CC BY
64
- в основном гибнут лица мужского пола трудоспо- - необходимо продолжать научные исследования, на-
собного возраста от 19 до 60 лет в состоянии алкогольного правленные на выявление новых объективных признаков опьянения; прижизненного воздействия пламени на тело человека.
Литература
1. БуланкинаИ.А, Лебединский В.Ю., ТрегубоваА.Б, Щедреев А.Г. Совершенствование методов диагностики морфофункционального состояния кожи при ожоговой болезни (морфология, биомеханика).//Материалы VВсероссийского съезда судебных медиков. -Мос-ква-Астрахань, 2000. - С. 116.
2. Козлов С. Н. О динамике уровня некоторыхмакро- и микроэлементов в коже при ожоговой травме.//Вопросы судебно-медицинской экспертизы и криминалистики. № 4. - Горький, 1972. - С. 208-210.
3. Попов С. И. Копоть в полостях сердца и крупных сосудах как показатель прижизненного пребывания человека в очаге пожара./ /Вопросы судебно-медицинской экспертизы и криминалистики. № 5. - Горький, 1975. - С. 251-255.
4. Сероджев Т.С. Гистоморфология ганглиев солнечного сплетения животных при прижизненных ожогах и посмертном обгорании кожи.//Сборник трудов Бюро главной судебно-медицинской экспертизы и кафедры судебной медицины Сталинабадского медицинского института им. Авиценны. Вып. 6. - Сталинабад, 1958., - С 81-87.
5. Сергеев В. В. Применение системного многофакторного анализа при судебно-гистологических исследованиях. Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики.//Сборник научных трудов. Вып. 6. - Барнаул, 1991.- С. 130-131.
6. Файн М. А. О концентрации восстановленного глютадиона в эритроцитах при тяжелых термических ожогах кожи.//Вопросы судебной медицины: Сборник научных трудов под ред. В.И. Алисиевича. - Москва.: Изд-во РУДН, 1954. - С. 66-67.
7. Файн М. А. Морфологические особенности прижизненных и посмертных повреждений кожи.//Научная сессия института судебной медицины М3 СССР. Рефераты докладов. - Л., 1955. - С. 105-107.
8. Файн М. А. К судебно-медицинской диагностике прижизненности ожогов.//Сборник статей Саратовского отделения Всероссийского научного общества судебных медиков и криминалистов. Вып. II. - Саратовское издательство "Коммунист"., 1958. - С. 53-59.
9. Файн М.А. Патогистологические изменения щитовидной железы в ранние сроки после тяжелых ожогов пламенем.//Сборник научных трудов общества судебных медиков Литовской ССР. Вып. 2. - Каунас, 1965. - С. 146-147.
10. Файн М. А. К вопросу о реакции костного мозга на тяжелую ожоговую травму.//Вопросы судебной медицины. Вып. 4. - Саратов. 1969. - С. 74-77.
11. Файн М. А. К вопросу о микролюминисцентном исследовании обгоревших тканей.//Физико-технические методы исследования в судебной медицине. - Москва-Ставрополь, 1972. - С. 190-191.
12. Файн М.А. Материалы к судебно-медицинскому исследованию трупов, извлеченных из пламени.//Вопросы судебной медицины и криминалистики. - Петрозаводск, 1976. - С. 14-41.
13. Файн М.А., Королева Н. П. Морфология надпочечников при обширных и глубоких ожогах кожи, причиненных в период агонии./ /Вопросы судебной медицины и криминалистики. - Петроза.водск, 1976. - С. 42-44.
14. Файн М.А., Королева Н.П. Реакция щитовидной железы на обширные ожоги кожи и дыхательных путей, сочетающиеся с воздействием окиси углерода и дыма.//Судебная экспертиза (5 сборник проблемных научных работ по судебной экспертизе). - Л., "Медицина", 1977. - С. 91-92.
