CC BY
24УДК 634.10: 632.482.31: 631.523.13
Т. Н. Марцинкевич1, Т. А. Гашенко1, З. А. Козловская1, Ю. Г. Кондратенок1, С. К. Лозюк2
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ITS-РЕГИОНА ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ПАТОГЕНОВ РОДА VENTURIA CES.ET DE NOT
1Институт плодоводства НАН Беларуси
Республика Беларусь, 223013, Минская обл., Минский р-н, аг. Самохваловичи, ул. Ковалева, 2
e-mail: 87martany@gmail.com 2ГУ «Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии» Министерства здравоохранения Республики Беларусь Республика Беларусь, 220114, г. Минск, ул. Филимонова, 23
В статье представлены результаты исследований по идентификации грибов рода Venturia spp. c использованием internal transcribed spacer (ITS)-региона. Установлена высокая результативность метода секвенирования рибосомальной ДНК для идентификации аскомицетных грибов рода Venturia Ces.et De Not. Степень сходства регионов выделенного гриба с имеющимися в базе V.pirina, V.nashicola и V.inaequalis составила 95-99%, 96-97% и 81-83% соответственно. Также в исследовании установлено, что для видового определения представителей рода Venturia необходимо применение более специфических методов идентификации.
Ключевые слова: ITS-регион, идентификация, Venturia spp., груша, яблоня.
Введение
В связи с интенсивным развитием биологических технологий, сегодня становится возможным более точно и объективно отвечать на вопросы по идентификации различных патогенов и их филогенетических связях.
Традиционные методы идентификации видов часто осложняются высоким внутривидовым полиморфизмом или, напротив, высокими межвидовыми морфологическими сходствами. В то же время необходимость видовой идентификации не вызывает сомнений, поэтому все чаще исследователи используют современные методы, основанные на применении технологий молекулярной генетики.
Преимущество современных молекулярно-генетических методов заключается в высокой универсальности, точности и относительной простоте проводимого анализа, поэтому они востребованы в области диагностики и идентификации различных объектов, в том числе возбудителей заболеваний растений.
Обзор литературных источников показал, что в исследованиях по идентификации грибных патогенов широко используют участок кластера рибосомной ДНК, так называемого транскрибирующегося спейсера internal transcribed spacer или ITS-регион [1].
Кластер рибосомной ДНК (рДНК) является неотъемлемой частью генома любого эукари-отического организма и представляет собой тандемно повторяющиеся гены рибосомных РНК (18S-, 5.8S-, 28S-подобные), разделенные рядом спейсерных последовательностей: внутренними транскрибируемыми (ITS1 и ITS2), внешним транскрибируемым (ETS) и межгенными, или нетранскрибируемыми (NTS), спей-серами. Данные структурные элементы рДНК обладают различной степенью эволюционного консерватизма, и наиболее вариабельными являются именно спейсерные последовательности. Молекулярно-генетическая организация рДНК различных эукариот во многом сходна, в то же время каждый вид обладает рядом структурных и функциональных особенностей, характерных для данного участка генома. На основе этого различия и возможна видовая и расовая идентификация эукариот [2].
Анализ межвидового разнообразия нукле-отидных последовательностей ITS участка рДНК грибов основан на том, что участки генома, кодирующие рибосомальные РНК, имеют в своем составе как консервативные (собственно участки, кодирующие рРНК), так и вариабельные спейсерные последовательности. Консервативные участки позволяют
подобрать праймеры для амплификации всей ITS-области и отдельных ее частей. Благодаря вариабельным участкам получаемые в результате ПЦР продукты у эукариот различаются по величине и имеют разные последовательности [3].
Среди грибных патогенов, наносящих наибольший вред семечковым культурам в условиях Беларуси является парша. Паршу яблони и груши вызывают грибы рода Venturia Ces.et De Not. Среди данного рода выделяют вид Vinaequalis, паразитирующий на яблоне, и два вида на груше — V.pirina [4] и V.nashicola [5], вызывающие паршу у европейских и азиатских груш соответственно [6]. Также установлен и тот факт, что данные виды очень сходны по своим морфологическим и физиологическим признакам, что вызывает сложности при их идентификации традиционными способами [7].
