CC BY
131
УДК 543.253
ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИОКИСЛИТЕЛЬНЫХ СВОЙСТВ СОЕДИНЕНИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РЕАКЦИИ ОКИСЛЕНИЯ СУЛЬФИТА НАТРИЯ
© В.В. Хасанов , Г.Л. Рыжова, Е.В. Мальцева
Томский государственный университет, химический факультет, пр. Ленина,
36, Томск, 634050 (Россия), e-mail: [email protected]
Создан метод для оценки антиокислительных свойств водорастворимых соединений на модельной реакции окисления сульфита натрия, проводимой в диффузионной области. Метод отличается хорошей чувствительностью при простоте исполнения и небольших затратах времени на определение.
Введение
Определение антиокислительных (антирадикальных) свойств соединений получило широкое распространение в связи с открытием и доказательством того факта, что антиоксиданты в организме проявляют очень важные защитные функции от ионизирующих излучений и химических факторов, вызывающих появление в организме нежелательных соединений с неспаренными электронами, иначе называемых радикалами.
К настоящему моменту во всем мире используется несколько методов определения антиокислительных свойств как отдельных соединений, так и сложных смесей [1-8]. Большинство из этих методов объединяет единственный подход - исследование влияния антиокислителей на радикальные процессы или специально генерируемые в системе радикалы. Известны попытки предсказания антиокислительной активности (АОА) по величине ред-окс потенциала соединения [4], а также по степени защиты от повреждающих факторов ДНК [5]. Известен и перечень наиболее опасных в физиологическом отношении радикалов [6]. Существуют как универсальные методы, рассчитанные на определение АОА водо- и жирорастворимых соединений [6], так и методы, оценивающие влияние на отдельные виды радикалов [7]. Многие методы используют в качестве маркеров специальные соединения (кроцин [1, 2], люминол [3], ABTS (2,2'-азино-бис-(3-этилбензтиазолино)-6-сульфоновая кислота) [8]), окисляющиеся в присутствии радикалов, генерируемых либо тепловым распадом особых соединений [1-3, 6], либо в результате химической реакции [5, 8]. В качестве соединений, генерирующих при тепловой обработке свободные радикалы, наиболее часто применяются ААРН (2,2'-азо-бис-2-амидинопропан гидрохлорид) и AMVN (2,2'-азо-бис-2,4-диметилвалеронитрил). Часть методов используют для количественной оценки сравнение с АОА стандартного соединения (чаще всего, Тролокс - 6-гидрокси-2,5,7,8-тетраметилхроман-2-карбоновая кислота). Измеряемой величиной в большинстве методов является интенсивность электромагнитного излучения, в том числе хемилюминесценция и флуоресценция. Каждый из методов определения антиокислительной активности имеет свои преимущества и недостатки. Есть основания полагать, что разработки новых и совершенствование известных способов определения АОА будут продолжаться и далее. Наиболее существенными недостатками известных способов определения АОА являются: использование соединений - генераторов радикалов [1-3, 6], требующих для стабильной и воспроизводимой работы предварительной очистки, редких и дорогих маркеров (ДНК, ABTS) [5, 8], специального регистрирующего оборудования (все вышеперечисленные методы) длительность определений (более 1,5 ч) [6]. Кроме того, определение периода индукции по кривым хемилюминесценции или изменению поглощения электромагнитного излучения [3, 5-8] не всегда удобно, быстро и однозначно.
* Автор, с которым следует вести переписку.
В настоящей работе авторы применили реакцию окисления сульфита натрия в водном растворе, протекающую по радикальному механизму, в качестве модельной системы для оценки антиокислительных свойств водорастворимых соединений.
Изучению кинетики окисления сульфита посвящено большое число исследований. Большая часть из них проводилась в связи с использованием реакции в качестве модельной при измерении поверхности контакта «газ-жидкость» промышленных аппаратов. Многие исследователи [9-12] сходятся на том, что кинетика реакции чрезвычайно сложна и существенно зависит от условий эксперимента.
