CC BY
197
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СТАНДАРТНЫХ ОБРАЗЦОВ ДЛЯ АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТИТЕЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ
Т.А. Сокольская, Т.Б. Шемерянкина, Т.Д. Даргаева
Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (ГНУ ВИЛАР Россельхозакадемии), Москва
Резюме: Обзор посвящен разработке государственных и рабочих стандартных образцов для повышения уровня стандартизации препаратов растительного происхождения. Предложены показатели качества для разработанных стандартных образцов. Представлены примеры сквозной стандартизации — от лекарственного растительного сырья до препаратов на его основе — при наличии стандартов и применения современных методов анализа.
Ключевые слова: стандартные образцы, лекарственные растительные препараты, разработка, стандартизация.
USE OF REFERENCE STANDARDS FOR THE ANALYSIS OF HERBAL MEDICINES T.A. Sokol’skaya, T.B. Shemeryankina, T.D. Dargaeva
Abstract: The review is dedicated to the development of state and working reference standards for the purpose of improving the standardization of herbal medicines. Quality indicators for the developed reference standards are suggested. The examples of through standardization of medicinal plants and herbal medicines under provided standards and modern methods of analysis are provided.
Key words: reference standards, herbal medicines, development, standardization.
В последние годы наблюдается все возрастающий спрос на использование безопасных и эффективных лекарственных средств (ЛС) вследствие увеличения числа хронических заболеваний, при которых необходимо длительное лечение. Этому критерию отвечают ЛС растительного происхождения, обладающие мягким, щадящим действием. Поэтому актуальным становится применение фитопрепаратов при использовании надежной системы их стандартизации. В связи с этим последнее десятилетие характеризуется все более широким применением в фармацевтическом анализе лекарственного сырья и препаратов природного происхождения современных физико-химических методов, связанных со сравнительной оценкой испытуемого препарата по отношению к стандартному образцу-веществу, которое характеризуется постоянством химического состава, устанавливаемого с необходимой точностью комплексом соответствующих методов.
Число стандартных образцов лекарственных веществ непрерывно возрастает.
В Государственной фармакопее (ГФ) VIII издания были рассмотрены первые стандартные образцы, в ГФ X издания — описано около двух десятков стандартных образцов. В настоящее время в России используется более 300 стандартов лекарственных веществ, из них растительного происхождения, разработанных в ВИЛАРе, — более 40 наименований (табл. 1).
В соответствии с современной тенденцией развития фармакопейного анализа, направленной на гармонизацию требований и унификацию испытаний, разработка нормативных документов на стандартные
образцы должна основываться на соответствующих рекомендациях ВОЗ и директив ЕС, содержащих полную классификацию методов оценки качества стандартов [1,2]
Использование стандартных образцов затрагивает все аспекты контроля качества ЛС и является необходимым условием при внедрении в фармакопейный анализ современных физико-химических методов [1]:
1) ИК-спектроскопии для установления подлинности лекарственного вещества;
2) ЯМР-спектроскопии для подтверждения подлинности, в частных случаях — для определения посторонних примесей [3];
3) спектрофотометрии в УФ- и видимой областях спектра для подтверждения подлинности, анализа чистоты и количественного определения вещества;
4) хроматографии ТСХ, ВЭЖХ, ГЖХ для подтверждения подлинности, определения посторонних примесей и количественного содержания вещества в образце.
В зависимости от цели применения стандартные образцы подразделяются на:
• государственные стандартные образцы (ГСО) — специально приготовленные соединения высокой степени чистоты, нормативные показатели качества которых отражены в фармакопейной статье и соответствуют требованиям ВОЗ к данному стандартному образцу;
• рабочие стандартные образцы (РСО) — серийные лекарственные вещества, соответствующие фармакопейным требованиям;
ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ
ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ
Таблица 1
ПЕРЕЧЕНЬ СТАНДАРТНЫХ ОБРАЗЦОВ
№ п/п Наименование образца № п/п Наименование образца № п/п Наименование образца
1 Алпизарин 15 Кислота урсоловая 29 Силибин
2 Анабазин 16 Кислота феруловая 30 Сирингин
3 Апобиозид 17 Ксантотоксин 31 Сумма а- и Р-эргокриптинов
4 Арбутин 18 Лютеолин 32 Триандрин
5 Берберин 19 Лютеолин-7-глюкозид 33 Флакозид (Амоден)
6 Батриден 20 Мармезин 34 Фловерин
7 Гиперозид 21 Нуфлеин 35 Фрутицин
8 Глицерам 22 Олеандрин 36 Целанид
9 Госсипол 23 Протодиосцин 37 Эвкалимин
10 Датискан 24 Розевин 38 Экдистерон
11 Донелвин 25 Ратибол (экдистен) 39 Эргокристин
12 Капсаицин 26 Рутин 40 Эргометрин малеат
13 Кверцетин 27 Сангвинарин 41 Эрготамин тартрат
14 Кислота глицирризиновая 28 Сангвиритрин 42 Эризимозид
• стандартные образцы веществ-свидетелей (СОВС) — применяются для определения примесей или установления компонентного состава лекарственного средства. В качестве стандартных образцов веществ-свидетелей могут использоваться ГСО, РСО и другие специально изготовленные и аттестованные вещества [4].
