CC BY
53
2005 = ВЕСТНИК САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКОГО УНИВЕРСИТЕТА. Сер. 3. Вып. 4
ГЕНЕТИКА
УДК 575.113:576.354.4:576.354.422.4:633.14
А. В. Войлоков, Н. В. Цветкова, А. В. Ловцюс, Т. В. Дояматович, С. В. Малышев, С. П. Соснихина
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ В ИЗУЧЕНИИ МЕЙОЗА У РЙСИ*
Мутации, нарушающие протекание мейотических делений, получили название мейо-тических (мей-мутаций). Проведение генетического и молекулярно-биологического анализа теистических мутации осложняется тем, что Б большинстве случаев эти мутации в гомозиготном состоянии ведут к полной или частичной стерильности [4]. Очевидно, этим объясняется и малое число мейотических мутаций, картированных к настоящему времени у высших растений, наибольшее их число картировано у кукурузы [6]. Вместе с тем картирование мейотических мутаций не только имеет самостоятельное значение для частной и сравнительной генетики растений, но и позволяет использовать полученные данные о сцеплении для надежного установления аллелизма мутаций, изучения их взаимодействия в компаунде и у двойных мутантов с использованием принципа генетических маркеров.
Логическое развитие генетических исследований л*ей-мутаций можно осуществить путем клонирования идентифицированных генов, основанного и в этом случае на знании о хромосомной локализации этих генов и анализа их белковых продуктов in situ и in vitro. Идея использования генов с качественным альтернативно-наследующимся проявлением как маркеров участков хромосом, в которых могут находиться гены с количественным проявлением или с проявлением, требующим значительных экспериментальных усилий для их выявления, была сформулирована в 20-30-х годах XX в. [1, 8]. Эта идея основана на совместной (сцепленной) передаче генов, находящихся в близко расположенных участках гомологичных хромосом, от родителей к потомкам в ряду последовательных поколений контролируемых скрещиваний. Реципрокный обмен участками гомологичных хромосом в мейозе (кроссинговер) может изменять взаиморасположение родительских аллелей в хромосомах, в результате чего в последующих поколениях появляются особи с новым (рекомбинантным) сочетанием родительских аллелей и соответствующих признаков. Частота кроссинговера определяется многими факторами наряду с главными из них - физической близостью генов в хромосоме и неравномерным распределением кроссоверных обменов по ее длине [1].
В свое время наиболее детально, с обсуждением множества экспериментальных подходов и с использованием математических методов, идея маркеров в приложении к анализу количественных признаков была изложена А. С. Серебровским [2]. Серебровский назвал эти гены сигнальными генами или сигналями. В современной литературе закрепилось вышеупомянутое понятие маркерных генов (локусов). Определение маркер относят к генам (локусам) с известной хромосомной локализацией и качественным, надежно идентифицируемым проявлением [8]. Исторически выделяют морфологические, биохимические (белко-
* Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (гранты № 04-04-81006-Бел2004_а, № 03-04-4 8887) и Минобразования (грант № 37890)
© А. В. Войлоков, Н. В. Цветкова, А. В. Ловцюс, Т. В. Долматович, С. В. Малышев, С. П. Соснихина, 2005
вые и изозимные) и молекулярные (ДНК-овые) маркеры [8]. Последний тип маркеров открыл возможности для гибридологического анализа любых сложно наследующихся признаков, идентификации и клонирования генов, ответственных за их проявление. Это связано с высокой степенью изменчивости на уровне последовательности нуклеотидов, составляющих структуру ДНК в кодирующих и некодирующих участках генома, и легко выявляемой с помощью современных молекулярно-биологических методов. В настоящее время насчитывается свыше 30 различных видов молекулярных маркеров, генетические карты хромосом, построенные с их помощью, получили название молекулярных [7].