Описано лабораторное упражнение [13], демонстрирующее влияние некоторых соединений на течение реакции окисления сульфита натрия. В частности, автор демонстрировал антиокислительные свойства фенолов по ингибированию реакции окисления сульфита натрия кислородом. Антиокислительная активность оценивается по степени замедления исчезновения растворенного в водном растворе сульфита натрия кислорода, определяемая при помощи кислородного датчика Кларка. Эксперимент показывает различие фенольных соединений по антиокислительной активности. Впрочем, ингибирующее действие целого ряда органических соединений на реакцию окисления сульфита было замечено еще довольно давно [14].
Установлено [15], что при неингибированном окислении раствора чистого сульфита натрия реакция имеет первый порядок по кислороду и нулевой по сульфиту и ее кинетическое выражение имеет вид:
- d[O] = вд.
dt
Исследования проводились в специально разработанной динамической установке для изучения медленных газодинамических реакций в следующем диапазоне концентраций реагентов: [SO32-] = 0,1 - 3,0 моль дм-3, [HSO3-] = 0,5 - 1,6 моль.дм-3, парциальное давление кислорода составляло 2,53-1000 кПа, температура 1040 °С. Перемешивание осуществлялось барботированием, исследования проводились в кинетической области и это утверждение вытекает из следующих фактов:
- равенство константы скоростей процесса при барботировании и в реакторе с механическим
перемешиванием в режиме интенсивной турбулизации жидкой фазы;
- отсутствие влияния расхода газа-носителя;
- пренебрежимо малое изменение парциального давления кислорода в газе-окислителе.
Автором приведено выражение, связывающее значение константы скорости реакции первого порядка k (с-1) с температурой, радиусом катиона (ki - для сульфитов, k2 - для бисульфитов):
k = (10,89 Т/Т0 - 11,26) + 5,4 r ;
k2 = (13,55 Т/Т0 - 13,72) + 5,4 r ,
r - радиус катиона, нм.
Экспериментальная часть
Исследовано поведение реакции окисления сульфита в диффузионной области, когда ее суммарная скорость определяется скоростью межфазового массопереноса окислителя. Схема реактора, на котором производилось изучение поведения окисления сульфита, представлена на рисунке 1.
В светозащищенную емкость небольшого объема (2) помещают 50 см3 раствора сульфита натрия 0,1 М
(реакционная смесь, 3). Газ-окислитель (кислород или воздух) подается с постоянной скоростью от
воздуходувки или из баллона, через трубку (1). Постоянный контроль за концентрацией кислорода в растворе осуществляется неразрушающими способами - датчиком кислорода (5), либо вольтамперометрически (полярография на волне восстановления кислорода). Раствор в реакторе перемешивается магнитной мешалкой (4, 6). Скорость реакции окисления сульфита контролировали по изменению концентрации сульфита в реакционной смеси, отбором проб и йодометрическим титрованием по общепринятой схеме.
