Инфекционная иммунология Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Медицинская иммунология 2001, Т. 3, №2

О 2001, СПб РО РААКИ

ИНФЕКЦИОННАЯ ИММУНОЛОГИЯ

СОСТОЯНИЕ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ У БОЛЬНЫХ АНТРОПОФИЛЬНЫМ ДЕМОДЕКОЗОМ

Акилов O.E., Власова И.А., Казанцева С.В.

Космепюлогическая клиника "Эстетика ”, Екатеринбург, Россия. Центральная научно-исследовательская лаборатория Уральской государственной медицинской академии, Екатеринбург, Россия

Введение. Клещи Demodex folliculonim и Demodex brevis являются условно-патогенной фауной сально-воло-сяных фолликулов кожи человека. В связи с широким распространением антропофильного демодекоза актуальным является вопрос оценки иммунного статуса у таких пациентов.

Цель исследования. Оценка состояние иммунной системы больных антропофильным демодекозом.

Материалы и методы. В исследовании приняли участие 78 человек. Основную группу составили - 66 больных с плотностью 5 и более клещей Demodex spp. на см:. Двенадцать человек без признаков демодекозного инфицирования, сопоставимые по возрасту и полу, составили группу контроля. В периферической крови исследовали мембранные маркеры различных клонов им-мунокомпетентных клеток (CD3 , CD4 . CD8 , CD 16 , CD20 , CD25 ) с помощью моноклональных антител отечественного производства(МедБиоСпсктр, Москва). ПоказателиCD5 .CD71 рассчитаны методом регрессионного анализа [Щеголева Л.С. и соавт., 1999].

Результаты. Согласно патогенетическому подходу к оценке иммунной системы человека [Ковальчук Л. В., Че-редеев A.H., 1990] можно выделить этапные особенности иммунного ответа на клещевую инвазию: 1) О повышении экспрессииМНС 1 может косвенно свидетельствовать повышение в 1,9 раз по сравнению с контрольной группой числа NK-клеток, имеющих рецептор Ly49 к МНС 1 класса. 2) Изменяются соотношения субпопуляций Т-лим-фоцитов: с высоким удельным весом популяции про-Т-лимфопитов, при статистически достоверном (р<0,05) снижении числа зрелых Т-клеток: CD5 на 24,2%; CD3 клеток на 35,0%; CD4 клеток на 61,1%; CD8 клеток на 44,0%; CD71 лимфоцитов на 32,5% по сравнению с контрольной группой. Параллельно отмечается снижение числа клеток с рецептором к IL-2, отражающееся снижением CD25 клеток на 22,5%, по сравнению с контролем. При этом не обнаружено достоверных различий в показателях гуморального ответа: числе CD20 клеток, IgM, IgG, IgA.

3) Повышается число про-Т- лимфоцитов в 17,7 раз по сравнению с контролем и в 1.9 раза 0-клеток. 4) Обращает на себя внимание значительная активация клеток "первой линии” защиты: число про-Т-клсток равно 0,28±0,03 x-lOYn; на 52,1% увеличено число CD5 В-клеток по сравнению с контрольной группой; на 92,3% повышено число CD 16 клеток у пациентов основной группы. 5) Не отмечается изменений в соотношении CD4 /CD8 . Снижение CD25 клеток и большое количество CD5 В-клеток (0,73±0,04 х• 109/л) являются косвенным признаком иШа-ëàaàièÿ ТЬ2-ответа.

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ ФРАКЦИЙ ЦЕРЕБРОСПИНАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ПРИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ МЕНИНГИТАХ У ДЕТЕЙ

Алексеева Л.А, Железникова Г.Ф., Монахова Н.Е., Сорокина М.Н.

Научно-исследовательский институт детских инфекций М3 РФ,

Санкт-Петербург, Россия

Центральная регуляция иммунного ответа осуществляется посредством разнообразных механизмов, включающих вещества белково-пептидной природы. При бактериальных менингитах (БМ) у детей нами установлены различные степени увеличения высокомолекулярной (белковой) и низкомолекулярной (пептидной) фракций (ВМФ и НМФ) цереброспинальной жидкости, соответствующие тяжести течения заболевания. Целью настоящей работы явилось исследование иммуномодулирующей активности фракций в тесте ФГА-стимулированной реакции бластной трансформации лимфоцитов и ее сопоставление с клиническим течением БМ и белково-пептидным составом ликвора.

Обнаружено, что у детей контрольной группы с ОРВИ (12 человек) фракции ликвора оказывают слабое ингибирующее действие на функциональную активность лимфоцитов крови (индексы модуляции составили: для ВМФ - 0,89±0,12, для НМФ

- 0,90±0,12 единиц). В остром периоде БМ у одной группы детей (19 человек) фракции ликвора оказывали стимулирующее действие: индексы модуляции для ВМФ и НМФ - 1,25±0,03 и 1,26±0,04 ед. соответственно; тогда как у другой группы (14 человек) ингибирующее действие равное для ВМФ - 0,60±0,08 ед., для НМФ -0,71 ±0,11 ед. При стимулируюшем воздействии фракций ликвора на лимфоциты крови заболевание протекало, преимущественно, в средне-тяжелой форме, без формирования резидуальных неврологических последствий. При супрессорном воздействии фракций у большинства больных заболевание протекало в тяжелой форме, осложненной развитием инфекцион-но- токсического шока, отека мозга. В стадии реконвалесценции у больных этой группы наблюдали формирование неврологического дефицита. Выявлены различия в белково-пептидном составе ликвора у этих групп больных как в остром периоде болезни, так и в динамике нейроинфекционного процесса.

Таким образом, средне-тяжелое течение БМ ассоциируется со стимулирующим эффектом фракций цереброспинальной жидкости на лимфоциты крови, тогда как тяжелое - с суп-рессирующим действием фракций ликвора.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ПОЛИОМАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У ПАЦИЕНТОВ С АЛЛОТРАНСПЛАНТАТОМ ПОЧКИ

Баранова Ф.С., Сазыкин А.Ю., Джатдоева А.А., Прилипов А.Г.

НИИ Трансплантологии и Искусственных органов М3 РФ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, г. Москва.

Введение. Реактивация полиомавирусов (РУ) типа ВК и .1С и персистентная РУ репликация у больных в условиях

иммунодепресии рассматривается как одна из причин развития прогрессивной дисфункции аллотрансплантата почки. До последнего времени диагноз PV - нефропатии ставился путём идентификации в моче клеток, содержащих вирусные внутриядерные включения (“decoy cells”) или антигена PV вируса в биопсийном материале. Первый метод имеет ограничения по чувствительности и специфичности, тогда как второй является инвазивной процедурой, которую невозможно использовать для мониторинга.

Внедрение полимеразной цепной реакции (PCR) расширяет возможности диагностики PV инфекции и как следствие, анализа причин дисфункции аллотрансплантатов почки.

Цель исследования. Создание системы для идентификации ВК и JC вируса в биологическом материале методом PCR и определение частоты реактивации PV у пациентов с аллотрансплантатом почки.

Материалы и методы. Забор мочи (утренняя порция) проводили в специально подготовленные флаконы для того, чтобы избежать контаминации. ДНК выделяли с помощью наборов “ДНК-сорб -В” Центрального НИИ Эпидемиологии М3 РФ, из осадка, полученного центрифугированием 1,5 мл мочи. Применяли как двухстадийную (Nested), так и одностадийную системы PCR. В качестве ( ) контролей использованы плазмиды, несущие участки рекомбинантной ДНК поли-мавирусов JC и ВК.

Результаты. Обследовано 30 больных отделения нефро-логических проблем трансплантации почки. Показана высокая степень реактивации PV (60%). ВК и JC одновременно обнаружены у 9 больных (30%). Только ВК вирус - у 1 больного (3%). Только JC - у 8 больных (26%). PV не обнаружены в моче 5 здоровых доноров.

Выводы. Полученные данные демонстрируют возможность использования метода PCR для диагностики и изучения иммунобиологии PV инфекции у больных с аллотрансплантатами почки.

ПРОДУКЦИЯ ТН1- И ТН2-МАРКЕРНЫХ ЦИТОКИНОВ У ЛЮДЕЙ ПОСЛЕ ИММУНИЗАЦИИ ЖИВЫМИ И ИНАКТИВИРОВАННЫМИ ГРИППОЗНЫМИ АНТИГЕНАМИ

Баранцева И.Б., Найхин A.H., Рекстин А.Р., Допнпа С.А., Дешева Ю.А., Руденко Л.Г.

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург. Россия

Вопрос о путях развития у людей поствакцннального иммунного ответа с позиции концепции ТЫ/ТЬ2-дихотомии носит дискуссионный характер. В частности, неясно, влияют ли такие факторы, как физико-биологическое состояние вводимого антигена (живой, инактивированный), место его аппликации (интраназально, парентерально), схема введения (раздельно, сочетано) и возраст людей на направление дифферен-цировки CD4 Т-хелперов на Th I и Th2, которые, как известно, определяют количественные показатели соответственно клеточного и гуморального иммунного ответа. Для выяснения этих вопросов проведено сравнительное исследование продукции Thl (IL-2, IFNy) и Th2 (1Ь-4)-зависимых цитоки-нов у пожилых и молодых людей, привитых живой (ЖГВ) и инактивированной (ИГВ) гриппозными вакцинами раздельно и в сочетании. Уровень цитокинов в надосадках культур, стимулированных гомологичными антигенами, лимфоцитов периферической крови, состояние клеточного (РБТЛ) и гумо-

рального (циркулирующие и локальные антитела) иммунитета определяли до и после вакцинации. ЖГВ вводили интраназально, ИГВ - подкожно.

ИГВ повышала уровень IL-2, IFNy и пролиферативную активность Т-лимфоцитов только у молодых, но не у пожилых людей. ЖГВ индуцировала более интенсивно и практически одинаковое по значению увеличение этих факторов иммунитета в обеих возрастных группах. Выработка IL-4 находилась на очень низком уровне и у пожилых, и у молодых лиц после введения обеих вакцин. Циркулирующие антитела вырабатывались активнее у молодых людей, привитых как ЖГВ, так и ИГВ, а антитела в секретах верхних дыхательных путей - у пожилых, иммунизированных ЖГВ. По сравнению с раздельной, сочетанная иммунизация как ЖГВ, так и ИГВ обеспечивала более активную продукцию IL-2, IFNy, (но не IL-4), а также местных и циркулирующих антител в обеих возрастных группах.

Полученные результаты косвенно свидетельствуют, что при инокуляции вирусных антигенов дифференцировка Т-хел-перов на подклассы Thl и Th2 осуществляется по преимущественному принципу. Преимущество в пути развития иммунного ответа по клеточному или гуморальному типу, по-видимому, зависит от многих факторов, в том числе и от физикобиологических свойств антигена, путей и схемы его введения и возраста иммунизируемых лиц. В этой связи необходим дальнейший поиск оптимальных способов антигенной стимуляции, позволяющих в одинаковой степени активно индуцировать как клеточный, так и гуморальный иммунный ответ.

“СЕРОДИАГНОСТИКА ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ, ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ И Т0КС0ПЛАЗМЕНН0Й ИНФЕКЦИЙ У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ЛИЦ г.ЕКАТЕРИНБУРГА”

Бейкин Я.Б., Праздничкова Т.И., Ферулева М.Н. Сбитнева H.H., Фадеева М.М., Патрушева Н.Б, Дегтярева А.Н., Лившиц A.A.

Центр лабораторной диагностики болезней матери и ребенка, г. Екатеринбург, Россия

Цель исследования. Выявление маркеров цитомегалови-русной (CMV), герпетической (HSV) и токсоплазменной (ТОХО) инфекций у ВИЧ-инфицированных лиц, зарегистрированных в 2000 году в г.Екатеринбурге.

