CC BY
85
УДК 617.73-018.74
© А.В. Верхоломова, Е.В. Маркова, А.С. Биляк, 2015
А.В. Верхоломова, Е.В. Маркова, А.С. Биляк ИНФОРМАТИВНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ СЛЕЗНОЙ ЖИДКОСТИ У ПАЦИЕНТОВ С НАРУШЕНИЕМ КРОВООБРАЩЕНИЯ В СЕТЧАТКЕ И ЗРИТЕЛЬНОМ НЕРВЕ
ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Курск
Обследованы 52 пациента (52 глаза), из них 15 пациентов с нарушением кровообращения в ветвях центральной вены сетчатки (ЦВС), 11 - с нарушением кровообращения в ЦВС, 9 - с сосудистой оптиконейропатией (СОН) по артериальному типу, 17 - с СОН по смешанному типу и 20 здоровых доноров (группа контроля).
Проведена оценка уровней эндотелина-1, метаболита оксида азота (NO2-), трансформирующего фактора роста - Р1 (ТФР-Р1) и фактора некроза опухоли-а (ФНО-а) в слезной жидкости. По сравнению с группой контроля выявлено повышение следующих показателей слезной жидкости: уровня эндотелина-1, среднего значения содержания стабильного метаболита оксида азота-нитрита, среднего содержания ФНО-а. Наиболее высокие показатели зафиксированы у пациентов с венозным характером нарушения кровообращения. У пациентов с СОН по смешанному типу выявлено повышение уровня ТФР-Р1 в 1,67 раза по сравнению с группой контроля.
Ключевые слова: эндотелиальная дисфункция, слезная жидкость, нарушение кровообращения, сетчатка, зрительный нерв.
A.V. Verkholomova, E.V. Markova, A.S. Bilyak INFORMATIVENESS OF LACRIMAL FLUID STUDY IN PATIENTS WITH IMPAIRED BLOOD CIRCULATION IN RETINA AND OPTIC NERVE
52 patients (52 eyes) were examined: 15 patients with branch of retinal vein circulatory disorder, 11 patients with central retinal vein circulatory disorder, 9 patients with arterial type vascular optic neuropathy, 17 patients with mixed type of vascular optic neuropathy and 20 healthy donors.
Levels of endotheline -1, nitric oxide metabolite (NO2-), transforming growth factor P1 (TGF-P1), and tumor necrosis factor-а (TNF-а) were evaluated in lacrimal fluid. In comparison with control group the analysis of lacrimal fluid showed increasing of levels of endotheline-1, average level of stable metabolite of nitric oxide, average level of TNF -а. The highest levels of endoteline-1 were found in patients with venous type of circulatory disorders. An increase of transforming growth factor P1 was noticed in patients with mixed type of vascular optic neuropathy for 1,67 times higher than in control group.
Key words: endothelial dysfunction, lacrimal fluid, circulatory disorders, retina, optic nerve.
Современная офтальмология достигла значительных высот в диагностике и лечении острой сосудистой патологии глаза. В то же время как в России, так и за рубежом отмечается рост числа заболеваний, в основе которых лежит нарушение микроциркуляции. Нарушение кровообращения в сетчатке и зрительном нерве проявляется внезапным и прогрессирующим снижением зрительных функций, что может привести к частичной или полной атрофии зрительного нерва, вторичной неоваскулярной глаукоме и, как следствие, к слабовидению и слепоте, даже несмотря на последующую ретино- и нейропро-текторную терапию [2,3,4]. По данным Н.Б. Шульпиной, слепота сосудистого происхождения составляет 2,6%. В 15% случаев окклю-зионные поражения сосудов сетчатки являются причиной инвалидности по зрению [8]. Согласно имеющимся данным отечественных и зарубежных исследований значительную роль в формировании и развитии сосудистых заболеваний играет дисфункция сосудистого эндотелия. Дисфункция эндотелия может быть самостоятельной причиной нарушения кровообращения, провоцируя ангиоспазм и тромбоз сосудов [10,11,12]. О функциональном состо-
янии эндотелия можно судить по спектру выделяемых им биологически активных веществ. Проведенные исследования и фундаментальные работы последних лет доказали, что изменение функций эндотелия может являться предвестником каких-либо сосудистых заболеваний и предшествовать их клиническому проявлению [13]. В диагностике заболеваний большое внимание уделяется изучению биохимического состава различных жидкостей и тканей. Предпочтительно использовать биохимически максимально приближенную к исследуемому объекту биологическую среду. Для глаза этой средой является слезная жидкость. Важно отметить, что слеза - это довольно доступная для исследования биологическая жидкость и получить ее возможно быстро, просто и неинвазивно в достаточном для исследования количестве [5,6].
