CC BY
59УДК 541.64:536
Ekaterina N. Glazacheva1, Alina V. Voronova2, Maya V. Uspenskaya3
investigation of biopolymer film based on chitosan/gelatin blend
ITMO University, Kronverksky pr., 49, St. Petersburg 197101, Russia. e-mail: termonna@mail.ru
Preparation of a new biopolymer film composition based on the chttosan/gelatin blend by the casting method is described. Non-toxic covalent and ionic cross-linking agents, i.e., tannin and calcium chloride, respectively, were used for cross-Unking of the blend. The morphology of the surface and the structure of the biopolymer films were studied by optical microscopy and IR Fourier spectroscopy. The effect of the nature and content of the cross-linking agent from 0 to 7 wt% on the structure, morphology of the surface, and mechanical properties of biopolymer film compositions was demonstrated. The attractiveness of the materiass based on the chttosan/gelatin blend as film coatings for medical appiications is shown.
Keyword: chitosan, gelatin, calcium chloride, tannin, biopolymer film, biopolymer, cross-linking agent.
Введение
В настоящее время многие природные полимеры активно применяются при разработке изделий медицинского назначения. Пленки, мембраны, матрицы на основе природных биополимеров являются биодеградируемыми материалами, обеспечивающими рост клеток и регенерацию тканей [1, 2]. Материалы для медицины должны обладать такими обязательными свойствами, как биосовместимость, развитая пористая структура, механическая прочность, биодеградируемость, способность поддерживать рост и пролиферацию клеток, сохранять метаболические функции и ингибировать инфекции [3]. Существует огромный выбор природных полимеров, обладающих перспективами применения в разработке пленок медицинского назначения: хитозан, крахмал, желатин, коллаген и др. [4-7].
Хитозан - полисахарид, сополимер глюкозамина и N-ацетилглюкозамина, получаемый из распространенного в природе хитина путем N-деацетилирования. Растворимость хитозана в кислой среде определяется его структурой - наличием свободных амино и N-ацетильных групп. Хитозан обладает антибактериальной активностью против грибов и бактерий, которая объясняется взаимодействием
Е.Н. Глазачева1 , А.В. Воронова2 , М.В. Успенская3
исследование v биополимернои
пленочной композиции
на основе смеси хитозана и желатина
Университет ИТМО, Кронверкский пр., 49, Санкт-Петербург 197101, Россия. e-mail: termonna@mail.ru
В данной работе получена новая биополимерная пленочная композиция на основе смеси хитозан/желатин методом полива из раствора. Предложен метод сшивания смеси с использованием нетоксичных сшивающих реагентов ковалентного и ионного типа - танина и хлорида кальция, соответственно. Изучены морфология поверхности и структура биополимерных пленок с помощью оптической микроскопии и методом ИК-Фурье спектроскопии. Продемонстрировано влияние природы и содержания сшивающего агента в количестве от 0 до 7 мас.% на структуру, морфологию поверхности и механические свойства биополимерных пленочных композиций. Показана перспективность использования материала на основе смеси хитозан/желатин в качестве пленочных покрытий для медицинских применений.
Ключевые слова: хитозан, желатин, хлорид кальция, танин, биополимерная пленка, биополимер, сшивающий реагент.
катионных аминогрупп хитозана с анионами стенок бактериальных клеток, приводящим к гибели клеток бактерий [8]. Хитозан обладает такими важными свойствами, как нетоксичность, способность к биологическому разложению, биосовместимость, антиоксидантный эффект, биоадгезия, способность к пленкообразованию [9]. Данный полисахарид нашел широкое распространение в различных областях медицины: адресная доставка лекарств, раневые покрытия, тканевая инженерия [10-15]. Помимо всех перечисленных положительных свойств хитозан имеет широкую сырьевую базу, что делает его легкодоступным материалом. Однако главными недостатками данного биополимера являются ограниченные механические свойства, что препятствует его расширенному применению.