Материалы и методы. Сыворотку крови тестировали на наличие специфических антител класса IgM и IgG к вирусу простого герпеса 1 и 2 типа (AntiHSV Уг IgM), цитомегаловирусу (Anti CMV IgM, IgG) и Toxoplasma gondii (AntiToxo IgM, IgG) методом иммуноферментного анализа (ИФА). Исследования были выполнены на автоматическом анализаторе “Cobas Core 2” с применением реагентов фирмы “Hoflmann-La-Roche” (Швейцария). Результаты ИФА оценивали в соответствиии с инструктивными указаниями, прилагаемыми к диагностическим наборам.

Результаты. Всего за 2000 год на указанные выше инфекции было обследовано 299 пациентов с диагнозом ВИЧ-инфекция. При тестировании материала на Anti CMV IgM в 1,2% случаях были получены положительные результаты. Анамнестические антитела (Anti CMV IgG) были выявлены у 84,7% обследованных лиц. Маркер острой стадии заболевания при токсоплазменной инфекции (Anti Тохо IgM) был обнаружен у 6,9% обследованных, в 22,3% случаев имело место давнее инфицирование, характеризующееся наличием Anti Тохо IgG. Из 146 пациентов, обследованных на герпетическую инфекцию, Anti HSV Vi IgM были определены в сыворотке крови в 4,1 % случа-

ев. При сопоставлении результатов, полученных в группе лип с ВИЧ-инфекцией и пациентов соматических отделений ЛПУ ['.Екатеринбурга следует отметить, что процент выявленных серопозитивпых лиц на маркеры острой стадии заболевания или рецидива CMV, Тохо и HSV Vi у ВИЧ - инфицированных был на 0,9, 5.3 и 3,6 выше соответственно, чем в группе взрослых пациентов, что, по-видимому, обусловлено снижением уровня иммунитета у ВИЧ - инфицированных больных. Полученные нами результаты согласуется с данными литературы.

ИНДИВИДУАЛЬНЫЙ ХАРАКТЕР ЭКСПРЕССИИ ВИРУСНЫХ БЕЛКОВ У БОЛЬНЫХ С ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ А

Бондаренко Т.Ю., Терновой В.А., Каткова Л.Р.*, Бондарчук В.Б., Шутанова М.А, Майдашок А.Г., Нстесов С. В.

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор ”,

*Новосибирский Областной Центр СПИД,

Кольцова, Новосибирской обл., Россия

Введение. Вирусный гепатит А ( ВГА) характеризуется острым воспалительным началом, подъемом уровня транса-миназ, высоким уровнем анти- ВГА IgM. В настоящее время нет данных об уровне экспрессии отдельных белков вируса гепатита А в ходе заболевания.

Цель исследования. Выявление уровня экспрессии белка структурной области VP1 ВГА и белка неструктурного района- протеиназы ЗС ВГА в сыворотке крови методом имму-нофермситного анализа ( ИФА) с использованием рекомбинантных белков.

Материалы и методы. Обследовали40 больных вирусным гепатитом А (25 мужчин и 15 женщин) в возрасте от 14 до 40 лет. Диагноз ВГА был подтвержден обнаружением в сыворотке крови анти- ВГА IgM с помощью тест-системы “Вектогеп-А- lgM"( ДГУ ЭГ1П "Вектор- БиАльгам ”). Уровни аминотран-сфераз и билирубина определяли стандартными методиками. Наличие антител ( АТ) к VP1 и ЗС белкам определяли в ИФА с помощью рекомбинантных белков. Рекомбинантные белки были получены в прокариотической экспрессирующей системе и очищены металл- хелатной хроматографией.

Результаты. У всех больных были выявлены анги- ВГА IgM с высокими значениями оптической плотности ( ОП) в ИФА в пределах 1,6- 2,5.

Большая часть больных имела высокий уровень алаиина-мшютраисфсразы (АЛТ), в среднем превышающий норму у мужчин в 19 раз. у женщин в 26 раз. Уровень аснартатами-нотрансферазы (АСТ) превышал норму в среднем у мужчин в 11 раз, у женщин в 19 раз. Общий билирубин у мужчин в среднем превышал норму в 4 раза, у женщин в 5; прямой билирубин превышал норму у мужчин в 12 раз, у женщин в 15 раз.

Наличие у больных АТ к протеиназе ЗС указывало на репликацию ВГА. Мы обнаружили у 85% больных наличие АТ к VP1 и ЗС белкам, ОП были в ИФА у мужчин от 0,6 до 2, у женщин от 0,4 до 2,2, причем оба белка встречались приблизительно у всех пациентов на одном уровне, но у некоторых больных было больше АТ к протеиназе ЗС. Количество АТ, у разных пациентов, отличалось и не коррелировало е биохимическими показателями и наличием анти- ВГА IgM.

Заключение. Полученные результаты позволяют говорить об индивидуальном характере экспрессии белков структурной и неструктурной областей генома ВГА, который не коррелировал с биохимическими показателями у различных пациентов.

РОЛЬ СТРЕПТОКОККОВЫХ IgG Fc-СВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТА

Бурова JI.A., Пигаревскнй П.В., Гладилина М.М., Нагорнев В.А., Тотолян А.А.

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург, Россия

Введение. Постстрептококковый гломерулонсфрит относится к числу тяжелых иммунопатологических заболеваний. И если роль стрептококков группы А в качестве этиологического фактора данного заболевания можно считать установленной, то его патогенетические механизмы нельзя считать изученными до конца. Основными факторами патогенности стрептококков группы А являются белки семейства М-проте-инов, среди которых значительную роль играют поверхностные белки, связывающие Fc фрагмент молекулы IgG человека и некоторых млекопитающих, так называемые стрептококковые IgG Fc-рецепторы. Полученные нами данные о биологической активности стрептококковых IgG Fe-связывающих белков позволили оценить их в качестве факторов инициации экспериментальных процессов: гломерулонефрита и миокардита.

Цель исследования. Определение роли IgG Fe-связыва-ющих белков в индукции гломерулонефрита у кроликов при иммунизации их изогенными мутантами стрептококка типа М22.

Материалы и методы. Для иммунизации кроликов были использованы следующие штаммы стрептококка группы А типа М22: исходный штамм AL168 и его изогенные мутанты

- AL168sir-mrp- (штамм полностью лишен экспрессии IgG Fc-связывающих белков), AL168sir- и AL168mrp- (штаммы дефицитны по экспрессии одного из IgG Fe-связывающих белков). Изогенные мутанты получены от A.Them (Институт медицинской микробиологии Лундского Университета, Швеция).

Схема иммунизации кроликов описана в литературе ранее.

Методы комплексного иммуноморфологического анализа почечной ткани иммунизированных кроликов - определение уровня анти-IgG в сыворотках животных, констатация депозиции IgG и СЗ компонента комплемента, определение продукции мезангиальными клетками TNFa, IL-1 (3 и IL-6, методика обработки тканевых срезов для иммуногистохими-ческих исследований и разноуровневой микроскопии описаны ранее.

Результаты. При морфологическом анализе почечной ткани от 4-х кроликов, иммунизированных исходным штаммом стрептококка типа М22, AL168, были обнаружены изменения, характеризующие развитие мембранозно-пролиферативного гломерулонефрита: в клубочках отмечали локальное увеличение базальной мембраны, разрушение эпителия и интенсивную пролиферацию мезангиальных клеток; в выводящих канальцах наблюдали деструкцию эпителиальных клеток вплоть до полного их лизиса, в просвете канальцев было отмечено скопление моноцитов и базофилов. Гипертрофия, вакуолизация и дезинтеграция подоцитов и их отростков, с деструкцией эпителиальных клеток и агрегацией клеточного деб-риса в капиллярах были отмечены в тканевых препаратах всех исследованных кроликов. У этих же кроликов была выявлена дснозиция IgG и СЗ компонента комплемента на базальной мембране клубочков и положительная реакция на IL-lf5, IL-6 и TNFa в мезангиальных клетках. В то же время в почках 4-х кроликов, иммунизированных изогенным мутантом AL168

mrp-sir-, были отмечены только функциональные (обратимые) изменения, характеризующие развитие в клубочках полнокровия и отека без деструктивных изменений, без пролиферации мсзангиальных клеток, без мононуклеарных инфильтратов. Не было обнаружено и депозиции IgG и СЗ компонента комплемента. Отсутствовала также положительная реакция HaTNFa, IL-1(3 и IL-6. Что же касается AL168mrp- и AL168sir-изогснных мутантов, то они при введении кроликам индуцировали развитие экспериментального гломерулонефрита, хотя и в меньшей степени выраженности патологических изменений почечной ткани. Высокие титры анти-IgG констатировали только у кроликов с явлениями гломерулонефрита.

Заключение. Наши предыдущие данные, также как и данные о способности большинства так называемых "нефритогенных” стрептококков связывать IgG человека, позволяли считать, что стрептококковым IgG Fc-связывающим белкам принадлежит инициирующая роль в генезе постстрептококкового гломерулонефрита. Эта концепция подтверждена результатами настоящего исследования на генетическом уровне.

ГМДП ПОВЫШАЕТ ЭФФЕКТИВНОСТЬ БЕСКЛЕТОЧНОЙ КОКЛЮШНОЙ ВАКЦИНЫ

Валякииа Т.И., Комалева P.J1.,. *Захарова Н.С., *Брицппа М.В., *Озерецковская М.Н., *Шмелева Е.И., *Ремова Т.Н., *Мерцалова М.У., *Бажанова И.Г., *Ермолова Е.В., Несмеянов В.А.

Институт биоорганической химии им. М. М. Шемякина и Ю.А.Овчинникова, РАН,

* ПИИ вакцин и сывороток lui. И. И. Мечникова , РАМН, Москва

Введение. В НИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова разработана бесклеточная коклюшная вакцина (БКВ ) на основе протективных белковых антигенов, которые играют роль патогенетических факторов коклюшного микроба. БКВ обладает меньшей токсичностью и гистаминсенсибнлизирующей активностью при достаточной иммуногенности по сравнению с корпускулярной коклюшной вакциной. Дальнейшее повышение эффективности и безопасности БКВ может быть достигнуто при добавлении ГМДП - иммуномодулятора нового поколения, обладающего иммунорегулирующим действием.

Цель и задачи. Цель настоящей работы состояла в оценке эффективности ГМДП как агента минимизирующего побочные эффекты вакцинации БКВ/А1(ОН),, а также как агента, влияющего на длительность формируемой памяти.

Материалы и методы. Функциональную активность долгоживущих клеток памяти мышей, иммунизированных БКВ/ А1(ОН), с и без ГМДП, оценивали в тесте адаптивного переноса лимфоцитов селезенки мышей-доноров генетически идентичным иптактным мышам-реципиентам. ЛД5(|определяли в группах опытных и контрольных мышей-реципиентов после заражения их интрацеребрально вирулентным коклюшным штаммом 18323.

Поликлональную активность В-лимфоцитов селезенки контрольных и иммунизированных мышей оценивали по числу неспсцифических АОК к эритроцитам барана.

Чувствительность мышей,иммунизированных БКВ/ А1(ОН), с и без ГМДП, к эндотоксическому шоку определяли по изменению ЛД5(| опытных и контрольных животных.

Основные результаты. Разработана модель адаптивного переноса клеток памяти, формирующихся у вакцинированных БКВ/А1(ОН)3 мышей-доноров, позволяющая тестировать про-

тективную активность клеток в организме мышей-реципиен-тов, зараженных нейротропной коклюшной культурой. Необходимыми условиями выявления протективной активности являются: а) активация покоящихся клеток памяти в организме доноров иммуногенной дозой вакцины, б) введение в организм реципиентов одновременно с адаптивным переносом активированных клеток неиммуногенной для интактных мышей дозы БКВ. Показано, что функциональная активность клеток памяти сохраняется ,по крайней мере, в течение 8 месяцев. Сравнение протективных свойств клеток памяти, формирующихся у мышей, вакцинированных БКВ/А^ОН), в присутствии ГМДП и в его отсутствии, показало, что большую защиту реципиентов от гибели обеспечивают лимфоциты, перенесенные от доноров, вакцинированных БКВ/Al (ОН), в присутствии ГМДП.

