CC BY
20
TLC method is essentially a semi-quantitative, GLC provides high sensitivity, specificity and accuracy, but there is possibility of formation of ETM in the reaction process of sample preparation as a product of the destruction of dithiocarbamate, which is present in a sample that overestimates the results.
In the methodical workings out undertaken by us the highly performance liquid chromatography - a method of a direct measurement of ETM values, excluding stages of degradation of the operating substance, noted above has been selected.
Certainly a promising approach in the development of analytical control as dithiocarbamates and their metabolites is application of liquid chromatography technique in combination with MS detection, especially with the atmospheric pressure ionization interface, offers new possibilities that have not been explored yet. However, still more difficult step remains the sample preparation because the instability of the dithiocarbamates, which are affected especially by pH, temperature and also plant component.
In development of the problem of minimizing or eliminating the risk of contamination of Pesticide Residues class of ethylene-bis-dithiocarbamate in 2005-2013 years conducted a large-scale research of the significance of biodegradation mancozeb-, zineb- and metiram-containing formulations with the formation of ethylenethiourea in agricultural products (grapes, cucumbers, onions, potatoes, tomatoes) and some processed products.
Analytical control of mancozeb and ETM residues in grapes in the dynamics of selection (0-th, 15-th, 20-th day) showed the presence of the active ingredient in hygienically significant values (33 - 2.7 MRL) at the 30-th and 45-th day (crop) - its residual amounts do not exceed
0.8 - 0.9 MRLs. The maximum level of metabolite (0.7 MPL) is identified in the grape crop. In samples of onions and cucumbers significant mancozeb concentration installed only on the day of plant treatment (onions - 23.4-25.5 MPL, cucumbers - 2.4-4.8 MPL), in subsequent periods of selection (15, 20-day), the active ingredient and metabolite in the samples were not found .
In the processed products - potato chips (mancozeb residues in potato tubers 0.017 mg/kg - 0.17MRL) and tomato puree (mancozeb values in tomato 0.04 mg/kg - 0.4MRL) there is not hygienic significant values of pesticide and metabolite. Mancozeb residues in samples of grape juice made of a crop of grape (mancozeb values - to 0.9MRL) is not exceeded 0.4MRL; ETM - 0.5MRL.
Thus, exceeding the hygienic standards for active substances and metabolites in crops of potatoes, tomatoes, grapes, onions, cucumbers, as well as processed products (chips, puree and juice) is not installed. The analytic data are consistent with the materials of foreign studies [3], showing the practical absence of ETM (less than 0.005 mg/kg - the detection limit) in grape juice, made from products grown with the use of dithiocarbamate fungicides, 82% of the samples of fruits and vegetables metabolite was level of 0.001 mg/kg (maximum content -
0.06 mg/kg). As dithiocarbamate residues, which are on surface, can be substantially diminished by vigorous washing, there is extremely important data about absence of excess of hygienic standards of ETM the in grape juice as grapes at its processing aren’t washed out.
Turning to the stability of metabolite storage of analytical samples of various crops in conditions of deep-frozen (-200C) as an important stage of the analytical procedure, it is necessary to note its variability. During the 12-month period more than 70 % ЭТМ remain in tomatoes and wheat, storage within 2th years is undesirable because of the 50%-s losses of substance, in apples they exceed 50 % in a year, in this connection, an admissible period of storage of these samples - 6 months.
The above date illustrate in addition to the importance of the problem and the importance of introducing modern adequate methodological approaches in order to ensure the safety of agricultural products in the consumer market.
References
1. Blasco C., Font G., Pico Y. Determination of dithiocarbamates and metabolites in plants by liguid chromatography-mass spectrometry//J. of Chromatography A.- 2004.- Vol. 1028.- No 1.- P. 267-276.
2. Houeto P., Bindoula G. and Hoffman J.R. Ethylenebisdithiocarbamates and Ethylenethiourea: Possible Human Health Hazards// Environmental Health Perspectives.- 1995.- Vol. 103.- No 6. -P. 568-573.
