CC BY
64
НИ
УДК 615.322:1547.814.5:582.794.21.015.11
ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ КОРНЕВИЩ И КОРНЕЙ ДУДНИКА ОБЫКНОВЕННОГО
Статья посвященна изучению антиоксидаитиой активности дудника обыкновеного (Angelicaarchangelica). В работе изложены результаты исследования антиоксидан-тов в пересчете на кверцетин и галловую кислоту.
Пятигорский филиал Ключевые слова: дудник обыкновенный, антиоксидан-
Волгоградского государственного ты, галловая кислота.
медицинского университета
e-mail: [email protected]
Введение. В последние два десятилетия установлено важное значение окислительного стресса в этиологии и патогенезе различных заболеваний: атеросклероза, диабета, рака, гипертензии, неврозов, воспалительных процессов [1-3]. Применение природных антиоксидантов показало ряд их преимуществ в лечении и профилактике свободнорадикальных патологий. Для большинства из них характерно эффективное воздействие на ведущие факторы повреждения, отсутствие побочных эффектов и низкая токсичность [3]. Поэтому весьма актуальным является поиск высокоактивных природных антиоксидантов.
Существуют сведения, согласно которым антиоксидантная активность в значительной степени обусловлена наличием в растениях таких фенольных соединений, как простые фенолы, флавоноиды, свободные органические кислоты, производных гидроксикоричных кислот [4]. Поэтому на основании установленного химического состава представляло интерес изучить антиоксидантную активность корневищ и корней дудника обыкновенного (АщеНсаагсЬащеНсаЬ.) [5-6].
Методы исследования. Исследование суммарного содержания антиоксидантов в различных экстрактах проводили на аппарате определения антиоксидантной активности «Цвет Яуза-01-АА». Сущность метода состоит в том, что при окислении молекул антиоксидантов на поверхности рабочего электрода изменяется напряжение тока, которое автоматически регистрируется ам-перометрической ячейкой. Данные из детектора поступают в ЭВМ и фиксируются специальным программным обеспечением. Методика выполнения измерений содержания антиоксидантов в напитках и пищевых продуктах, биологически активных добавках, экстрактах лекарственных растений амперометрическим методом, разработанная ОАО НПО «Химавтоматика», аттестована ФГУП Всероссийский научно-исследовательский институт метрологической службы в соответствии с ГОСТ Р 8.563-96, ГОСТ Р ИСО 5725-2002 (свидетельство об аттестации МВИ № 31-07).
Приготовление исходного раствора кверцетина с массовой концентрацией 1 г/л
На аналитических весах в стаканчике взвешивали (0,0570 ± 0,0001) г кверцетина, добавляли приблизительно 30 мл дистиллированной воды и подщелачивали од М раствором гидроксида натрия до полного растворения кверцетина (рН раствора 9,5 ±0,2). После этого содержимое стаканчика количественно переносили в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили объем до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивали. Срок хранения данного раствора в холодильнике - 1 месяц при температуре 4 ± 1°С.
Приготовление раствора кверцетина с массовой концентрацией юо мг/л
В мерную колбу вместимостью ю мл пипеточным дозатором вводили 1 мл исходного раствора кверцетина, доводили объем до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивали. Раствор готовили непосредственно перед градуировкой прибора.
Приготовление градуировочных растворов кверцетина с массовой концентрацией 0,2; 0,5; 1,о; 2,о; 4,о мг/л
В мерные колбы вместимостью ю мл пипеточным дозатором вводили 20, 50,100, 200, 400 мкл раствора кверцетина с массовой концентрацией юо мг/л, доводили объем до метки биди-стиллированной водой и тщательно перемешивали. Градуировочные растворы готовили каждый раз при градуировке, их погрешность не должна превышать ± 2,5 %.
Для определения водорастворимых антиоксидантов в качестве подвижной фазы разработчики прибора предлагают использовать раствор ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 0,0022 моль/л (элюент) [1, 6].
Э.Р. ГРИГОРЯН Т.В. ОРЛОВСКАЯ
М.И. кодониди
В мерную колбу вместимостью 1 л наливали примерно 700 мл дистиллированной воды и пипеточным дозатором добавляли 150 мкл концентрированной ортофосфорной кислоты, после чего доводили объем до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивали.
После ввода анализируемого раствора кверцетина возникающие на электроде электрические токи преобразуются в цифровой сигнал, который регистрируется процессорным блоком и отображается в виде пиков на мониторе. При снижении тока до фонового значения кран дозатора переводят в положение «ВВОД» и вводят следующую пробу.