Исследование влияния БКВ/А1(ОН), с и без ГМДП на число АОК к эритроцитам барана выявило модулирущее действие препаратов вакцин порознь и в комбинации с ГМДП на поликлональную активность В-лимфоцитов. Присутствие в препаратах вакцин ГМДП существенным образом не сказывалось на числе АОК, регистрируемых в селезенке мышей, иммунизированных коклюшными вакцинами в отсутствии ГМДП. Препарат БКВ/А1(ОН), с и без ГМДП оказывает на поликлональную активность В-лимфоцитов меньшее стимулирующее влияние, чем стандартная корпускулярная коклюшная вакцина.

Сравнительное изучение чувствительности к эндотокси-новому шоку мышей, иммунизированных БКВ/А1(ОН)3 и БКВ/ А1(ОН), в смеси с различными дозами ГМДП, показало, что оптимальной для уменьшения проявления токсических свойств БКВ/АЦОН), является доза ГМДП 0,0001 мкг. Гибель мышей от больших доз БКВ/А^ОН), снижалась в 2-4 раза при данной дозе ГМДП.

Заключение. Показана перспективность использования ГМДП для повышения эффективности и снижения токсичности БКВ А1(ОН)г Используя БКВ, сорбированную на гидроокиси алюминия, с помощью ГМДП удается добиться формирования долгоживущих клеток памяти, необходимых для генерации резистентности к коклюшному микробу.

МЕДИАТОРЫ ТИПОВ ИММУННОГО ОТВЕТА И КОНЦЕНТРАЦИИ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ У БОЛЬНЫХ ТОКСОПЛАЗМОЗОМ

Васильев В.В., Лобзин Ю.В., Васильева И.С.

Российская Военно-медицинская академия, Санкт-Петербургская Государственная, педиатрическая медицинская академия,

Санкт-Петер бург

Введение. Латентное течение инфекции, вызванной Toxoplasma gondii, является основной формой инфекционного процесса при данной патологии и отражает формирующийся при первичном заражении и длительно поддерживаемый Th 1 -тип иммунного ответа. Последний является альтернативой сохранения иммунного гомеостаза хозяина при взаимодействии с высоко приспособленным к паразитизму микроорганизмом и реализуется через развитие толерантности к его антигенам (Лобзин 10.В. с соавт., 2000, Denkers E.Y., Gazzinelli R.Т., 1998 и др.). Мнения о концентрациях специфических антител, при которых развивается “реактивация” латентной инфекции противоречивы.

Цель и задачи. Изучение типа иммунного ответа и специфических антител классов IgM и IgG у больных хроническим латентным манифестным токсоплазмозом в динамике.

Материалы и методы. В центре диагностики и лечения токосплазмоза клиники инфекционных болезней ВМедА в 1998-2001 гг. изучали маркеры типов иммунного ответа (интерлейкин-4, гамма-интерферон) у 40 больных хроническим токсоп-лазмозом (далее - ХТ) в период обострения (без признаков СПИДа) и 20 лиц, инфицированных токеоплазмамн, без клинических признаков болезни (контрольная группа, далее - КГ). Определяли концентрации общего ннтерферона-гамма (далее

- lFN-y) и интерлейкина-4 (далее - IL-4) методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием коммерческих тест-систем ООО “Протеиновый контур” (Санкт-Петер-бург) и “Цитокин” (Санкт-Петербург). Чувствительность метода составила 10 пг/мл. Концентрацию специфических антител (IgM, IgG) определяли в КГ однократно, у больных ХТ: в период обстрсния, через 1, 3, 6 и 9 месяцев после лечения, с помощью метода твердофазного иммуноферментного анализа с использованием тест-систеы фирмы “La Roche”.

Основные результаты. Установлено, что для 90% больных ХТ характерными изменениями являлись достоверное снижение концентрации IFN-y (327 пг/мл против 1143 пг/мл в КГ, р<0,01) и троекратный рост концентрации 1L-4 (162,8 пг/ мл против 56,3, р=(), 15) по сравнению с лицами КГ. Остальные пациенты демонстрировали значительно более высокие концентрации IFN-y (в среднем 626 пг/мл) и низкие - 1L-4 (в среднем, 38.6 пг/мл). Проспективный анализ показал, что именно у пациентов с выраженной диспропорцией медиаторов типа иммунного ответа наблюдалась высокая эффективность специфической иммуномодуляцип методом внутрикож-ного введения комплекса большого поверхностного антигена гоксоплазм по А.ГГ Казанцеву).

Выявлено, что в период обострения ХТ концентрация специфических IgM не превышае т порога чувствительности ИФА (“отрицательные” IgM), а концентрация специфических IgG имеет тенденцию к снижению (в среднем, 39,5 МЕ/мл против 52,8 МЕ/мл в КГ, р=0,17). Клинические проявления заболевания не коррелируют с концентрацией специфических антител, а специфическая иммуномодуляция не оказывает значимого влияния на их концентрацию (IgG в динамике колеблется в пределах 37-44 МЕ/мл).

Заключение. Полученные данные позволяют расценивать появление признаков обострения хронического токсоплазмо-за у пациентов без явного иммунодефицита, как результат нарушения уже сложившегося равновесия в системе “паразит-хозяин”. Пусковым механизмом могут служить любые воздействия (стресс, ятрогсиии, интеркуррентные заболевания), которые способны вызывать мощный иммунный ТЬ2-ответ и, тем самым, способствовать “реактивации” латентного токсоп-лазмоза. Дополнительная антигенная нагрузка приводит к обратному переключению типа иммунного ответа, вероятно, через активацию функции макрофагов. Концентрация специфических IgG ис может служить ни критерием диагностики обострения ХТ, ни критерием эффективности терапии, ни фактором прогноза и должна использоваться для констатации факта наличия или отсу тствия инфицированное™.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ ЗАТЯЖНОГО ТЕЧЕНИЯ ИЕРСИНИОЗНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ

Ваеякина Л.И., Железникова Г.Ф., Иванова В.В., Монахова Н.Е., Павленко М.А., Попова H.A., Бехтерева М.К., Квстная A.C., Железова Л.И.

НИИ детских инфекций МЗРФ,

Институт цитологии РАН,

Санкт-Петербург, Россия

Патогенез иерсиниозной инфекции (ИИ) сложен, о чем свидетельствует разнообразие клинических проявлений болезни. Вирулентные белки наружной мембраны Yersinia вызывают нарушение продукции TNF-cc макрофагами и их апоптоз (Monack D. et al., 1998). Редукция воспалительного ответа способствует внеклеточному размножению возбудителя и развитию затяжных и хронических форм ИИ. Цель нашей работы состояла в выявлении иммунологических показателей, наиболее пригодных для прогноза характера течения ИИ. Нами обследовано 22 ребенка в возрасте от 5 до 15 лет с ИИ. По наличию у больных повторных вспышек ИИ дети были разделены на 2 группы: 1-ая - острое течение (16 больных) и 2-ая - затяжное течение (6 больных). У 75% детей 1-й группы выявлены антитела к Yersinia enterocolitica 09, у остальных - к серовару 03, как и у всех 6 больных с затяжным течением ИИ. Иммунологическое обследование включало фенотипирование лимфоцитов в лимфоцитотоксическом тссте, оценку спонтанного апоптоза в 72-часовой культуре мононуклеаров венозной крови с учётом числа погибших клеток (по поглощению трипано-вого синего, ТС) и числа апоптотических клеток с фрагментацией ядра (при окраске propidium iodide, PI), определение общего IgE, TNF-a, IFN-y и IL-4 в сыворотке крови (ИФА).

У детей 1-й группы (но не 2-й) в острую фазу ИИ наблюдали увеличение в крови числа CDS , CD25 и CD95 лимфоцитов (в сравнении с “нормой”), тогда как у детей 2-й группы был значительно увеличен пул циркулирующих В-лимфоцитов (CD20 ). Затяжное течение ИИ ассоциировано также с низким содержанием в крови IFN-y, относительно высоким - TNF-a и гиперпродукцией IgE. Несмотря иа сравнительно небольшое число CD95 клеток, у детей 2-й группы была более выражена спонтанная гибель мононуклеаров in vitro (поглотивших ТС 39±1,8 vs 31 ±2, р<0,05 и клеток с апоптотическими ядрами при окраске PI 36,7±1,4 vs 26,6±,5, р<0,001). По-видимому, затяжное течение ИИ обусловлено недостаточностью клеточных механизмов иммунной защиты и прежде всего их главного медиатора-- IFN-y. Важными прогностическими критериями затяжного течения ИИ могут служить, кроме низкого уровня IFN-y, гиперпродукция IgE (нарушение негативной регуляции IFN-y), "нормальное” содержание в крови CD8 , CD25 и CD95 клеток и, напротив, повышенное - CD20 В-клеток.

N гр. п CD8+ % CD20 % CD25 % CD95 % lg Е КЕ/л TNF-a пг/мл IFN-y пг/мл

1 16 22,0+1,4* 24,2±3,1 28,0±4,0* 46,0+3,9* 152+46 108+46 110+26

2 6 16,5+1,6 35,1 ±3,3* 16,1+1,4 26,0+2,1* 960+24* 343+66 15,6+2,9*

Р < 0,01 < 0,01 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001 < 0,001

К 10 17,7+1,4 21,0±2,0 17±0,8 19,8±1,7 100±32 124+33 92+24,1

Примечание: * - достоверное отличие от К (здоровые дети) при р по крайней мере <0,05

“Дни иммунологии в СПб ‘2001 ’

Медицинская иммунология

ЭФФЕКТИВНОСТЬ МОНИТОРИНГА ИЗМЕНЕНИЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО ГОМЕОСТАЗА ПРИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ МЕТОДОМ СВОБОДНОГО РАСПРЕДЕЛИТЕЛЬНОГО КЛЕТОЧНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

Вихрев Д.В., Журавель В.А., Стукова Н.Ю., Семененко М.С., Фирстова В.В., Мелещенко Н.Ю., Цека Ю.С., Ледванов М.Ю.

Пензенский государственный университет, г.Пенза, Россия; РосНИПЧИ "Микроб", г. Саратов, Россия

Одним из высокоэффективных интегральных методов оценки изменений иммунологического гомеостаза (особенно клеточного звена иммунитета) является определение электрофоретической подвижности (ЭФП) лимфоцитов, обусловленной величиной электрического заряда клеток. Электрический заряд, архитектоника поверхностной мембраны и функциональные свойства клетки находятся в тесной взаимосвязи (Bauer J„ 1994).

Целыо настоящей работы явилось провести сравнительное изучение электрокинетических свойств популяций лимфоцитов при различных инфекционных и вакцинных процессах, а также в динамике иммуномодулирующей терапии.

Электрофоретическое фракционирование лимфоцитов крови осуществляли методом препаративного клеточного электрофореза в свободном потоке жидкости на аппарате Elphor VaP-5. Полученные фракции типировалн с использованием стандартной панели моноклональных антител, изучали содержание ДНК, активность ферментов энергетического и пуринового обмена. Под наблюдением находились больные урогенитальными (хламидиоз, кандидоз, герпес), кишечными (ОКЗ, вызванные энтеропатогенными E.coli, сальмонеллез) и другими инфекциями (дифтерия, инфекционный моно-нуклеоз). В эксперименте на лабораторных животных (кроликах, морских свинках и мышах различных линий) изучали вакцинный процесс, инициированный введением различных коммерческих и экспериментальных противочумных и противохолерных вакцин.