В работах, посвященных изучению парши груши, исследователями E. Shabi и др. в 70-х годах было заявлено, что Vnashicola является расой V. pirina, а не отдельным видом [8]. Однако, в 2000 г. H. Ishii и H. Yanase проанализировали связь между двумя этими видами и пришли к выводу, что V. nashicola является видом, отличным от V.pirina. Их результаты были основаны на тестах на патогенность, где наглядно было продемонстрировано существование специфичного хозяина и патогена. Кроме того, было доказано достоверное морфологическое отличие между ними, в частности, по размеру конидий и аскоспор [9]. Позже учеными B. Le Cam, M. Devaux и L. Parisi было подтверждено генетическое различие V.nashicola и V.pirina с использованием специфической ПЦР (анализ участка, охватывающего оба спейсера ITS) [10].
В Беларуси исследованием возбудителя парши груши в 90-е годы занималась Т.П. Курдюк [11]. В результате изучения морфолого-культуральных признаков фитопатогена ею было установлено, что в Беларуси распространена V.pirina Aderh., характеризующаяся широким полиморфизмом популяций на территории республики. Ученый выделила три морфотипа возбудителя парши — Р1, Р2, Р3 с различной степенью вредоносности [12].
В дальнейшем на протяжении почти 30 лет исследований в области идентификации пато-
гена, вызывающего паршу груши, в Беларуси не проводили. Анализ литературных источников показал, что V.pirina — относительно мало изученный объект по сравнению с возбудителями парши яблони V.inaequalis или азиатских груш V.nashicola [13]. В международной базе данных NCBI нуклеотидные последовательности V.pirina представлены слабо.
Благодаря полученным сведениям о том, что два возбудителя — V.pirina Aderh. и V.nashicola относятся к отдельным видам, сегодня мы можем судить о существовании отличий в нуклеотидной последовательности ДНК данного рода и в этом контексте искать свой молекулярно-генетический подход для их различия. Учитывая близкое генетическое родство данных видов и их морфологическое сходство, имеется необходимость поиска и разработки молекулярно-генетических методов их видовой идентификации, как наиболее точных.
Цель данного исследования — использование ITS-региона для идентификации грибов рода Venturia Ces.et De Not.
Материалы и методы
Исследования проводились в 2017-2018 гг. в лаборатории иммунитета отдела селекции плодовых культур РУП «Институт плодоводства».
Объектами исследований являлись моно-изоляты грибов V.inaequalis (Cooke) Wint. и V.pirina Aderh., выделенных в чистую культуру, и изоляты грибов, полученных со смывов пораженных плодов яблони и груши различного географического и генетического происхождения, культивированных на питательной среде. Объекты собраны в коллекционных садах РУП «Институт плодоводства».
Выделение моноспоровых изолятов, возбудителей парши яблони и груши в чистую культуру осуществляли при помощи специальной насадки на объектив микроскопа [14]. Для культивации патогенов использовали модифицированную среду Чапека. Смывы с пораженных плодов проводили по общепринятым в фитопатологии методикам [15-17].
Выделение ДНК грибов-возбудителей болезней яблони и груши проводили с использованием колоночного набора «АртДНК MiniSpin» (ООО «АртБиоТех», Беларусь) в сочетании с инкубированием в сорбирующем
и лизирующем растворах при 65 °С в течение 2 ч. Количество ДНК в препаратах определяли с помощью спектрофотометра P330 («Implen», Германия).
Для ПЦР использовали следующие праймеры:
• ITS1 (5-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3) — для определения последовательности региона малой субъединицы 5.8S;
• LR3 (5-CCGTGTTTCAAGACGGG-3) и LR5 (5-TCCTGAGGGAAACTTCG3) — к региону большой субъединицы 28S;
• NS1(5-GTAGTCATATGCTTGTCTC-3), NS4(5TTTCCGTCAATTCCTTTAAG-3) — к региону малой субъединицы у мицелиальных грибов 18S.
Реакцию амплификации проводили с готовым премиксом iProof HF master mix (Bio-Rad, США) с добавлением 10мМ праймеров и 50 нг ДНК-матрицы по следующему протоколу:
• I этап — преденатурация при 98 °С — 1 мин;
• II этап — 35 циклов: денатурация при 98 °С — 10 с, отжиг при 55 °С — 10 с, элонгация при 72 °С — 1 мин;
• III этап — элонгация при 72 °С — 3 мин.
Продукты амплификации разделяли с помощью электрофореза с использованием ага-розных гелей 0,8% и 1,2%. Для визуализации и сохранения результатов электрофореза применяли систему цифровой видеодокументации ChemiDoc («BioRad», США).
