Исследование биологической активности пептидов, полученных извнутренних органов животных, перенесших острую кровопотерю Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Информация об авторе: 664079, Иркутск, м/р Юбилейный, 100, ИГМАПО, тел.: (3952) 748062, e-mail: molokovdd@mail.ru, Молоков Дмитрий Дмитриевич - заведующий кафедрой, д.м.н., профессор.

© ЕСАУЛОВА И.Н., ТАРНУЕВ В.А. - 2012 УДК 615.361.419.015.4:616.005.1

ИССЛЕДОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПЕПТИДОВ, ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ ЖИВОТНЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ ОСТРУЮ КРОВОПОТЕРЮ

Ирина Николаевна Есаулова, Владимир Абогоевич Тарнуев (Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования, ректор - д.м.н., проф.

В.В. Шпрах, кафедра медицинской реабилитации, зав. - д.м.н., проф. Д.Д. Молоков)

Резюме. Цитомедины - это биологически активные соединения, продуцируемые органами и тканями, способные влиять на течение физиологических и биохимических процессов в организме для поддержания гомеостаза. Экспериментально выявлено, что пептиды (цитомедины), выделенные из тканей печени и сердца животных, влияют на адгезивные свойства клеток крови. Феномен лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии является ярким примером тесной взаимосвязи иммунитета и гемостаза, являющихся составными частями единой интегральной клеточно-гуморальной системы защиты организма.

Ключевые слова: гемостаз, кровопотеря, пептиды, резистентность организма, цитомедины.

THE STUDY OF BIOLOGICAL ACTIVITY OF PEPTIDES OBTAINED FROM INTERNAL ORGANS OF ANIMALS, ENDURED ACUTE BLOODLETTING

I.N. Esaulova, V.A. Tarnuev (Irkutsk State Medical Academy of Continuing Education)

Summary. Cytomedines are biologically active compounds, producing by organs and tissues, they are able to influence on the course of physiological and biochemical processes in an organism to suport homeostasis. It has been revealed experimentally that peptides (cytomedines), isolated from tissues of liver and heart of animals influence upon the adhesive properties of blood cells. The phenomenon of lymphocyte-platelet adhesion is an impressive example of the close relationship of immunity and haemostasis, which are integrated components of a single cellular-humoral defense system.

Key words: haemostasis, peptides, bloodletting, adhesion, resistance of the organism, cytomedines.

Кровопотеря представляет собой комплекс компенсаторных и патологических реакций, возникающих в ответ на кровотечение [3]. К адаптивным механизмам компенсации кровопотери относят активацию свертывающей системы крови и процессы тромбообразова-ния, реакции со стороны сердечно-сосудистой системы, восстановление белкового состава крови, устранение дефицита форменных элементов [4,7].

Известно, что кровопотеря сопровождается активацией системы иммунитета, что проявляется в появлении «активированных лимфоцитов», увеличение уровня антител, активацией реакции неспецифического иммунитета [4,6]. Основное место в регуляции системы иммунитета отводится медиаторам в том числе, щелочным полипептидам - цитомединам, которые являются пептидами межклеточной регуляции и обеспечивают гомеостаз организма. Последние образуются в клетках различных органов в результате катапсинового про-теолиза, проникают в жидкие среды организма и способны специфическим образом через рецепторы воздействовать на лимфоциты. При патологии меняется количественный и качественный состав цитомединов и образованные пептиды принимают участие в адаптивных и саногенетических реакциях организма. Одним из перспективных направлений исследования адаптационных реакций организма в ответ на острую кровопо-терю является изучение свойств эндогенных пептидов (цитомединов), продуцируемые органами, тканями и клетками, способные вмешиваться в реализацию самых различных функций организма [1,7].

Цель исследования: изучить биологические свойства пептидов, выделенных из печени и сердца животных, перенесших острую кровопотерю на адгезивные свойства клеток крови.

Материалы и методы

Эксперименты проведены на 20 животных (бараны).

Все животные были разделены на 2 группы: опытные (10 баранов), которым пунктировали яремные вены и извлекали кровь в объеме равной 30% ОЦК за 5 дней до забоя и контрольные без предварительного кровопускания (10 баранов). Забой проводился в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение 4 к Приказу Минздрава СССР №755 от 12.08.1977). Для получения цитомединов были взяты внутренние органы баранов -ткани печени и сердца. Выделение цитомединов проводилось методом уксусно-кислой экстракции с последующим осаждением комплекса полипептидов ацетоном (В.Г. Морозов и В.Х. Хавинсон, 1999).

Цитомедины, полученные из печени и сердца баранов, которым за пять дней до забоя вскрывались яремные вены, и выводилась кровь, в объеме равной 30% ОЦК, были названы «опытными». «Контрольные» ци-томедины были получены из печени и сердца животных без предварительного кровопускания.