Проведенные исследования показали, что у здоровых людей лимфоциты крови распределялись по электрофоретической подвижности в основном с 50 по 70 фракции и формировали до 4-х хорошо выраженных, различающихся по ЭФП популяций. Результаты тнпирования лимфоци тов с использованием моноклональных антител показали, что клетки, относящиеся к В-популяции, концентрировались преимущественно в ннзкоподвижных в электрическом поле фракциях (с большим порядковым номером), Т-лимфоциты - в высокоподвижных (с меньшим порядковым номером). Инфекционный процесс сопровождался, как правило, снижением ЭФП, выраженность которого находилась в прямой корреляции с тяжестью заболевания. Конфигурация гистограмм была характерна для определенных нозологических форм. Эффективно проводимая специфическая и иммуномодулирующая терапия сопровождалась восстановлением качественных и количественных показателей ЭФП лимфоцитов.

Результаты исследований позволяют рекомендовать свободный распределительный клеточный электрофорез в качестве высокочувствительного и высокоинформативного метода иммуномониторинга при инфекционных заболеваниях.

ДИСБИОЗ ПОЛОСТИ РТА И КИШЕЧНИКА КАК ФАКТОР ПЕРСИСТЕНЦИИ ВОСПАЛЕНИЯ У БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ

Гавриш Т.Н., Рябова Л.Н., Нечет В.А.

Кафедра иммунологии и аллергологии ЧелГМА, отделение иммунологии и аллергологии ЧелГМА, г. Челябинск, Россия

В патогенезе персистирующего воспаления при бронхиальной астме (БА) общепризнана роль патогенной и условно-патогенной микрофлоры, например, пневмококков, инфлюэнцы, микоплазмы, хламидий, дрожжевых и плесневых грибов, колонизирующей слизистую оболочку респираторного тракта, создающей условия для полисенсибилизации. В последние десятилетия было показано, что естественным резервуаром нормальной и патогенной микрофлоры является кишечник. Штаммы микрорганизмов, выделенных с других слизистых оболочек, нередко идентичны кишечным.

Лимфоидная система кишечника (ЕАЛТ), входя в единую лимфоидную систему организма, теснейшим образом связана с бронхоассоциированной лимфоидной тканью (БАЛТ) легких. Неблагополучие в желудочно-кишечном тракте, дисбиоцепоз кишечника самым непосредственным образом могут влиять на развитие и неэффективное противовоспалительное лечение БА. В настоящей работе была поставлена цель диагностики и коррекции дисбиоценоза полости рта и кишечника у 75 больных умеренно персистирующей БА с частыми эпизодами респираторных инфекций на фоне базовой терапии 2-3 ступени, в возрасте 15-45 лет. Всем больным было проведено общеклиническое, аллергологическое, бактериологическое и иммунологической исследование, включающее иммунофенотипирование лимфоцитов, экспрессирующих СО 3, СО 4, СО 8, СО 20, СО 95 рецепторы, определение уровня общего ^Е в сыворотке крови.

Проведенные исследования показали, что из ротовой полости 15% больных БА выделяется золотистый стафилококк, патогенные стрептококки - у 16%, энтерококки - у 15%, грибы рода Кандида - у 25%. Кишечная микрофлора была представлена следующим образом: золотистый стафилококк - у 25%, патогенный стрептококк - у 3%. гемолитическая кишечная палочка - у 25%, грибы рода Кандида - у 45%. Таким образом, слизистая оболочка полости рта и кишечника больных умеренно персистирующей БА колонизирована патогенной и условнопатогенной микрофлорой.

Для больных этой группы характерно нормальное количество лейкоцитов, эозинофилия (р<0,01), склонность к лимфо-цитозу (р>0,05). гипер-^Е-емия (р<0,001). Количество СОЗ клеток не отличалось от нормы, что важно для больных, получающих базовую терапию ингаляционными глюкокортикоида-ми. Соотношение С04 /С08 было снижено до 1,5±0,07 за счет снижения С04 лимфоцитов (р<0,05). Выявлена лимфопения С020 клеток (р<0,01). Таким образом, у больных умеренно персистирующей БА выявлен дисбиоцепоз полости рта и кишечника, диспропорция количества С04 и С08 лимфоцитов, дефицит В-лимфоцитов, эозинофилия, гипер-1§Е-емия.

ДИСБАКТЕРИОЗ КОЖИ, ПОПУЛЯЦИОННЫЙ И СУБПОПУЛЯЦИОННЫЙ СОСТАВ ЛИМФОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ РЕЦИДИВИРУЮЩИМ ФУРУНКУЛЁЗОМ

Гавриш И.В., Гавриш Т.В., Журавлева Т.В., Нечет В.А.

Отделение иммунологии и аллергологии Клиники ЧелГМА, г. Челябинск, Россия

Рецидивирующий фурункулёз является актуальной проблемой иммунологии, дерматологии, хирургии, поскольку во

веем мире наблюдается продолжающийся рост заболеваемости и легальности от гнойно-септических заболеваний, к которым относи тся и рецидивирующий фурункулез. Этиологически фурункулез представляет собой острую стафилококковую инфекцию кожи, её придатков и подкожной клетчатки, имеющую нередко рецидивирующее, осложненное течение с развитием сепсиса. Традиционное лечение фурункулеза - антибиотики широкого спектра действия, оперативное иссечение некротических тканей при рецидивирующем течении заболевания малоэффективно. Нами было обследовано 30 больных рецидивирующим фурункулезом с длительностью заболевания от 1 месяца до 2 лет. количеством рецидивов до 60, исключенным сахарным диабетом. Мужчин и женщин было 18 и 12 человек в возрасте от 15 до 45 лет. Контрольную группу составили здоровые лица того же возраста. Всем больным проводилось общеклиническое, бактериологическое и иммунологическое обследование, включающее иммунофено-типирование лимфоцитов, экспрессирующих CD 3, CD 7, CD 4. CD8, CD 22 рецепторы, методом непрямой иммуиофлюо-рссценции.

Установлено, что у обследованных больных с кожи выделяются патогенные и/или условнопатогенные штаммы стафи-локока - золотистый стафилококк в монокультуре у 20% больных, сапрофитный/эпидермальный стафилококк - у 33%, т1 xl-стафилококки получены у 29% пациентов. В остальных случаях выделялись стафилококки в сочетании со стрептококком, синегнойной палочкой, гемолитической кишечной палочкой (по 2%) грибами рода Ксшдида (5%) и др. Для этой категории больных характерен нормальный уровень лейкоцитов (5,8±0,37; р>0,05) нейтрофилов (3,48±0,32; р>0,05), умеренный моноцитоз и лимфопения (1,69+0,12; р<0,05) периферической кровп, диспропорция CD лимфоцитов за счет дефицита СОЗ-экспрессирующих клеток (43,3±1,34; р<0,01). увеличения удельного веса NK-клеток, достоверной С022-лим-фоиении (0.13±0,07; р<0.01) и снижения CD4/CD8 до

1,19*0.07; р<0,01).

Таким образом, у больных рецидивирующим фурункулезом выявлен стафилококковый дисбактериоз кожи, дефицит CD3- и CD22-no3HTHBHbix лимфоцитов, снижение иммуноре-гуляторного индекса, что позволяет констатировать комбинированный характер иммунной недостаточности. Выявленные нарушения необходимо учитывать при проведении диагностических и лечебно-реабилитационных мероприятий, включать иммунодиагностику и иммунотерапию в стандарт лечения этой категории больных.

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИММУНИТЕТА ПРИ ЖЕЛТУШНЫХ ФОРМАХ ГЕПАТИТОВ В, С и В+С

Гусев Д.А., Жданов К.В., Лобзин Ю.В., Симбирцев A.C.

Военно-медицинская академия,

ГосНИИ ОЧБ,

Санкт-Петербург. Россия

Целыо настоящего исследования явилось сравнительное изучение показателен функционального состояния иммунной системы при манифестных формах парентеральных вирусных гепатитов.

Под нашим наблюдением находились 48 больных с гепатитом В (ГВ), 21-е гепатитом С (Г'С) и 33 - с микст-гепатитом В+С (ГВ+С). Все пациенты были мужчинами в возрасте от 16 до 32 лег. Диагноз верифицировался на основании об-

наружения в крови специфических маркеров HBV и HCV-инфскции с применением ИФА и ПЦР. Первичное иммунологическое обследование проводилось в периоде разгара заболевания, контрольное - в периоде реконвалесценции. Оно включало определение в крови: количества лимфоцитов и их субпопуляций: CD3, CD4, CD8, CD4/CD8, CD20, CD25, HLA

II, CD16; спонтанной, индуцированной продукции и сывороточного содержания IL-lß, IL-2, IL-8; функциональной активности лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов; компонентов комплемента (СIq, СЗ, СЗа, СН50, С4); неспецифи-ческнх иммуноглобулинов классов IgM, IgG, IgA и ЦИК.

В ходе первичного изучения было установлено, что при всех сравниваемых вариантах вирусных гепатитов наблюдались: снижение содержания основных субпопуляций Т-лим-фоцитов (CD4 , CD8 ) на фоне нормального общего количества зрелых Т-лимфоцитов (CD3 ), гиперстимуляция В-звена иммунитета (увеличение числа CD20 , IgM, IgG, ЦИК), повышенная продукция провоспалительных цитокинов (IL-lß, IL-8), резкий дефицит IL-2, снижение функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов. При этом если для ГВ в большей степени были характерны проявления Т-клеточной иммуно-супрессии, то для ГС - возможный сдвиг в сторону Т-хелперов 2 типа. В то же время иммунологические изменения при ГВ+С были во многом схожими с ГВ.

Результаты контрольного иммунологического обследования, проведенного перед выпиской из стационара, показали, что при ГВ отмечалась тенденция к восстановлению числа CD4 , CD8 , CD20 клеток. Тогда как при ГС и ГВ+С наблюдались еще более выраженные, по сравнению с первичным изучением, изменения показателей клеточного звена - Т-кле-точная иммуносупрессия, существующая на фоне сохраняющейся активации В-системы иммунитета и гиперпродукции провоспалительных цитокинов. Вероятной причиной этому могла служить персистенция HCV-инфскции у данной категории пациентов вследствие переключения иммунного ответа с Т-хелперов 1 типа на Т-хелперы 2 типа.

Таким образом, полученные данные свидетельствовали о значительных изменениях как со стороны клеточного, так и со стороны гуморального иммунитета при всех сравниваемых вариантах гемоконтактных вирусных гепатитов. Кроме того, тот факт, что клиническое выздоровление именно у больных с ГС и ГВ+С не сопровождалось нормализацией иммуно-па-тологических сдвигов, может определять высокую частоту хронизации инфекционного процесса HCV этиологии.

АКТИВНОСТЬ ЛАЙМ-Б0РРЕЛИ03А В ОСТРУЮ СТАДИЮ ПО ДАННЫМ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЫВОРОТОЧНОГО УРОВНЯ ЛАКТОФЕРРИНА

Данилов A.B., Лаврентьева И.В., Рязанцева Е.В., Данилова Т.Г., Цыганова Л.А.

Ярославская государственная медицинская академия, Ярославская областная клиническая больница, Ярославль, Россия

При Лайм-боррслиозе (ЛБ) происходит мобилизация защитных систем организма, в том числе механизмов неспеци-фичсской резистентности, к которым относится и маркер вторичных гранул нейтрофилов - лактоферрин (ЛФ). В литературе полностью отсутствуют данные о характере синтеза ЛФ при остром ЛБ и в динамике после перенесенного ЛБ.

Цель исследования. Выявить характер изменения сывороточного уровня ЛФ в острый период ЛБ и в динамике после перенесенного ЛБ. Оценить возможность использования

ЛФ в качестве критерия активности воспалительного процесса при ЛБ и его прогностическую ценность.

Материалы и методы. На предмет наличия постлаймс-кого синдрома (ПЛС) было обследовано 60 больных острым ЛБ и 79 человек, перенесшие ЛБ 0,5-2,5 года назад. У всех больных острым ЛБ и у 42 человек из диспансерной группы иммунофсрментным методом определяли содержание ЛФ в сыворотке крови.

