Использование аптамеров для идентификации возбудителей сальмонеллеза Текст научной статьи по специальности «Науки о здоровье»

Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.

Инфекция и иммунитет

ЭТИОЛОГИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ ОСТРЫМИ КИШЕЧНЫМИ ИНФЕКЦИЯМИ В РЕГИОНЕ КУРСКОЙ МАГНИТНОЙ АНОМАЛИИ

Л.Ю. Зайцева1, П.В. Калуцкий1, О.А. Медведева1, М.М. Бернштейн2

1ГБОУ ВПО Курский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России, г. Курск; 2Управление Роспотребнадзора по Курской области

Несмотря на разнообразие бактериальных агентов, способных вызвать острую кишечную инфекцию (ОКИ) у ребенка, в большинстве случаев этиология заболевания остается не выявленной. Это связано, как с изменением культураль-ных свойств возбудителей, так и бесконтрольным приемом лекарственных препаратов в ранние сроки заболевания. Одним из факторов, влияющих на свойства микроорганизмов является геомагнитное поле (ГМП) повышенной напряженности, регистрируемое в г. Железногорске, расположенном на территории Курской магнитной аномалии. Для сравнения был проведен анализ структуры заболеваемости ОКИ в г. Курске (регион с фоновыми значениями ГМП). В обоих регионах преобладают острые кишечные инфекции невыясненной этиологии: они составляют 69% всех ОКИ в Курске и 70% в Железногорске. Второй по частоте инфекцией в г. Курске можно назвать шигеллез (28%), и только 3% всех случаев ОКИ вызваны сальмонеллами. В Железногорске шигеллез также находится на втором месте, однако роль сальмонеллезной инфекции в этиологической структуре ОКИ там гораздо выше. На сальмонеллез приходится около 10% случаев всех кишечных инфекций в данном регионе. Наиболее часто острые кишечные инфекции встречаются в раннем детском возрасте. Заболеваемость ОКИ в этой возрастной группе значительно выше, чем среди старших детей. Причем заболеваемость ОКИ среди детей раннего возраста превышает показатели общей детской заболеваемости в г. Курске в 4,4 раза, в г. Железногорске — в 2,9 раза, а по Курской области в — 3,4 раза. При анализе возрастной структуры заболеваемости сальмонеллезом в Курской области и исследуемых регионах также выявлено преобладание количества заболевших среди детей раннего возраста. Шигеллез в обоих регионах встречался в основном у детей 1—3 лет. Однако, в регионе с повышенными значениями геомагнитного поля заболеваемость шигеллезом в младшей возрастной группе превышала общую заболеваемость у детей в 1,4 раза, а в г. Курске — в 2,5 раза.

Таким образом, при анализе динамики, характера и структуры заболеваемости ОКИ в г. Курске, г. Железногорске и в Курской области выявлены значительно более высокие ее значения в регионе с аномальными значениями напряженности ГМП Земли.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ АПТАМЕРОВ

ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ

САЛЬМОНЕЛЛЕЗА

О.С. Замай12, А.Г. Савицкая1,

A.С. Замай1, И.Т. Решетнева1, О.В. Перьянова1, Е.Н. Еркаев1,

B.С. Мезько1, Г.М. Дмитриева3, Т.Г. Остапова4

1ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» Минздравсоцразвития России; 2Сибирский федеральный университет, г. Красноярск; 3Управления Роспотребнадзора по Красноярскому краю; 4ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Красноярском крае», г. Красноярск

За последнее время в Российской Федерации сложилась неблагополучная ситуация по острым кишечным инфекциям в целом отражающая общемировые тенденции. Из всех возбудителей кишечных инфекций большую опасность представляют сальмонеллы вследствие того, что они вызывают генерализацию инфекционного процесса с развитием осложнений. Увеличивается циркуляция резистентных штаммов сальмонелл.

Цель работы — получение искусственных антител (аптамеров), для идентификации сальмонелл.

Селекцию аптамеров к сальмонеллам осуществляли с помощью технологии SELEX путем чередования позитивной и негативной селекции. Для выбора аптамеров использовали бактерии Salmonella Enteritidis и Salmonella Typhimurium. В качестве негативных мишеней использовали E. coli, S. aureus,

C. freundii, P. aeruginosa. Исследование аффинности аптамеров к сальмонеллам проводили на проточном цитометре Beckman Coulter Cytomics FC 500.

Технология SELEX представляет собой процесс скрининга очень большой библиотеки олигону-клеотидов со случайными последовательностями повторяющихся циклов селекции и амплификации. Селекция аптамеров к Salmonella Enteritidis и Salmonella Typhimurium проходила на протяжении 7 раундов, в которых осуществляли отбор последовательностей, связывающихся с бактериями-мишенями. В результате отбора происходило постепенное обогащение библиотеки последовательностями, обладающими повышенным сродством к мишеням. Исследование аффинности аптамеров к Salmonella Enteritidis и Salmonella Typhimurium выявило, что наибольшей специфичностью к Salmonella Enteritidis и Salmonella Typhimurium обладали ап-тамеры 7 раунда селекции. Данные аптамеры имели высокую степень специфичности, которая позволяет идентифицировать и дифференцировать разные серовары (Salmonella Enteritidis, Salmonella Typhimurium).

Таким образом, получены аптамеры, которые могут быть использованы для создания диагностических тест-систем с целью верификации сальмонелл.