Рис. 1. Схема реакционной установки для определения антиокислительной активности соединений. 1 - трубка подвода газа- окислителя;
2 - емкость реактора; 3 - реакционная смесь (раствор сульфита); 4 - привод магнитной мешалки;
5 - малоинерционный датчик кислорода;
6 - магнитная мешалка
Обсуждение результатов
Если раствор сульфита продувать воздухом (кислородом) с такой скоростью, чтобы не происходило превышения концентрации [02] предела растворимости, это и будут условия проведения реакции в диффузионной области. Разная скорость продувки газа в жидкость вызывает образование различных по величине поверхностей контакта «газ-жидкость». Более интенсивная продувка раствора и быстрое перемешивание увеличивают площадь контакта. При прочих равных условиях при этом возрастает скорость реакции окисления в соответствии с кинетическим уравнением первого порядка по кислороду. На рисунке 2 приведена графическая зависимость изменения скорости окисления сульфита в диффузионной области от концентрации кислорода в растворе 0,12 сульфита натрия. Изменение концентраций кислорода в растворе получали изменением скорости продувки реакционной смеси воздухом. На рисунке 3 приведена зависимость параметров окисления (концентрации сульфита и кислорода в реакционной смеси) при окислении 0,12 М раствора сульфита. Обе зависимости (рис. 2 и 3) иллюстрируют первый порядок реакции по кислороду и позволяют рассчитать константу и скорость реакции окисления. Однако существенные изменения концентрации сульфита в растворе также оказывают влияние на кинетику реакции. Так, на рисунке 4 приведена зависимость концентрации кислорода в реакционных смесях с широко различающимися содержаниями сульфита, при этом наблюдается обратно пропорциональная зависимость между концентрацией сульфита и кислорода в реакционной смеси при одинаковых условиях массопереноса кислорода. Кроме всего прочего, очевидное влияние имеет также высаливающий эффект больших концентраций сульфита. Заметное влияние на параметры реакции окисления проявляется при малых содержаниях сульфита (ниже 0,05 М/л). С уменьшением концентрации сульфита начинается рост содержания кислорода в реакционной смеси при неизменной общей скорости реакции окисления. Это явление проиллюстрировано на рисунке 5. Наконец, при одинаковых условиях массопереноса концентрация кислорода в растворе обратно пропорциональна константе скорости реакции окисления. Так, освещение реактора приводит к снижению концентрации кислорода, а затемнение - к росту. Реактивы сульфита натрия квалификации «чда» или «хч» содержат микропримеси ионов тяжелых металлов, которые обеспечивают приемлемую скорость окисления и без специального добавления инициаторов. Одновременно на величину к влияет температура, поэтому все эти факторы следует контролировать.
Для упрощения кинетических зависимостей нами были сделаны следующие допущения:
1. Скорость межфазового массопереноса окислителя предполагается постоянной при одинаковых скоростях продувки газа и перемешивания реакционной смеси, одинаковых температуре и парциальном давлении кислорода в газе-окислителе.
Рис. 2. Зависимость скорости реакции окисления сульфита (-ЩБОз]/^, мольхл-1хч-1) от концентрации кислорода в растворе ([02], мольхл-1х105)
Рис. 3. Изменение концентрации сульфита и кислорода в реакционной смеси в процессе окисления
Рис. 4. Начальные концентрации кислорода в растворах окисляющегося сульфита разных концентраций в одинаковых условиях продувки растворов кислородом. Размерность концентраций ^[мольхл-1]
Рис. 5. Параметры окисления слабого раствора сульфита. Концентрация кислорода обозначена в мольх л-1 х 105, а сульфита - в мольх л-1
2. Все эксперименты проводятся с одинаковой начальной концентрацией сульфита, которая составляет
0,1 М.
3. Изменением концентрации сульфита в период проведения эксперимента можно пренебречь, поскольку за 5-10 мин протекания реакции она не может существенно снизиться.
4. Поскольку содержание сульфита превышает содержание растворенного кислорода в несколько тысяч раз, реакцию практически можно считать имеющей псевдопервый порядк по кислороду.
5. Постоянство концентрации кислорода в реакционном растворе сульфита в некотором промежутке времени означает равенство скоростей окисления (исчезновения кислорода из раствора) и поступления кислорода в раствор из газовой фазы.
6. Константа реакции к выражает условия генерирования и исчезновения промежуточных частиц реакции.