Нами проводилось исследование биологической активности цитомединов на 15 образцах крови доноров в возрасте от 18 до 25 лет (средний возраст 19,3±1,8 года), не имеющих соматических, психических заболеваний.

В специальной серии экспериментов мы исследовали адгезивные способности клеток крови различных типов. Анализировалась способность клеток образовывать гетеротипичные агрегаты до и после введения в кровь (in vitro) пептидов, выделенных из печени и сердца баранов.

Исследуемые пептиды, в конечной концентрации 10 мкг/мл, инкубировали с цитратной кровью доноров 60 минут, затем центрифугировали со скоростью 3000 об/ мин в течение 10 минут. Использовалась методика, предложенная Д.И. Бельченко (1993). Осадок ресуспензиро-вали, наносили на предметное стекло и окрашивали по Романовскому-Гимза. Подсчитывали число агрегатов на 100 клеток. В качестве контроля проводили аналогичные тесты, используя кровь доноров, инкубируемую с

физиологическим раствором.

Полученные данные были обработаны статистически общепринятыми методами с применением пакета прикладной программы «BIOSTAT» и программы статистического анализа Microsoft Excel, версия XP. Исследуемые параметры приведены в виде средних величин со стандартным отклонением M±SD, где M - среднее значение, SD - среднее квадратичное отклонение. Статистическую значимость различий оценивали по критерию Манна-Уитни. Изменения считались статистически значимыми при р<0,05.

Результаты и обсуждение

Прежде всего, мы решили выяснить, как влияют цитомедины на лимфоцитарно-тромбоцитарную, эритроцитарно-

тромбоцитарную и лейкоцитарно-эритроцитарную адгезию. Известно, что при повреждении тканей возникает тесное взаимодействие между отдельными лейкоцитами, тромбоцитами и сосудистой стенкой [5,9]. Высвобождающиеся из активированных и поврежденных эндотелиальных клеток биологически активные вещества способны стимулировать адгезивную и агрегационную функцию тромбоцитов. При этом одни лейкоциты присоединяются к эндотелию, тогда как другие адгезируют к уже прикреплённым клеткам. Увеличение феномена лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии может указывать на активацию клеточного гемостаза и повреждение эндотелия [2,5,8].

В последние годы установлено, что одним из свойств лейкоцитов (нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов и эозинофилов) является способность адгези-ровать на своей поверхности кровяные пластинки, благодаря чему возникают коагрега-ты [5]. Но лейкоциты также могут образовывать розетки друг с другом и с эритроцитами [4]. В физиологических условиях в кровотоке в небольших количествах происходит формирование разнообразных агрегатов клеток крови лимфоцитарно-тромбоцитарных (ЛТА), эритроцитарно-тромбоцитраных (ЭТА) и лейкоцитарно-эритроцитарных (ЛЭА). Физиологический смысл в формировании розеток состоит в том, что с одной стороны, микроагрегаты форменных элементов передают определенный гемоста-тический потенциал организму, а с другой стороны, вероятно, в агрегатах происходит взаимоакти-вация клеток и усиление их физиологических функций. Совершено иная картина развивается при массивном образовании розеток в патологии. Количество появляющихся лейкоцитарно-эритроцитарных агрегатов при стенокардии, по сравнению с нормой, увеличивается в 12 раз, а при остром инфаркте миокарда в 26 раз. В десятки раз может возрастать содержание агрегатов при неотложных состояниях [4]. Безусловно, при этом происходит блок микроциркуляции, так как крупные агрегаты не способны проходить через капилляры и нарушают микроциркуляцию. Особенно патофизиологичны лейкоцитарные агрегаты, так как клетки активируются с выделением агрессивных лизосомальных ферментов.

Поскольку предпочтительным местом образования этих агрегатов является венозное русло, то основными «органами-мишенями» являются легкие, печень, сердце. Поэтому, понятен наш интерес к изучению влияния пептидов из печени и сердца на формирование ЛТА, ЭТА и ЛЭА.

Нами установлено (табл. 1), что пептиды, выделенные из тканей печени интактных животных, увеличивают ЛТА (р1< 0,01), вместе с тем и «опытные» цитомедины увеличивают ЛТА (р1<0,01).

В следующей серии исследований нами изучалась активность пептидов, выделенных из сердца животных, на способность клеток крови образовывать межклеточные агрегаты между лимфоцитами и тромбоцитами, эритроцитами и тромбоцитами, лейкоцитами и эритроцитами.

Оказалось, что пептиды, выделенные из сердца ин-тактных животных (табл. 2), увеличивают количество ЛТА (р1<0,01), ЭТА (р1<0,05) и ЛЭА (р1<0,01), и этот эффект и1меет тенденци1ю к нарастанию1 при добавлении пептидов, выделенных из сердца животных, перенесших острую кровопотерю.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют в пользу способности пептидов усиливать синтез и экспрессию адгезивных молекул на мембранах форменных элементов крови, что проявляется в увеличении количества розеток. В целом, такую реакцию следует признать адаптивной, повышающей общую резистентность организма, так как в агрегатах идет взаимоактивация клеток, вследствие чего повышается их функциональная активность.

