CC BY
35
12 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I ВЕСТНИК ВолГМУ 1111111111111111111111111111111111111111111111111111111111
2004
УДК 615.37:616.9-008.9-085.37
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ИММУНОКОРРЕКТОРОВ ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ ИММУНИТЕТА ПРИ НЕКОТОРЫХ ОСОБО ОПАСНЫХ ИНФЕКЦИЯХ
В.Е. Жемчугов, С.И. Жукова, И.А. Дятлов, О.А. Волох, В.В. Кутырев, И.В. Авророва, Н.М. Дрефс
Межрегиональный институт иммунокоррекции и метаболической терапии, г. Москва,
Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт, Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб", г. Саратов
В настоящее время нет иммунологически активного препарата, эффективного при широком спектре инфекционных заболеваний, включая особо опасные. Вместе с тем, необходимость разработки таких препаратов совершенно очевидна в современных условиях возросшей опасности биотерроризма, а также для ликвидации возможных эпидемиологических последствий природных и техногенных катастроф [3]. С появлением нового класса веществ - тиопоэтинов, являющихся метаболическими иммунокорректо-рами, стало возможным создание новых комплексных средств профилактики и лечения тяжелых инфекционных заболеваний, совершенствования имеющихся схем.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Изучение возможности иммуномодулятора глутоксима (Гл), относящегося к классу тиопо-этинов, повышать естественную невосприимчивость и специфический иммунный ответ к возбудителям некоторых особо опасных инфекций: чумы, мелиоидоза, туляремии.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Работа выполнена на беспородных белых мышах. Иммуномодулятор глутоксим предоставлен нам М.Б. Балазовским (ЗАО "Фармавам -С.-Петербург"), за что авторы выражают ему искреннюю благодарность. Для изучения влияния Гл на неспецифическую резистентность к чуме препарат вводили животным однократно, подкожно в дозах 0,5; 2,5; 12,5; и в 62,5 мг за 1, 6, 12, 18 часов до заражения 10 DCL вирулентного штамма Yersinia pestis 231. В отдельном опыте определяли заражающую дозу (ЛД50), от которой Гл защищает животных, получавших по 12,5 мг препарата за 6 ч до заражения разными дозами возбудителя чумы (1, 5, 25, 125 DCL).
При изучении воздействия Гл на специфическую резистентность к чуме животных вакцинировали разными дозами вакцинного штамма Y.pestis EV НИИЭГ. Гл вводили в дозе 12,5 мг/мышь одномоментно с вакциной и за 6 ч до заражения. Через 21 сут. после вакцинации животных заражали 200 DCL Y.pestis 231. Перед заражением у животных определяли титры антител в РНГА к специфическому чумному антигену фракции1 (F1). Защитные свойства препаратов оценивали по показателям летальности животных спустя 1 мес.
после заражения: проценту погибших животных и средней продолжительности их жизни (СПЖ).
Для изучения влияния Гл на неспецифическую резистентность к мелиоидозу препарат в разных дозах (0,5-62,5 мг) вводили мышам однократно подкожно за 1-18 ч до заражения 300 ЛД50 вирулентной культуры возбудителя мелиоидоза ВигкИо1Сепа рвеиСота!Ы 59361. За животными наблюдали 1 мес., после чего определяли показатели летальности.
При исследовании влияния Гл на неспецифическую резистентность к живой туляремийной вакцине (ЖТВ) Гл вводили мышам внутрибрю-шинно в дозе 2 мг/мышь (0,5 мл) за 6 ч до подкожной инокуляции животным ЖТВ в различных дозах (4102 - 4106 м. кл) с последующим определением ЛД50 ЖТВ в контрольной и опытной группах.
Для изучения влияния Гл на специфическую и неспецифическую протективную активность С-комплекса из возбудителя туляремии (условно обозначенного нами ХТВ - химическая туляре-мийная вакцина) последний вводили мышам подкожно в разных дозах без Гл и в сочетании с ним и через 21 сут. одну часть животных заражали вирулентным штаммом возбудителя мелиоидоза (10 ЛД50), другую - ЖТВ в летальной для мышей дозе (410 м. кл.). Для профилактики туляремии Гл вводили однократно за 6 ч до вакцинации ХТВ, а для повышения невосприимчивости к мелиоидозу - дважды: за 6 ч до вакцинации и за 6 ч до заражения.
Результаты опытов обрабатывали статистически [1].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Установлено, что максимальная защита животных при заражении чумой достигалась при введении Гл в дозе 12,5 мг за 6 ч до заражения. СПЖ белых мышей в этом случае была равна 12,3±2,2 сут (при 6,5±0,5 в контрольной группе), а ЛД50 вирулентного штамма У.ревйв 231 составляла 1,32 РСЬ. Было отмечено, что Гл при изолированном применении с целью неспецифической стимуляции иммунитета достоверно не увеличивал показатель выживаемости животных, хотя существенно удлинял СПЖ, особенно при заражении небольшими и средними дозами возбудителя чумы.