Таким образом, кинетическая зависимость довольно сложной последовательности превращений сводится к простому выражению -^8032-]/&=к[02], в чем можно легко убедиться на практике, измеряя время полного окисления сульфита в различных условиях массопереноса окислителя. Условия массопереноса можно менять либо изменением скорости продувки окислителя, либо изменением парциального давления кислорода в газе - окислителе при неизменной скорости продувки. В любом случае с ростом концентрации растворенного кислорода увеличивается скорость окисления. Это является ключевым моментом. При исследовании реакции с добавлением ряда индивидуальных соединений было установлено, что при неизменных условиях массопереноса окислителя наблюдается увеличение концентрации кислорода в растворе после добавления в реакционную систему образца антиоксиданта (рис. 6). Концентрация растворенного кислорода при этом поднимается до некоторой величины ([02] + Д[02]), после чего наблюдается ее спад. Степень изменения концентрации кислорода Д[02] (измеренная на максимуме) и время, в течение которого она возвращается к первоначальному значению, зависят от количества и активности добавленного антиокислителя. Графическая зависимость изменения концентрации кислорода в реакционной смеси от количества добавленного в реактор витамина С представлена на рисунке 7.
Очевидно, что рост концентрации кислорода вызван снижением числа промежуточных частиц реакции в результате действия антиоксиданта. Скорость исчезновения кислорода в результате ингибированного окисления снижается, а скорость поступления его из газовой фазы остается неизменной, в результате происходит накопление растворенного кислорода. Накопление кислорода происходит до тех пор, пока его увеличенная концентрация не приведет к пропорциональному росту скорости окисления, после чего установится новое равновесие в системе. Новое равновесие в силу «срабатываемости» антиоксиданта, впрочем, удерживается недолго, после чего наблюдается постепенное возвращение реакции к первоначальному состоянию.
Рис. 6. Изменение концентрации растворенного кислорода в процессе окисления 0,1 М сульфита после добавления образцов антиоксидантов: 1 - 1 х 10-8 М гидроксил-амин; 2 - 4х 10-10 М витамин С
Рис. 7. Изменение концентрации кислорода в растворе окисляющегося сульфита при добавлении разных количеств витамина С
Практическое значение в нашем случае имеет лишь величина пикового изменения содержания кислорода в растворе Д[02], которая оказалась прямо пропорциональной количеству добавляемого антиоксиданта при нескольких условиях:
1. Количество добавляемого антиокислителя не должно приводить к повышению концентрации кислорода в растворе до предела растворимости. В такой ситуации реакция переходит из диффузионной области в кинетическую. Для предотвращения этого образец антиоксиданта разбавляется (опытным путем) до необходимой степени, при которой степень изменения концентрации кислорода в растворе не превышает 20% от предела растворимости.
2. Объем добавляемого раствора должен быть минимальным - для предотвращения разбавления реакционной смеси.
3. В реакционную смесь образец антиоксиданта добавляется только один раз, после чего в реактор загружается свежий раствор сульфита.
Измерение константы скорости реакции свободного окисления сульфита осуществляется измерением времени, необходимого на полное окисление сульфита в реакторе. В течение всего процесса поддерживается постоянная скорость межфазового переноса кислорода, чем обеспечивается постоянная суммарная скорость окисления. Когда весь сульфит в растворе окислится, концентрация кислорода в реакционной смеси поднимается до значения предела растворимости. Значение к определяется из уравнения:
к (с-1) = У[8032-] / 1000г[02],
где V - объем раствора сульфита в реакторе, см3; [8032-] - исходная концентрация сульфита, моль-дм-3; [02] - концентрация кислорода растворе в при малых степенях превращения сульфита (начальный момент процесса окисления), моль-дм-3; 1 - время полного окисления, с; 1000 - коэффициент, см3.
Количественные расчеты АОА
Возможно предположить три способа количественного сравнения антиокислительных свойств соединений. Наиболее простой - откалибровать систему по витамину С и после этого выражать АОА сложных смесей единицами витамина С или относительными единицами, приняв АОА витамина С за единицу. В этом случае учитываются изменения в скоростях межфазового массопереноса и отпадает необходимость в измерениях константы скорости реакции окисления. На рисунке 8 приведены зависимости в логарифмических координатах изменения концентрации кислорода в реакционной смеси от количества добавленного антиоксиданта на примере трех соединений с разными антиокислительными свойствами.