Лаборатория генетики растений располагает оригинальной коллекцией линий, которые несут мейотические мутации, в большом числе выщепляющиеся при инбридинге у ржи [3]. С участием соавторов этой статьи построены одни из наиболее полных генетических карт хромосом ржи, включающие молекулярные, биохимические и морфологические маркеры [5]. Целью наших исследований является картирование мейотических мутаций с помощью изозимных и молекулярных маркеров, а также разработка подходов, позволяющих на этой основе повысить эффективность изучения мейотических мутаций у ржи. В статье представлены данные по сцеплению с изозимными и молекулярными маркерами двух рецессивных синаптических мутаций sy 1 и sy Р, нарушающих формирование синаптонемных комплексов [3]. На анализ были взяты гибридные семьи F2, полученные от скрещивания отдельных растений линий-носителей этих мутаций и линии 6 (JT6), характеризующейся нормальным мейозом. Семьи F2 получены от самоопыления растений Fb семьи 317 и 318 расщеплялись по гену sy 1, а семьи 3-20 и 321 - по гену sy 9. Листья для биохимического анализа были взяты от каждого растения гибридных популяций F2 и родительских форм. От тех же растений фиксировали колосья для анализа поведения хромосом в мейозе.
Результаты исследований и их обсуждение. Анализируемые синаптические мутации характеризуются количественно-средним числом унивалентов на материнскую клетку пыльцы (МКП) и распределением МКП по числу унивалентов, оцениваемых в диакинезе и метафазе I [3]. Вследствие этого идентификация двойных мутантов на основе характеристик мейоза становится затрудненной. Это относится и к выделению аллельных мутаций независимого происхождения в компаунде. Использование маркеров позволяет надежно выделять искомые генотипы среди выщепляющихся потомков скрещиваний и объективно описывать эффекты взаимодействия мутаций. Картирование (mapping) мутаций подразумевает обнаружение их сцепления, по крайней мере с двумя маркерами определенной хромосомы ржи. Таким образом, устанавливается положение мутантного гена в хромосоме. Маркирование (tagging) района расположения мутаций осуществляется в ходе их картирования путем обнаружения тесного сцепления (0-5% рекомбинации) мутации с одним из маркеров хромосомы или относительно слабого с двумя, расположенными по обе стороны мутации. Последнее взаиморасположение маркеров и гена известно в литературе как маркерные скобки. Для эффективного отбора гетерозигот по мутации используются локусы с кодом и-нантными аллелями. Отбор гомозигот по мутации возможен и с использованием доминантно-рецессивных маркеров. В этом случае рецессивная аллель маркера исходно должна быть расположена в той же хромосоме, что и мутация (^wc-положение или фаза притяжения).
Работа по картированию мейотических мутаций проводится по следующей схеме. Растения из линий - носителей мутации наугад скрещивают в качестве материнской формы с линиями с нормальным ходом мейоза. В подавляющем большинстве случаев семена завязываются у гомо- и гетерозигот по нормальной аллели, что не позволяет надежно выделить гетерозиготы по рецессивной мутации даже в случае проведения цитологического анализа и идентификации мутантов в пределах линии. Выращенные гибриды F1 - гомозиготы по нормальной аллели или гетерозиготы по мутации - самоопыляются. Далее проводится скрининг семей F2 на расщепление по стерильности (завязываемости семян). Завязываемость
семян при свободном опылении анализируют в выборках растений ¥2, достаточных для обнаружения моногибридных расщеплений (около 20-30 растений). Резерв семян из семей с расщеплениями по полной или частичной стерильности высевают с целью проведения на следующий год цитологического анализа и анализа расщепления по маркерам. В первую очередь проводится анализ изозимных маркеров. Обнаружение сцепления мутации с каким-либо изозимным локусом значительно облегчает последующее молекулярное картирование. Отсутствие сцепления с проанализированными маркерами позволяет выделить участки генома, в которых расположение анализируемой мутации наименее вероятно («негативное» картирование). Работа при молекулярном картировании проводится в этом случае с маркерами остальных участков генома.