ВЕСТНИК ВолГМУ
В опытах по изучению влияния Гл на специфический иммунный ответ при чуме было показано, что при введении живой чумной вакцины совместно с Гл титры антител к Р1 возрастали в 5-6 раз по сравнению с контрольной группой, иммунизированной только вакциной. Как и в предыдущих опытах по неспецифической стимуляции иммунитета, эффективность Гл проявлялась в увеличении сроков СПЖ при одновременном введении его с чумной вакциной. Существенного увеличения выживаемости зараженных мышей не было отмечено.
В экспериментах по изучению способности Гл повышать естественную резистентность к ме-лиоидозу установлено, что на 18 сут. после заражения животных 300 ЛД50 В.рвеиСотаНе! 59361 Гл защищал от гибели 34 % мышей при 100 % гибели в контроле. На 30 сут наблюдения отмечено снижение числа выживших животных до 17 %, в то же время зарегистрировано достоверное повышение показателя СПЖ (р < 0,05) погибших мышей, получавших Гл. Наиболее активной в защите от мелиоидоза оказалась доза Гл 2,5 мг, введенная животным за 1, 6, 12 или 18 ч до заражения.
В результате изучения влияния Гл на резистентность животных к туляремийному микробу было показано, что введение мышам Гл повышало их устойчивость к ЖТВ, при этом ЛД50 ЖТВ для мышей, которым вводили Гл, оказалась в 4 раза выше, чем для интактных животных.
Далее нами была изучена способность Гл повышать иммуногенность ХТВ в отношении возбудителей мелиоидоза и туляремии, при этом ХТВ использовалась в качестве специфического и неспецифического факторов защиты.
Отмечено, что вакцинация мышей ХТВ в дозах 10, 50 и 250 мкг защищала от гибели до 25 % зараженных мелиоидозом животных, при этом СПЖ павших мышей лишь незначительно превышала аналогичный показатель в контрольной группе интактных животных (р > 0,05). Двухразовое введение Гл (за 6 ч до вакцинации ХТВ и за 6 ч до заражения) способствовало увеличению выживаемости животных (на 12 %) и существенному росту СПЖ (р < 0,05) ( табл.1).
Интересно отметить, что доза данной серии ХТВ 250 мкг оказалась токсичной для мышей: из 12 животных, вакцинированных этой дозой, погибло 8, в то время как в группе животных, получавших вместе с 250 мкг хТв 2 мг Гл, из 12 мышей до заражения дожили 11.
При изучении возможности Гл повышать специфический иммунитет к туляремии было показано, что однократное введение Гл за 6 ч до вакцинации 25-100 мкг ХТВ повышало иммуно-генные свойства этого препарата, что выражалось в приросте выживаемости животных (на 1417 %) и в существенном увеличении (р < 0,05) сроков СПЖ при заражении летальной дозой ЖТВ (табл. 2).
Таблица 1
Влияние глутоксима на протективность туляремийного С-комплекса при мелиоидозной инфекции
№№ Препарат для Доза Летальность при заражении В.рБеиСота11е1 59361
иммунизации ХТВ (мкг) Пало/ взято % павших СПЖ (сут)
1 10 8/8 100 8,2
2 ХТВ 50 9/12 75 9,3
3 250 3/4 75 10,3
4 10 8/9 88 14,1*
5 ХТВ+Гл 50 8/11 72 15,8*
6 250 7/11 63 16,1*
7 Контроль - 6/6 100 7,6
Примечание. Здесь и в табл. 2: * - различия с контролем статистически достоверны (р < 0,05)
Таблица 2
Влияние глутоксима на специфическую резистентность к туляремийному микробу
№№ Препараты для Доза Летальность при заражении 4х106 м.кл ЖТВ
иммунизации ХТВ (мкг) Пало/взято % павших СПЖ (сут)
1 ХТВ 25 7/8 88 10,3
2 50 6/7 86 12,2
3 100 6/8 75 12,8
4 ХТВ+Гл 25 6/7 86 14,3*
5 50 5/7 71 15,8*
6 100 4/7 57 16,2*
7 Контроль - 6/6 100 8,1
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведенные исследования показали способность нового иммуномодулятора Гл повышать неспецифическую резистентность животных к чуме, мелиоидозу и туляремии. Важной особенностью препарата Гл является его системное цито-протекторное действие. Полученные нами данные о существенном снижении токсичности дозы ХТВ 250 мг для мышей с помощью Гл, введенного за 6 ч до вакцинации, скорее всего, свидетельствуют именно о его цитопротекторном влиянии на клетки.
Практически ценной является отмеченная нами способность Гл повышать специфический иммунный ответ при вакцинации живой чумной вакциной и увеличивать протективность туляремийного С-комплекса в отношении возбудителей мелиоидоза и туляремии, что может быть использовано при разработке профилактических препаратов против этих инфекций, в том числе -комплексных [2].
