CC BY
25
миндалин у лиц группы сравнения не было (р>0,05) за исключением грибов рода Candida (R=-0,2, р=0,0004). У детей старше 7 лет они отсутствовали на миндалинах.
Чувствительность золотистого стафилококка, выделенного с миндалин у детей, страдающих АД, к некоторым антибактериальным препаратам (АБП) представлена в табл. 3.
Чувствительность золотистого стафилококка, выделенного от детей группы сравнения, приведена в табл. 4.
При сравнении чувствительности золотистого стафилококка, выделенного с миндалин от детей с АД и без, были получены следующие результаты. Мети-циллинрезистентный S. aureus идентифицировался значимо чаще у детей с АД (р=0,02). Достоверно меньше чувствительных к цефазолину культур было выявлено у детей с АД (р=0,05). Чувствительных к линкомицину изолятов, напротив, было
выделено существенно меньше у детей из группы сравнения (р=0,01). Других различий в чувствительности золотистого стафилококка у детей группы сравнения и страдающих АД получено не было (р>0,05).
Заключение
Микрофлора поверхности миндалин у детей, страдающих АД, и группы сравнения существенно различается. У детей с АД золотистый стафилококк выделялся чаще (р=0,002), а количество выделенных культур в структуре полученных ответов было больше, чем у детей без АД (р=0,009). У детей с АД золотистый стафилококк, выделенный с миндалин, присутствует в таком же количестве, что и у детей без АД (р=0,08), но является более агрессивным, что демонстрируется достоверно большим количеством метициллинрезистентных изолятов (р=0,02).
Л И Т Е Р А Т У Р А
1. WAO Eczema (E), Atopic Eczema (AE) and Atopic Dermatitis (AD) [Electronic resource]. - Mode of access: http://www.worldallergy.org/professional/aller-gic_diseases_center/atopiceczema/. - Date of access: 05.12.2015.
2. WAO White Book of Allergy 2013 [Electronic resource]. - Mode of access: http://www.worldallergy.org/ UserFiles/file/WAO-White-Book-on-Allergy.pdf. - Date ofaccess: 04.04.2013.
3. Brodsko P.L. et al. // Dermatitis. - 2014. - Vol.25, N3. - P.120-126.
4. Petry V. et al. // An. Bras. Dermatol. - 2012. - Vol.87, N5. - P.729-734.
5. Клинический протокол диагностики, лечения и профилактики атопического дерматита: Прил. 6 к приказу МЗ РБ от 25.02.2008 №142 // Режим доступа: http://minzdrav.gov.by/dadvfiles/000275_923134_ Add6_Pr142_2008.doc. - Дата доступа: 17.08.2011.
6. Адаскевич В.П. Диагностические индексы в дерматологии / В.П. Адаскевич. - М., 2004. - 165 с.
7. Микробиологические методы исследования биологического материала: Инструкция по применению: утв. МЗ РБ от 19.03.2010. - Минск, 2010. -129 с.
Поступила 03.10.2016г.
Ингибитор тканевого фактора TFPI-2
как потенциальный прогностический маркер
онкологического процесса
при саркомах костей и мягких тканей
у пациентов детского возраста
Киселев Л.П., Савицкая Т.В., Липай Н.В., Алейникова О.В.
Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Беларусь
Kisialeu L., Savitskaia T, Lipay N., Aleinikova O.
Belarusian Research Center for Pediatric Oncology, Hematology and Immunology, Minsk, Belarus Expression of TFPI-2 as prognostic markers for pediatric patients
with bone and soft tissue sarcomas
Резюме. Поиск новых молекулярных маркеров, характеризующих биологию опухоли и ее поведение, является актуальной задачей для современной практической онкологии. Изучена экспрессия мРНК генов сигнального пути тканевого фактора (TF) и его ингибиторов (TFPI-1 и TFPI-2) в образцах патологической ткани у 39 пациентов детского возраста со злокачественной и 23 - с незлокачественной природой заболевания. В группе случаев без онкопатологии констатирован значимо больший уровень экспрессии мРНК всех трех изучаемых генов по сравнению с пациентами, у которых имело место наличие саркомы костей или мягких тканей. Констатированы статистически значимые отличия в уровне экспрессии TFPI-2 у онкологических пациентов детского возраста в зависимости от стадии процесса и его существенно более низкое содержание при наличии распространенной стадии заболевания. Уровень экспрессии мРНК гена TFPI-2 может служить одним из критериев для прогнозирования течения и исхода заболевания у пациентов детского возраста с саркомами костей и мягких тканей. Представляется важным дальнейшее изучение роли ингибиторов проводящих путей тканевого фактора в качестве онкомаркеров со значительным прогностическим потенциалом.