Очистку ПЦР-фрагментов от посторонних примесей проводили колоночным набором «АртДНК MiniSpin гель» (ООО «АртБиоТех», Беларусь) в соответствии с рекомендациями фирмы-изготовителя.
Секвенирующую реакцию проводили с прай-мерами, указанными выше, по подобранному протоколу:
• I этап — 96 °С — ю;
• II этап — 30 циклов: 96 °С — 20 с, 55 °С — 20 с, 60 °С — 4 мин;
• III этап — 4 °С — ю.
Прямое секвенирование нуклеотидных последовательностей межгенного ITS- региона проводили на генетическом анализаторе GenomeLab GEXP («Beckman Coulter», США) с использованием набора для секвенирования согласно рекомендациям фирмы-производителя. Анализ нуклеотидных последовательностей осуществляли с помощью программы Lfr-a 130 («Beckman Coulter», США).
Сравнение полученных нуклеотидных последовательностей с доступными последовательностями из базы данных GeneBank проводили с помощью программы BLASTN 2.3.1 (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi).
Результаты и обсуждение
В данной работе в качестве материала для исследования были использованы чистые культуры возбудителей парши яблони и груши и смывы с пораженных плодов данных культур. Чистые культуры возбудителя парши яблони V.inaequalis были получены с сортов Лучезарное и Мечта, парши груши V.pirina — с сортов Велеса, Восточная золотистая, Десертная россошанская, Красавица Черненко.
Проведена первичная идентификация возбудителей парши яблони и груши по совокупно -сти морфо-культуральных признаков (рис.1, 2). Установлено, что изоляты, выделенные с яблони, относятся к виду V.inaequalis, с груши — к виду V.pirina.
Проведение первичной морфологической оценки возбудителей со смывов было затруд-
V)
с?
г?
Рис. 1. 30-дневные колонии изолята V.inaequalis на питательной среде Чапека (а) и конидии гриба (б)
б
Рис. 2. 30-дневные колонии изолята Кртпа на питательной среде Чапека (а) и конидии гриба (б)
нительным ввиду наличия нескольких культур в подготовленных образцах.
ДНК выделяли из чистой культуры гриба и со смывов плодов. Использовали колоночный набор «АртДНК MiniSpin» в сочетании с инкубированием в сорбирующем и лизи-рующем растворах в течение двух часов. Детекция результатов экстракции показала высокое содержание ДНК в пробах как при выделении из чистых культур, так и со смывов плодов. А именно — отношение 260/280, используемое для определения чистоты ДНК, составило 1,8-1,9, а отношение 260/230 — 2,0-2,2 (табл. 1).
Полученные препараты ДНК со смывов и из чистых культур были использованы для постановки ПЦР. В результате ПЦР грибной ДНК с парами праймеров ITS1 и LR3, №1 и №4 были получены продукты амплификации размером около 1200 п. н., в реакции с парой праймеров ITS1 и LR5 — около 1400 п. н.
Детекция результатов
Для проведения точной идентификации грибов-возбудителей парши на молекулярно-генетическом уровне были использованы фрагменты ДНК, полученные из чистых культур.
Сравнение полученных в результате сек-венирования нуклеотидных последовательностей продуктов амплификации с базой данных GeneBank показало, что исследованные изоляты, полученные из чистых культур, являются представителями сумчатых грибов рода Venturia. В результате было установлено, что последовательности, полученные при применении пар праймеров ITS1 и LR3, NS1 и NS4, были недостаточно информативны для четкого разделения близкородственных видов рода Venturia Ces.et De Not. (последовательности представлены на рис. 5). А именно — степень сходства регио -нов выделенного гриба с имеющимися в базе V.pirina, V.nashicola и V.inaequalis составила 95-99%, 96-97% и 81-83% соответственно.