Другой способ - выразить АОА в единицах скорости реакции окисления сульфита. Поскольку при добавлении антиоксиданта происходит увеличение концентрации кислорода, умножив значение Д[02] на величину константы скорости реакции свободного окисления, можно получить значение скорости реакции, на которую увеличилась бы общая скорость, не будь антиоксиданта в системе:
АОА = к Д[02]
Однако этот способ пригоден для сравнения АОА различных соединений только в том случае, если имеется абсолютная уверенность в воспроизводимости межфазового массопереноса кислорода. Изменение условий межфазового массопереноса оказывает существенное влияние на изменение концентрации кислорода при добавлении одинаковых количеств антиоксиданта (рис. 9), откуда следует, что при неизменной к величина отклика пропорциональна начальной концентрации кислорода. С другой стороны, если используется сульфит натрия из другой производственной партии (упаковки), возможно изменение величины к, поскольку содержание инициаторов реакции (примеси ионов металлов переменной валентности), скорее всего, окажется иным. Действительно, реактивы сульфита натрия разных партий окисляются при прочих равных условиях с разной скоростью. Это приводит к тому, что одинаковые количества одного и того же антиоксиданта дают неодинаковые значения роста концентрации кислорода в растворах сульфита разных партий. В таких случаях (при смене партии реагента) следует либо повторно
калибровать систему по витамину С, либо измерять АОА по способу, описанному ниже. В этом случае влияние условий генерирования радикалов нивелируется.
Если не использовать для оценки АОА стандартное соединение (Тролокс, витамин С), то АОА образца можно выразить отношением безразмерной величины Д[02] / [02] к количеству добавленного в систему антиоксиданта или образца (или его концентрации в реакционной смеси):
АОА= Д[02] / [02][1пН].
Соотношение Д[02] / [02] косвенно характеризует степень ингибирования реакции, что можно пояснить из следующих предположений.
Скорость реакции «свободного» окисления сульфита можно выразить уравнением:
-а[80з2] /Л = к [02].
(1)
После добавления в реактор некоторого количества антиоксиданта наблюдается увеличение концентрации кислорода в растворе, и скорость реакции может быть представлена выражением:
-Л[80з ] /Л = к1( [02] + Д[02]).
(2)
Здесь к - константа скорости неингибированной реакции; к1 - константа скорости ингибированной реакции.
При неизменных условиях массопереноса можно считать, что на максимуме изменения концентрации кислорода в растворе суммарная скорость ингибированного окисления та же, что и у «свободной» реакции, на этом основании выражения (1) и (2) можно приравнять:
откуда следует
к [02] = к( [02] + ДМ,
к/к = 1+ Д[02] / [02].
Рис. 8. Зависимость изменения концентрации кислорода (^Д[02], %) в растворе окисляющегося сульфита от вида и количества (^[1пН], мкг) добавленного антиокислителя. 1 - витамин С;
2 - гидрохинон; 3 - этанол
Рис. 9. Влияние межфазового массопереноса кислорода на величину изменения концентрации кислорода при добавлении одинаковых количеств антиокислителя. Зависимости получены при разных скоростях перемешивания реакционной смеси (соответствующие им начальные концентрации [02], %): 1 - 75 мин-1 (3,90%); 2 - 100 мин-1 (4,33%); 3 - 200 мин-1 (6,50%)
Определение АОА витамина С
№ [1пН], мкг [02] А[02] А[02]/[02] АОА Среднее Стандартное отклонение Довери- тельный интервал Ошибка, %
1 2 3 4 5 6 7 8 9
1 0,06 3,91 1,53 0,39 6,52 6,04 0,53 0,52 8,60
2 0,12 3,89 2,64 0,68 5,66
3 0,24 3,85 5,98 1,55 6,47
4 0,3 3,96 6,55 1,65 5,51
Примечание. Расшифровка граф столбцов: 1 - добавлено в реактор витамина С, мкг; 2 и 3 - концентрации кислорода выражены в процентах относительно предела растворимости; 5 - рассчитанное АОА, мкг-1; 6 - среднее значение АОА из четырех измерений; 9 - относительная ошибка определений.