Результаты. У больных ЛБ в острую стадию выявлен значительный рост сывороточного уровня ЛФ (2743,67±236,55 нг/мл) по сравнению с таковым у здоровых лиц (484,35±23,76; р<0,001). Содержание ЛФ в крови мужчин превышало таковое у женщин (р<0,05). Уровень ЛФ коррелировал с выраженностью лихорадки у больных ЛБ (р<0,05). В результате лечения антибиотиками уровень ЛФ снизился на 31,5% (р<0,01), однако остался достоверно более высоким, чем в группе контроля (р<().0()1).

У 18 человек из 79 обследованных в диспансерной группе наблюдался ПЛС (22,8%), что соответствовало данным литературы (15-53%). Частота выявления ПЛС не зависела от пола, у большинства больных выявлялись симптомы поражения опорпо-двпгательного аппарата (83,3%). У больных с ПЛС в острый период Л Б отмечались более длительный инкубационный период, высокая лихорадка большей продолжительности, высокий титр антител к Borrelia burgdorferi, выявляемых в рНИФ (р<0,05). Средний уровень ЛФ в обследованной группе был достоверно выше, чем в группе контроля (р<0,01), причем существенно более высокие цифры ЛФ обнаруживались у женщин (р<0,02). Содержание ЛФ не зависело от наличия или отсутствия признаков ПЛС, однако у 59,2% обследованных диспансерной группы был выявлен диагностический титр антител к бор-релии.

С использованием методов кластерного анализа (К-means) показано, что сывороточный уровень ЛФ является достоверным показателем, при помощи которого всю выборку больных острым ЛБ удается разделить на две наиболее различающихся группы. Выделено две степени активности острого ЛБ: при 1 степени активности уровень ЛФ сыворотки крови не превышал 2000 нг/мл, при 2-й степени

- находился в пределах 2000-7000 нг/мл. Примечательно, что во второй группе обнаруживался более длительный инкубационный период (р<0,05). В этой группе также имела место тенденция к более высокой и длительной лихорадке (р<0,1), а также следующие недостоверные изменения: позднее удаление клеща, поздняя госпитализация, больший размер эритемы, высокое СОЭ и количество сегментоядерных иейтрофиловв периферической крови, рост уровня IgA, IgG, церулоплазмина. Однако ни один из этих показателей в действительности не позволял достоверно диагностировать активность заболевания.

Выводы. В острую стадию ЛБ отмечается рост сывороточного уровня ЛФ, снижающегося после антибиотико-терапии. Через определенное время после перенесенного ЛБ в сыворотке крови может сохраняться повышенный уровень ЛФ, что нужно учитывать при использовании ЛФ для диагностики активности воспалительных заболеваний. Содержание ЛФ в крови может служить в качестве диагностического критерия активности ЛБ в острую стадию, что позволит также осуществлять прогноз шансов развития ПЛС у больных ЛБ. Особенности течения острого ЛБ у больных с ПЛС соответствуют, по нашим данным, 2-й степени активности ЛБ. Вероятно, такие больные должны получать более активную антибиотикотерапию в острый период ЛБ.

ИНДУКЦИЯ ГУМОРАЛЬНОГО И ЛОКАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА ПОСЛЕ ИММУНИЗАЦИИ ВЗРОСЛЫМ ВАРИАНТОМ ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ ДЕТЕЙ 3-6 ЛЕТ

Дешева Ю.А., Донина С.А., Григорьева Е.П., Баранцева И.Б., *Суховецкая В.Ф., *Дриневский В.П., *Ерофсева М.К., Найхин А.Н., Руденко Л.Г.

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН,

Санкт-Петербург, Россия

*Научно-исследовательский институт гриппа РАМН, Санкт- Петербург, Россия

Российская живая холодоадаптированная гриппозная вакцина (ЖГВ) производится в 2-х вариантах: взрослый вариант ЖГВ рекомендован для детей от 7 лет, подростков и взрослых, детский вариант - для детей от 3 лет. Отличие взрослого и детского вариантов вакцин заключается в числе пассажей при сниженной темпе-ралуре и количестве мутаций базового донора аттенуации вакцинных штаммов вирусов гриппа А. Вакцина применяется интрана-зально однократно для взрослых и двукратно (с 3-х недельным перерывом) для детей. Необходимость двукратного введения детского варианта вакцины затрудняет проведение вакцинопрофилак-тики в предэпидемический период из-за большого количества медицинских отводов вследствие сезонного подъема ОРЗ и осложняет работу практического здравоохранения по проведению плановых прививок против других инфекций. Задачей исследования явилось изучение прививочных свойств взрослого варианта ЖГВ в виде единого препарата для взрослых и детей при однократном применении. Всего было привито 185 детей 3-6 лет в детских садах Ленинградской области. При использовании взрослого варианта ЖГВ среди детей 3-6 лет реактогенность была низкой и не превышала допустимых норм, регламентированных техническими условиями на препарат. Через 21 день после вакцинации серонегативных детей 4-х кратный прирост сывороточных антител к вирусу гриппа А (Н1N1) наблюдался у 25% обследованных, в то время как прирост 1§А в носовых секретах к данному сероти-пу вируса гриппа А - у 44%. В целом 4-х кратным приростом либо сывороточных, либо локальных а! (тител к вирусу гриппа А (Н1N1) на прививку отреагировали 50% обследованных. К вирусу гриппа А(НЗ№) сероконверсии сывороточных антител наблюдались у 66% наблюдаемых, локальных антител - у 34%, к вирусу гриппа В - у 53% и 22% соответственно. При этом прирост средне-гео-метрических титров сывороточных антител составил 2,3-4,2, локальных - 1,6-2,9. Таким образом, хотя количественные параметры поствакцинального иммунного ответа у детей 3-6 лет были ниже, чем у взрослых или детей старшего возраста, интраназаль-ное введение взрослого варианта ЖГВ позволило стимулировать выраженный гуморальный общий и местный иммунный ответ. Полученные данные позволяют рекомендовать взрослый вариант ЖГВ детям от 3-х лет при однократном введении.

ИММУНОПАТОГЕНЕЗ ХРОНИЧЕСКИХ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ

Дмитриева Е.В., Буеверов А.О., Москалева Е.Ю., Коган Е.А., Ивашкин В.Т., Северин Е.С.

Институт молекулярной медицины Московской Медицинской Академии им. И.М. Сеченова,

Центр медико-биологических и экологических проблем, Москва

Вирусные гепатиты В и С характеризуют широкое распространение и преимущественно хроническое течение.

ТАБЛИЦА

Исследуемая группа Уровень апоптоза лимфоцитов,% Уровень апоптоза гранулоцитов,%

Здоровые добровольцы 1,2+0,2 9,2+1,6

Больные ХВГ 7,7±1,3 (р < 0,05) 15,3+1,8 (р < 0,05)

Определяющим фактором в вероятности персистенции вируса и развитии хронического заболевания печени являются взаимоотношения между вирусом и иммунной системой организма человека. Иммунный ответ играет решающую роль как в элиминации вируса, так и в патогенезе заболевания печени. Хотя механизм повреждения ткани печени при вирусных гепатитах до конца не изучен, есть основания считать, что это иммуноопосредовав-ннный процесс, происходящий при участии системы Fas/ FasL. В связи с этим целью настоящей работы явилось изучение уровня экспрессии Fas и FasL на клетках печени и лейкоцитах периферической крови больных хроническим вирусным гепатитом (ХВГ) в сравнении с уровнем апоп-тоза этих клеток. Для этого на 14 биоптатах печени больных ХВГ В и С, фиксированных формалином и залитых в парафин, проведено иммуногистохимическое исследование уровня экспрессии Fas и FasL с помощью моноклональных антител (Pharmingen) с использованием стандартного етрептавидин-биотин-пероксидазного метода, а также оценка степени повреждения ДНК клеток печени с помощью TUNEL-тсста in situ. Апоптоз свсжевыделенных мононуклеарных и полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови больных ХВГ и 15 здоровых добровольцев оценивали с помощью проточной цитофлуориметрии с йодистым пропидием в качестве флуохрома путем подсчета гиподнилоидных клеток. Уровень экспрессии Fas и FasL на клетках крови изучали с помощью проточной ци-тофлуоримсiрии после окрашивания моноклональными антителами (Pharmingen). У больных ХВГ обнаружена диффузная экспрессия Fas на мембране гепатоцитов в виде зерен, а также на клетках воспалительного инфильтрата. Ядра многих гепатоцитов больных ХВГ являются TUNEL-положительными. Мопонуклеарные клетки инфильтрата в паренхиме печени и портальных трактах экспрессируют FasL и часто являются TUNEL-положительными. При исследовании уровня апоптоза лейкоцитов периферической крови у больных ХВГ в сравнении со здоровыми добровольцами были обнаружены достоверные различия (табл.).

Уровень экспрессии FasL на лимфоцитах периферической крови больных ХВГ превышал таковой у здоровых добровольцев, что свидетельствует о наличии в периферическом русле больных ХВГ активированных лимфоцитов. Неясным остается вопрос, появляются ли активированные лимфоциты и лимфоциты в состоянии апоптоза в периферической крови больных ХВГ в следствие рециркуляции из зон активного воспаления в ткаии печени, или же обнаруженные изменения индуцируются непосредственно в периферическом русле в процессе репликации вирусов в этих клетках. В любом случае это предопределяет нарушение защитных функций этих клеток и может способствовать персистенции вируса и хронизации заболевания. Кроме того, можно заключить, что система Fas/ FasL играет важную роль в патогенезе хронических вирусных гепатитов.

НОВЫЙ МЕТОД СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНОГО ПАРОТИТА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ НУКЛЕОКАПСИДНОГО БЕЛКА,

ЭКСПРЕССИРОВАННОГО В РЕКОМБИНАНТНЫХ ДРОЖЖАХ

Жвирблене А., Самуель Д.*, Ли-Д.*, Гедвилайте А., Саснаускас К.

Институт биотехнологии,

Вильнюс, Литовская Республика,

* Центральная лаборатория здравоохранения.

Лаборатория респираторных и нейрологических вирусов,

Лондон, Великобритания

Вирусный паротит нередко сорповождается серьезными осложнениями, включая нарушения центральной нервной системы. Возбудителем паротита является пара-микеовирус, состоящий из 7 различных структурных белков. Ранним диагностическим признаком инфекции паротита служит появление антител к нуклеокапсидному белку, который играет важную роль в упаковке вирусного генома.

Разработанный нами иммунофермен гный метод серодиагностики вирусного паротита основан на определении нук-леокапсид-специфических антител в сыворотке крови, используя для этого антитела к иммуноглобулинам человека, рекомбинантный нуклеокапсидный белок и пероксидазой меченые моноклональные антитела к нему. Нуклеокапсидный белок вируса был экспрессирован в рекомбинантных дрожжах S. cerevisiae и очищен из дрожжевого экстракта при помощи ультрацентрифугирования. Исследование структурных и антигенных свойств данного белка показало, что он способен к формированию вирусоподобных частиц и обладает высокой иммуногенностыо в мышах. Нами также были получены и охарактеризованы моноклональные антитела к рекомбинантному нуклеокапсидному белку, которые взаимодействовали с нативным вирусом в инфицированных клетках в культуре.

Для оценки специфичности и чувствительности метода нами было исследовано 108 образцов сыворотки крови, предварительно исследованных на присутствие антивирусных антител методом радиоиммунологического анализа: 18 положительных и 90 отрицательных, в том числе 26 образцов с высоким содержанием ревматоидного фактора. Результаты обоих тестов полностью совпали (18/18 и 90/90). Таким образом, чувствительность и специфичность метода оценивается в 100%. Данный метод может быть использован для диагностики острого вирусного паротита, исследования эпидемиологической ситуации, а также для оценки эффективности вакцинации против этой инфекции.

“Дни иммунологии в СПб ‘2001 ’

Медицинская иммунология

ИММУНОСЕРОДИАГНОСТИКА ПНЕВМОКОККОВОЙ И ХЛАМИДИЙНОЙ ИНФЕКЦИЙ В КОЛЛЕКТИВЕ ВОЕННОСЛУЖАЩИХ

Жоголсв С.Д., Жоголев К.Д., Огарков П.И., Вишнякова Л.А.