Ключевые слова: ингибиторы пути тканевого фактора, ткань опухоли, саркомы костей и мягких тканей у детей.
Медицинские новости. — 2016. — №12. — С. 56-59. Summary. Prediction of early tumor recurrence at primary diagnosis can provide benefits through the timely strengthening of therapeutic options. We investigated the prognostic role of tissue factor (TF) and tissue factor pathway inhibitors TFPI-1 and TFPI-2 in pediatric patients with sarcomas. Levels of TFTFPI-1 and TFPI-2 genes expression in pretreatment tissues of pathological foci were examined using quantitative reverse transcriptase-poiymerase chain reaction (qRT-PCR). 62 (39 malignant and 23 nonmalignant) samples from pediatric patients with bone and soft tissues pathology were studied. Significantly less levels of TF TFPI-1 and TFPI-2 ascertained for malignancies. Level of TFPI-2 was greater for localized cancer vs. metastatic forms. Expression of TF TFPI-1 and TFPI-2 is not the prerogative of neoplasms and may be greater in patients without malignancy. TFPI-2 distinguished localized and metastatic cancer pediatric patients and can be used as a tumor prognostic marker.
Keywords: tissue factor pathway inhibitors, TFPI-1, TFPI-2, pediatric patients, tissue tumors, sarcomas of bone and soft tissues. Meditsinskie novosti. - 2016. - N12. - P. 56-59.
Саркомы представляют группу гетерогенных заболеваний мезенхи-мальной природы, рост и развитие которых напрямую связаны с синтезом опухолью широкого спектра биологически активных агентов [1, 2]. Достижения в терапии последних десятилетий позволяют излечить более половины детей с данной нозологией, а для случаев без метастатического распространения на момент постановки диагноза лечение успешно для 2/3 пациентов [3, 4]. Таким образом, критически важным является прогнозирование случаев, для которых стандартный план курации окажется неэффективным для попытки использования новых терапевтических агентов и опций. Значения классических клинических маркеров (пол, возраст, размер опухоли, уровень лактатдегидрогеназы и др.) варьируются в широких диапазонах и не позволяют однозначно определять таких пациентов [5, 6]. На сегодняшний день также важен поиск дополнительных критериев, которые могут помочь в дифференциальной диагностике злокачественной и незлокачественной природы новообразования. В связи с этим изучение новых маркеров, связанных с пониманием биологического поведения неопластического процесса, является крайне актуальным для практической онкологии. Тканевой фактор (tissue factor (TF)) и его ингибиторы 1 и 2 (tissue factor pathway inhibitor-1 (TFPI-1), tissue factor pathway inhibitor-2 (TFPI-2)) представляются на сегодняшний день перспективными маркерами, отражающими определенные аспекты местного прогрессирования и системного распространения опухолевого процесса в организме [7]. Белки, кодируемые генами TFPI-1 и TFPI-2 являются структурными аналогами, присутствуют в сосудистом эндотелии и плазме как в свободной форме, так и в связке с липопротеинами. Они ингибируют процесс коагуляции, препятствуя активации факторов коагуляции X и VIIa-TF [7, 8]. Считается, что уровень экспрессии TFPI-2 обратно пропорционален степени злокачественности опухоли, что подтверждает его роль в поддержании стабильности размеров новообразования и препятствовании процессу диссеми-нации. Также белковый продукт гена TFPI-2 показывает активность в индукции апоптоза и ингибировании опухолевого ангиогенеза (формирования сосудистой сети) [8, 9]. В настоящей работе представлены данные по определению уровня экспрессии мРНК TfTFPI-1 и TFPI-2 как в опухолевой ткани детей и подростков с костными и мягкоткаными саркомами, так и в очагах незлокачественной природы.