Сочетание хитозана с другими полимерами направлено на преодоление этих недостатков [16, 17]. Границы применения хитозана расширяет его высокая реакционная способность образовывать комплексы со сшивающими агентами. Химическое сшивание является эффективным инструментом для улучшения характеристик биоматериалов на основе хитозана, таких как механическая прочность и биоустойчивость.
1 Глазачева Екатерина Николаевна, аспирант, каф. ИТТЭК, e-mail: termonna@mail.ru
Ekaterina N. Glazacheva, a graduate student, Department of information technology in fuel and energy industry,
2 Воронова Алина Алексеевна, студент, каф. ИТТЭК, e-mail: arxipowalina12@yandex.ru Alina A. Voronova, student, Department of information technology in fuel and energy industry
3 Успенская Майя Валерьевна, д-р техн. наук, профессор, зав. кафедрой ИТТЭК, университет ИТМО, e-mail: mvuspenskaya@mail.ru
Maya V. Uspenskaya, Dr.Sci. (Eng.), Professor, Head of Department of information technology in fuel and energy industry Дата поступления - 4 июля 2018 года
Хитозан обладает сравнительно невысокой пластичностью, что затрудняет использование данного материала и требует добавления к нему пластификатора, в качестве которого часто используют коллаген или желатин [18-20]. В данной работе в качестве пластификатора выбран желатин, так как этот материал экономически выгоднее коллагена, но при этом не уступает ему в пластических свойствах. Желатин представляет собой белок, который получают посредством контролируемой денатурации коллагена, основного компонента кожи, костей и соединительной ткани.
Для сшивания структуры хитозана и желатина эффективен глутаровый альдегид, но этот материал имеет существенный недостаток - токсичность, поэтому существует необходимость его замены. Перспективными материалами для сшивки структур биополимеров являются хлорид кальция и танин, так как они не токсичны и способны упрочнить биополимерные структуры.
Таким образом, разработка метода получения и исследование биополимерных структур на основе хитоза-на и желатина с введением сшивающих агентов, улучшающих физико-химические свойства смесевой композиции, являются перспективным направлением, что определяет практическую значимость данной работы.
Экспериментальная часть
Материалы. В работе были использованы следующие материалы: хитозан (средний молекулярный вес 100-150 кДа, степень деацетилирования 75-85%, SigmaAldrich, США), желатин (ЛенРеактив, Россия), глицерин (чда, Вектон, Россия), кальций хлористый (ч, Вектон, Россия), уксусная кислота ледяная (хч, Вектон, Россия), танин (имп. ч, ООО «Экспит», Китай).
Методы исследования. Исследование структуры полученных полимерных пленок проводили методом ИК-Фурье спектроскопии на спектрометре Tensor 37 (BRUKER, Германия), оснащенным приставкой нарушенного полного внутреннего отражения (НПВО).
Изучение морфологии поверхности образцов биополимерных пленок на основе хитозана проводили с помощью оптического микроскопа Olympus STM6.
Исследование физико-механических характеристик пленочных материалов проводили на анализаторе текстур TA.XTplus (StableMicroSystems, Великобритания).
Приготовление биополимерных пленок. Приготовление биополимерных пленок проводили методом полива пленкообразующего раствора на подложку. Предварительно готовили 1 %-ные растворы хитозана и желатина в 2 %-ном растворе уксусной или малоновой кислоты при температуре 60 °С и скорости перемешивания 200 об/мин. Далее растворы полимеров смешивали в различном соотношении хитозан/желатин: 100/0, 90/10, 80/20, 70/30, 60/40, 50/50. Содержание сшивающего агента варьировали в интервале 1-10 мас. %. В качестве пластификатора использовали глицерин. Полученную реакционную смесь перемешивали при температуре 25 °С в течение 30 мин, затем раствор наносили на чашки Петри.