Военно-медицинская академия, НИИ пульмонологии СПбГМУ, Санкт-Петербург, Россия

Введение. В последние годы в воинских коллективах участились вспышки пневмоний и других острых заболеваний органов дыхательной системы, этиология которых нередко остается нераспознанной, что затрудняет осуществление специфической профилактики и этиотропного лечения этих заболеваний.

Цель исследования, изучить с помощью иммуносероло-гических методов роль Streptococcus pneumoniae, Chlamydia pneumoniae и их ассоциаций в этиологии вспышки острых заболеваний верхних и нижних отделов респираторного тракта в коллективе военнослужащих.

Материалы и методы. В военном учебном отряде с момента приема ноябрьского пополнения и в течение всего шестимесячного срока пребывания в нем личного состава осуществлялось клиническое, серологическое и эпидемиологическое наблюдение за очагом респираторных инфекций. 63 заболевших были обследованы серологически на наличие антипневмококковых антител в реакции непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) и антихламидийных антител при помощи бивалентного ИФА IgG Immunocomb ORGENICS. Этиологический диагноз пневмококкоза или хламидиоза ставили по нарастанию титров антител в парных сыворотках в четыре и более раз или по высоким титрам антител в сыворотке, полученной в конце заболевания. Диагностическими считались титры антипневмококковых антител 1:640 и более и антихламидийных антител - 1:512 и более.

Результаты. Было зарегистрировано 197 случаев ОРЗ, 47 случаев острых бронхитов и 51 случай пневмоний. От вспышек респираторных инфекций в предыдущие годы данная вспышка отличалась растянутостью во времени, вялотекущим, но более продолжительным течением большинства случаев заболеваний.

Из 18 больных пневмониями, обследованных серологически, хламидиоз и пневмококкоз был диагностирован с одинаковой частотой - в 12 (66,7%) случаях, причем в 9 (50%) случаях наблюдалась микстиифекция. Моноинфекций (только хламидийной или только пневмококковой этиологии) обнаружено по 3 (16,7%) случая.

Из 15 больных острыми бронхитами как хламидиоз, так и пневмококкоз обнаружен в 9 (60,0%) случаях. Микстинфск-ция выявлена в 7 (46,7%) случаях, а моноинфекцпй наблюдалось по 2 (13,3%) случая.

Из 30 обследованных больных ОРЗ хламидиоз диагностирован в 15 (50,0%) случаях, а пневмококкоз в 22 (73,3%) случаях. Микстинфскция наблюдалась у 11 (36,7%) больных, монохламидиоз в 4 (13,3%) случаях, а монопневмококкоз - в 11 (36,7%) случаях.

Суммарно при серологическом обследовании 63 больных острыми заболеваниями органов дыхания различного уровня поражения хламидиоз обнаружен в 36 (57,1%) случаях, а пневмококкоз в 43 (68,3%) случаях. Ассоциированная пнев-мококко-хламидийная инфекция выявлена в 27 (42,9%) случаях, монохламидийная инфекция в 9 (14,3%) случаях, а мо-нопиевмококковая инфекция в 16 (25,4%) случаях. В 11 (17,5%) случаях этиология заболеваний органов дыхания не

была установлена: результаты серологических тестов на Str. pneumoniae и Ch. pneumoniae оказались диагностически незначимыми.

Выводы. Таким образом, нами впервые в нашей стране установлена эпидемическая вспышка острого респираторного хламидиоза, наслоившаяся на вспышку пневмококковой инфекции. По всей вероятности Streptococcus pneumoniae и Chlamydia pneumoniae действуют взаимообусловлено, вызывая поражения как верхних, так и нижних отделов респираторного тракта.

ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У БОЛЬНЫХ ЛЯМБЛИ030М

Журавлева Т.В., Долгушин И.И., Гавриш Т.В.

Государственная медицинская академия,

Челябинск, Россия

В настоящее время лямблиозная инфекция относится к числу наиболее часто встречаемых паразитарных болезней человека. Несмотря на большое разнообразие противопара-зитарных препаратов (метронидазол, тинидазол, орнидазол, фуразолидон, макмирор), вопросы лечения лямблиоза полностью не решены в связи с недостаточной паразитологической активностью данных препаратов и их токсичностью. В то же время ряд клинических наблюдений и экспериментов свидетельствуют о том, что спонтанное исчезновение лямблий является главным образом результатом иммунологических процессов в организме.

В связи с этим целью нашей работы явилось изучение иммунного статуса у больных лямблиозом. Для выявления инфицирования лямблиями применяли стандартный метод формалин-эфирного обогащения, утвержденный “Методическими Указаниями 4.2.735-99 М3 РФ”. Для оценки иммунного статуса использовали иммунологические тесты второго уровня.

Было обследовано 23 пациента с лямблиозом: 16 женщин и 7 мужчин в возрасте от 16 до 56 лет. В клинической картине преобладали диспептический синдром (100%), болевой (73,9%), астено-невротический (78,3%), аллерго-дерматоло-гичсский (30,4%).

Изменения в иммунной системе больных лямблиозом характеризовались лейкопенией, снижением CD7 ,CD3,CD4-клеток и соотношения CD4 /CD8 . На фоне Т-клеточной лим-фопении выявлено повышение CD 10 , CD34 , CD95 -клеток. Содержание сывороточных иммуноглобулинов IgA и IgM не отличалось от показателей здоровых, хотя имело тенденцию к снижению. Уровень IgG был в 1,5 раза ниже нормы. Определение количества компонентов комплемента показало снижение С1, С2, СЗ, С5 - компонентов и повышение С4- компонента комплемента. У трети пациентов была снижена фагоцитарная активность нейтрофилов.

Помимо этого, отмечено, что пациенты, резистентные к противопаразитарной терапии, имели наиболее низкие показатели Т-клеточных маркеров, фагоцитарной активности нейтрофилов и уровней компонентов комплемента и наиболее высокое содержание клеток, опосредующих апоптоз CD95+.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют

о выраженных изменениях в иммунной системе больных лямблиозом, что позволяет расширить диапазон поиска эффективных средств для лечения лямблиоза и использовать имму-нокоррегирующую терапию.

КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ГАСТРИТА И ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ, ВЫЗВАННЫХ ВИРУСНО-БАКТЕРИАЛЬНЫМИ АССОЦИАЦИЯМИ

Зотова В.В., Темникова Н.В., Мационис A3., Ткачев A.B.

Областная детская больница,

I Ъсударственный медицинский университет. Областное патологоанатомическое бюро, Ростов-на-Дону, Россия

В последние годы появились работы, свидетельствующие

0 связи герпетической (ВПГ) и цитомегаловпрусной (ЦМВ) инфекции с поражением верхних отделов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ).

Цель работы: изучение клинико-иммунологических и морфологических особенностей течения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки (ЯБДПК) и хронического гастрита (ХГ) у больных при поражении гастродуоденальной зоны бактериально-вирусными ассоциациями.

Под наблюдением находились 104 больных: 53 с хроническими НР-ассоцинрованным гастритом и 51 человек с ЯБДПК.

У больных ЯБДПК и ХГ отмечались нарушения в Т-звене иммунитета, характеризующиеся повышением числа CD8 лимфоцитов. При ЯБДПК установлено снижение числа CD3 лимфоцитов и повышение CD16 лимфоцитов, а при ХГ -возрастание активированных HLA-DR /CD3 лимфоцитов. При иммуногистохимпческом исследовании биоптатов слизистой оболочки (СО) ЖКТ была выявлена инфильтрация СО CD3 лимфоцитами. В строме ворсинок и в области лимфоидных фолликулов лимфоциты были представлены CD8 клетками. CD20 лимфоциты обнаруживались в глубоких слоях слизистой. Отмечалось усиленное отложение легких (лямбда) и тяжелых (каппа) цепей IgA. При цитологическом исследовании у всех больных была выявлена обсеменснность СО Helicobacter priori (HP). При окрашивании но модифицированной методике Steiner у 93% больных выявились клетки, пораженные цитомегаловирусом и/или вирусом простого герпеса.

При исследовании специфических антител к ЦМВ и ВПГ

1 и II типов было установлено, что у 93,1% больных ХГ и 92,3% больных ЯБДПК имелась смешанная вирусная (ЦМВ и ВПГ) инфекция.

Таким образом, клинико-лабораторные, иммунологические и морфо-гистохимичсскис исследования свидетельствуют об участии вирусной инфекции (ЦМВ и ВПГ 1 и II типов), наряду с HP, в патогенезе ХГ и ЯБДПК.

ВЛИЯНИЕ ЛЕЧЕБНОЙ ЭНДОСКОПИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЛАЗЕРА НА П0КАЗАТЕЛИИММУНН0Г0 СТАТУСА БОЛЬНЫХ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ,АССОЦИИРОВАННЫМИ С ИНФЕКЦИЕЙ Н.PYLORI

Иваненко Т.В., Москалей О.В., Терещенко С.Г.

Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М. Ф.Владимирского, Москва, Россия

Введение. Проблема инфицирования И.pylori является одной из самых актуальных в гастроэнтерологии. Наличие этого микроорганизма кардинально меняет тактику лечения

ассоциированных с ним заболеваний и в значительной мерс определяет их прогноз. В настоящее время антихсликобакте-риальная терапия является ключевым этапом в лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки; разработано много ее вариантов, включающих, как правило, несколько лекарственных средств. Но, к сожалению, стоимость препаратов остается весьма высокой. В связи с этим, остается необходимость в разработке новых подходов к лечению больных данных патологией.

В то же время, наличие длительно персистирующсй инфекции может приводить к развитию вторичного иммунодефицита, поэтому, на наш взгляд, в комплексное обследование данного контингента больных следует включать иммунологические тесты и, при необходимости, проводить иммунокоррекцию. Однако этот аспект лечебно-диагностической стратегии при заболеваниях, ассоциированных с инфекцией Н. pylori, разработан еще недостаточно.

Цель исследования. Изучение иммунного статуса у больных с торпидным течением язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки и оценка иммуномодулирующего действия низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ).

Материалы и методы. Обследовано 50 больных в возрасте от 33 до 72 лет, у которых в биоптагах слизистой обнаружен Н. pylori, а в сыворотке выявлены специфические антитела в диагностических титрах. На фоне базисной противоязвенной терапии (блокаторы Н,-гистаминорецепторов, ангаци-ды) проводился курс лечебной эндоскопии с использованием спектроскопического прибора, в основе действия которого, лежит излучение гелий-неонового лазера, применяемого курсами по 9 сеансов через день.

Оценка иммунного статуса включала определение основных субнопуляций лимфоцитов (CD3 , CD4 , CD8 , CD16 , CD19 ), показателей фагоцитоза (латекс-тест, НСТ-гест), содержания сывороточных IgG, IgM, IgA. Уровень IgG к Н. pylori определяли методом ИФА с помощью тест-системы “11ELCONS-AB IgG”.

Результаты. У больных отмечались изменения исходных показателей иммунного статуса: дисбаланс регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов (90%), снижение фагоцитарной активности нейтрофилов (74%), повышение уровня сывороточных IgG (38%) и снижение уровня IgA (32%).

Иммунологический мониторинг выявил иммуномодулирующий эффект НИЛИ, заключающийся в нормализации суб-популяционного состава Т-лимфоцитов, преимущественно за счет возросшего количества CD4 клеток, оптимизации фагоцитарной активности нейтрофилов и достижения сбалансированности концентраций сывороточных Ig. Эрадикация Н. pylori наступила у 84% больных, концентрация специфических антител снизилась, в среднем на 35%.

Заключение. У больных с торпидным течением язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки развивается вторичный иммунодефицит, для коррекции которого можно использовать лечебную эндоскопию с НИЛИ.

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ

Кисина Т.Е., Кнорринг Б.Е., Калинина Н.М., Арчакова Л.И., Басек Т.С.

Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины МЧС России, Научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии,

Сап кт-Пет ер бург, Ро с с i ш

Как известно, возбудителем туберкулеза является Mycobacterium tuberculosis, кислотоустойчивый внутриклеточ-

ный паразит, характеризующийся многообразием морфологических форм, высокой адаптивностью и способностью приобретать лекарственную устойчивость. Только у 7-10% инфицированных лиц развивается клиника туберкулеза. Вероятность развития болезни при инфицировании в первую очередь зависит от состояния иммунной системы. Вторичные иммунодефициты и другие нарушения иммунной системы, а также протекание иммунного ответа преимущественно по Th, типу увеличивают риск развития этого заболевания. Кроме того, на рост заболеваемости и смертности от туберкулеза влияют социальные причины, такие как условия жизни, скученность населения и стресс. Первыми клетками, которые сталкиваются с М. tuberculosis являются фагоциты, ог их активности зависит эффективность элиминации возбудителя. В настоящей работе были обследованы 22 человека с легочными формами туберкулеза. Нами определялись спонтанная и индуцированная бактсрицидность (по показателям НСТ-тсс-та), адгезионная способность (процент клеток прикрепившихся к пластику), и фагоцитоз S. cerevisae (фагоцитарное число и фагоцитарный индекс) нейтрофилов периферической крови. Исходя из полученных данных, пациенты были разделены на 2 группы. В первую группу (п=7) вошли пациенты с первично выявленным туберкулезом, с отрицательной динамикой, не получавшие какие-либо иммунотрониыс препараты, е длительностью заболевания менее года. Пациенты этой группы отличались сниженными показателями адгезии и фагоцитоза (р<0,05) по сравнению с контрольной группой (п=5). Показатели HCT-теста также были снижены по отношению к здоровым донорам, но это было статистически недостоверно. Во вторую группу (п=7) вошли остальные пациенты, с более давним сроком начала болезни, получавшие длительное время патогенетическое лечение. Эти пациенты отличались значительным повышением бактерицидное™ нейтрофилов (р<0,05) по сравнению с контрольной группой. Показатели адгезии и фагоцитоза были в пределах нормы. Внутри каждой из групп независимо от срока от момента инфицирования функциональная активность нейтрофилов также зависела от возраста пациентов. Так, в группе более пожилых людей (средний возраст 41 ±4 года) бактерицидность, адгезивность и фагоцитарная способность нейтрофилов были значительно ниже, чем в группе молодых людей (средний возраст 19±4 года), у которых значения этих показателей, были чуть выше нормы. Можно предположит!,, что у молодых пациентов усиление функций нейтрофилов было ответом на М. tuberculosis, чего не отмечается у пожилых людей.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ HELICOBACTER PYLORI-АССОЦИИ РОВАН Н ЫХ ГАСТРОДУОДЕНАЛ ЬН ЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У ДЕТЕЙ

Козлова И.П., Варюшина Е.А., Симбирцев A.C., Александрова В.А.,

МАПО, НИИ особо чистых биопрепаратов,

Сан кт- Пет ер бург

Цель работы: изучение влияния инфекции Helicobacter pylori (Нр) на показатели иммунного статуса у детей с гастродуоденальной патологией. Обследовано 65 детей в возрасте 9-16 лет с хроническими заболеваниями гастродуоденальной зоны. Всем детям проведена ФЭГДС со взятием биоптатов слизистой оболочки желудка (СОЖ) из антрального отдела, бактериологическое исследование биоптатов СОЖ, определение уровня специфических IgG к Нр и его компонентам (CagA-токсин, уреаза) методом им-

муноферментного анализа. Иммунологическое обследование включало в себя определение субпопуляций 'Г-лим-фоцитов, спонтанной пролиферации лимфоцитов, реакцию бластной трансформации лимфоцитов (спонтанную и индуцированную митогенами - ФГА и PWM), определение показателей фагоцитоза и НСТ-теста (спонтанного и индуцированного), исследование продукции цитокинов в крови (1L-2, IL-8). В биоптатах СОЖ методами иммуногистохимии определяли уровень провоспалительных цитокинов (IL-1 ос, IL-1|3, 1L-8), реакцию на миелоперокси-дазу и эндогенную перекись. По данным фиброгастрос-копии у 33 детей выявлен поверхностный гастродуоденит, у 20 детей - эрозивный гастродуоденит, у 11 - язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки и у одного - язвенная болезнь желудка. Наличие инфекции Н.pylori по совокупности бактериологического и серологического методов подтверждено у 35 детей (53,8%), причем большинство из них инфицированы токсигеными штаммами Нр, о чем свидетельствуют высокие титры анти CagA-антител. Эрозивно-язвенные повреждения СОЖ коррелируют с ток-сигенностью штаммов Нр и степенью обсемененности слизистой желудка (р<0.05). Клинически болевой абдоминальный синдром более выражен у Нр-инфицированных пациентов, частота диспептических явлений и признаков астеновегетативного синдрома существенно не отличалась в сравниваемых группах. Количество лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови не зависело от инфицированное™. При анализе субпопуляционного состава лимфоцитов (CD4, CD8) не выявлено достоверных различий в группах Нр(+) и Нр(-) пациентов. Спонтанная пролиферация лимфоцитов снижена у Нр(+) пациентов, однако при этом индуцированная активность реакции бластной трансформации лимфоцитов (в присутствии ФГА) достоверно повышена. Показатели фагоцитарной активности и фагоцитарного индекса не претерпевают значительных изменений в зависимости от наличия инфекции. У Нр (+) детей отмечено достоверное снижение активности спонтанного НСТ-теста, но при этом повышен уровень индуцированного НСТ-теста. В группе Нр(+) CagA(+) пациентов обнаружено достоверное снижение уровня IgA в крови, что косвенно свидетельствует о снижении местной иммунной защиты СОЖ, и, как следствие, у этих детей гораздо чаще встречаются эрозивно-язвенные повреждения слизистой (р<0,05). Отмечена тенденция к повышению уровней цитокинов в крови (1L-2, 1L-8) у Нр-инфицированных больных, особенно индуцированная продукция этих цитокинов (р<0,05). При иммуногистохимическом исследовании биоптатов СОЖ уровень продукции провоспалительных цитокинов IL-1J3 и IL-8 оказался существенно выше у Нр-инфицированных больных. Отмечена тесная корреляция между содержанием IL-8 в крови и уровнем его продукции в слизистой оболочке желудка. Практически у всех детей выявлена высокая активность миелопе-роксидазы и эндогенной перекиси в тканях, что можно расценить как неспецифический маркер активности воспалительного процесса в СОЖ. Выводы: в группе Нр-инфицированных пациентов отмечено снижение спонтанной пролиферации лимфоцитов и спонтанного НСТ-теста при повышении индекса индуцированной бластной трансформации лимфоцитов. Снижение уровня IgA в крови и повышенная продукция провоспалительных цитокинов (IL-1(3, IL-8) в СОЖ у Нр(+) CagA(+)nanHeHTOB коррелирует с высокой частотой эрозивно-явенных повреждений у этих детей. Уровни 1L-2 и IL-8 также выше при наличии Нр-инфекции.

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИММУНОТЕРАПИИ ИНТЕРФЕРОНАМИ И ПРОТИВО-ВИРУСНЫМИ ПРЕПАРАТАМИ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ

Козлова C.H., Савельева Е.В.

Уральская государственная медицинская академия, Академический медицинский центр “Семья и здоровое поколение’’, Екатеринбург, Россия

Актуальность исследований по проблеме цнтомегалови-русной и хлампдпйиой инфекций обусловлена их широким распространением в популяции населения, неуклонным ростом частоты инфицирования.

Цель исследовании. Разработать показания к рациональной иммунотерапии цптомсгаловируепои инфекции у детей раннего возраста и оценить эффективность применения ци-токннов и противовирусных препаратов.

Задачи исследовании: Планировалось выявить клинико-иммунологические особенности моноцитомегаловирус-иой инфекции, цитомегаловирусно-хламидийно-уреплазмен-ной ассоциации и определить прогностические критерии риска формирования бронхообструктивного синдрома у детей.

Материалы и методы. Комплексное обследование проведено у 142 детей в возрасте до 3 лет, из них цитомсгалови-русно-хламидийно-уреаплазмепная ассоциация диагностирована у 54, ЦМВ- инфекция - 47, хламндийная - 30, урсаплаз-менная инфекция - у 1 1 больных. Оценка поверхностных структур лимфоцитов проведена у 30 детей пммунофспоти-пированием с определением CD3 ,CD4 , CD8 , CD19 .CD23 , CD16/56 клеток на проточном питометре FacScaii наборами Beetem Dickinson; фагоцитоз исследовался по методике В.М.Бермана-Е.М.Славской; уровень IgM, IgG. IgА по методу Манчнни. Этиологическая расшифровка TORCH-инфек-ций проведена методом ИФА с определением IgM и IgG, индикацией ДНК-ЦМВ в моче н крови PCR, диагностика хла-мпдий выполнена в РНИФ и PCR в соскобах с конъюнктивы, уретры, вагины п в моче. Иммунореабилнтациопную терапию получили 59 детей, индукторы интерферона (неовнр, цпкло-ферон) назначены у 39 детей, рекомбинантный а-пнтерферон (Вифсрон) - у 20.

В клинике ЦМВ-инфекции у 89% детей отмечено формирование гппертепзпонного синдрома, судорожного синдрома - у 46,8%, задержки етатпко-локомоторных функций -у 42,5%. Поражение почек с ранним мочевым синдромом диагностировано у 12,7%, патология печени у 60%, частые ОРВИ у 30%, ос трый обструктнвный бронхит у 10%, бронхиальная астма у 6%.

В отличие от ЦМВ-инфекции при хламиднпной инфекции и цнтомегаловпруспо-хламидийпо-уреаплазменных ассоциациях выявлено формирование С1)4-лимфопенпи. При TORCH-ассоцппроваппой патологии с развитием обструктив-пых бронхитов обнаружено повышение уровня С'D23-лимфо-цнтов и 2 раза по сравнению с контингентом больных без об-сгруктпвного синдрома. Селективный иммунодефицит IgA (<0,1 г/л) выявлен у 20% детей с цитомегаловпрусно-хлами-дийно-уреаплазменноп ассоциацией и у 64% уровень IgA<0,2 г/л. При ЦМВ-пнфекцпи формирование недостаточности IgA<0,1 г/л встречалось у 8,3% детей, снижение IgA<0,2 г/л -у 56%. Нами выявлена взаимосвязь активной репликации ЦМВ. по уровню антпгенурпп в моче, с продукцией IgA (i- - 0.4516: р<0.02), IgG (г=0,4391: р<0,05), при низкой степени репликации данной закономерности не отмечено. Сравнительная оценка эффективности применения индукторов ин-

терферонов (неовир, циклоферои) и рекомбинантного альфа-интерферона (виферон) в иммунореабилитации цитомегало-вирусной инфекции у детей раннего возраста показала, что назначение индукторов интерферона приводит к угнетению продукции IgG у 50%, при этом наиболее выраженное угнетение фагоцитарного звена отмечено у 54% детей, получавших неовир, по сравнению с иммунотерапией циклофероном (р<0,01). Препаратом выбора при поражении печени с цито-литическим синдромом является Виферон. Терапия Фамви-ром снижала степень антигенемии у 96% детей.

Выводы. В ходе исследования получены данные о эффективности комбинированной терапии фамвиром, ацикловиром и препаратами интерферона, даны иммунологические критерии прогноза формирования бронхообструктивного синдрома по низкоаффинному рецептору к IgE.

ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА В ОСТРОМ ПЕРИОДЕ ЛАЙМ-БОРРЕЛИОЗА

Корикова М.Ю., Лесник О.М., Мельников В.Г., Амосов М.Л., Надеждина М.В., Крестьянинова Л.Р., Базарный В.В.