Целью исследования была оценка уровней экспрессии исследуемых маркеров в качестве фактора дифференциальной диагностики онкологического и неонкологического процессов, а также их роль в оценке биологического поведения сарком костей и мягких тканей.
Материалы и методы
Пациенты. Исследуемая когорта была сформирована с ноября 2008 года по март 2011 года и состояла из пациентов детского возраста, которые были обследованы в связи с подозрением на наличие онкопатологии костных структур или мягких тканей в Республиканском научно-практическом центре детской онкологии, гематологии и иммунологии Минздрава Республики Беларусь. 62 образца тканей первичных патологических очагов были получены в результате диагностического оперативного вмешательства (биопсии) до начала специального лечения. Критерием включения пациента в исследование было наличие достаточного количества материала и гистологическое (при необходимости - иммуногистохими-ческое и молекулярно-биологическое) подтверждение диагноза. Пациенты, получавшие специальное противоопухолевое лечение до взятия образца ткани, в исследование не включались. Среди 39 (62,9%) пациентов с онкозаболеванием у 16 (41,0%) диагностирована саркома Юинга (СЮ), у 16 (41,0%) - остеосаркома (ОС), у 7 (18,0%) -рабдомиосаркома (РМС). Для 23 (37,1%) диагноз онкозаболевания был исключен: у 5 - незлокачественные образования кости (остеоид-остеома, остеокластома, остео-бластома, хондрома), у 5 - остеомиелит, у 3 - фиброзная дисплазия, у 3 - аневриз-мальная костная киста, у 3 - посттравматические изменения, у 1 - гранулематозное
воспаление, у 1 - аневризмальная киста, у 1 - фиброматоз мягких тканей, у 1 - ос-сифицирующий миозит бедра.
Дополнительные показатели исследуемой когорты пациентов представлены в табл. 1.
Диагноз и стадия (распространение) опухоли устанавливались согласно критериям международных протоколов:
- для ОС - ЕВРОАМОС (EuRAMOS1 Protocol, Version 1.0, 30 September 2004);
- для СЮ - ЕВРОЮИНГ (EURO-E.W.I.N.G.99 Protocol, Version 1999-09-27);
- для РМС, РМС-2005 (RMS 200б, EpSSG Protocol Final Version January 200б).
Выделение РНК и синтез кДНК
Образцы тканей были получены непосредственно после операции и заморожены в жидком азоте. Общую РНК выделяли с использованием RNeasy Mini Kit (Qiagen, xx, Germany) согласно инструкции производителя. Количественные показатели концентрации РНК оценивались посредством спектрофото-метрии. Общую РНК (1,б мкг) из опухолевой ткани конвертировали в первую цепь ДНК с использованием случайного праймера (0,3 мкг) и обратной транскриптазы (200 U) мышиного вируса лейкемии (Moloney murine leukemia virus, M-MLV; Promega, XX, USA).