Таблица 1

Влияние пептидов из печени животных на ЛТА, ЭТА и ЛЭА (M±SD)

Изучаемый показатель (число агрегатов на 100 кл) Кровь доноров

Физиологический раствор (контроль) (n=15) Контрольные пептиды (опыт I) (n=15) Опытные пептиды (опыт II) (n=15)

Лимфоцитарно- тромбоцитарные агрегаты 10,57±1,9 15,0+1,41 р1< 0,01* 16,29+1,11 р1< 0,01* р2>0,01

Эритроцитарно- тромбоцитарные агрегаты 1,71±0,76 2,29+0,49 р1>0,05 4,39+0,38 р1>0,05 р2>0,05

Лейкоцитарно- эритроцитарные агрегаты 1,57±0,53 3,86+1,07 р1>0,05 4,86+0,69 р1>0,05 р2>0,05

Примечание: (здесь и в табл. 2): р1 - уровень значимости различий показателей между контролем и опытом I, между контролем и опытом II; р2 - уровень значимости различий показателей между опытом I и опытом II; * - значимые отличия.

Таблица 2

Влияние пептидов из сердца баранов на ЛТА, ЭТА и ЛЭА (M±SD)

Изучаемый показатель (число агрегатов на 100 кл) Кровь доноров

Физиологический раствор (контроль) (n=15) Контрольные пептиды (опыт I) (n=15) Опытные пептиды (опыт II) (n=15)

Лимфоцитарно- тромбоцитарные агрегаты 10,57+1,9 14,29+1,8 р1< 0,01* 19,14+2,34 р1< 0,01* р2< 0,05*

Эритроцитарно- тромбоцитарные агрегаты 1,71+0,76 2,19+0,49 р1< 0,05* 8,29+0,39 р1< 0,05* р2< 0,05*

Лейкоцитарно- эритроцитарные агрегаты 1,57+0,53 5,86+1,07 р1< 0,01* 10,29+1,49 р1< 0,05* р2< 0,01*

ЛИТЕРАТУРА

1. Ашмарин И.П., Королева С.В. Биоинформационный подход к исследованию функционального континуума // Успехи функциональной нейрохимии: сб. статей / Под ред. С.А. Дамбинова, А.В.Арутюнян. - СПб., 2003. - С.83-93.

2. Витковский Ю.А., Кузник Б.И., Солпов А.В. Феномен лимфоцитарно-тромбоцитарного розеткообразования // Иммунология. - 1999. - №4. - С.35-37.

3. Клигуненко Е.Н., Кравец О.В. Интенсивная терапия

кровопотери. - М.: МЕДпресс-инфом, 2005. - 112 с.

4. Кузник Б.И. Клеточные и молекулярные механизмы регуляции системы гемостаза в норме и патологии: монография. - Чита: Экспресс-издательство, 2010. - 832 с.

5. Кузник Б.И., Витковский Ю.А., Солпов А.В. Адгезивные молекулы и лейкоцитарно-тромбоцитарные взаимодействия // Вести гематологии. - 2006. - №2. - С.42-55.

6. Кузник Б.И., Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы

- М., 2004. - С.11-86.

7. Произаев К.И., Ильницкий А.Н., Князькин И.В. и др. Боль. Молекулярная нейроиммуноэндокринология и клиническая патофизиология. - СПб.: ДЕАН, 2006. - 304 с.

8. Солпов А.В. Механизмы лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии: Дис...канд. мед. наук. - Чита, 2005.

- 146 c.

9. Shenkman B., Brill G., Solpov A., et al. CD4+ lymphocytes require platelet for adhesion to immobilized fibronectin in flow: Role of p1 (CD29)-, p2 (CD18) related integrins and non-integrin receptors // Cellular Immunology. - 2006. - Vol. 11. - P.520-527.

Информация об авторах: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Пирогова, 30а, Республиканский клинический госпиталь для ветеранов войн, кафедра медицинской реабилитации ИГМАПО, тел/факс: (3012) 416670; Есаулова Ирина Николаевна - ассистент кафедры, е-таП: esaulova_i@mail.ru; Тарнуев Владимир Абогоевич - к.м.н., доцент кафедры