Стандарты предназначены для контроля качества ЛС с использованием физико-химических методов анализа.
При пересчете количественного содержания определяемого вещества стандартный образец, если нет других указаний, принимают за 100%.
Наиболее важной задачей исследования по разработке ГСО растительного происхождения является установление показателей качества: описание, растворимость, подлинность, посторонние примеси, потеря в массе при высушивании, количественное определение [5, 6, 7].
Данные показатели являются обязательными. Включение дополнительных показателей зависит от природы вещества, технологии получения и области применения ГСО.
Для подтверждения подлинности стандартного образца используется ЯМР-спектроскопия, масс-спектрометрия, ИК-спектроскопия и спектрофото-метрия в УФ- и видимой областях.
Примерно в 80% нормативных документов на перечисленные стандарты, разработанных в ВИЛА-Ре, подлинность определяется с помощью ЯМР- и УФ-спектров.
Для определения показателя «Посторонние примеси» стандартов наиболее широко используются хроматографические методы: ТСХ, ВЭЖХ и ГЖХ.
Метод ТСХ позволяет получить предварительную информацию о составе примесей, в основном близких по структуре компонентах. Он дает возможность полуколичественного определения примесей. Пороговая чувствительность в зависимости от анализируемого объекта чаще всего находится в пределах от 0,1 до 0,01 мкг. Например, для сангвиритрина, алпизари-на и урсоловой кислоты при использовании метода ТСХ пороговая чувствительность составляет ~ 0,1 мкг, для сирингина ~ 0,01 мкг, для алпизарина и урсуловой кислоты ~ 0,1 мкг.
Для получения более полной информации о примесных компонентах стандартные образцы исследуются методами ВЭЖХ и ГЖХ.
ВЭЖХ со спектрофотометрическим или диодноматричным детектором является наиболее предпочтительным методом для оценки тех ГСО, которые предназначены для применения в количественном анализе Л С методом спектрофотометрии УФ- и видимых областях спектра. При определении примесных продуктов условия детектирования должны обеспечивать одинаковые отклики основного и примесных веществ.
Значительно реже для характеристики чистоты ГСО (т.е. определения посторонних примесей) используются методы ЯМР-спектроскопии. В качестве примера можно привести использование ЯМР-спектроскопии для определения посторонних примесей в стандартах глицирризиновой, урсоловой кислот, капсаицина, арбутина.
Необходимо отдельно сказать о посторонних примесях стандартов, получаемых из растительного сырья, которое не всегда возможно регламентировать. Набор биологически активных веществ, в т.ч.
минорных компонентов, в лекарственном растительном сырье меняется не только в качественном, но и в количественном отношении и зависит от: сырьевого источника; места произрастания; времени сбора; погодных условий; качества почвы, где произрастает растение, и т.д.
Поэтому, исходя из этих причин, сложно стандартизовать посторонние примеси. Но, как правило, эти примеси являются родственными соединениями (с близкими физико-химическими показателями), причем в минорных количествах менее 1^2%, и не мешают при использовании стандарта.
Важным количественным критерием чистоты стандарта и подлинности является удельный показатель поглощения, получаемый с использованием УФ-спектрофотометрии. Данный показатель применяется для характеристики практически во всех стандартах, разработанных в нашем институте.
В оценке качества стандарта особенно важен такой показатель, как потеря в массе при высушивании, который всегда учитывается при расчетах количественного определения, а также данные о возможности использования этого стандарта после определения влаги.
Так как в последнее время наблюдается значительное повышение требований к стандартизации фитопрепаратов, исследовательская работа химических подразделений ВИЛАРа направлена на совершенствование уровня стандартизации ЛС в соответствии с международными требованиями.
В связи с этим в последние годы в ВИЛАРе проводится пересмотр целого ряда нормативных документов на стандартные образцы и разработка новых стандартов, которые целесообразно использовать при создании методов анализа ЛС растительного происхождения, а также для повышения уровня стандартизации выпускаемых препаратов.
Нормативная документация дополняется современными методами анализа, такими как ВЭЖХ, ЯМР-спектроскопия, необходимыми аналитическими методами для достижения требуемого уровня качества стандартов.
Так, за последние несколько лет пересмотрены и дополнены необходимыми показателями качества нормативные документы на ГСО: алпизарина, ги-перозида, кверцетина, ксантотоксина, лютеолина, лютеолин-7-глюкозида, сангвиритрина, сирингина.
В перечисленных ФС на образцы ГСО метод ТСХ был заменен методом ВЭЖХ, дающим возможность количественно определить примеси.
В ФС на ГСО сирингина в раздел «Подлинность» включен метод ЯМР-спектроскопии.
Наряду с ГСО для исследовательских работ в институте разработан ряд технических условий на стандартные образцы: арбутина, капсаицина, кислоты
глицирризиновой, кислоты урсоловой, кислоты фе-руловой, рутина, экдистерона. Показатели качества в ТУ для стандарта соответствуют фармакопейным требованиям.
