Использование низкомолекулярных лигандов ASGPR для создания противоопухолевых препаратов направленного действия Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

49

которые обеспечивают оптимальные выходы конечных соединений: синтез из хинонов и диаминов, синтез с Cbz-монозащищенными диаминами, синтез на основе Cu-ка-тализируемой реакции азид-алкинового присоединения (CuAAC) и прямой синтез путем аминирования хинонов 2-тиоксо-тетрагидро-4Н-имидазол-4-онами. Для соединения-лидера проведены первичные in vivo испытания.

Заключение. В результате данной работы был разработан качественно новый класс координационных соединений одновалентной меди, стабилизированных в физиологических средах и проявляющих противоопухолевую активность. Исследована токсичность полученных соединений на клеточных линиях НЕК 293 и выявлено соединение-лидер.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (РНФ № 16—33—60166).

С.Ю. Маклакова1, В.В. Топко1, А.В. Пугач1, О.С. Шубернецкая1, Е.К. Белоглазкина12, Н.В. Зык1, В.Э. Котелянский1, А.Г. Мажуга12 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ЛИГАНДОВ ASGPR ДЛЯ СОЗДАНИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ НАПРАВЛЕННОГО ДЕЙСТВИЯ 1МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия; 2Национальный исследовательский технологический университет «МИСиС», Москва, Россия

Введение. Асиалогликопротеиновый рецептор (ASGPR) широко используется в качестве мишени для направленного транспорта терапевтических агентов в гепа-тоциты. Ранее нами был синтезирован ряд эффективных лигандов данного рецептора. Эта работа посвящена in vitro и in vivo исследованиям способности систем на основе лигандов ASGPR проникать в опухолевые клетки на примере конъюгатов с флуоресцентными красителями.

Цель исследования — синтез и биологическое тестирование конъюгатов лигандов ASGPR с флуоресцентными красителями.

Материалы и методы. Полученные вещества анализировали с помощью спектроскопии ЯМР 'H, масс-спектро-метрии высокого разрешения, ВЭЖХ-МС. В работе использовали клеточные линии HEK-293, Huh7 и HepG2, модель альвеолярного слизистого рака печени РС-1, трансплантированную подкожно крысам Wistar.

Результаты. Исследовано влияние добавления биотина и/или хлорида кальция в культуральную среду на уровень экспрессии ASGPR. Показано, что в обоих случаях количество рецепторов на поверхности клеток Huh7 и HepG2 значительно увеличивается. Использование данных добавок способствует проникновению лигандов ASGPR: после добавления лиганда к клеточным культурам в присутствии биотина и/или хлорида кальция, последующей обработки флуоресцентным красителем и фиксации наблюдалась индукция экспрессии рецептора в клеточных линиях Huh7 и HepG2 (в контрольном эксперименте на клеточной линии HEK-293 сигнал флуоресценции отсутствовал). В in vivo исследованиях использовали конъюгаты флуоресцентного красителя Sulfo-Cy5 c лигандами ASGPR на основе с #-ацетилгалактозамина и #-ацетилглюкозамина (контр-

ольное соединение). Животным внутривенно вводили водный раствор контрольного соединения или исследуемого. Спустя 24 ч после инъекции интенсивность флуоресценции в опухоли была выше в случае конъюгата, содержащего #-ацетилгалактозамин. Синтезированные конъюгаты не проявили токсичности: ни в одной из исследуемых групп не отмечено неспецифической гибели животных.

Заключение. В результате работы показано, что добавление биотина и/или хлорида кальция в среду клеточных линий способствует увеличению количества ASGPR на поверхности и, как следствие, ведет к повышенному проникновению лигандов внутрь клеток. Конъюгаты на основе #-ацетилгалактозамина проникают в клетки рака печени на порядок лучше в сравнении с производными #-ацети-лглюкозамина.

Работа выполнена при поддержке РНФ (грант № 14-34-00017) и РФФИ (грант № 16-33-60166).)

И.А. Мамичев, Е.А. Пономаренко, С.А. Калюжный, Д.В. Новиков, Е.А. Дудко, А.Н. Гришанина, И.Г. Воробьева, М.М. Давыдов, Т.А. Богуш

КОЭКСПРЕССИЯ БЕЛКОВ ПРОМЕЖУТОЧНЫХ ФИЛАМЕНТОВ И БЕТА-Ш ТУБУЛИНА В ТКАНИ НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ЛЕГКОГО

ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия

Введение. Молекулярная диагностика прогностических маркеров немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) — одно из интенсивно развивающихся направлений трансляционной медицины. Коэкспрессия белков промежуточных филаментов цитокератина и виментина (Цит/Вим), так называемый эпителиально-мезенхималь-ный переход опухолевых клеток эпителиального происхождения, считается неблагоприятным прогностическим признаком, свидетельствующим о повышенном риске ме-тастазирования. Бета-Ш тубулин (ТиВВЗ), изоформа белка микротрубочек бета-тубулина, также ассоциируют с неблагоприятным прогнозом заболевания, так как в литературе описана ассоциация ТиВВЗ с миграцией опухолевых клеток, инвазией и метастазированием.

Цель исследования — оценить корреляционную связь между коэкспрессией Цит/Вим и ТОВВЗ для того, чтобы ответить на вопрос, являются ли эти белки частью единого фенотипического комплекса, характеризующего метастатический потенциал НМРЛ.

Материалы и методы. Количественное иммунофлуо-ресцентное исследование коэкспрессии опухолевых маркеров в 23 хирургических образцах НМРЛ проведено методом проточной цитофлуориметрии (оценка экспрессии Цит/Вим — с использованием двойного окрашивания). В работе применены первичные и вторичные антитела: для ТиВВ — аЬ7751 и аЬ98729 (DyLight650); для Цит — М0821 ДОАКО) и аЬ98729 (DyLight650); для Вим — SP20 (BЮCARE) и аЬ98510 (DyLight650). Количественную обработку данных проводили с помощью программы FlowJo. Уровень экспрессии (количество специфически окрашенных клеток относительно показателя при инкубации с вторичными антителами) анализировали с помощью статистического критерия Колмогорова-Смирнова.

Спецвыпуск/ том 16 / 2017

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