2006. № 937. Annex 7.
3. Biopharmaceutics Classification System (BCS). Электронный ресурс. Режим электронного доступа: http://69.20.123.154/services/bcs/results.cfm
4. FDA Inactive Ingredient Database. Available from: URL: http://www.fda.gov/cder/iig/iigfaqWEB. htm.
5. О контроле качества вспомогательных веществ // Письмо Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития. № 01И-343/05. (2005)
Статья поступила в редакцию 15 июля 2011 г.