© КИРГИЗОВ В.Ю., МОСКАЛЕВА А.Ю., КИРГИЗОВА О.Ю. - 2012 УДК 618.11-006.2-085.8-036.8

ЭФФЕКТИВНОСТЬ АКУПУНКТУРЫ И ФИЗИОТЕРАПИИ В ЛЕЧЕНИИ ФОЛЛИКУЛЯРНЫХ КИСТ ЯИЧНИКОВ

Вячеслав Юрьевич Киргизов, Анна Юрьевна Москалева, Оксана Юрьевна Киргизова (Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования, ректор - д.м.н., проф. В.В. Шпрах, кафедра рефлексотерапии и традиционной китайской медицины, зав. - д.м.н. О.Ю. Киргизова)

Резюме. В статье показана эффективность рефлексотерапевтического и физиотерапевтического лечения ретен-ционных образований яичников. Представлены результаты лечения 90 девушек в возрасте от 15 до 20 лет с фолликулярными кистами яичников (средний возраст больных составил 17,51±0,15 лет). В работе продемонстрировано, что комбинированное акупунктурное и физиотерапевтическое воздействие приводит к нормализации менструального цикла и гормонального статуса и эффективному регрессу кист. Полный регресс кисты наблюдается у 42% больных, уменьшение среднего размера кисты в 2 раза - у 58% больных.

Ключевые слова: фолликулярная киста яичника, акупунктура, рефлексотерапия.

THE EFFICIENCY OF ACUPUNCTURE AND PHYSIOTHERAPY IN THE TREATMENT OF OVARIAN FOLLICULAR CYSTS

V.Yu. Kirgizov, A.Yu. Moskalyova, O.Yu. Kirgizova (Irkutsk State Medical Academy of Continuing Education)

Summary. The results of the treatment of 90 pubertal girls have been presented. The average age of the patients was 17,51±0,15 years. The high effectiveness of the methods of reflexotherapy and physiotherapy in the treatment of follicular ovarian cyst in pubertal girls have been shown in the paper. There was done the evaluation of the influence of reflexotherapy and physiotherapy on hormonal status. Complete regression of cysts was noted in 42% of patients, the decrease of the average cysts size was noted in 58% of pubertal girls.

Key words: reflexotherapy, physiotherapy, follicular ovarian cyst.

Фолликулярные кисты относятся к функциональным опухолевидным образованиям яичников и встречаются в 25-30% случаев всех кистозных образований [4,5,6]. Длительное существование кист в пубертатном возрасте наряду с нарушениями гормонального профиля является неблагоприятным прогностическим признаком развития патологических состояний эндометрия, встречающихся в 63% случаев [8,11]. В пубертатном возрасте лечение проводят гестагенами или комбинированными прогестинами с целью инволюции кисты, нормализации менструального цикла и восстановления гипоталамо-гипофизарно-яичниковых взаимоотношений [6,7,8].

Принимая во внимание возможность воспалительной этиологии в развитии кисты, рекомендуют также проводить противовоспалительную терапию [9].

Арсенал методов физического лечения, применяемый в гинекологической практике, пополняется постоянно [13]. Патогенетический и симптоматический подход физиотерапии помогает добиться хороших клинических результатов без медикаментозного и, что особенно важно, без гормонального лечения [3].

Возросший в последнее десятилетие интерес к рефлексотерапии как к эффективному методу безлекарственной терапии [1] обусловлен полученными объективными данными об её результативности и вновь открывшимися возможностями современных технологий [2]. Несмотря на проведенные исследования, в литературе до настоящего времени нет убедительных данных о влиянии комплексных воздействий различными физио- и рефлексотерапевтическими факторами у девушек с фолликулярными кистами яичников.

Цель работы: дать патогенетическое обоснование

комплексного воздействия акупунктуры и низкочастотного электрического поля у девушек с фолликулярными кистами яичников.

Материалы и методы

Было обследовано 90 девушек с фолликулярными кистами яичников (ФКЯ) в возрасте от 15 до 20 лет. Средний возраст больных составил 17,51±0,15 лет. Диагноз ФКЯ верифицировался на основании клинических, лабораторных данных и данных функциональных исследований.

Критериями включения в основную группу были: 1) наличие по УЗИ фолликулярной кисты яичника в виде однокамерного эхонегативного образования с ровными внутренними контурами, без включений, диаметром 3-6 см; 2) 1-2-я степень чистоты влагалища; 3) отсутствие инфекций, передающихся половым путем.

Критериями исключения были: 1) срок после менархе < 2 лет; 2) прием гормональных препаратов меньше чем за 3 месяца до исследования; 3) длительность задержек менструаций >2 месяцев; 4) подозрение или установленный диагноз «гипоталамический синдром пубертатного периода».

Больные были разделены на 2 группы по 45 человек в каждой:

1-я группа (п=45) - девушки с ФКЯ, которым проводилось консервативное медикаментозное лечение. Средний возраст девушек составил 17,53±0,23 года, возраст менархе - 12,71±0,13 лет.

2-я группа (п=45) - девушки с ФКЯ, которым проводилось только комплексное рефлексотерапевтическое и физиотерапевтическое лечение. Средний возраст