© А.М. Хромова, Ю.П. Калинин, 2003
УДК 340.67
А.М. Хромова, Ю.П. Калинин ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИММУНОГИСТОЦИТОХИМИИ ДЛЯ ЦЕЛЕЙ СУДЕБНОЙ МЕДИЦИНЫ (предварительное сообщение) Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы (начальник бюро - Ю.П. Калинин) МЗ Республики Татарстан
Иммунногистоцитохимия (ИГЦХ) - метод идентификации и определения локализации в клетке и тканях различных структур, имеющих антигенные свойства, основанный на реакции антиген (АГ) - антитела (АТ). Основателями этого метода по праву можно считать группу исследователей под руководством Альберта Кунса (1941), которые впервые получили меченные флюоресцеином антитела и применили их в диагностических целях. Кардинальным событием в иммуногистохимии явилась разработка Кохлером Милстейном (1975) гибридомной технологии, основанной на слиянии (гибридизации) миеломных клеток со спленоцитами иммунизированных животных и дающей возможность получать разнообразные моноклональные антитела в больших количествах. Эта технология оказалась настолько продуктивной и важной для проведения фундаментальных и прикладных биомедицинских исследований, что ее авторы были удостоены Нобелевской премии в области физиологии и медицины за "Открытие принципов синтеза моноклональных ан-
тител" (1984 г.). В литературе метод называют по-разному: иммуногистохимия, иммуноцитохимия, в зависимости от прикладного значения или выявляемого антигена.
Получение моноклональных антител процесс многоэтапный и сложный, они, являются высокоспецифичными и высокоавидными антителами и направлены к одному эпитопу антигена.
Поликлональные антисыворотки, получаемые при иммунизации животных, содержат (АТ) к различным эпитопам (АГ). Для получения поликлональной антисыворотки лабораторному животному вводят очищенный АГ вместе с неспецифическим стимулятором иммунного ответа - адъювантом. АГ стимулирует множество В - лимфоцитов, каждый из которых дает клон плазматических клеток, продуцирующий АТ. АГ может иметь несколько эпитопов и антисыворотка содержит иммуноглобулины против каждого из них, причем каждый клон плазматических клеток способен вырабатывать АТ лишь к одному типу эпитопов.
Основой для ИГЦХ является иммунологическая реакция антигена и антитела. Принцип метода очень схож с иммуноферментным анализом. Существует несколько наиболее часто используемых вариантов постановки ИГЦХ метода: прямой иммунофлюоресцентный (ИФ), непрямой пероксидазный, растворимых ферментных комплексов: пероксидаза - антипероксидаза (ПАП), щелочная фосфатаза - антищелочная фосфатаза (ЩФАЩФ), авидин (или стрептовидин) - биотиновый (АВС) и современный метод (EPOS, EnVision). Наиболее перспективными из перечисленных методов является авидин - биотиновый и современные (EPOS, EnVision), как высокочувствительные.
В последние годы метод ИГЦХ широко применяется как в клинической практике для диагностики различных заболеваний и, главным образом, в дифференциальной диагностике опухолей, так и в научно-исследовательской работе. Благодаря тому, что в настоящее время стало доступным получение большого количества поли- и моноклональных (АТ), обладающих высокой специфичностью и авидностью, количество научных задач, для решения которых могут использоваться методы ИГЦХ, практически не ограничено.
Так, этот метод уже достаточно широко используется для:
- дифференциальной диагностики опухолей, определения источника метастаза при неясном первичном очаге опухоли, оценки гормонального статуса опухоли, иммуно-фенотипирования опухолей (особенно опухолей лимфоидной системы), определения факторов прогноза опухолевого процесса;
- идентификации различных микроорганизмов (бактерий, вирусов);
- определения гормонов и их рецепторов и т.д.
По доступной нам литературе, а также на основании собственных наблюдений и опыта практической работы определены приоритетные направления использования ИГЦХ в судебной медицине, главным из которых является определение давности травматического и патологического процесса, кроме того, нас заинтересовал вопрос тканевой и цитологической идентификации.
В Республиканском бюро судебно-медицинской экспертизы М3 Республики Татарстан с 2002 г. начато создание иммуногистохимической лаборатории, основной целью которой является определение маркеров прижизненного характера повреждений, их "изменчивости" и динамики. Освоено определение 2-х маркеров для определения ранней прижизненной реакции (первые минуты-часы от момента травматизации). Наличие на оснащении гистологического отделения РБ СМЭ М3 РТ рабочего места гистолога, включающего микроскоп фирмы NICON, видеокомплекс (видеокамера, видеодвойка, компьютер с принтерами, программы для системного ввода, анализа изображений и морфо-метрии) позволяет решить следующие задачи:
1.Документирование объектов и результатов экспертизы, их структурирование.
2.Создание баз высококачественных видеоизображений (создание фототеки).
3.Возможность оперативной выборки из базы данных объектов по любым заранее заданным признакам; т.е. возможность импорта, экспорта, редакции и формирования галерей изображений.
4.Количественный анализ гистологических и цитологических объектов.
5.Статистическая обработка накопленных в базе данных измерений.