3. Yess N.J. Gunderson E.L. and Roy R.R. US Food and Drug Administration monitoring of pesticides residues in infant foods and adult foods eaten by infants/children.// J. Assoc. Off. Analyt. Chem. - 1993. - Vol. 76.- P. 492-507.
Саркисян Н.С.
Младший научный сотрудник лаборатории патоморфологии особо опасных инфекционных заболеваний. Место работы: ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора, г. Ставрополь, ФКУЗ Ставропольский противочумный институт
Роспотребнадзора
ИНТЕНСИВНОСТЬ ЭКСПРЕССИИ МАРКЕРОВ АКТИВАЦИИ ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ ВВЕДЕНИИ B. ABORTUS 19 ВА
Аннотация
Проведена оценка интенсивности экспрессии маркеров активации лейкоцитов экспериментальных биомоделей, при иммунизации B. abortus 19 BА. Установлено увеличение интенсивности экспрессии рецепторов IL - 2 и IL - 4 на популяции моноцитов и нейтрофилов в период с 5 по 14 сутки после вакцинации против бруцеллеза. Учитывая ведущую роль антиген-презентующих клеток в инициальную стадию иммуногенеза, выявление интенсивности экспрессии рецепторов к интерлейкинам 2 и 4 позволяет определять функциональное состояние фагоцитов в ответ на иммунизацию, а соответственно может выступать маркером при оценке эффективности мероприятий по специфической профилактике бруцеллеза.
Ключевые слова: интерлейкин 2,4, моноциты, нейтрофилы, вакцинный штамм B.abortus 19BA.
Sarkisyan N. S.
Junior researcher of laboratory pathological morphology especially dangerous infectious diseases, FKUZ Stavropol Antiplague Institute
Rospotrebnadzora
INTENSITY THE EXPRESSION MARKERS OF ACTIVATION LEUKOCYTES AT INTRODUCTION B. ABORTUS 19 BA
Abstract
The assessment of intensity an expression markers activation of leukocytes of experimental biomodels is carried out, at immunization B. abortus 19 BA. The increase in intensity an expression of receptors IL - 2 and IL - 4 on population monocytes and neutrophils during the period from 5 to 14 days after vaccination against a brucellosis is established. Considering the leading role an anti-gene - presenting cages in an initial stage of immunogenesis, detection of intensity of an expression of receptors to IL 2 and 4 allows to define a functional condition of phagocytes in response to immunization, and respectively can act as a marker at an assessment of efficiency actions for specific prevention a brucellosis.
Keywords: Interleukin 2,4, monocytes, neutrophils, vaccinal strain B.abortus 19BA.
Цитокины представляют собой низкомолекулярные антигенспецифические белки, которые являются посредниками в межклеточных взаимодействиях, включая иммунитет, воспаление и гемопоэтическую систему. Цитокины воздействуют на клетку, связываясь со специфическими рецепторами на цитоплазматической мембране, которые запускают каскадную реакцию межсетевых взаимодействий, ведущую к регуляции иммунного ответа [1, 4].
Экспрессия цитокиновых рецепторов интенсивно регулируется, поэтому покоящиеся клетки или не экспрессируют данный рецептор, или экспрессируют низко-или среднеаффинную версии этого рецептора. Увеличение уровня экспрессии цитокинового рецептора или начало экспрессии высокоаффинной формы данного рецептора предрасполагает клетку-мишень к ответу на цитокин [3].
22
Интерлейкин 2 (IL-2) - пептид, играющий центральную роль в регуляции иммунного ответа, за счет контроля пролиферативной активности и дифференцировки субпопуляций Т-лимфоцитов. Иммуно-биологические свойства интерлейкина 4 (IL-4) обуславливают синтетическую активность В-лимфоцитов. Продуцируется IL-4 активированными CD4+ лимфоцитами, тучными клетками, эозинофилами, по отношению к В-клеткам ИЛ-4 выступает в качестве костимулятора пролиферации [1,2].