2004
инфекционных заболеваний. - Описание изобретения к патенту РФ № 2147234, Опубл. 10.04.2000 г., Бюлл. № 10 - 3с.
3. Тихонов Н.Г., Рыбкин В.С., Жукова С.И. и др. // Мелиоидоз: Сб. науч. тр. Волгоград. н.-иссл. противо-чум. ин-та. - Волгоград, 1995. - С.119-141.
Zhemchugov V.E., Zhukova S.I., Dyatlov I.A., Volokh O.A., Kutyrev V.V., Avrorova i.V., Drefs N.M. The applying of metabolic correctors for ctimulation of immune response to some pandemic infections // Vestnik of Volgograd state medical University. - 2004. - № 12. - P. 29-31.
Results of study in experiments on mice ability of a new immunomodulator from tyopoetin class, Glutoksim (GL) which refers to metabolytic immunomodulators to raise non-specific resistance and specific immune response to plague, melioidosis and tularemia were presented. It was shown than GL increased the middle duration of lifetime of animals infected by plague and melioidosis and raised specific immune response by vaccination of mice with live plague vaccine and S-complex of F.tularensis.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гланц С. Медико-биологическая статистика. -Пер. с англ. - М.: Практика. - 1998. - 459 с.
2. Жемчугов В.Е., Кутырев В.В. Препарат для экстренной профилактики и лечения особо опасных
УДК 577.352.24:616-097:575.113.001.6
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ПРОТЕКТИВНОСТЬ ЛИПОСОМАЛЬНОЙ И АДЪЮВАНТНОЙ ФОРМ МЕЛИОИДОЗНЫХ АНТИГЕНОВ
В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
С.И. Жукова, В.С. Рыбкин, И.В. Авророва, К.А. Ротов, О.Б. Прошина, Н.М. Дрефс
Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт
Расширение и углубление международных связей России, отмечаемое в последние годы, диктует необходимость интенсификации работ по созданию эффективных средств профилактики опасных инфекционных заболеваний, которые могут быть завезены в нашу страну из-за рубежа. К таким заболеваниям относится, в частности, мелиоидозная инфекция, против которой пока не разработана вакцина.
Работами последних лет показана возможность ряда поверхностных антигенов гликопро-теиновой природы формировать невосприимчивость к мелиоидозу [3, 4]. Однако уровень защиты от инфекции был невысоким. Для повышения иммуногенности мелиоидозных антигенов предпринимались попытки использовать их для вакцинации в различных комбинациях, а также совместно с иммуномодуляторами.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Изучение возможности усиления иммуноген-ности мелиоидозных антигенов за счет их включения в липосомы, а также при добавлении в схему иммунизации иммуномодулятора бромантана.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Белых беспородных мышей иммунизировали различными фракциями водно-солевого экстракта возбудителя мелиоидоза ВигкИо!Сепа рвеиСотаПе! 111 (Д, С, Н, Р, и) в дозе 30 мг каждой фракции подкожно с полным адъювантом Фрейнда (ПАФ) в соотношении 1:1, дважды, с интервалом 7 сут. Другую группу животных иммунизировали теми же антигенами, включенными в ли-посомы. Липосомы готовили из хроматографиче-ски чистых фосфатидилхолина Харьковского завода бактерийных препаратов и холестерина
(Serva) в молярном соотношении 7:3 методом обращения фаз. В липосомы включали мелиои-дозные антигенные фракции Д, С, F, H, J [5].
Для иммунизации использовали различные сочетания антигенов как в адъювантной (в смеси 1:1 с ПАФ), так и в липосомальной формах, которые также вводили и с бромантаном в дозе 1 мг внутрибрюшинно. Заражение животных проводили спустя 14 сут. после повторной иммунизации умеренно вирулентными культурами возбудителя мелиоидоза штаммов С-141 и 56830. Через 30 сут. после заражения вычисляли показатели летальности: процент погибших животных и среднюю продолжительность их жизни (СПЖ). Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически [1].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Показано, что иммунизация мышей отдельными антигенными мелиоидозными фракциями с ПАФ защищала от гибели при контрольном заражении небольшое число животных (11-17 % от 3-30 ЛД50). Использование для иммунизации сочетаний адъювантных форм мелиоидозных антигенов (по 2 антигена в каждом сочетании) увеличивало выживаемость животных до 40-60 %, а введение мышам тех же сочетаний антигенов в липосомальной форме увеличивало их выживаемость еще на 20-30 % (табл. 1).
Как видно из данных табл. 1, разница в показателях летальности при заражении 3ЛД50 составляла 20-30 %, при заражении 30 ЛДщ - 13-22 %.
Ранее нами было отмечено, что некоторые иммуномодуляторы способны повышать протек-тивность мелиоидозных антигенов для экспериментальных животных [2].