В ходе картирования .мей-мутаций каждое растение Р2 характеризуется по нескольким маркерам, сцепленным с этой мутацией. Это позволяет использовать потомства от самоопыления отдельных растений Р2 (растения РЗ) для выделения гомо- или гетерозиготных генотипов по ,ией-мутациям, идентифицируя соответствующие генотипы по маркерам этих мутаций. С помощью маркеров эффективно решаются две задачи генетического анализа синаптических мутаций - можно проверить аллелизм мутаций, предварительно картированных в идентичных участках хромосомы, и выделить двойные гомозиготы по мутациям, локализованным в разных участках одной и той же хромосомы или в разных хромосомах. Очевидно, что наиболее простым является решение этих задач для пар мутаций, характеризующихся неполной стерильностью в гомозиготе. В этом случае маркеры для установления аллелизма не нужны, так как уровень завязываемости семян у гомозигот по мутациям достаточен для их поддержания в гомозиготе и получения гибридов Р]. В то же время в случае неаллельности сцепленных мутаций (кластеризации мей-генов), а также для несцепленных мутаций получение двойных гомозигот по этим мутациям может быть проведено эффективно и надежно только с помощью маркеров. Для выделения таких генотипов лучше всего использовать соответствующие межлинейные гибриды Р2. Получение двойных гомозигот для тесно сцепленных мей-мутаций (кластеров генов) является трудной задачей, так как такие гомозиготы образуются только в случае сочетания рекомбинантных гамет, несущих обе мутации. Для слабо сцепленных и несцепленных мутаций выделение двойных мутантов из гибридов ¥2 является реальной задачей. В этом случае в Р2 до прохождения мейотиче-ских делений отбирают растения гомозиготные по маркерам обеих мутаций. Подтверждением правильности выделения должно служить единообразие картин мейоза у этих растений и их совпадение с ходом мейоза у одного из родителей. Как правило, проявление одной из мутаций эпистатирует проявление другой и на основании этого делается вывод о последовательности действия анализируемых генов [3].
Для изучения взаимодействия лгеи-мутаций, характеризующихся полной стерильностью, между собой и с мутациями с неполной стерильностью, использование маркеров становится необходимым и для проведения теста на алеллизм. В этих случаях лучше всего проводить скрещивания между гетерозиготными растениями РЗ, полученными при самоопылении растений Р2 из разных картирующих популяций. Данная схема является универсальной и может быть использована для анализа взаимодействия мутаций с неполной стерильностью. В этих популяциях каждое растение Р2 уже идентифицировано по анализируемым маркерам и известна исходная фаза сцепления аллелей маркеров с мутацией. Для проведения теста на аллелизм и выделения двойных мутантов используются растения из семей РЗ, полученных от множественных гетерозигот Р2 по маркерам, сцепленным с мутацией. У таких гетерозигот сохранение исходной структуры родительских хромосом (фазы сцепления маркеров и мутации) является наиболее вероятным. Среди растений РЗ из разных картирующих популяций проводится отбор гетерозигот по маркерам. Такие растения, в большинстве случаев, являются и гетерозиготами по анализируемой мутации. Релрезента-
тивные выборки из каждой семьи РЗ используются для подтверждения расщепления по этой мутации и сохранения фазы сцепления мутации и маркеров. Для обеспечения надежности результатов, которые могут нарушаться вовлечением в скрещивания растений с измененной фазой сцепления мутации и маркеров, возникшей вследствие кроссинговера, желательно проводить попарные скрещивания с привлечением с той и другой стороны по 2-3 гетерозиготных по маркерам растения РЗ. После проверки сохранения фазы сцепления для дальнейшей работы можно использовать наиболее многочисленное потомство, полученное от скрещивания только двух растений РЗ - надежно установленных гетерозигот по маркерам и соответствующим мутациям. В этих потомствах в зависимости от решаемой задачи - установления аллелизма или получения двойных мутантов, - осуществляется отбор разных генотипов. Для установления аллелизма мутаций, сцепленных с одними и теми же маркерами, отбираются генотипы гомо- либо гетерозиготные по аллелям маркеров анализируемых мутаций. Гомо- или гетерозиготность таких генотипов определяется аллелью маркера, находящегося в фазе притяжения у исходных линий - носителей анализируемой пары мутаций. Протекание мейоза у отобранных по маркерам генотипов будет нормальным в случае неаллельности мутаций или их взаимодействия по типу позитивной комплементации. либо аномальным, в том числе с теоретически непредсказуемыми картинами мейоти-ческих делений, в случае специфического взаимодействия мутаций в компаунде.