Ряд исследователей указывает на прямую зависимость степени интенсивности экспрессии фагоцитами цитокиновых рецепторов IL-2,4 и функциональной активности клеток, вовлеченных в индуцибельную фазу иммунного ответа, которая обусловливает качество презентации антигена эффекторным клеткам [5,6,7].
Таким образом, изучение особенности экспрессии рецепторов к интерлейкинам 2 и 4 на фагоцитах крови, позволит определить возможность использования данных показателей в качестве маркеров клеточной активации при иммунизации против бруцеллеза.
Целью работы явилось изучение интенсивности экспрессии маркеров клеточной активации в процессе формирования вакцинального противобруцеллезного иммунитета.
Объектом исследования служили 150 нелинейных лабораторных мышей, 100 из которых иммунизировали подкожно вакцинным штаммом B.abortus 19 BA в дозе 0,1 мл, содержащей 105 микробных клеток. Контролем служили 50 интактных животных, которым вводили стерильный физиологический раствор в том же объеме. Взятие крови осуществляли на 3, 5, 7, 14 и 21 сутки после иммунизации от 20 животных опытной и 10 контрольной группы в каждый период исследования. Методом проточной цитометрии (аппарат FACS Calibur) с помощью моноклональных антител (Invitrogen, США) определяли рецепторы к интерлейкинам 2, 4 (IL-2, 4) на нейтрофилах и моноцитах.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета прикладных программ Statistica 6.0. С учетом малой выборки (n<30) для выявления статистической значимости различий результатов использовали t-критерий Стьюдента, при уровне надежности P>0,95.
В результате анализа полученных данных на 3 сутки после вакцинации против бруцеллеза выявлено повышение количества нейтрофилов экспрессирующих рецепторы к интерлейкину - 4, в среднем до 7,50±0,69%, контрольные значение в данный период исследования составили - 2,60±0,25%. Статистически значимого изменения в количестве фагоцитов экспрессирующих IL-2 на 3 сутки после иммунизации не установлено.
На 5 сутки после иммунизации, определено повышение числа лейкоцитов экспрессирующих рецепторы к интерлейкину - 2. В данный период исследования количество моноцитов и нейтрофилов экспрессирующих биологические молекулы цитокина IL-2 составило 18,7 ± 1,25%, (контрольные значения - 3,13±0,27) и 15,81±1,19% (контрольные значения - 4,01±0,22%), соответственно. Количество моноцитов и нейтрофилов, экспрессирующих рецепторы к IL-4 значительно повышалось на 5 сутки и достигало значений 25,88±2,43% и 26,59±1,94% по сравнению с контролем 4,18±0,39% и 2,60±0,25%, соответственно.
Анализируя результаты исследования интенсивности клеточной активации на 7 сутки после введения экспериментальным биомоделям вакцинного штамма В. abortus 19 BA установлено, что экспрессия цитокиновых рецепторов IL-4 наблюдалась у 29,94±2,90 % (контрольные значения - 2,80±0,18%) моноцитов и 16,10±0,77% (контрольные значения - 3,71±0,25%) нейтрофилов периферической крови. Интенсивность экспрессии биологического маркера IL-2, в анализируемый период снизилась до уровня контрольных особей.
На 14 сутки после иммунизации выявлено повышение количества нейтрофилов экспрессирующих маркер клеточной активации IL-2 - 12,20±0,63%, в сравнении с уровнем экспрессии цитокина в контрольной группе - 3,54±0,31%. При изучении интенсивности экспрессии интерлейкина - 4 на популяции фагоцитов крови, определено, что изучаемый маркер активации экспрессировали 15,49 ± 0,54% (контрольные значения - 1,92 ± 0,15%) нейтрофилов и 28,07 ± 2,20 (контрольные значения -2,17±0,19%) моноцитов, соответственно.