Таблица 1
стракции ДНК в пробе
Объекты Выделение ДНК грибов из чистых культур ДНК нг/мкл Выделение ДНК грибов со смывов плодов ДНК нг/мкл
А 260/А280 А260/ А230 А 260/А280 А260/А230
Яблоня Лучезарное 1,906 2,089 283 1,864 2,000 105
Яблоня Мечта 1,874 2,000 89 1,799 1,987 300
Груша Велеса 1,887 2,052 100 1,764 2,190 197
Груша Восточная золотистая 1,981 1,945 51,5 1,802 1,963 25
Груша Десертная россошанская 1,897 2,018 27,5 1,895 2,246 97
Груша Красавица Черненко 1,882 1,971 104 1,938 2,010 45
Так, изолят 13ХШ, выделенный с сорта груши Велеса и идентифицированный по мор-фо-культуральным признакам как Vpirina, на молекулярно-генетическом уровне проявил высокий процент сходства (99%) как с Vpirina, так и с V.inaequalis. Изолят 19Х1Х, выделенный с сорта яблони Мечта, показал сходство с V.inaequalis и Vpirina, хотя ранее при идентификации традиционными методами был определен как возбудитель парши яблони. А изоляты /11г от P.pyrifolia сорта Восточная золотистая и 14 Ш4г от
P.ussuriensis сорта Десертная россошанская проявили высокий процент сходства с V.nashicola и V.pirina (табл. 2). Анализ более длинной последовательности кластера рибо-сомных генов ITS1-LR5 также не дал желаемых результатов, так как поиск гомологий был затруднен отсутствием достаточного ко -личества референсных последовательностей, депонированных в Genbank.
Таким образом, в ходе проведенного исследования с применением пар праймеров ITS1 и LR3, NS1 и NS4, ITS1-LR5 удалось иденти-
а CATCCTAGCAGAGCGCGAACCTCGTGTCCGGGCTGGCCGCATGGCACGCCGGGCTATAACACCTCCCCGAGGGGAGGCCACG
TGTCCCGCCGCCTTTATCCGGCCGCCCAAACCGATGCTGGCCTGACCGCGGAAGAGTGCACCCGCCAAAAGGCGGGCTGAGCAACCG CGGGCAAGTCTGGCCGCAAGCGCTTCCCTTTCAACAATTTCACGTACTTTTTAACTCTCTTTTCAAAGTGCTTTTCATCTTTCGATCACT CTACTTGTGCGCTATCGGTCTCTGGCCGGTATTTAGCTTTAGATGGAATTTACCACCAATTTAGAGCTGCATTCCCAAACAACTCGACTC GTCGAAGGAGTTTCACAGCGGGGGGCACCGACGGCCAGGTACGGGGTTCTCACCCTCTATGACGTCCTGTTCCAAGGGACTTGGACC GTGGCTTCACCCGAAACATCCTCTGCAAATTACAACTCGGGCTTGCGCCAGATTTCAAATTTGAGCTGTTGCCGCTTCACTCGCCGTTA CTGAGGCAATCCCTGTTGGTTTTCTTTTCCTCCGCTTTATTTGATATTGCCTTAAAGTTTTCAAGCCGGGGGTTA
б TTATCTCCCCCCAGAACCCAAAAACTTTGATTTCTCGATAAGGTGCCGAGCGAGTCAAGATAGTAACATCGCCCGATCCCTAGT
№ изолята Растение - хозяин Видовая принадлежность по морфо-культуральным признакам Праймеры Видовая принадлежность по результатам молекулярно-генетического анализа и процент сходства с последовательностями из базы данных Genbank
13XIII P.communis var. Велеса Venturia pirina NS1/NS4 Venturia pirina isolate ATCC38995(EF114739.1) — 99% Venturia asperata isolate ATCC 34052 (EF114736.1) — 99%
5V P.communis var. Красавица Черненко Venturia pirina NS1/NS4 Venturia pirina isolate ATCC38995(EF114739.1) — 95% Venturia inaequalis isolate ATCC 60070 (EF114737.1) — 94%
12R M.x domestica var. Лучезарное Venturia inaequalis NS4 Venturia inaequalis isolate ATCC 60070 (EF114737.1) — 83% Venturia pirina isolate ATCC38995 (EF114739.1) — 83%
CGGCATAGTTTATGGTTAAGACTACGACGGTATCTGATCGTCTTCGATACCCCTAACTTGTCGTGTTCACTGATTAATGAAAACATCCTT GCGCAAATGCTGTTCGCAGTAGTTAGTCTTCAATAAATCCAAGAATTTCACCTCTGACAATGTGAATACTGATGCCCCCGACTATCCCTA TTAATCATTACGGCTTCACCTAGAAACCAACAAAATAGAGAAAGCCGTCCTATTGCATATTATGGCCATGGCTAATGTATACGAGCAAA GGCCTGCTGTTGAACACTCTAATGATTTGCAAAGTAAAAGTCCTGGGTTCCCCAGCACACCCAGTGAAGGGGCATGCGGATCACCCA GTGATGCTAAGGGCCCCGGGCCGGGAAACCATGTTGTCACTGCCGGGATTGTAGGGCTGAGAACCCCGGGAACCAATCCCCCAATTG АТСССССААААААААТАТССАААААСТ Рис. 5. Нуклеотидные последовательности изолятов Vpirina 11Ш1г и 5Х полученные в результате секвени-рования ITS-региона: а — сиквенс, полученный при применении пары праймеров ITS1 и LR3; б — сиквенс, полученный при применении пары праймеров №1 и №4