Задача выделения двойных мутантов для двух слабо сцепленных и несцепленных мутаций при использовании гибридов РЗ является более сложной. Для решения этой задачи также отбирают семьи РЗ, полученные от самоопыления множественных гетерозигот по маркерам, и проверяют фазу сцепления мутации и маркера. Далее наиболее многочисленное потомство, полученное от скрещиваний маркированных гетерозигот по разным мутациям, используется для выделения нескольких растений гетерозиготных по маркерам как одной, так и другой мутации (дигетерозигот). Критичным в данной схеме анализа является необходимость различий по аллелям маркеров сцепленных с мутантной и нормальной аллелью для каждой из мутаций. Это требование выполняется автоматически, если для картирования разных мутаций в качестве родителя с нормальным мейозом использована одна и та же ин-бредная линия. В противном случае это препятствие позволяет устранить использование множественных и высокополиморфных молекулярных маркёров (цепочки маркеров). Так нами установлено, что асинаптические мутации зу 1 а $у 9 «окружает» по шесть таких маркеров. Таким образом, существует возможность выбора пары из них практически в любой комбинации скрещивания без предварительного анализа маркеров у линий-носителей мутаций. Выделение искомых двойных мутантов осуществляется в потомстве от самоопыления дигетерозигот по маркерам путем отбора растений, гомозиготных по аллелям маркеров обеих мутаций. Кроссинговер (обмен участками гомологичных хромосом) может изменить исходную фазу сцепления мутации и маркера. Надежность отбора искомых генотипов -гомо- или гетерозигот по мутации определяется силой сцепления (частотой кроссинговера) между маркерами и мутацией - чем сильнее сцепление тем меньше ошибок. Наличие одного тесно (абсолютно) сцепленного с мутацией маркера, имеющего кодоминантные аллели, позволяет одинаково эффективно отбирать гомо- и гетерозиготы по исследуемой мутации. В случае доминантно-рецессивных маркеров возможен отбор только гомозигот, причем рецессивные аллели маркера и гена должны исходно находиться в фазе притяжения. Маркерные скобки даже в случае кодоминантных маркеров эффективны только при отборе гомозигот. Рассмотрим расщепление по аллелям двух кодоминантных маркеров - М1 ,/М12 и М2/ М22, составляющим маркерные скобки для анализируемого гена - А/а. В потомстве от самоопыления тригетерозиготы М1 ¡АМ2¡/М12аМ22 гомозиготами по аллелям М12 и М22 являются только три генотипа - исходный родительский М12аМ22/М12аМ22 и два рекомби-
нантных - М12аМ22/М12Ат22, М12АМ22/М12АМ22, первый из которых - гетерозигота Аа, второй - гомозигота АА, а не искомая гомозигота аа. Однако исходный нерекомбинантный генотип значительно преобладает в численности, что делает отбор гомозигот аа с использованием маркерных скобок достаточно эффективным. В случае отбора гетерозигот Аа доля искомых генотипов среди дигетерозигот по маркерам резко снижается. В этом случае уже семь генотипов совпадают по сочетанию маркеров с исходным сочетанием последних в Р1 (М1,/М12, М2,/М22), а именно, М1 ,АМ22/М12АМ2,, М1 ¡аМ22/М12аМ2 ¡, М1 ¡АМ2,/М12АМ22, М1,аМ2,/М12аМ22, М1 ,АМ22/М12аМ2,, М1 ,аМ2/М12АМ2,, М1 ,аМ2,/М12АМ22.