Все это решает проблему прикладного использования ИГЦХ эффективно и доказательно.
На наш взгляд перспективным является вопрос установления тканевой и цитологической идентификации методами ИГЦХ. Так в экспертное учреждение осенью 2002 года поступил биологический материал. На рассмотрение экспертизы поставлен следующий вопрос: Прижизненно ли или посмертно отделение представленных на исследование объектов?
Из постановления следователя известно, что: "17 августа 2002 года в спортивном корпусе завода "Искож" по ул. Модельная 25 неизвестные лица совершили убийство гражданина С. с применением огнестрельного оружия".
Приводим описательную часть данной экспертизы и ход исследования: 28 августа 2002 года вместе с вышеуказанным постановлением следователя в отделение доставлены 2 полиэтиленовых пакета, заклеенных прозрачной липкой лентой с сопроводительной запиской "Прокуратура Республики Татарстан, постоянно действующая следственная группа, уголовное дело № 86617 по факту убийства С. Наименование предметов: зуб, белое вещество (мозговое вещество (?))... В свертке с надписью "17.08.02г." ве-
щество похожее на фрагменты головного мозга, объект -1.
В свертке "17.08.02г.." зубы, 3 корня зуба, объект -2.
Ход исследования: произведена фиксация биологического материала объекта №1 (вещества белого цвета) и объекта № 2 (зуба) в 10% растворе нейтрального формалина. Зуб подвергался гистологической проводке после декальцинации. Проводка спиртово-ацетоновая с использованием Автоматизированного процессора ТР 1020. Заливка в парафин. Изготовлены парафиновые срезы на санном микротоме с окраской гематоксилин-эозином, по Маллори. Использовалась световая микроскопия. Кроме того проведена иммуногистохимическая реакция на гистосрезах, изготовленных из парафиновых блоков; использован стреп-тавидин-биотиновый иммунопероксидазный метод; первичными антителами явились CD - 62Р (P - Selectin, Код М7199, фирмы DAKO), CD - 62E (моноклональные антитела клон 1604,код CD62E-382 фирмы Novocastra), кислый глиальный фибриллярный белок (DAKO моноклональные мышечные антитела, глиальный фибриллярный кислый белок 6F2 код M761 лот 064), в качестве позитивного контроля на эндотелий использованы антитела к эндотелиальному маркеру CD - 34 (DAKO, моноклональные антитела HPS CD34, клон Birma K3, код №3, M7080, лот 077).
В результате данной экспертизы было установлено:
- объектом №1 является мозговая ткань; каких-либо морфологических признаков повреждений различного
Таблица 1
Описание гистологических препаратов:
Маркированные препараты Маркер
сд -р СД-Е Кислый глиальный фибриллярный белок СД-34 Описание
Объект №1 Негативная реакция в эн-дотелио-цитах Негативная реакция в эн-дотелио-цитах Позитивная реакция в глиоцитах Позитивная (+) реакция в эндоте-лиоцитах Клеточные структуры по типу глиоци-тов, группы полнокровных сосудов
Объект №2 Негативная реакция в эн-дотелио-цитах Негативная реакция в эн-дотелио-цитах Реакция не проводилась В сосудистых щелях эндотелий не вышвля-ется Клеточные структурные компонентов зуба. Сосудистые щели в пульпе пустые
генеза (в т.ч. активация функциональных молекул эндотелия сосудов) не выявлена.
- объектом №2 является коренной зуб, клеточные структуры зуба сохранены, функциональные молекулы группы селектинов и контроля на эндотелиоциты в сосудах не выявляются, что может указать на выраженные трупные явления (аутолиз).
Всё это указывает, что каких либо признаков прижиз-ненности повреждения в представленных биологических объектах не обнаружено.
Таким образом, благодаря исключительной информативности и хорошо разработанной технологии иммуногистоцитохимия может использоваться и для решения прикладных задач судебной медицины.
Литература:
1. Возможности иммуногистохимическихметодов исследования и их роль в онкоморфологии. Под ред. Г.Б.Ковальского.-СПб.,1999.
2. Иммуноцитохимия и моноклональные антитела в онкогематологии. Под ред. В.П. Пинчука, Д. Ф. Глузмана, Киев, Наук.думка.,1990.
3. Молекулярная клиническая диагностика. Методы: Пер. с англ. Под ред. С. Херрингтон, Дж.Макги - М.: Мир, 1999.-558 с.
4. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. Издание 2-е, дополненное и переработанное. Под ред. С.В. Петрова и Н.Т. Райхлина. - Казань, 2000.-287с.