Для построения градуировочного графика последовательно регистрировали сигналы растворов кверцетина в порядке возрастания их концентрации.
С целью исключения случайных результатов и усреднения данных проводили по 5 последовательных измерений каждого из пяти градуировочных растворов кверцетина. За результат принимали среднее арифметическое значение из 5 измерений (относительное среднеквадратиче-ское отклонение не более 5%).
По полученным данным строили градуировочный график, который описывается уравнением У = аХ + Ь. В координатах: X - массовая концентрация кверцетина, мг/л; У - сигнал кверцетина (площадь пика), нАС.
На рис. 1 и 2 представлены градуировочные графики зависимости выходного сигнала от концентрации кверцетина и галловой кислоты.
Сш мл.I кн1'ра1'|ы1а, мАс
< ИI ИД 1 ГД.1.10ПЛИ ККГ-10ТМ. кЛг
Рис. 1. Градуировочный график кверцетина Рис. 2. Градуировочный график галловой
кислоты
Массовую концентрацию X, мг/г, определяли по формуле:
т„ ■ 1000
где Хг - массовая концентрация антиоксидантов, найденная по градуировочному графику, мг/л; Уп - объем раствора (экстракта) анализируемой пробы, мл; тп - навеска анализируемого вещества, г; N - кратность разбавления анализируемого образца.
Таблица
Концентрации суммы антиоксидантов в исследуемом сухом экстракте
Растительное сырье Экстрагент Площадь пика (Бп нА/с) Суммарная концентрация антиоксидантов, в пересчете на кверцетин, мг/г Суммарная концентрация антиоксидантов, в пересчете на галловую кислоту, мг/г
Корневища и корни дудника обыкновенного спирт этиловый 70 % 3425 0,4024 0,2024
спирт этиловый 40 % 3023 0,2155 0,1512
вода 3641 0,1400 0,1013
Исследуемый сухой экстракт предварительно растирали в ступке. Точную массу измельченной пробы (около 0,5 г) помещали в коническую колбу вместимостью 100 мл, добавляли приблизительно 70 мл дистиллированной воды и встряхивали в течение одного часа. Пробу фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл, промывали фильтр дистиллированной водой и доводили объем фильтрата до метки.
Результаты исследования: Концентрацию антиоксидантов определяли по площадям пиков дифференциальных кривых соответствующих экстрактов. Площади пиков, а также концентрации антиоксидантов в пересчете на кверцетин и галловую кислоту представлены в таблице.
Выводы. Исходя из экспериментальных данных, можно сделать вывод о том, что максимальное содержание антиоксидантов имеет место в сухом экстракте, полученном из корневищ и корней дудника обыкновенного спиртом этиловым 70 %. Выраженная антиоксидантная активность позволяет рекомендовать его в качестве экзогенного средства защиты организма человека от повреждающего действия свободных радикалов.
1. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты / Ю.А. Владимиров // Вестник РАМН. -1998. - № 7. - С. 43-50.
2. Голотин, В.Г. Биоантиоксиданты и их роль в жизнедеятельности организма / В.Г. Голотин, В.А. Гоненко // Валеология. - 1995. - Вып. 2. - С. 49-63.
3. Барабой, В.А. Антиоксиданты и здоровье. / В.А. Барабой // Валеология: диагностика, средства и практика обеспечения здоровья. - СПб.: Наука, 1993- ~~ Вып. 3. - 269 с.
4. О влиянии биологически активных веществ на антиоксидантную активность фитопрепаратов / Е.И. Шкарина [и др.] // Хим.-фармац. журн. - 2001. - № 6. - С. 4°~47-
5. Лекарственные растения мировой флоры / Н.В. Попова, В.И. Литвиненко // Харьков: СПДФЛ. -2008. - С. 149-151.
6. Методы клинических лабораторных исследований / B.C. Камышников [и др.]. - Минск, 2001. -
695 с.
Литература
INVESTIGATION OF ANTIOXIDANT ACTIVITY OF THE RHIZOMES AND ROOTS OF ANGEIICAE
E.R.GRIGORYAN T.V. ORLOVSKAYA M.I. KODONIDI
The article is devoted to the study of antioxidant activity of angelica (Angelica archangelica). This paper presents the results of the study in terms of antioxidants quercetin and gallic acid.
Pyatigorsk Branch of Volgograd State Medical University
Keywords: angelica ordinary, antioxidants, gallic acid.
e-mail: shpitzbaum@maiLm