Целью работы явилась оценка уровней эндотелина-1, метаболита оксида азота (КО2-), трансформирующего фактора роста - Р1 (ТФР-Р1), фактора некроза опухоли-а (ФНО-а) в слезной жидкости пациентов с нарушением кровообращения в сетчатке и зрительном нерве для установления их значения в возникновении данного вида патологии.
Материал и методы
Под наблюдением находилось 52 пациента (52 глаза) в возрасте от 42 до 79 лет (средний возраст 61,3±9,7 года) с нарушением кровообращения в сетчатке и зрительном нерве. Диагноз нарушения кровообращения в сетчатке и зрительном нерве устанавливался на основании клинических проявлений заболевания, результатах инструментальных методов исследования (визометрии, биомикроскопии, офтальмоскопии, периметрии и др.).
В соответствии с целями исследования все испытуемые были разделены на четыре группы. В 1-ю группу вошли пациенты с нарушением кровообращения в ветвях центральной вены сетчатки - 15 человек (15 глаз), во 2-ю группу - 11 пациентов с нарушением кровообращения в центральной вене сетчатки (11 глаз), 3-ю группу составили пациенты с сосудистой оптиконейропатией по артериальному типу в количестве 9 человек (9 глаз), 4-ю группу - 17 пациентов с сосудистой оптико-нейропатией по смешанному типу (17 глаз).
В контрольную группу вошли 20 практически здоровых лиц (40 глаз), подобранных в соответствии с исследуемыми пациентами по полу и возрасту. Критериями включения пациентов в исследование были: верифицированный диагноз нарушения кровообращения в сетчатке и зрительном нерве; наличие информированного согласия пациента о включении в исследование.
Критериями исключения из исследования служили: сопутствующая офтальмологическая патология (миопия высокой степени, дистрофические изменения сетчатки, диабетическая ретинопатия, выраженное помутнение хрусталика, глаукома); сахарный диабет, ожирение; отказ от участия в исследовании.
Слезную жидкость без предварительной анестезии в объеме 50 мкл собирали с помощью капилляра из нижнего конъюнктиваль-ного свода в утренние часы. Для стимуляции слезопродукции использовали пары нашатырного спирта. Собранные образцы слезной жидкости помещали в пластиковые пробирки типа Eppendorf и замораживали до проведения измерений.
Определение уровня эндотелина-1 в образцах проводили на полуавтоматическом анализаторе для иммуноферментного анализа с использованием набора реактивов «ENDOTELIN (1-21)» (Biomedica, Австрия).
Уровень ТФР-ß! в слезной жидкости определяли на полуавтоматическом анализаторе для иммуноферментного анализа с использованием набора реактивов «HUMAN
ТФР-ßl Platinum ELISA» (Bioscience, Австрия). Чувствительность метода - 4 пг/мл.
Содержание ФНО-а в слезной жидкости определяли методом иммуноферментного анализа с использованием набора для определения ФНО-а (Вектор - Бест, Россия).
Содержание оксида азота в слезе оценивали спектрофотометрически по концентрации его стабильного метаболита - нитрита (NO2-), используя реакцию Грисса.