Сушка биополимерных пленок осуществлялась при комнатной температуре в течение 48 ч. После высыхания пленочную композицию промывали в дистиллированной воде. Влагосодержание полученных пленок с добавлением в качестве сшивающего агента танина составило 15-17 мас. %, хлорида кальция - 20-24 мас.%.
Результаты и их обсуждение
Получены пленки на основе смеси хито-зан/желатин с использованием двух растворителей: 2 %-
ные растворы уксусной и малоновой кислоты. Слабый раствор уксусной кислоты наиболее распространенный растворитель хитозана. Интерес также представляет малоновая кислота, представляющая собой двухосновную предельную карбоновую кислоту, способную оказывать дополнительное сшивающее действие. Оптические микрофотографии полученных пленочных композиций приведены на рисунке 1. При использовании в качестве растворителя 2 %-го раствора малоновой кислоты происходит интенсивное фазовое разделение, при растворении в 2 %-ом растворе уксусной кислоты образуется пленка, имеющая оптически однородную поверхность.
а) б)
Рисунок 1. Оптические фотографии биополимерных пленок состава 50 % хитозан/ 50 % желатин, приготовленных с использованием разных растворителей: а) 2 % малоновая кислота; б) 2 % уксусная кислота
При введении сшивающего агента происходит изменение цвета пленки: при добавлении танина и хлорида кальция пленка приобретает желтоватый и матовый оттенок, соответственно.
Исследовано влияние содержания танина на морфологию поверхности пленочной композиции хитозан/желатин. При использовании малоновой кислоты формируется пленка, имеющая неоднородную поверхность (рисунок 2).
шшак
ИггЧИ®
и
ЕЙЯ
а) б в
Рисунок 2. Оптические микрофотографии образцов биополимерной пленки состава 50 % хитозан/50 % желатин (растворитель 2 % малоновая кислота) с содержанием танина, мас. %: а) 3; б) 7; в) 10
При введении танина в композиции, приготовленные в растворе уксусной кислоты, наблюдается оптически однородная поверхность при содержании сшивающего реагента до 7 мас. % (рисунок 3).
в)
г)
Рисунок 3. Оптические микрофотографии образцов биополимерной пленки состава 50 % хитозан/50 % желатин с содержанием танина, мас. %: а) 1; б) 3; в) 7; г) 10
Микрофотографии биополимерных пленочных композиций с различным содержанием хлорида кальция в поляризованном свете на отражение, представлены на рисунке 4. Установлено, что при добавлении хлорида кальция в состав полимерной композиции в количестве более 1 мас. % пленки обладают пористой структурой.
щение на частоте 1550 см-1, характерное для вторичной амидной группы.
В спектрах смеси хитозан/желатин присутствуют все характерные для данных веществ полосы поглощения без заметного смещения. Снижение интенсивности полосы на частоте 1640 см-1 может быть обусловлено увеличением содержания желатина в пленке.
При использовании хлорида кальция в качестве сшивающего агента с увеличением его содержания наблюдается увеличение количества адсорбированной воды (3350 см-1) (рисунок 6). Как видно на ИК спектре сшитой композиции хитозан/желатин, снижается интенсивность полосы 1640 см-1, соответствующей колебаниям связей (-С=0). Наблюдается также рост интенсивности полосы поглощения на частоте 1550 см-1 -Ш2 групп хито-зана для композиции, содержащей 1 мас. % СаС12 и снижение для 5 мас. % СаС12. Таким образом, можно предположить, что при введении сшивающего агента СаС12 в количестве 5 мас. %, взаимодействие функциональных групп хитозана с карбоксильными группами желатина становится более выражено.
в) г)
Рисунок 4. Оптические микрофотографии образцов биополимерной пленки состава 50 % хитозан/50 % желатин с содержанием хлорида кальция, мас. %: а) 0; б) 1; в) 3; г) 5
Таким образом, при сшивке биополимеров с помощью хлорида кальция происходит формирование пористой структуры, в то время как при использовании танина подобный эффект отсутствует.