Количественная обратно-транскрип-тазная полимеразная цепная реакция
Полимеразная цепная реакция в реальном режиме времени для генов TF, TFPI-1 и tFpI-2 проводили с использованием коммерческих систем (TaqMan Gene Expression Assays; Applied Biosystems, Foster City, CA) в соответствии с протоколом производителя на оборудовании Icycler (Bio-Rad, Hercules, CA). Относительные величины мРНК генов в образцах рассчитаны по показателям стандартных кривых, полученных путем амплификации
НЯтШП Дополнительные характеристики исследованной группы пациентов
Общая характеристика пациентов (n=62) Злокачественные опухоли Незлокачественные образования (n=23) P
Всего (n=39) СЮ (n=16) ОС (n=16) РМС (n=7)
Мальчики, n (%) 24 (61,б) 10 (62,б) 10 (62,б) 4 (б7,1) 1б (6б,2) >0,0б
Девочки, n (%) 1б (38,б) 6 (37,б) 6 (37,б) 3 (42,9) 8 (34,8)
Средний возраст, лет 12,б 12,4 13 11,9 12,4
Медиана возраста, лет 13 12 14 1б 14 >0,0б
Стадия II, n (%) 24 (61,б) 11 (68,8) 11 (68,8) 2 (28,6) - <0,0б
Стадия III, n (%) 2 (б,2) - - 2 (28, 6) -
Стадия IV n (%) 13 (33,3) б (31,3) б (31,3) 3 (42,8) - <0,0б
Н Уровни экспрессии TF, TFPI-1 и TFPI-2 в ткани опухоли и ткани незлокачественных патологических очагов
Фактор Злокачественные опухоли (п=38) Незлокачественные образования (п=23) Р
ТР Ме [25; 75], тт-тах 1,106 [0,389; 2,557] 0,037-38,021 3,114 [0,754; 4,986] 0,047-102,000 0,0509
ТРРИ, Ме [25; 75], тт-тах 0,516 [0,338; 1,154] 0,007-21,486 2,070 [0,967; 2,962] 0,382-16,105 0,0003
ТРР1-2, Ме [25; 75], тт-тах 0,117 [0,035; 0,302] 0,001-8,704 0,543 [0,355; 2,347] 0,052-10,881 0,0004
ИИ Уровни экспрессии мРНК факторов TF, TFPI-1 и TFPI-2 в ткани опухоли с локализованным и распространенным онкологическим процессом
Фактор Локализованный онкологический процесс (п=38) Распространенный онкологический процесс (п=23) Р
ТР Ме [25; 75], тт-тах 1,106 [0,389; 2,557] 0,037-8,021 3,114 [0,754; 4,986] 0,047-102,000 0,0509
ТРРИ, Ме [25; 75], тт-тах 0,516 [0,338; 1,154] 0,007-21,486 2,070 [0,967; 2,962] 0,382-16,105 0,0003
ТРР1-2, Ме [25; 75], тт-тах 0,1783 [0,035; 0,302] 0,001-8,704 0,0939 [0,355; 2,347] 0,052-10,881 0,04
серийного разведения обратно транскрибированной общей РНК. Значения исследованных показателей представлены в виде относительных величин. В качестве внутреннего контроля использовали ген глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH).
Статистический анализ
Статистическая обработка полученных данных проведена с использованием пакета программы STATISTICA 6.0. Количественные данные представлены с определением медианы (Ме [25; 75]), минимумов-максимумов; качественные данные выражены в абсолютных величинах и процентах. Проверка гипотез о равенстве двух средних проведена с помощью и-критерия Манна - Уитни или Фишера для количественных признаков. Различия
считали статистически значимыми при вероятности ошибки менее 5% (Р<0,05). Результаты и обсуждение Уровни экспрессии мРНК TF, TFPI-1 и TFPI-2 в ткани опухоли и незлокачественных образований
Уровни экспрессии исследованных TF, TFPI-1 и TFPI-2 в ткани опухоли и незлокачественных патологических очагов представлены в табл. 2. Анализируя данные табл. 2, можно отметить статистически значимо большую медиану уровня экспрессии мРНК всех трех исследованных маркеров в ткани незлокачественных патологических очагов по сравнению с таковой злокачественных опухолей. Пожалуй, это отличие наиболее ярко проявилось в случае TFPI-2 (0,543 против 0,117; Р=0,0004).
На рисунке представлены данные об относительных уровнях экспрессии мРНК генов TF, TFPI-1 и TFPI-2 в выделенных группах сарком в зависимости от нозологии процесса. Характеризуя представленные данные в группах пациентов с ОС, СЮ и РМС, можно отметить общую тенденцию с объединенной группой лиц с онкопатологией, указывающую на существенно более низкие показатели экспрессии исследованных генов по сравнению с таковыми в неопухолевых очагах.