Из полученного выражения вытекает, что при добавлении одного и того же количества антиоксиданта (ингибитора) в систему (рис. 9) величина отклика будет зависеть от величины начальной концентрации кислорода в растворе, иначе говоря, от суммарной скорости окисления. Зато отношение Д[02]/[02] остается неизменным, поскольку не связано со скоростью суммарного процесса, а зависит лишь от соотношения к/к1, т.е., от количества добавленного антиоксиданта.
Для определения АОА выполняется серия измерений с добавлениями разных количеств одного и того же антиоксиданта и рассчитывается среднее значение АОА. В таблице приведен пример определения величины АОА для витамина С и обработка результатов.
Для сравнения: величина АОА для гидрохинона составляет 0,91 мкг-1, а для этанола - 0,096 мкг-1. Работа с очень разбавленными растворами витамина С (внесение в реактор 0,06 мкг витамина С означает добавление 2 мкл 0,003% раствора) требует некоторых мер предосторожности, потому что разбавленные растворы витамина очень нестойки и быстро теряют антиокислительные свойства. При неаккуратной работе величина ошибки возрастает. Она увеличивается и в том случае, если измеряемые величины Д[02] находятся в диапазоне ниже 1 или выше 15%.
К сожалению, последовательность промежуточных превращений сульфита в процессе окисления настолько сложна, что не представляется возможным вывести единое уравнение, связывающее воздействие антиокислителя со скоростью процесса. Особую трудность представляет описание процесса связывания промежуточных частиц реакции антиоксидантами, число обрываемых цепей и т.д.
Выводы
Предлагается новый способ оценки антиокислительной (антирадикальной) активности индивидуальных водорастворимых соединений и смесей с использованием реакции окисления сульфита натрия, проводимой в диффузионной области. Постановка эксперимента определения АОА по предлагаемому способу, в отличие от известных методов, имеет ряд весьма существенных преимуществ. Во-первых, не требуется использование соединений, генерирующих радикалы. Такие соединения всегда требуют достаточно сложной предварительной очистки, но даже и в этом случае получение воспроизводимых результатов не гарантируется. Во-вторых, не требуется специальных приборов регистрации (спектрофотометры, флуориметры, планшетные сканеры или детекторы хемилюминесценции). Не требуется никакой пробоподготовки. Достаточно иметь недорогой и недефицитный электрохимический датчик кислорода, либо полярограф, настроенный на полуволну восстановления кислорода. Не требуется никакой нестандартной химической посуды. Количественная интерпретация результатов гораздо проще, точнее и надежнее осуществляется по концентрации кислорода в растворе, нежели по кинетическим кривым хемилюминесценции или УФ-поглощения. При всей простоте метод является очень чувствительным. Высокая чувствительность реакции по отношению к ингибиторам позволяет регистрировать микроколичества сильных антиоксидантов. Так, минимально определяемое количество витамина С составляет 50 нг в реакторе, что сопоставимо с пределом обнаружения некоторых УФ-детекторов для высокоэффективной жидкостной хроматографии. При определении антиокислительной активности в экстрактах растений или чая требуются лишь единицы микролитров, причем приготовленных в соотношении 1 : 100-1 : 500 экстрактов. Никаких особых требований не предъявляется и к реактивам
сульфита натрия. Аппаратурное оформление метода таково, что он может быть воспроизведен практически в любой химической лаборатории.
Несмотря на сложный механизм окислительного превращения сульфита и влияние на течение процесса ингибиторов и инициаторов, возможно относительно простое, быстрое (на одно определение затрачивается около 3 мин) и чувствительное определение антиокислительных свойств различных объектов, наибольший интерес из которых представляют растительные объекты и продукты их переработки.