Соотношение разных генотипов по мутации (АА, Аа и аа) в пределах генотипов, отбираемых по маркерам, определяется частотой кроссинговера (р) между мутацией и маркерами. Так, в потомстве дигетерозиготы М1А/М2а при отборе гетерозигот М!М2 генотипы М]А/М2а, М2А/М!а и (М]А/М2А + М]о/М2а) будут встречаться в следующем соотношении (1 — р)2: р2: 4 (р — р2). Из этих трех групп генотипов только первая представляет гетерозиго-ты по мутации с исходной фазой сцепления и является искомой. При р ~ 0,05 доля таких растений среди гетерозигот М^М2 составляет 0,83, т. е. ошибка в идентификации гетерозигот по мутациям около 20%. Доля растений второй группы - дигетерозигот с измененной фазой сцепления, при р = 0,05, очень мала (0,0023), поэтому ошибкой, связанной с появлением таких растений в выборке ¥2 порядка 100-200 растений, можно пренебречь. Растения третьей группы состоят из двух однородных классов — генотипов с нормальным мейозом (А/А) и мутантов (а/а), что выявляется при скрининге их потомков (РЗ) на завязываемость семян. Таким образом, расщепление по мутации (разнообразие по завязываемости семян) в потомстве отобранных по маркеру гетерозигот ¥2 служит достаточным условием для идентификации генотипа такого растения, как М1А/М2а. В этом отношении такие растения Р2 являются аналогами гибридов Р1, а выщепляющиеся в их потомстве растения РЗ - аналогами соответствующих гибридов Р2.
Практическая работа по картированию и маркированию синаптических мутаций начата нами при анализе гибридов Р2, полученных при скрещивании линий носителей мутаций 5у 1, зу9 и линии 6. При анализе совместного наследования изозимных маркеров и синаптических мутаций установлена хромосомная локализация мутаций Бу 1 и ¿7 9. Ген яу 1 наследовался сцеплено с маркером хромосомы 7Я - локусом Оо(2, а ген 9 локализован в хромосоме 2Я благодаря его сцеплению с локусом Бос12. В последнем случае частота кроссинговера у двух изученных гибридов достоверно различается - 20,1±4,5% у гибрида 320 и
п ллл со/. ,, г„к„„г,о т 1
I / у у I пч^рпДс! ^I у 1 114 ил!J.
Совместное расщепление по синаптическим мутациям 1,$у 9) и маркерным локусам ((/ог2,5о(/2)
Число растений в классах расщепления
¥2 А/а М,/М, А. А. А. аа аа аа х2 0= 1 р(%)
Ми М,2 М:? Ми М ¡2 М22
317 5у1 Со/2 И 45 0 0 0 24 57,41 0
318 зУ1 Со12 14 42 0 0 0 24 61,63 0
320 БосИ 28 40 8 3 2 13 17,73 20,1±4,5
321 5уР Боа 2 30 64 5 0 3 18 34,67 7,4±2,5
Примечание. Классы расщепления представлены с помощью фенотипических радикалов (А. = АА. Аа) и генотипа аа для генов с доминантно-рецессивными аллелями (уу /, ¿ту 9) и генотипами Мц, М,2, ЛУтрДля маркерных локусов с кояоминантными аллелями (Оо/2, 5ос12). Исходная фаза сцепления генов и маркеров - АМ/аМр - частота кросснигозерз, приведенные значения критерия -¿2 оценивают сцепление маркеров и изучаемой мутации [8].