Во всех стандартах подлинность подтверждается с помощью метода ЯМР-спектроскопии. Посторонние примеси в разработанных технических условиях определяются с помощью метода ВЭЖХ.
В настоящее время разрешено к применению более 250 видов лекарственного растительного сырья. Лекарственные формы на его основе (сборы, экстракты (сухие, жидкие, спиртовые), настойки, субстанции, фитопрепараты (таблетки, мази, капсулы, гели) и т.д.) составляют около 40% номенклатуры всех зарегистрированных ЛС.
Все это разнообразие требует качественной стандартизации. Поэтому для анализа при производстве фитопрепаратов применяется принцип сквозной стандартизации (СС): от лекарственного растительного сырья до препаратов на его основе.
Принцип СС предполагает применение одноименных методик и соответственно один стандарт для обнаружения и количественного определения биологических активных веществ в растительном сырье на всех этапах постадийного контроля производства, в субстанциях и готовых лекарственных форм
СС лекарственного растительного сырья и препаратов на его основе при наличии стандартов и использовании современных физико-химических методов анализа — важное условие обеспечения качества ЛС (табл. 2).
Так, для выпускаемого препарата Алпизарин на сырье и его лекформы используется одноименный стандарт «Алпизарин», с помощью которого проводятся количественные определения на всех этапах производства методом ВЭЖХ.
Все стадии производства препаратов из лекарственного сырья элеутероккок (экстракт жидкий, сухой, таблетки) контролируется с использованием стандарта «Сирингин». Для осуществления данного контроля также используется метод ВЭЖХ.
В контроле при производстве препаратов Сили-мар и Сибектан используется для СС стандарт «Си-либин» [8].
Для препарата Аммифурин используется стандарт «Ксантотоксин»,
Для препарата Танацехол — стандарт «Лютеолин»,
Для препарата Леспефлан — стандарт «Лютеолин-7-глюкозид».
Как следует из представленного материала, разработка и использование стандартных образцов для анализа лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов обеспечивает гармонизацию требований к качеству ЛС и дальнейшему совершенствованию и унификации методов фармакопейного анализа.
ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ
ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ
Таблица 2
ПРИМЕРЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ СТАНДАРТОВ В СКВОЗНОЙ СТАНДАРТИЗАЦИИ
Наименование ГСО стандарта Используемое сырье Субстанция Экстракты Лекарственная форма
Aлпизарин (I) Mангиферин технический Лист манго (Mangifera indica L.) Трава копеечника альпийского (Hedysarum alpinum L.) Препарата Алпизарин Алпизарин (таблетки) Алпизариновая мазь (2% и 5%)
Ксантотоксин (II) Плоды Aмми большой (Ammi majus L.) Препарата Аммифурин Аммифурин (таблетки) Аммифурин (раствор 0,3%)
Силибин (III) Плоды расторопши пятнистой (Silybum marianum L.) Жмых плодов расторопши Препарата Силимаран Препарата Сибектан Силимар (таблетки) Сибектан (таблетки)
Сирингин (IV) Корневище с корнями элеутерококка колючего (Eleutheroccocus senticosus, Rupr et Maxim) Сухой экстракт Элеутерококка экстракт жидкий Элеутерококк (таблетки)
Лютеолин (V) Цветки пижмы обыкновенной (Tanacetum vulgare L.) Очищенный сухой экстракт Танацехол (таблетки)
Лютеолин-7-глюкозид (VI) Леспедеция двухцветная (Lespedeza bicolor (Turcz.) Очищенный экстракт Леспефлан (водно-спиртовый раствор)
Сангвиритрин (VII) Трава маклеи сердцевидной (Macleya cordata Will. L.) Трава маклеи мелкоплодной (M. microcarpa) Препарата Сангвиритрин Сангвиритрин (таблетки) Сангвиритрин (раствор 0,2%)
ЛИТЕРАТУРА
1. Арзамасцев А.П., Дорофеев В.Л., Садчикова Н.П. Ведомости научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств, МЗ РФ. 2000. № 3.
С.24-28 .
2. Дорофеев В.Л., Арзамасцев А.П. Стандартные образцы для фармакопейного анализа. Вопросы биологической,
медицинской и фармацевтической химии. 2010. №5. С. 6-10.
3. Шейченко В.И., Рудакова И.П., СамылинаИ.А. Фармация, 2006. № 5. С. 3-5.
4. Багирова В.Л., Северцев В.А. (ред). Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация. СПб.: СпецЛит. 2001. 224 с.
5. Государственная фармакопея XI издания,
М.: Медицина. 1991. вып. 1, 2.
6. Самылина И.А., Ермакова В.А. Химикофармацевтический вестник. 1999. №6,
С. 19-22.
7. XII Государственная фармакопея Российской Федерации. М. 2007. Ч.1.
8. Сокольская Т.А. Автореф. дисс. докт фарм. наук. Москва. 2000.
