CC BY
21
УДК 636.09:616.99
Прийма О.Б., асистент © Лъв\всъкый нацюналъныыутеерсытет ветерынарногмедыцыны та бютехнологт
iMeni С.З. Гжицъкого
ВПЛИВ IHBA3IÍ TOXOCARA CANIS НА ГЕНОМ СОБАК
Проведеними дослгдженнямы встановлено, що продукты жыттед1ялъност1 нематоды Toxocara canis призводятъ до тдвыщення piem частоты та спектру аберацш хромосом у л1мфоцытах кровi собак, спонтанно iнвазованих токсокарозом.
Ключое1 слова. Токсокароз, токсокари, кров, лейкоциты, аберацп, хромосомы, собакы.
Вступ. Розвиток не ф1зюлопчних метод1в боротьби з хворобами швидкими темпами приводить цившзацш до еко- i генотоксичних змш.
Тому важливим у цьому плаш е дослщження вщдалених вплив1в зовшшшх чинник!в, як1 зв'язаш 3Í змшами генетичного матер1алу - мутащями [1,2]. Мутаци у статевих кл1тинах можуть призводити до спонтанних аборт1в, мертвонароджених, вироджених аномалш розвитку, до збшьшення частоти спадкових захворювань. Мутаци в соматичних кл1тинах зв'язаш з процесами канцерогенезу, старшня, порушенням ембрюнального розвитку тощо.
Цитогенетичний метод анал1зу л1мфоцит1в кров1 in vivo, використовуеться для виявлення кластогенних або анеугенних чинниюв середовища, здатних викликати 3míhh структури i числа хромосом. Хромосомний анал1з е тестом, що характеризуе дш мутагешв р1зних за походженням на цшсний оргашзм [3,4]. Bíh позбавлений очевидних недолшв, пов'язаних з застосуванням штучних систем метабол1чно! активност1 in vitro [5]. Пошкодження хромосом у експериментальних тварин in vivo анал1зують в метафазах м1тотичного подшу кл1тин прол1феруючих тканин [6] та найчастше вивчають в л1мфоцитах кров1, юстковому мозку i соматичних тканинах [7].
Проведения дослщжень щодо вивчення хромосомних аберацш в л1мфоцитах кров! собак за спонтанного токсокарозу е нагальним i визначае актуальнють вивчення njei проблеми.
Мета. Метою нашо! роботи було вивчення впливу швази Toxocara canis на геном собак.
Матер1али i методи. Клшжо-експериментальш дослщження проведен! на 12 собаках 2-4-мюячного вку. Для дослщу були вщбраш здоров! собаки за принципом аналопв (з урахуванням породи, живо! маси, в1ку, стат1, розвитку). У процеа дослодв групи тварин знаходилися за однакових умов год1вл1 та утримання. Для оцшки стану хромосом як дослщний бюлопчний матер1ал використовували
© Науковий KepiBHHK д.вет.н, професор Стибель В.В. Прийма О.Б.,
285
периферичну кров собак на 7-у, 14-у, 21-у, 28-у добу вщ часу заражения, оскшьки вона е найбшьш доступним об'ектом дослщжень та дае можлившть проводити динам1чне спостереження за мутагенним навантаженням на геном тварин протягом тривалого перюду життя. Препарати метафазних хромосом i3 л1мфоцит1в кров! собак готували за загальноприйнятою методикою (Moorchead P.S. et al., 1960). Кров культивували in vitro у живильному середовищА 1ГЛА з глютамшом та сироваткою кров1 велико! рогато! худоби. Як стимулятор прол1фераци використовували ф^огемаглютинш ф1рми „Difco" у стандартному розведенш.
Фжсацш кл1тин проводили на 48-у годину вщ початку культивування
Отримаш таким чином препарати метафазних хромосом пщдавали рутинному фарбуванню у 2%-му розчиш барвника Пмза протягом 8-10 хвилин. Пкля цього препарати промивали протягом 1-2 хвилин пщ слабим струменем води i висушували на noeiTpi.
Вивчення хромосом проводили за допомогою мжроскопа „Jenamed- 2" (Carl Zeiss Jena) i3 збшьшенням, що становить 1000 одиниць. Вщ кожно! тварини анал1зували по 100 рутинно зафарбованих метафазних пластинок. Облк аберацш хромосом проводили згщно з рекомендац1ями ВООЗ (1989).
Результата досл1джень. Досл1дженнями встановлено, що карютип собак представлений дипло!дним набором - 78 хромосом. Bei аутосоми собаки представлен! акроцентриками. Статев! хромосоми: Х-хромосома -субметацентрик великих po3MipiB, Y-хромосома - найменша хромосома у набор!.
П!сля анал!зу хромосомного апарату собак, спонтанно ¿нвазованих токсокарозом виявлено хромосомн! аберац!!, хроматидн! аберац!! та явище пол!пло!д!!. Найб!льш часто встановлеш порушення структури хромосом (ендоредупл!канти, дицентрики, центричн! к!льця). Пол!пло!дн! кл!тини були представлен! у вигляд! зменшеного або зб!льшеного кар!отипу, переважно, на одну хромосому.
Дослщженнями кар!отипу кл!тин л!мфоцит!в периферично! кров! контрольних собак, було встановлено, що к!льк!сть хроматидних аберацш складала в!д 0,78±0,09 до 0,99±0,12%, хромосомних в!д 0,89±0,08 до 1,12±0,11%, полшло!дних В1д 2,17±0,18 до 2,31±0,16% (табл. 1).