I. Отбор и скрещивание гетерозигот из F3
7R 2R 7R
-JTI 41)
H h-»-— H )-
nD Ml) ni) -С;
II. Отбор и самоопыление дигетерозигот
-(1) п:)
III. Отбор и цитологический анализ двойных мутантов
7 К
syl ( 21
уу9 (2) <т/ (2)
Схема выделения двойных мутантов по мутациям sy ! и sy 9 с помощью маркерных локусов.
Нормальные аллели синалтических генов sy 1 и sy 9 обозначены знаком +. Маркерные аллели мутаций обозначены цифрой 2, заключенной в скобки, маркеры нормальных аллелей - цифрой 1. Участки хромосом, несущие мутацию и соответствующую маркерную аллель (2), выделены темным прямоугольником, гомологичные участки - светлым. Закрашенные круги - центромеры. Пунктиром обозначены противоположные плечи субметацен-трических хромосом.
Относительно высокое значение частоты кроссинговера у гибрида 320 может быть следствием генотипических особенностей этого гибрида, на что указывает аномальное расщепление по ряду других изозимных маркеров. В семьях F3 гибрида 321 можно использовать отбор гетерозигот по маркеру Sod2. Однако в этом случае необходимо подтверждение выщепления мутантов как до проведения скрещиваний в отобранных семьях F3, так и после их проведения на следующий год в потомстве конкретного растения - гетерозиготы по маркеру, взятой для проведения парных скрещиваний. Избежать трудоемкой процедуры оценки по потомству позволяет использование молекулярных маркеров. Установление сцепления гена sy 9 с локусом Sod2 явилось ориентиром для поиска полиморфных микросателлитных маркеров, локализованных в этом участке генома. Такие маркеры были найдены, три абсолютно сцепленных маркера - Xscm32, Xscm35 и Xscm3l расположены на расстоянии 3,8 сМ 0Т5у 9, а два ~Xscm43 и Xgwml32 косегрегируют с этой мутацией у гибрида 321.
В случае пары .sy l-Got2 для обоих гибридов F2 {п = 160) не обнаружено рекомби-нантных генотипов, что позволяет эффективно использовать локус Got2 для отбора гетерозигот в последовательных поколениях от самоопыления и после проведения скрещиваний, а также для фиксации гомозигот по этой мутации. Кроме того, обнаружено абсолютное сцепление этой мутации с двумя микросателлитными маркерами - Xremsl 188 и Xremsl 135а у гибрида 318. Обнаружение маркеров, абсолютно сцепленных с синаптическими мутациями sy / и sy 9, позволяет предложить конкретную схему выделения двойных гомозигот по этим мутациям (см. рисунок). Схема состоит из трех этапов. На первом этапе высевают по одному потомству (семье) F3 от каждой комбинации скрещивания sy 1 • л.6 (3 18) и sy 9 ■ л.6 (321). Для посева используют потомства, полученные от растений F2 гетерозиготных по маркерам соответствующей мутации (обозначены цифрой 2) и гомозиготных по маркерам нормаль-
ных аллелей второго синаптического гена (обозначены цифрой 1). В каждом потомстве до цветения растений отбирают по маркерам два-три растения таких же генотипов. Абсолютное сцепление нескольких маркеров с изучаемыми мутациями позволяет использовать по выбору любой из них. В частности, для отбора гетеро- и гомозигот по sy 1 (7R) удобно использовать изозимный маркер Got4, анализ 100 растений по которому требует всего двух дней работы. Далее проводят парные скрещивания между гетерозиготами, принадлежащими к разным картирующим популяциям. Полученные семена высевают, на чем заканчивается первый этап работы, требующий для его проведения в случае озимой ржи одного года.
На втором этапе в потомстве от парных скрещиваний до цветения растений проводят отбор дигетерозигот, теоретическая доля которых в каждом из потомств составляет 0,25 (1/4). От отобранных дигетерозигот получают инбредные потомства. Посевом наиболее многочисленных из них завершается второй этап работы.