Фурье ИК-спектроскопия. Для изучения химической структуры смесей хитозан/желатин были сняты ИК спектры (рисунок 5).
Рисунок 6. Инфракрасные спектры смесевых композиций 50 % хитозан/50 % желатин с различным содержанием СаС12, мас.%: 1 - 0; 2 -1; 3 - 5
На ИК спектрах биополимерных композиций хитозан/желатин, сшитых с помощью танина (рисунок 7) наблюдается изменения интенсивностей полос поглощения на частоте 3250 см-1 и 1650 см-1, относящихся к колебаниям связей N-H и -С=0, соответственно. Это позволяет сделать вывод, что при введении сшивающего агента танина происходит взаимодействие функциональных групп хитозана в композиции хитозан/желатин с карбоксильными группами желатина.
Рисунок 5. Инфракрасные спектры смесевых композиций хитозан/желатин: 1 - 100 % хитозан; 2 - 70 % хитозан/30 % желатин; 3 - 50 % хитозан/50 % желатин
ИК спектр хитозана содержит полосы поглощения, обусловленные валентными колебаниями ОН-групп в области 3750-3000 см-1, которые перекрываются с валентными колебаниями -Ш2 групп (3400-3200 см-1). Полосы на частоте 2920 см-1 и 2875 см-1 соответствуют валентным колебаниям связи в группах -СН2 и -СН3, соответственно. Поглощение на частоте 1640 см-1 соответствует валентным колебаниям (-С=0) связей в группе CONHR, на частоте 1540 см-1 - деформационным колебаниям аминогруппы -Ш2. Интенсивные полосы поглощения на частоте 1650 см-1 и 1550 см-1 указывают на высокую степень деацетилирования хитозана.
К основным полосам поглощения, характеризующим желатин, относятся полосы поглощения валентных колебаний связи N-H на частоте 3250 см-1, полоса 1650 см-1, соответствующая колебаниям группы -С=0 и погло-
Рисунок 7. Инфракрасные спектры смесевых композиций 50 % хитозан/50% желатин с различным содержанием танина, мас.%: 1 - 0; 2 - 7 Таким образом, о взаимодействии сшивающих агентов (танина и хлорида кальция) свидетельствует смещение полосы поглощения 1650 см-1, которая соответствуют связям -С=О, группы амида I желатина. То есть механизм сшивки танином и хлоридом кальция отличается только видом взаимодействия сшивающего агента с амид-ной группой желатина - танин образует водородные связи с боковыми функциональными группами и -С=О группой в -СОNH-, что можно наблюдать в виде уширения и незна-
чительного смещения по частоте полосы поглощения 1650 см-1. В случае с хлоридом кальция происходит образование солевых мостиков с боковыми группами желатина и координационное взаимодействие с группой -С=0 желатина и хитозана. Это проявляется в значительно большем смещении полосы 1650 см-1 и изменением интенсивности полосы 1550 см-1 (деформационные колебания 1550 см-1).
Физико-механические свойства биополимерных пленок. Исследовано влияние соотношения биополимерных компонентов, природы и содержания сшивающего реагента на физико-механические свойства пленочных материалов.
На рисунке 8 представлена зависимость удлинения при прокалывании от соотношения компонентов в смеси хитозан/желатин: эластичность пленок увеличивается с ростом содержания хитозана. Такой эффект обусловлен более высокой жесткостью полимерной цепи хи-тозана по сравнению с желатином [21]. Варьируя содержание желатина в смеси можно добиться значений эластичности биополимерной композиции, близких к эластичности ткани организма. Это делает возможным применение таких материалов в качестве покрытий медицинского назначения для ускоренной регенерации тканей.
связей между хитозаном, желатином, полифенолом и глицерином наблюдали и другие авторы [22].