Список литературы
1. Kampa M., Nistikaki A., Tsaousis V., Maliaraki N., Notas G., Castanas E. A new automated method for the determination of the Total Antioxidant Capacity (TAC) of human plasma, based on the crocin bleaching assay // BMC Clinical Pathology. 2002, V. 2 (http://www.biomedcentral.com/1472-6890/2/3).
2. Lussignoli S., Fraccaroli M., Andrioli G., Brocco G., Bellavite P. A microplate-based colorimetric assay of the total peroxyl radical trapping capability of human plasma // Analytical Biochemistry. 1999. № 269. P. 38-44.
3. Krasovska A., Rosiak D., Czkapiak K., Lukaszewicz M. Chemiluminescence detection of peroxyl radicals and comparison of antioxydant activity of phenolic compounds // Current topics in Biophysics. 2000. V. 24. P. 89-95.
4. Stephanson C.J., Stephanson A.M., Flanagan G.P. Antioxidant capability and efficacy of Mega-H silica hydride, an antioxidant dietary supplement, by in vitro cellular analysis using photosensitization and fluorescence detection // Journal of Medicinal Food. 2002. №5. P. 9-16.
5. Labuda J., Buckova M., Heilerova L., Caniova-Ziakova A., Brandsteterova E., Mattusch J., Wennrich R. Detection of Antioxidative Activity of Plant Extracts at the DNA-Modified Screen-Printed Electrode // Sensors. 2002. V. 2. P. 110.
6. Cao G.H., Alessio H.M., Cutler R.G. Oxygen Radical Absorbency Capacity Assay for Antioxidants // Free Radicals In Biology And Medicine. 1993. V. 3. №14. P. 303-311. (http://www.brunswicklabs.com/ORAC.pdf).
7. Yang X.F., Guo X.Q. Fe(II)-EDTA Chelate-Induced Aromatic Hydroxylation of Terephthalate as a New Method for the Evaluation of Hydroxyl Radical-Scavenging Ability // The Analyst. 2001. №126. P. 928-932.
8. Arnao M.B., Cano A., Hernandez-Ruiz J., Garcia-Canovas F., Acosta M. Inhibition by L-ascorbic acid and other antioxidants of the 2,2'-azinobis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) oxidation catalyzed by peroxidase: a new approach for determining total antioxidant status of foods // Analytical Biochemistry. 1996. V. 236. P. 255-261.
9. Данквертс П.В. Газожидкостные реакции. М., 1973. 396 с.
10. Ogawa S., Shimizu Y., Tone S., Otake T. Kinetics of the oxidation of aqueous sodium sulphite solutions with air //
Journal of Chemical Engineering of Japan. 1982. V. 15. №5. P. 400-402.
11. Ermakov A.N., Poskrebyshev G.A., Purmal A.P. Sulfite oxidation: The state-of-the-art of the problem // Kinetics and catalysis. 1997. V. 38. №3. P. 295-308.
12. Martins C.R., Cabral Neto C.A., Alves J.F., Andrade J.B. Oxidation of Sulfur (IV) by Oxygen in Aqueous Solution.
Role of Some Metal Ions // Journal of Brazilian Chemical Society. 1999. V. 10. №6. P. 453-458.
13. Sipos L. Inhibition of Sulfite Oxidation by Phenols: Screening Antioxidant Behavior with a Clark Oxygen Sensor // Journal of Chemical Education. 1998. V. 75. №12. P. 1603.
14. Jen K. Kh., Alyea H.N. // Journal of the American Chemical Society. 1933. V. 55. P. 585-588.
15. Гладкий А.В. Кинетика окисления сульфитов и бисульфитов одновалентных катионов кислородом // Журнал прикладной химии. 1984. Т. 57. №9. С. 2121-2123.
Поступило в редакцию 5 июля 2004 г.
После переработки 11 августа 2004 г.