Таблица 2
Результаты идентификации возбудителей парши яблони и груши различными методами
Продолжение табл. 2
№ изолята Растение - хозяин Видовая принадлежность по морфо-культуральным признакам Праймеры Видовая принадлежность по результатам молекулярно-генетического анализа и процент сходства с последовательностями из базы данных Genbank
19XIX M.x domestica var.Me4Ta Venturia inaequalis NS1/NS4 Venturia inaequalis isolate ATCC 60070 (EF114737.1) — 81% Venturia pirina isolate ATCC38995(EF114739.1) — 81%
11f/11r P.pyrifolia var. Восточная золотистая Venturia pirina ITS/LR3 Venturia nashicola strain CBS 793.84 (EU035465.1) — 97% Venturia pirina strain CBS331.65 (EU035469.1) — 97%
14f/14r P.ussuriensis var. Десертная россошанская Venturia pirina ITS/LR5 Venturia nashicola strain CBS 793.84 (EU035465.1) — 96% Venturia pirina strain CBS331.65 (EU035469.1) — 96%
фицировать гриб Venturia до рода. Сложность видовой идентификации грибов данного рода обусловлена недостаточным для сравнения количеством нуклеотидных последовательностей, представленных в GeneBank. Поэтому необходим поиск и разработка дополнительных методов идентификации (табл. 2).
Заключение
Метод секвенирования рибосомальной ДНК в идентификации грибов дает высокую результативность в определении родовой принадлежности.
В результате данного исследования была проанализирована ITS-область грибов рода Venturia Ces.et De Not местных изолятов возбудителей парши яблони и груши, а именно — регионы малой субъединицы 5.8S, большой субъединицы 28S и малой субъединицы у мицелиальных грибов 18S, где был установлен 81-99% сходства с базовыми вариантами. Несмотря на то, что анализ проводился с несколькими парами праймеров по нескольким участкам, охватывающим в конечном счете полный ITS- и частично NS-регионы рибосомального кластера, четкие различия нуклеотидных последовательностей V.pirina, Vnashicola и V.inaequalis не были выявлены, что свидетельствует о невозможности разделения этих близкородственных видов, используя данные праймеры. Для дальнейшего исследования необходима разработка более специфических методов идентификации.
Работа выполняется в рамках ГПНИ «Качество и эффективность агропромышленного производства» на 2016-2020 годы (подпрограмма «Земледелие и селекция») по заданию 6.50: Выявление морфологической и генетической структуры популяций грибов рода Venturia — возбудителей парши семечковых культур.
Список использованных источников
1. Арефьев, В. А. Англо-русский толковый словарь генетических терминов / В. А. Арефьев, Л. А. Лисовенко; под ред. Л.И. Патрушев. - М.: Изд-во ВНИРО, 1995. - 407 с.
2. Юрченко, Е. О. Основы молекулярного маркирования грибной ДНК: практическое руководство / Е. О. Юрченко, М. Г. Синявская; Ин-т эксперим. Ботаники НАН Беларуси. -Минск: Право и экономика, 2007. - 101 с.
3. Detection and identification of decay fungi in spruce wood by restriction fragment lenth polymorphism analysis of amplified genes encoding rRna / C. A. Jasalavich [et al.] // Applied and Environmental Microbiology. - 2000. -Vol. 66, № 11. - P. 4725-4734.
4. Tanaka, S. Taxonomy of the causal fungus of Japanese pear scab: Studies in pear scab II / S. Tanaka, S. Yamamoto // Annals Phytopathol. Soc. Jpn. - 1964. - Vol. 29. - P. 128-136.