Надо сказать, что группа незлокачественных заболеваний в исследовании была достаточно гетерогенна и включала пациентов с заболеваниями, для которых рутинно осуществляется дифференциальная диагностика с онкологическим процессом: доброкачественные и воспалительные изменения костных и мягких тканей. Однако в подгруппах не было отмечено значимой разницы в уровне экспрессии факторов ангиогенеза (данные не показаны), кроме, пожалуй, большего значения TFPИ (2,9261 против 1,6039; Р=0,0269) для когорты пациентов с воспалительным процессом.
Особо следует отметить результаты исследования показателей экспрессии мРНК факторов ангиогенеза в ткани опухоли лиц с локализованным и распространенным онкологическим процессом, которые, на наш взгляд, имеют как фундаментальное, так и прикладное значение (табл. 3).
Как видно из табл. 3, в группе пациентов, у которых на момент постановки диагноза были метастазы, уровень экспрессии тканевого ингибитора TFPI-2 был существенно более низким по сравнению больными с локализованными формами онкопатологии, составивший 0,0939 против 0,1783 соответственно при Р=0,0405. Содержание мРНК для остальных двух компонентов значимо не отличалось.
Костные и мягкотканые саркомы представляют группу гетерогенных заболеваний мезенхимальной природы. Несмотря
на существующие алгоритмы морфологической диагностики при постановке онкологического диагноза, до настоящего времени остается актуальным вопрос: могут ли быть обнаружены какие-либо дополнительные маркеры, способствующие дифференцировке злокачественной и незлокачественной природы заболевания. Также необходим поиск маркеров, которые смогут предсказывать биологическое поведение опухоли и прогнозировать эффективность терапии у конкретного пациента. Формирование опухолью патологической сосудистой сети происходит на фоне физиологического ангиогенеза, который особенно активен в детском растущем организме [1-4]. Не вызывает сомнения, что маркеры тканевого пути так же, как его ингибиторы являются важными составляющими, характеризующими жизнедеятельность новообразования, и могут служить критериями для прогнозирования течения и исхода заболевания. В настоящей работе мы исследовали уровни экспрессии мРНК Т^ ТРРИ и TFPI-2 у пациентов детского возраста с патологией костей и мягких тканей. Уровни экспрессии исследованных факторов у детей с онкопатологиями сравнивались с результатами, полученными для контрольной когорты пациентов без злокачественного процесса. Дополнительно
оценивались данные внутри групп с различными видами онкологического процесса.
Результаты нашего исследования, представленные в табл. 2 и 3, а также на рисунке, однозначно свидетельствуют в пользу существенно более высокого уровня мРНК факторов TF, TFPI-1 и TFPI-2 у пациентов детского возраста в незлокачественных патологических очагах по сравнению с опухолевой тканью. Это хорошо согласуется с имеющимися представлениями о функциональной роли тканевого фактора и его обратимых ингибиторов, заключающейся в регуляции сигнальной активности клетки. Действительно, in vitro и in vivo показана способность TFPI-1 к антиангиогенному и противометастатическому эффекту [6, 7]. TFPI-2 - структурный аналог TFPI-1, его экспрессия обратно пропорциональна повышению степени злокачественности и распространению новообразования. Таким образом, роль TFPI-2 может расцениваться, как ограничение роста опухоли в организме [6, 7], в том числе путем ингибирования ангиогенеза и участия в запуске процесса апоптоза [8, 9]. На этом фоне значительный интерес вызывают зарегистрированные нами статистически значимые отличия в уровне экспрессии TFPI-2 в группах онкологических пациентов детского возраста в зависимости от стадии процесса и его
существенно более низкое содержание при распространенном онкологическом процессе (см. табл. 3). Заключение
Уровень экспрессии мРНК гена TFPI-2 может служить одним из критериев для прогнозирования течения и исхода заболевания у пациентов детского возраста с саркомами костей и мягких тканей. Представляется важным дальнейшее изучение роли ингибиторов проводящих путей тканевого фактора в качестве онкомаркеров со значительным прогностическим потенциалом.
Л И Т Е Р А Т У Р А
1. Алейникова О.В., Потапнев М.П., Сыцкевич О.Н. и др. Достижения детской онкологии и гематологии в Республике Беларусь. Актуальные вопросы детской онкологии и гематологии: Материалы VIII меж-дунар. симп. - Минск, 2000. - С.3-8.