При зараженн! токсокарозом у експериментальних тварин на 14-ту добу ¿нваз!! в!дсоток хроматидних аберацш був у 2,2 раза вищим в!д показника контрольно! групи (Р<0,05). До 21-! та 28-! д1б експерименту в!дсоток хроматидних аберац!й був вщповщно у 2,7 та 2,3 раза вищим, шж у контрол! (Р<0,01).
Водночас спостер!галося зростання р!вня хромосомних аберантних кл!тин. Зокрема до 14-! доби !х кiлькicть зросла у 1,7 раза пор!вняно до контролю. До 21-! доби експерименту вщеоток хромосомних аберацш був у 2,5 раза вищим, шж у кoнтpoлi (Р<0,01). На 28-му добу р!вень хромосомних aöepauift був у 2,3 раза вищим вщ показника контрольно! групи (Р<0,01).
286
Таблиця 1
Частота та спектр аберацш хромосом у собак, спонтанно ¡нвазованих __токсокарозом % (M±m, n=6)_
Показники До заражения П1сля заражения
7 доба 14 доба 21 доба 28 доба
Хроматидш аберацп К 0,78±0,09 0,97±0,09 0,85±0,07 0,82±0,09 0,99±0,12
д 0,84±0,12 1,08±0,10 1,85±0,32* 2,24±0,31** 2,28±0,29**
XpOMOCOMHi аберацп к 1,02±0,08 1,12±0,11 0,97±0,09 0,89±0,08 1,07±0,09
Д 0,98±0,11 1,32±0,17 1,67±0,38 2,19±0,33** 2,47±0,32**
Полшлощя к 2,21±0,29 2,28±0,31 2,17±0,18 2,27±0,29 2,31±0,16
Д 2,07±0,38 2,47±0,28 3,16±0,24** 4,05±0,37** 4,42±0,31***
Примггки: * - Р <0,05; ** - Р <0,01; *** - Р <0,001
В експериментально ¿нвазованих токсокарозом собак у кл1тинах л1мфоцит1в периферично! кров! до 14-1 доби дослщу кшьюсть полшлощних кл1тин зростала у 1,5 раза (Р<0,01). До 21-! доби експерименту - у 1,8 раза, р1вень в1рог1дност1 становив (Р<0,01). На 28-му добу швазп р1вень пол1пло!дних кл1тин перевищував контрольш величини у 1,9 раза (Р<0,001).
Отже, у первинному патогенетичному мехашзм! за спонтанного токсокарозу поряд з ф!зюлопчними виникають генетичш змши соматичних кл1тин з ознаками „хромосомних хвороб".
Висновки. 1. Цитогенетичний анал1з частота та спектру аберацш хромосом показав, що продукта життед1яльност1 нематоди Toxocara canis призводять до п^двищення р1вня хромосомних аберац1й у л1мфоцитах кров1 собак.
2. П1двищення р1вня хромосомних аберацш у л1мфоцитах периферично! кров! з 7-oi' до 28-о! доби ¿нваз!! можливо пов'язано ¿з високою б!олог!чною активн!стю паразит!в i видшенням велико! к!лькост! ксеноб!отик!в безпосередньо у тканини хазя!на.
3. Зниження кшькост! хромосомних аберац!й у л!мфоцитах периферично! кров! на 28-у добу заражения можливо е наслщком зменшення видшення екскреторно-секреторних вид^лень личинками, спричинене зниженням !х б!олог!чно! активност!.
Л1тература
1. Ауэрбах Ш. Проблемы мутагенеза. - М.: Мир, 1978. - 464 с.
2. Дубина Н.П. Потенциальные повреждения в ДНК и мутации / Н.П. Дубина // Молекулярная цитогенетика. - М.: Наука, 1978. - 246 с.
3. Макгрегор Г., Варли Дж. Медоды работы с хромосомами животных: Пер. с анг. - М.: Мир, 1986. - 268 с.
4. Дарлингтон С.Д. Хромосомы. / С.Д. Дарлингтон, Л.Ф. Кур // Методы работы. - М.: Атомиздат, 1980.
5. Гигиенические критерии состояния окружающей среды 51: Руководство по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ/ Совместное издание Программы ООН по окружающей среде, МОТ и ВОЗ. - Женева: Изд-во „Медицина", 1989. - 212 с.
287
6. Natarajan A.T. Chromosome aberrations: past, present and future / A.T. Natarajan // Mutat. Res. Fund, and Mol. Mech. of Mutagen. -2002. - Vol. 504. -P. 3-16.
7 Galloway S.M. Cytotoxiciry and Chromosome Aberrations In Vitro: Experience to Industryand the Case for an Upper Limit on Toxicity in the Aberration Assay / S.M. Galloway // Mutat. Res. Fund, and Mol. Mech. of Mutagen. -2000. -Vol 35. -P. 191-201.
8. Ford C.E. A colchicine hypotonic citrate squash sequences for mammalian chromosomes / C.E. Ford, J.L. Hamerton // Stain Tech nol. - 1956. _ Vol. 31. - P. 247-251.
9.Руководство по изучению генетических эффектов в популяции человека. Женева. ВОЗ, - 1989, 121 с.
Summary Pryima O.B.
Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after
S.Z. Gzhytskyj
INFLUENCING OF INVASION OF TOXOCARA CANIS ON GENOME OF DOGS
Researches are conducted by us rotined that the metabolites eelworms of Toxocara canis resulted in the increase of level of chromosomal abberation in the cages of lymphocytes of blood in experimental infested of toxocara dogs.
Рецензент - д.вет.н., професор Гуфрш Д.Ф.
288