5. Langford, M.H. Heterothallism and variability in Venturia pirina / M.H. Langford, E.N. Keitt // Phytopathology. - 1942. - Vol. 32. -P. 357-369.
6. Abe, K. Inheritance of resistance to pear scab from European pears to Asian pears / K. Abe, K. Kotobuki [et al.] // Journal of the Japanese Society for Horticultural Science. - 2000. -Vol. 69. - P. 1-8.
7. Schnabel, G. Characterization of ribosomal DNA from Venturia inaequalis and its phylogenetic relationship to rDNA from other tree-fruit Venturia species / G. Schnabel [et al.] // Phytopathology. - 1999. - Vol. 89. - P. 100-108.
8. Shabi, E. Physiological races of Venturia pirina on pear / E. Shabi [et al.] // Phytopathology. -1973. - Vol. 63. - P. 41-43.
9. Ishii, H. Venturia nashicola, the scab fungus of Japanese and Chinese pears: A species distinct from V. pirina / H. Ishii, H. Yanase // Mycol. Res. - 2000. - Vol. 104. - P. 755-759.
10. Le Cam, B. Specific polymerase chain reaction identification of Venturia nashicola using internally transcribed spacer region in the ribosomal DNA/ B. Le Cam [et al.] // Phytopathology. - 2001. - Vol. 91. - P. 900-904.
11. Курдюк, Т. П. Внутривидовая неоднородность Venturia pirina Aderh.- возбудителя парши груши / Т. П. Курдюк // Плодоводство: межвед. темат. сб. / Белорус. Науч.-исслед ин-т картофелеводства и плодоовощеводства; гл. ред.: В. А. Самусь. - Минск, 1989. - Вып. 7. - С. 39-45.
12. Курдюк, Т. П. Конкурентная способность штаммов Venturia pirina Aderh.B связи с селекцией груши на устойчивость к парше / Т. П. Курдюк // Плодоводство: науч.тр. / Бело -рус. науч.-исслед ин-т плодоводства; гл. ред.:
B. А. Самусь. - Минск, 1993. - Т. 8. - С. 79-87.
13. Козловская, З. А. Внутривидовая неоднородность Venturia inaequa/is-возбудителя парши яблони / З. А. Козловская, Т. А. Гашен-ко // Вестн. Бел. гос. с.-х. акад.: Земледелие, селекция, растениеводство. - 2009. - № 4. -
C. 97-100.
14. Коновалова, Н. А. Биологическая специализация возбудителя парши яблони в Белорусской ССР: автореф. дис ... канд. с.-х. наук: / Н. А. Коновалова. - Самохваловичи, 1977. - 24 с.
15. Гашенко, Т. А. Исходный материал яблони для создания высокопродуктивных сортов, сочетающих устойчивость к парше и высокое качество плодов: дис. ... канд. с.-х. наук: 06.01.05 / Т. А. Гашенко. - Самохваловичи, 2009. - 132 с.
16. Бондарцев, А. С. Шкала цветов / А. С. Бон-дарцев. - М.; Л., 1954. - 27 с.
17. Хохряков, М. К. Методические указания по экспериментальному изучению фитопато-генных грибов / М. К. Хохряков. - Ленинград: ВИЗР, 1974. - 69 с.
T. M. Martsinkevich1, T. A. Hashenka1, Z. A. Kazlouskaya1, J. G. Kandratsenak1, S. K. Laziuk2
USING ITS REGION IN THE RIBOSOMAL DNA TO IDENTIFY PATHOGENES OF THE GENUS VENTURIA CES.ET DE NOT
institute for Fruit Growing of NASB Samokhvalovichy, Minsk reg., 223013, the Republic of Belarus
2State University «Republican Scientific and Practical Center for Epidemiology and Microbiology» of the Ministry of Health of the Republic of Belarus Minsk, 220114, the Republic of Belarus
This article presents the results obtained using the internal transcribed spacer (ITS) region to the study of fungi of the genus Venturia spp. The ribosomal DNA sequencing method proved itself as highly efficient in the identification of ascomycetes of the genus Venturia Ces.et De Not. A degree of similarity between the regions of a fungus we isolated and of V.pirina, V.nashicola and V.inaequalis present in the database was 95-97%, 96-97% and 81-83% respectively. The study also found that the species identification of Venturia genus representatives requires the use of more specific identification methods.
Key words: ITS region, identification, Venturia spp., pear, apple.
Дата поступления статьи: 16 июля 2019 г.