© К.В. Шевченко, З.Д. Давыдова, 2003 УДК615,31:546.33131-06:616.8-009.831]-036.88
К.В. Шевченко, З.Д. Давыдова ГИПЕРОСМОЛЯРНАЯ КОМА СО СМЕРТЕЛЬНЫМ ИСХОДОМ ПОСЛЕ КЛИЗМЕННОГО ВВЕДЕНИЯ ГИПЕРТОНИЧЕСКОГО РАСТВОРА ХЛОРИДА НАТРИЯ
Кафедра судебной медицины (зав. кафедрой - доцент А.В. Светлаков)
Пермской государственной медицинской академии
Известно, что различные гиперосмолярные состояния, не являются редкими в клинической и судебно-медицинской практике [1, 3,4,5]. Разработана классификация причин развития данного вида комы, описана характерная клиническая и морфологическая картины. Однако, в литературе мы не встречали упоминания о случаях развития этого состояния в результате введения гипертонических растворов per rectum, с целью самолечения, что навело нас на мысль поделиться подобным наблюдением.
Инженер крупного предприятия 40 лет поступила в клиническую больницу в состоянии комы. За 2 дня до поступления у нее появилась тошнота и рвота, в связи с чем, она не пошла на работу. Позднее знакомые обнаружили женщину на полу без сознания.
При поступлении в стационар общее состояние тяжелое. Кома III. Гемодинамика неустойчивая. АД=100/60 мм рт ст. Пульс - 112 в минуту. Живот мягкий, на пальпацию не реагирует. Диурез отсутствует. В отделении произошло два генерализованных судорожных припадка. Проведено биохимическое исследование крови, которое показало значительное увеличение креатинина до 416 мкмоль/л (в норме 76,25 мкмол/л) [2], мочевины - 18,8 ммоль/л (в норме - 8,3 ммоль/л). Кроме того, изменен оказался электролитный состав крови: содержание калия составило 2,6 ммоль/л (3,4ммоль/л),натрия- 163ммоль/л (156 ммоль/л), кальция - 1,26 ммоль/л (2,3 ммоль/л). Больная была осмотрена эндокринологом, который поставил предварительный диагноз: Церебральная кома, на фоне острой почечной недостаточности. Смерть пострадавшей наступила на 2-е сутки пребывания в стационаре.
При исследовании трупа обнаружены признаки экси-коза в виде сухости кожных покровов, жировой клетчатки, поперечно-полосатыхмышц, плевры и брюшины, свернувшейся крови в сосудах. При исследовании головного мозга обращало на себя внимание уменьшение его объема, отставание до 1 см от костей черепа, обезвоженность, плотная консистенция. Резко уменьшено количество субарахноидально-желудочкового ликвора. Гистологически в мозге обнаруживается кариопикноз и гидропическая дистрофия оли-годендритов, пикноз ядер и базофилия нейронов, карио-пикноз и уплощение цитоплазмы эндотелиоцитов сосудов, а так же эпендимоцитов желудочков и сосудистых сплетений. Вокруг артериол обнаружены очаговые кровоизлияния. Гидропическая дистрофия олигодендритов.
На основании сопоставления клинической картины, данных лабораторных исследований и морфологических изменений, мы пришли к выводу, что причиной развития комы у женщины явилось нарушение электролитного обмена. В дальнейшем выяснилось, что незадолго до описанных событий больная была проконсультирована "спе-циалистом-экстрасенсом", который определил у нее "заш-лакованность" организма и рекомендовал очищающие клизмы с гипертоническим раствором. Женщина вводила ежедневно гипертонический раствор хлорида натрия в количестве до 15 литров в сутки, потеряв в весе, со слов ее знакомых, за неделю около 10 кг.
Приведенный случай представляет практический интерес, как пример необычной причины развития гиперос-молярного состояния, явившегося причиной смерти пострадавшей.
Литература:
1. Боголепов Н.К. Коматозные состояния. - М., 1962. - с. 207-219.
2. Данилова Л.А. Анализы крови и мочи. - СПб., 2001. - с. 36-55.
3. Лосев Н.И., ХитровН.К, Грачев С.В. Патофизиология экстремальных состояний. - М., 1988. - с. 44-49.
4. Плам Ф., Познер Дж.Б. Диагностика ступора и комы. - М., 1986, - с. 374-378.
5. Туманский В.А. Патологоанатомическая характеристика гиперосмолярных и других коматозных состояний //Архив патологии, 1985, вып. 2, с.51 -58.