Рисунок 8. Удлинение при прокалывании образцов биополимерных пленок с различным соотношением компоненто в хитозан / желатин
Введением сшивающего реагента в полимерную композицию можно повысить сроки деградации пленки, а также улучшить физико-механические свойства. Введение хлорида кальция в полимерную смесь хитозан/желатин приводит к увеличению относительного удлинения при прокалывании в 1,5-2 раза (рисунок 9). При этом, дальнейшее увеличение доли сшивающего реагента, более 7 мас. %, приводит к снижению эластичности полимерных композиционных пленок.
Рисунок 9. Удлинение при прокалывании образцов биополимерных пленок состава 50 % хитозан/50 % желатин с различным содержанием СаС12
Результаты механических испытаний биополимерных пленок, сшитых танином, приведены на рисунке 10. Введение танина приводит к снижению эластичности плёнок. Такой эффект, связанный с уменьшением подвижности полимерных цепей вследствие образования
Содержание танина
Рисунок 10. Удлинение при прокалывании образцов биополимерных пленок состава 50 % хитозан/50 % желатин с различным содержанием танина
Заключение
В данной работе получены и исследованы полимерные пленочные композиции на основе смеси биополимеров хитозан/желатин с использованием нетоксичных сшивающих реагентов — хлорида кальция и танина. Биополимерные пленки приготовлены методом полива пленкообразующего раствора на подложку.
Исследовано влияние используемого растворителя и содержания сшивающего реагента на морфологию поверхности полученных смесевых композиций. Показано, что применение раствора малоновой кислоты приводит к интенсивному фазовому разделению. Плёнки, приготовленные с использованием раствора уксусной кислоты, обладают оптически однородной поверхностью.
Результаты ИК-Фурье спектроскопии подтвердили формирование сшитой структуры при введении хлорида кальция и танина, соответственно.
При проведении механических испытаний установлено, что значения удлинений при прокалывании пленок, содержащих до 5 мас. % хлорида кальция увеличиваются в 1,5-2 раза. Полученные биополимерные пленочные композиции хитозан/желатин/хлорид кальция могут быть использованы при разработке изделий медицинского назначения.
Литература
1. Добровольская И.П, Юдин В.Е, Попрядухин П. В., Иванькова Е.М. Полимерные матрицы для тканевой инженерии СПб.: Издательско-полиграфическая ассоциация университетов России, 2016. 224 с.
2. Parka S., Liha E, Parka K, Jounga Y.K,b, Han D.K. Bi-opolymer-based functional composites for medical applications // Progress in Polymer Science. 2017. No 68. P. 77-105.
3. Rebelo R, Fernandes M, Fangueiro R. Biopolymers in medical implants: a brief review // Procedia Engineering. 2017. V. 200. P. 236-243.
4. Coimbra P. Preparation and chemical and biological characterization of a pectin/chitosan polyelectrolyte complex scaffold for possible bone tissue engineering applications // International Journal of Biological Macromolecules. 2011. V. 48. No 1. P. 112-118.
5. Ferreira A.M., Gentile P., Chiono V., Ciardelii G. Collagen for bone tissue regeneration // Acta Biomaterialia. 2012. V 8. P. 3191-3200.
6. Kim I.Y. Chitosan and its derivatives for engineering applications//Biotechnology Advances. 2008.V.26. P.1-21.
7. Aravamudhan A., Ramos D.M., Nip J,, Harmon M.D, James R, Deng M, Laurencin C.T, YuX., Kumbar S.G. Cellulose and Collagen Derived Micro-Nano Structured Scaffolds for Bone Tissue Engineering // Journal of Biomedical Nanotech-nology. 2013. V. 9. No 4. P.719-731.
8. Aranaz I. Functional Characterization of Chitin and Chi-tosan // Current Chemical Biology. 2009. V. 3. P. 203-230.
9. Чирков С.Н. Противовирусная активность хитозана //Прикладная биохимия и микробиология. 2002. Т.38С.5
10. Altiok D, Altiok E. Tihminlioglu F. Physical, antibacterial and antioxidant properties of chitosan films incorporated with thyme oil for potential wound healing applications // Journal of Materials Science: Materials in Medicine. 2010. V. 21. P. 2227-2236.