Результаты и обсуждение
Было исследовано содержание биологически активных веществ (метаболита оксида азота и эндотелина-1) в слезной жидкости, играющих важную роль в регуляции сосудистого тонуса [13]. При проведении анализа слезной жидкости у пациентов с острыми нарушениями кровообращения в сетчатке и зрительном нерве выявлено достоверное повышение уровня эндо-телина-1 (p<0,05), обладающего выраженным вазоконстрикторным действием.
Концентрация эндотелина-1 в слезной жидкости у пациентов с сосудистой патологией сетчатки и зрительного нерва превышала аналогичные показатели в контрольной группе в 2,7 раза (p<0,05). Установлено, что наиболее высокий уровень эндотелина-1 в слезной жидкости наблюдался в группе пациентов с сосудистой оптиконейропатией по венозному типу (2,35±1,39 фмоль/мл) и при тромбозе ветвей центральной вены сетчатки (6,51±1,19 фмоль/мл). При анализе содержания эндотели-на-1 в слезной жидкости было выявлено превышение его концентрации в 1,2 раза (1,74±0,44 фмоль/мл) в 3-й, и в 1,42 раза (2,1±0,65 фмоль/мл) в 4-й группах пациентов с сосудистой оптиконейропатией по артериальному и смешанному типам в сравнении с аналогичными показателями у пациентов контрольной группы (p<0,05). Таким образом, у больных с нарушением кровообращения в сетчатке и зрительном нерве имеет место повышение в слезной жидкости содержания эндотелина-1, наиболее выраженное у больных венозным характером нарушения кровообращения.
Среднее значение содержания стабильного метаболита оксида азота- нитрита (NO2-) в слезной жидкости больных составило 5,83±1,89 мкмоль/л, что превышало аналогичный показатель в контрольной группе (5,71±2,03мкмоль/л) (p<0,05). Максимальный уровень концентрации нитрита (NO2-) слезы был зафиксирован у пациентов с сосудистой оптиконейропатией по смешанному типу и составил 8,32±0,55 мкмоль/л. Концентрация этого метаболита оксида азота в других группах была ниже, чем в контрольной (p<0,05).
Минимальный уровень N0 - слезы (3,77±1,44 мкмоль/л) определялся во 2-й группе у пациентов с сосудистой оптиконейропатией по венозному типу.
Важное значение в диагностике функционального состояния сосудистого эндотелия имеет баланс между про- и противовоспалительными цитокинами [1,7,9]. При исследовании содержания иммуносупрессорного ци-токина - трансформирующего фактора роста - Р1 (ТФР-Р1) в слезной жидкости - были получены следующие результаты: у пациентов с сосудистой оптиконейропатией по смешанному типу уровень этого цитокина был в 1,67 раза выше его концентрации в группе контроля (1093,4±227,3 пг/мл и 654,5±149,7 пг/мл соответственно) (р<0,05). В других группах уровень этого цитокина был ниже, чем в контрольной (р<0,05).
При определении провоспалительного цитокина в слезе - фактора некроза опухоли-а (ФНО-а) - возникли определенные трудности, так как у большинства пациентов содержание данного цитокина в слезе, вероятно, было ниже минимально определяемых значений. Фактор некроза опухоли-а определился всего у 11% исследуемых. В группе контроля концен-
трация ФНО-а составила 2,49± 0,28 пг/мл, причем положительные значения наличия этого цитокина в слезе было зафиксировано всего у 6 исследуемых. Среднее содержание ФНО-а в слезной жидкости составило 3,24±0,469 пг/мл, что было достоверно выше аналогичного показателя в группе контроля (2,49±0,28 пг/мл) (р<0,05). Если же оценивать значение данного показателя в слезе отдельно по группам, то значительных различий в уровнях концентраций обнаружено не было.
Выводы
1. Острое нарушение кровообращения в сетчатке и зрительном нерве сопровождалось повышением средних значений эндотелина-1 и метаболита оксида азота, являющихся важными маркерами эндотелиаль-ной дисфункции.