2. Суконко О.Г., Антоненкова Н.А. // Онкологич. журнал. - 2011. - №20. - С.42-45.
3. Демидчик Ю.Е., Писаренко А.М., Фридман М.В. и др. // Онкологич. журнал. - 2008. - №8. - С.9-21.
4. Жаврид Э.А., Антоненкова Н.Н., Прохорова В.И., Лаппо С.В. // Мед. панорама. - 2011. -№7. - С.19-23.
5. Padhye B., McCowage G. // Cancer Forum. - 2011. -P.128-134.
6. Beting M, Ahamed J, Ruf W. //Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. - 2005. - Vol.25. - P.1545-1550.
7. Wcäukiewicz M.Z, Sieiko E, Zimncch L, Kczhwski L., КШ W // Thromb. Haemost. - 2003. - Vol.90, N1. - P.140-146.
8. Scctlandi K, Remcndnni D, Castellani G., et al. // J. Clin. Oncol. - 2009. - N27. - P.2209-2216.
9. SchaeferK.L., Eisenacher M, Braun Y, et al. // Eur. J. Cancer. - 2008. - Vol.44. - P.699-709.
Поступила 04.04.2016г.
Особенности циркуляции возбудителей энтеровирусных инфекций в Республике Беларусь в 2014-2015 годах
Богуш З.Ф.1, Амвросьева Т.В.1, Поклонская Н.В.1, Лозюк С.К.1, Бискина Н.М.2
Республиканский научно-практический центр эпидемиологии и микробиологии, Минск, Беларусь 2Республиканский центр гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья, Минск, Беларусь
Bogush Z.F, Amvroseva TV.1, Poklonskaya N.V.1, Lozyuk S.K.1, Biskina N.M.2
'Republican Research and Practical Center for Epidemiology and Microbiology, Minsk, Belarus 2National Center for Hygiene, Epidemiology and Public Health, Minsk, Belarus
Features of enterovirus circulation in the Republic of Belarus in 2014-2015
Резюме. Проанализированы результаты лабораторного контроля за циркуляцией возбудителей энтеровирусных инфекций (ЭВИ) в Республике Беларусь в течение 2014-2015 годов. Приведены данные о количестве и результативности диагностических и санитарно-вирусологических исследований в разрезе административных территорий страны. Установлена интенсивность циркуляции неполиомиелитных энтеровирусов (НПЭВ) среди населения и уровни энтеровирусного загрязнения объектов окружающей среды. Отражена динамика заболеваемости ЭВИ за 2003-2015 годы, и установлена тенденция к снижению интенсивности эпидемического процесса в предшествующие 2 года (практически в 2 раза) по сравнению с 2013 годом. Описаны спектр и типовая структура НПЭВ, циркулирующих на территории республики в анализируемый период, установлены доминирующие серо- и генотипы возбудителей ЭВИ. Приведены данные их молекулярно-эпидемиологического анализа. Ключевые слова: энтеровирусные инфекции, заболеваемость, лабораторный контроль, неполиомиелитные энтеровирусы, спектр,, типовая структура.
Медицинские новости. — 2016. — №12. — С. 59-63. Summary. The paper contains he results of he laboratory control of enterovirus circulation in the Repubiic of Belarus in 2014-2015. The presented data show the number and effectiveness of diagnostic and sanitary studies in different regions of the county. The intensity of non-polio enterovirus (NPEV) circulation and levels of environmental contamination were identified. The paper also reflects he fluctuation of enterovirus morbidity from 2003 till 2015 and identifies he downward trend (almost 2-fold) of the epidemic process in 2014-2015compared to 2013. The study describes the range and typical structure of NPEV circulating in he country in the period under review. The dominant enteroviralsero- and genotypes were identified. The papier contains he resutts of enterovirus molecular epidemiology investigation. Keywords: enteroviral infection, incidence, laboratory control, non-polio enteroviruses, range, tipical structure. Meditsinskie novosti. - 2016. - N12. - P. 59-63.