11. Кулиш Е.И., Чернова В.В., Колесов С.В. Пленки биомедицинского назначения на основе хитозана // Вестник Башкирского университета. 2007. Т. 12. № 3. C. 23-25.
12. Khora E, Lim L Y Implantable applications of chitin and chitosan // Biomaterials. 2003. No 24. P. 2339-2349.
13. Ravi Kumar M.N.V. A review of chitin and chitosan applications // Reactive and Functional Polymers. 2000. V. 46. No 1. P. 1-27.
14. Mengatto L.N., Heibiing I.M, Luna J.A. Recent Advances in Chitosan Films for Controlled Release of Drugs // Recent Patents on Drug Delivery & Formulation. 2012. No 6. P. 156-170.
15. Qian Y.F., Zhang K.H, Chen F, Ke Q.F, Mo X.M. Crosslinking of gelatin and chitosan complex nanofibers for tissue engineering scaffolds // Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 2011. No 22 (8). P. 1099-1113.
16. Воронько Н.Г., Деркач С.Р, Соколан НИ. Взаимодействие желатины с хитозаном: влияние концентрации полисахарида // Вестник МГТУ. 2015. Т. 18. № 1. С. 80-89.
17. Lih E. Rapidly curable chitosan-PEG hydrogels as tissue adhesives for hemostasis and wound healing // Acta Bio-materialia. 2012. V. 8. No 9. P. 3261-3269.
18. Parvez S, Rahman M.M, Khan M.A, Khan M.A.H, Islam J.M.M., Ahmed M, Rahman M.F., Ahmed BB. Preparation and characterization of artificial skin using chitosan and gelatin composites for potential biomedical application // Polymer Bulletin. 2012. No 69. P. 715-731.
19. Nagahama H, Maeda H, Kashiki T., Jayakumar R, Furuike T, Tamura H.Preparation and characterization of novel chitosan/gelatin membranes using chitosan hydrogel // Carbohydrate Polymers. 2009. No 76. P. 255-260.
20. Kim S, Marcel E, Yang Z, Han BB. Chitosan/gelatin-based films crosslinked by proanthocyanidin // Journal of Biomedical Materials Research Part B: Applied Biomaterials. 2005. No 75(2). P. 442-450.
21. Pulieri E, Chiono V,, Ciardelli G., Vozzi G., Ahluwalia A., Domenici C, Vozzi F, Giusti P. Chitosan/gelatin blends for biomedical applications // Journal of Biomedical Materials Research Part A. 2008. No 86(2). P. 311-322.
22. Rui L., Xie M., Hu B, Zhou L, Yin D., Zeng X. A comparative study on chitosan/gelatin composite films with conjugated or incorporated gallic acid // Carbohydrate Polymers URL: http://dx.doi.org/10.1016/j.carbpol.2017.05.072
References
1. Dobrovol'skaja I.P., Judin V.E., Poprjaduhin P.V., Ivan'kova E.M. Polimernye matricy dlja tkanevoj inzhenerii SPb.: Izdatel'sko-poligraficheskaja associacija universitetov Rossii, 2016. 224 s.
2. Parka S, Liha E, Parka K, Jounga Y.K,b, Han D.K. Bi-opolymer-based functional composites for medical applications // Progress in Polymer Science. 2017. No 68. P. 77-105.
3. Rebelo R, Fernandes M., Fangueiro R. Biopolymers in medical implants: a brief review // Procedia Engineering. 2017. V. 200. P. 236-243.
4. Coimbra P. Preparation and chemical and biological characterization of a pectin/chitosan polyelectrolyte complex scaffold for possible bone tissue engineering applications //
International Journal of Biological Macromolecules. 2011. V. 48. No 1. P. 112-118.
5. Ferreira A.M., Gentile P., Chiono V., Ciardelli G. Collagen for bone tissue regeneration // Acta Biomaterialia. 2012. V 8. P. 3191-3200.