2. В результате исследования установлено наличие нарушения продукции цитокинов, что свидетельствует о важной роли иммунных механизмов в формировании эндотелиальной дисфункции у пациентов с нарушением кровообращения в сетчатке и зрительном нерве. Разноречивость полученных данных может служить ориентиром для продолжения исследований в данном русле.
Сведения об авторах статьи: Верхоломова Анна Владимировна - аспирант кафедры офтальмологии ГБОУ ВПО КГМУ Минздрава России. Адрес: 305004, г. Курск, ул. Садовая, 42-а. E-mail: anna.verholomova@mail.ru.
Маркова Елена Владимировна - ассистент кафедры офтальмологии ГБОУ ВПО КГМУ Минздрава России. Адрес: 305004, г. Курск, ул. Карла Маркса, 3. E-mail: markova_helen@rambler.ru
Биляк Алексей Сергеевич - клинический ординатор кафедры офтальмологии ГБОУ ВПО КГМУ Минздрава России. Адрес: 305004, г. Курск, ул. Карла Маркса, 3. Тел./факс: 8(4712) 74-03-82.
ЛИТЕРАТУРА
1. Васюк, Ю.А. «Цитокиновая» модель патогенеза хронической сердечной недостаточности и возможности нового терапевтического подхода в лечении декомпенсированных больных / Ю.А. Васюк, О.П. Дударенко, Е.Н. Ющук // Рациональная фармакотерапия в кардиологии. - 2006. - № 4. - С. 63-70.
2. Егоров, Е.А. Неотложная офтальмология / Е.А.Егоров, А.В. Свирин, Е.Г. Рыбакова. - М., 2005. - 119 с.
3. Егоров, Е.А. Нейропротекция при глаукоме: современные возможности и перспективы / Е.А. Егоров, А.Ю. Брежнев, А.Е. Егоров // Клиническая офтальмология. - 2014. - N° 2. - С.108-112.
4. Мошетова, Л.К. Офтальмология. Клинические рекомендации. / Л.К. Мошетова, А.П. Нестеров, Е.А. Егоров. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 256 с.
5. Содержание эндотелина-1 в слезной жидкости у больных глаукомой и пролиферативной диабетической ретинопатией / В.В. Нероев [и др.] //Сборник научных трудов научно-практической конференции с международным участием. - М., 2012. - 87 с.
6. Сенников, С.В. Методы определения цитокинов / С.В. Сенников, А.Н. Силков // Цитокины и воспаление. - 2005. - Т. 4, № 1. -С. 22-27.
7. Симбирцев, С.В. Цитокины: классификация и биологические функции / С.В. Симбирцев// Цитокины и воспаление. - 2004. -Т. 2, № 3. - С. 16-22.
8. Танковский, В.Э. Тромбозы вен сетчатки /В.Э. Танковский. - М., 2000. - 263 с.
9. Чуров, А.В. Роль ТФР-Р в формировании иммуносупрессии в онкогенезе / А.В. Чуров, Е.К. Олейник, В.М. Олейник // Цитокины и воспаление. - 2009. - Т. 8, № 3. - С. 11-15.
10. Bhatt, J. Endothelium as endocrine organ- in health and disease / J.Bhatt // Indian Journal of Applied Basic Medical Sciences. - 2000. -Vol. 2, №1.
11. Dessein, P. Biomarkers of endothelial dysfunction, cardiovascular risk factors and atherosclerosis in rheumatoid arthritis / P.Dessein, B. Joffe, S. Singh // Arthritis Res Ther. - 2005. - Vol.7, №3. - R634-R643.
12. Giles, T.D. Aspects of nitric oxide in health and disease: a focus on hypertension and cardiovascular disease / T.D. Giles // J Clin Hypertens (Greenwich). - 2006. - Vol.8, №4. - P. 2-16.
13. Hadi, H.A. Endothelium dysfunction: cardiovascular risk factors, therapy, and outcome / H.A. Hadi, C.S. Carr, J. Al Suwaidi // Vasc Health Risk Manag. - 2005. - Vol.1, №3. - P.183-198.