В результате изучения активности экспрессии интерлейкина - 4 нейтрофилами и моноцитами на 21 сутки после введения вакцины против бруцеллеза, установлена тенденция к снижению активности фагоцитов, однако количество клеток содержащих рецепторы к IL- 4 оставалось статистически значимо выше относительно контрольного уровня.
Таким образом, в процессе формирования иммунного ответа у белых мышей при иммунизации вакцинным штаммом B.abortus 19 BA наибольшее повышение уровня моноцитов и нейтрофилов экспрессирующих рецепторы к IL -2,4 наблюдалось на 5 - 14 сутки.
Проведенные исследования показали, что процесс формирования вакцинального противобруцеллезного иммунитета при введении антигена характеризуется активацией клеток (нейтрофилов, моноцитов), несущих на своей мембране рецепторы цитокинов (IL-2, IL-4) необходимых для пролиферации и созревания Т-лимфоцитов.
Учитывая ведущую роль антиген-презентующих клеток в инициальную стадию иммуногенеза, выявление интенсивности экспрессии рецепторов к интерлейкинам 2 и 4 позволяет определять функциональное состояние фагоцитов в ответ на иммунизацию, а соответственно может выступать маркером при оценке эффективности специфической профилактики бруцеллеза.
Литература
1. Егорова В. Н. Интерлейкин-2: обобщенный опыт клинического применения: юбилейное издание к 20-летию ООО «Биотех» / В. Н. Егорова, А. М. Попович, И. В. Бабаченко [и др.]. - Санкт-Петербург: Ультра Принт, 2012. - 98 с.
2. Луговская С.А., Козинец Г.И. Иерархия гемопоэтических клеток: кинетика, структура и функции. II часть (лекция) // Журнал клиническая лабораторная диагностика. - 2009. - №7.- с. 25-32.
3. Кетлинский С. А. Цитокины / С. А. Кетлинский, А. С. Симбирцев - СПб: ООО «Изд-во Фолиант», 2008. - 552 с.
4. Койко Р., Саншайн Д., Бенджамини Э. Иммунология: учебное пособие. Пер. с англ. А.В. Камаева, А.Ю. Кузнецовой под.ред. Н.Б. Серебряной.- М.: Издательский центр «Академия», 2008.- с. 368.
5. Логвиненко О.В., Ракитина Е.Л., Пономаренко Д.Г., Костюченко М.В., Саркисян Н.С., Бердникова Т.В. Особенности иммунологических показателей крови у больных различными формами бруцеллеза // Журнал Инфекция и иммунитет.- 2013.- №3.-с. 275-278.
6. Jason S. Ellis. Transient depletion of CD4+ CD25+ regulatory T cells results in multiple autoimmune diseases in wild-type and B-cell-deficient NOD mice / Jason S. Ellis, Xiaoxiao Wan, Helen Braley-Mullen // J. Immunol. - 2013. - №6.-Vol. 139. - Р. 179-186.
7. Stuart Olver. Interleukin-4-induced loss of CD8 expression and cytolytic function in effector CD8 T cells persists long term in vivo / Stuart Olver, Simon H. Apte, Adriana Baz, Anne Kelso, Norbert Kienzle // J. Immunol.- 2013.-№6.- Vol. 139(2). Р. 187-196.
Андреева Е.И.1, Унанова НА.2, Андреева Е.А.3
'Кандидат медицинских наук, доцент, 2ассистент, 3аспирант, Ставропольский государственный медицинский университет.
ИНКРЕТИНОМИМЕТИКИ: ВЗГЛЯД НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ И БЕЗОПАСНОСТЬ
Аннотация
В статье рассмотрена и сравнена сахароснижающая эффективность двух групп препаратов бигуанидов и инкретиномиметиков, а также их влияние на индекс массы тела (ИМТ), Оценивалась вероятности развития одного из возможных побочных эффектов - острого панкреатита. При достоверной доказательности эффективности препаратов инкретиномиметиков, в частности эксенатида, положительного его влияние на уменьшение ИМТ, а также минимальную
23