6. Kim I.Y. Chitosan and its derivatives for tissue engineering applications//Biotechnology Advances.2008.V.26. No1.P.1-21.
7. Aravamudhan A., Ramos D.M., Nip J, Harmon M.D, James R, Deng M, Laurencin C.T, YuX, Kumbar S.G. Cellulose and Collagen Derived Micro-Nano Structured Scaffolds for Bone Tissue Engineering // Journal of Biomedical Nanotech-nology. 2013. V. 9. No 4. P.719-731.
8. Aranaz I. Functional Characterization of Chitin and Chitosan // Current Chemical Biology. 2009. V. 3. P. 203-230.
9. Chirkov S.N. Protivovirusnaja aktivnost' hitozana // Pri-kladnaja biohimija i mikrobiologija. 2002. T. 38. № 1. S. 5-13.
10. Attiok D, Attiok E. Tihminlioglu F. Physical, antibacterial and antioxidant properties of chitosan films incorporated with thyme oil for potential wound healing applications // Journal of Materials Science: Materials in Medicine. 2010. V. 21. P. 2227-2236.
11. Kulish EI, Chernova V.V., Kolesov S.V. Plenki bio-medicinskogo naznachenija na osnove hitozana // Vestnik Bashkirskogo universiteta. 2007. T. 12. № 3. C. 23-25.
12. Khora E., Lim L.Y. Implantable applications of chitin and chitosan // Biomaterials. 2003. No 24. P. 2339-2349.
13. Ravi Kumar M.N.V. A review of chitin and chitosan applications // Reactive and Functional Polymers. 2000. V. 46. No 1. P. 1-27.
14. Mengatto L.N., Heibiing I.M, Luna J.A. Recent Advances in Chitosan Films for Controlled Release of Drugs // Recent Patents on Drug Delivery & Formulation. 2012. No 6. P. 156-170.
15. Qian Y.F, Zhang K.H, Chen F, Ke Q.F, Mo X.M. Crosslinking of gelatin and chitosan complex nanofibers for tissue engineering scaffolds // Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 2011. No 22 (8). P. 1099-1113.
16. Voron'ko N.G, Derkach S.R, Soko/an N.I. Vzai-modejstvie zhelatiny s hitozanom: vlijanie koncentracii polisaharida // Vestnik MGTU. 2015. T. 18. № 1. S. 80-89.
17. Lih E. Rapidly curable chitosan-PEG hydrogels as tissue adhesives for hemostasis and wound healing // Acta Bio-materialia. 2012. V. 8. No 9. P. 3261-3269.
18. Parvez S, Rahman M.M, Khan M.A, Khan M.A.H, Islam J.M.M, Ahmed M, Rahman M.F, Ahmed B. Preparation and characterization of artificial skin using chitosan and gelatin composites for potential biomedical application // Polymer Bulletin. 2012. No 69. P. 715-731.
19. Nagahama H, Maeda H, Kashiki T, Jayakumar R, Furuike T, Tamura H.Preparation and characterization of novel chitosan/gelatin membranes using chitosan hydrogel // Carbohydrate Polymers. 2009. No 76. P. 255-260.
20. Kim S, Marcel E, Yang Z, Han B. Chitosan/gelatin-based films crosslinked by proanthocyanidin // Journal of Biomedical Materials Research Part B: Applied Biomaterials. 2005. No 75(2). P. 442-450.
21. Pulieri E, Chiono V, Ciardelli G, Vozzi G, Ahluwalia A., Domenici C, Vozzi F, Giusti P. Chitosan/gelatin blends for biomedical applications // Journal of Biomedical Materials Research Part A. 2008. No 86(2). P. 311-322.
22. Rui L, Xie M, Hu B, Zhou L, Yin D, Zeng X. A comparative study on chitosan/gelatin composite films with conjugated or incorporated gallic acid // Carbohydrate Polymers URL: http://dx.doi.org/10.1016/j.carbpol.2017.05.072.