На третьем этапе до цветения растений (осенью и весной) проводят отбор гомозигот по маркерным аллелям обеих мутаций, которые в случае отсутсвия кроссинговера между маркером и мутацией, должны быть двойными мутантами. Доля таких растений в инбред-ных потомствах дигетерозигот теоретически составляет 0,0625 (1/16). Поэтому исходное число растений в каждом потомстве должно быть около 100. В случае необходимости получения большого количества «живого» материала для последующего цитологического анализа удобно использовать отбор по маркерам в лабораторных условиях на проростках с последующей яровизацией выделенных по маркерам двойных мутантов. Таким образом, в случае озимой ржи проведение работы по получению двойных мутантов на основе картирующих популяций F2 требует трех лет. Повысить эффективность анализа мейотических мутаций можно с помощью создания картирующих популяций на основе гибридизации с яровыми линиями ржи и последующим переводом мутаций на яровой генотип. Использование маркеров может быть эффективным для поддержания мутаций в гетерозиготном состоянии у вновь создаваемых яровых линий. Воспроизведение семенного материала может строиться путем отбора гетерозигот по маркерам этих мутаций у гибридов F3. Далее такие гибриды (гетерозиготы Аа) могут переопыляться, что обеспечит выщепление ожидаемой чётверти мутантов и позволит избежать нежелательной инбредной депрессии при повторении этого способа размножения линий в дальнейшем.
Таким образом, использование генетических маркеров позволяет повысить эффективность изучения мейотических мутаций у ржи, начиная от их воспроизведения в гетерозиготном состоянии и кончая получением любых сочетаний мутантных генов.
Статья рекомендована акад. С. Г. Инге-Вечтомовым. Summary
Voylokov А. V., TsvetkovaN. V., Lovtsyus А. V., Dolmatovich Т. V., Malyshev S. V., Sosrtikhina S. Р. Using of genetical markers in the study of meiosis in rye.
Two synaptic mutations sy 1 and sy 9 in rye are localized in chromosome 7R and 2R correspondingly with the use of isozyme markers. Mutation sy 1 is linked with iocus Got2 (7R) and mutation sy 9 is linked with locus.SW2 (2R). Each mutation is absolutely linked with two additional molecular markers. A scheme is proposed for using F3 progenies of different mapping populations and absolutely linked markers for mutants reproduction, allelic test and production of double mutants.
Литература
1 .Король А. Б., Прейгель И. А., ПрейгельС.И. Изменчивость кроссинговера у высших организмов. Кишинев, 1990. 2. Серебровский А. С. Генетический анализ. М., 1970. 3. Соснихина С. П., Федотова Ю. С., Смирнов В. Г., Михайлова Е. И., Богданов Ю. Ф. Изучение генетического контроля мейоза у ржи // Генетика. 1994. Т. 30. С. 1043-1056. 4. Kaul М. L. И., Murthy Т. G. К. Mutant genes af-
feeling higher plant meiosia // Tneor. Appl. Genet. 1985. Vol. 70. P. 449-466. 5. Korzun V., Malyshev S.r VoylokovA. V., Borner A. A genetic map of rye (Secale cereale L.) combining RFLP, isozyme, protein, mi-crosatellite and gene loci // Theor. Appl. Genet. 2001. Vol. 102. P. 709-717. 6. Maize Genetics Cooperation Newsletter. Vol. 74. 20G0. 7. Varshney R. K.. Korzun V.. Borner A. Molecular maps in cereals: methodology and progress // Cereal genomics. Netherlands, 2004. P. 35-82. 8. Weber W. £., Wricke G. Genetic markers in plant breeding// Advances in plant breeding. Supplement 16 to «Plant Breeding». Berlin; Hamburg, 1994.
CTaTbfl nocTynmia b peflaxunio 29 ceHTHopa 2005 r.