Уральская государственная медицинская академия, Областная клиническая больница № 1,

Городской центр природноочаговых инфекций, г.Екатеринбург

Средний Урал является регионом с традиционно высоким уровнем заболеваемости лайм-боррелиозом. Клинические проявления данного заболевания достаточно разнообразны, в то время как типичный симптом - мигрирующая эритема, встречается не у каждого больного. Поэтому актуальна проблема лабораторной диагностики этой природно-очаговой инфекции. По существу, она основана на серологическом выявлении антител к Borrelia burgdorferi. При этом особенности формирования антител к антигенам указанного возбудителя у пациентов с различными проявлениями заболевания не описаны, что затрудняет формирование диагностического алгоритма данной нозологической формы. Это и определило цель работы - провести сравнительное изучение динамики титра специфических антител у больных с эритематозной и безэритематозной формами лайм-боррелиоза на госпитальном этапе.

Обследовано 128 пациентов в остром периоде заболевания, у которых диагноз лайм-боррелиоза был установлен на основании стандартных критериев. 65 больных имели эрите-матозную, а 63 - безэритематозную форму. Все пациенты были обследованы 2-4 кратно. Титр специфических антител определяли методом твердофазного ИФА.

Проведенное исследование позволило выявить своеобразие динамики титра антител у пациентов обеих групп. Если при безэритематозной форме титр IgM нарастал в течение 6 -15 су ток и сохранялся на высоком уровне в течение всего острого периода, то для эритематозной формы было характерным медленное увеличение уровня анти тел к 16 дню с последующим постепенным снижением после 30 суток болезни. Существенных различий в титре IgG между пациентами групп мы не обнаружили.

Установленные различия в динамике формирования гуморального иммунного ответа при лайм-боррелиозс у пациентов с различными клиническими формами болезни определяют необходимость дифференцированного подхода к интерпретации серологических тестов.

МЕТОДЫ ОБЩЕКЛИНИЧЕСКОЙ ЛИМФОЛОГИИ В РЕГУЛЯЦИИ ИММУННОГО ОТВЕТА ПРИ ГЕРПЕТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ

Косякова Н.И.

Научный Центр РАН,

Пущино, Россия

За последние годы герпетическая инфекция (ГИ) все чаще принимает затяжное течение и плохо поддается традиционным методам лечения. В патогенезе этих состояний лежат глубокие изменения в лимфатической системе, дисбаланс системы иммунитета. В связи с этим, поиск новых методов терапии ГИ становится весьма актуальным. Цель - изучить влияние методов общеклинической лимфологии (MOKJ1) на динамику иммунного ответа при герпетической инфекции. Основными показателями оценки результатов лечения стали: время купирования местных проявлений, длительность ремиссии, устойчивое подавление репликации HSV-2 в мазке (ПЦР-диагностика), динамика показателей CD8 , CD 16 , IFNa.y. Были сформированы 2 группы пациентов по 27 человек, сходные по полу, возрасту, давности заболевания, частоте обострения процесса, условиям труда и быта. Средний возраст составил 32,3±2,4 года, давность процесса 12,4±1,1 лет. Частота рецид! ib в среднем была 6 раз в течение года. Все пациенты получали базисную терапию противовирусным препаратом-валтрексом по стандартной схеме. Полиоксидоний пациентам 1-й группы вводили в/м по 6 мг через день, курсом в 10 инъекций. Пациенты 2-й группы получали полиоксидоний лимфотропно, в той же дозе, но 2 раза в неделю также курсов в 10 инъекций. Контрольная группа 0i=21) получала только Валтрекс. В результате проведенного лечения было установлено, что полная реэпители-зация у пациентов 2фуппы наступила на 3 дня раньше, длительность ремиссии увеличилась у них (37,5%) до 10-12 месяцев, более чем у 97,4% отсутствовали антигены HSV-2 в мазках после лечения и через бмес. Иммунный ответ после лечения между группами не различался, однако, через 6 месяцев только у пациентов 2 группы, сохранялся восстановленный баланс в иммунном статусе (увеличение естественных киллеров, CD8 клеток, вирус-ин-дуцировапного IFNa, митоген-индуцированного IFNy). Таким образом, включение МОКЛ в комплексную терапию ГИ позволяет сформировать стойкий положительный иммунный ответ, сократить длительность лечения и удлинить ремиссию.

ПРОТЕКТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕКОТОРЫХ ПЕПТИДНЫХ ФРАГМЕНТОВ ПОВЕРХНОСТНЫХ БЕЛКОВ NEISSERIA MENINGITIDIS

Котельникова О.В., Несмеянов В.А., Лахтина O.E., Королева И.С., Вольнииа О.М., Аллилуев А.П., Титова М.А., Короев Д.О., Жмак М.H., Иванов В.Т.

Институт биоорганической химии

им. М.М.Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН,

НИИ общей и прикладной патологии РУДН,

1-я Городская инфекционная б-ца,

Москва, Россия

Менпнгококковая инфекция (МИ) остается актуальной проблемой всемирного здравоохранения в связи с высокой летальностью и тяжелыми неврологическими последствиями, которыми она сопровождается. В экономически развитых странах практически вся заболеваемость в настоящее время определяется менингококком серогруппы В. Заболевания остальными эпидемически значимыми серогруппами (А и С) легко предотвращаются с помощью высоко эффективных вакцин против этих ссрогрупп н'а основе их капсульных полисахаридов.

Против менингококков серогруппы В вот уже более 30-ти лет не удается создать эффективной вакцины, хотя работа в этом направлении непрерывно ведется исследователями многих стран, в том числе и в России.

Один из путей создания вакцины против менингококка серогруппы В заключается в использовании синтетических фрагментов белков наружной мембраны менингококка, ответственных за стимуляцию антибактериального иммунитета и относящихся к наиболее консервативным областям этих белков.

Основой для выбора пептидов явились также теоретический расчет Т-эпитопов и наличие мотивов для связывания на антигенах главного комплекса гистосовмсстимости И класса человека и мыши.

Были синтезированны фрагменты трех белков менингококка - РогА, ОраВ и NspA. Из них были отобраны пептиды, обладавшие выраженной протективной активностью в отношении гомологичного штамма Neisseria meningitidis

Протективность пептидов оценивали по их способности защищать мышей от менингококковой инфекции и по уровню бактеремии в крови животных в опытах прямого заражения живой вирулентной культурой менингококка серогруппы В (штамм В: 15:Р1.6,17).

Полученные результаты показали, что пептиды относящиеся к консервативным участкам исследуемых белков защищали мышей в равной степени как от заражения гомологичным, так и гетерологичным штаммом менингококка - с иной серо-субтиповой принадлежностью (В:2а:Р1.2). Уровень защиты у мышей, иммунизированных этими пептидами, на 40 - 60% превышал уровень защиты контрольных животных. Защита пептидами, относящимися к вариабельным участкам белка, была существенно снижена при заражении гетерологичным штаммом по сравнению с защитой от гомологичного штамма.

Титрование сывороток больных менингококковым менингитом с бактериологически подтвержденным диагнозом выявило нарастание специфических антител к некоторым пептидам в процессе болезни, что свидетельствует о наличие В-эпитопов в составе этих фрагментов.

С целыо изучения механизмов защиты от менингококковой инфекции с помощью пептидов была изучена способность лимфоцитов селезенки иммунизированных мышей переносить защиту интактным мышам -реципиентам.

Показана способность иммунных лимфоцитов защищать мышей-реципиентов от заражения гомологичным штаммом менингококка через 10 месяцев после иммунизации мышей-доноров.

В результате проведенных исследований выявлены пептиды из консервативных участков поверхностных белков менингококка, обладающие протективностыо к менингококкам различной серосубтиповой принадлежности и включающие в свою структуру В-эпитопы, распознаваемые иммунной системой людей при менингококковой инфекции.

ВЛИЯНИЕ ИЗОФОНА В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ НА ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ

Кривонос П.С.1, Шпаковская Н.С.2, Авдеев Г.С.1, Решетов АЛ.3, Суркова Л.К.2

/ 2

МГМИ, НИИ пульмонологии и фтизиатрии,

Минск, Беларусь

Центр по изучению бифункциональных иммуномодуляторов, Ярославль, Россия

Иммунная недостаточность при туберкулезе носит комбинированный характер и обусловлена токсическим действием микобактерии туберкулеза на иммунокомпетентные клет-

ки и пммуносупрессивным влиянием антпоактериальных препаратов, что требует назначения различных пммунокоррек-торов. Изофон - производное изопназнда обладающий анти-м1и<обс1К'1 ериальпой и иммуностимулирующей активностью.

ЦелI. исследования. Изучение пммупомодулпрующеи активности изофона в комплексном лечении больных е распространенными формами туберкулеза легких;

Методы. Методы оценки иммунного статуса.

Результаты и обсуждение. Под нашим наблюдением находится 54 больных с распространенными формами туберкулеза легких. Показано, что включение Изофона в курс химиотерапии больных туберкулезом легких не оказывал заметного влияния к 3-3,5 месяцам лечения на Т-систему иммунитета (нормализация количества CD3 и CD4 клеток до 70% наблюдении против 53,6-60% в контрольной группе); среди показателен гуморального звена иммунного ответа достоверные отличия наблюдались только по уровню ЦИК - значительное увеличение в группе больных с применением изофона, однако существенно увеличивался фагоцитарный показатель ней-трофилов крови в тесте фагоцитоза стафилококков. Также существенно увеличивались показатели ИСТ-теста как спонтанного, гак и индуцированного БЦЖ и зимозаном, нормализация которых к 3-3,5 месяцам быстрее наблюдается в группе с применением Изофона. В этой группе отмечалось также и более выраженное увеличение комплементарной активности сыворотки крови.

Иммуиомодулпруюшее действие изофона, по-видимому, больше сказывается на показателях функциональной активности нейтрофпльных гранулоцитов крови (достоверное увеличение поглотительной способности и их переваривающей функции, усиление "метаболического взрыва” в первые 2 месяца с последующей тенденцией к нормализации кислород-зависиыого метаболизма).

Выводы. Применение изофона в комплексном лечении больных с распространенными формами туберкулеза легких способствует нормализации нарушений иммунитета. Изофон

- препарат выбора в комплексной терапии туберкулеза легких, особенно у больных с наличием иммунодефицита.

ВЛИЯНИЕ КОРПУСКУЛЯРНОГО АНТИГЕНА COXIELLA BURNETII НА ПРОДУКЦИЮ TNFa, IL-6 И IL-8 КЛЕТКАМИ КРОВИ ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ

Кузнецова С.А., Токаревич Н.К.*, Лукачева М., Колосков А.В., Фрейдлин И.С.

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН,

*НИИЭМ им. Пастера, Санкт-Петербург, Россия

Возбудитель Ку лихорадки - Coxiella burnetii - это гра-мотрицательпые неподвижные бактерии, отличающиеся от других прокариот облигатным внутриклеточным паразитизмом. Ранний, индуцированный кокеиеллами ответ, вызывающий усиление неспецифнческой резистентности, обусловлен активацией макрофагов и естественных киллеров и опосредован индукцией цитокинов. Целью настоящего исследования было сравнительное изучение влияния коксисллезных антигенов на продукцию TNFa, IL-6 и IL-8 в культурах цельной крови человека.

Гепаринизированную цельную кровь от здоровых доноров (п=10) разводили в 10 раз культуральной средой и инкубировали в печение 24 часов в присутствии коксиеллезных антигенов “Nine-Mile”, который относится к группе штаммов, вызывающих “острое” течение Ку-лихорадки, и "Priscilla” -

штамма, обусловливающего хроническое течение инфекции. Количественное содержание провоспалительных цитокинов в иадосалочиой жидкости определяли методом иммунофер-ментного анализа (ГНЦ НИИ ОЧБ, Санкт-Петербург, Россия). Было обнаружено, что кокспеллезные антигены статистически достоверно и дозозависимо индуцировали значительное увеличение секреции TNFa, IL-6 и IL-8 в культурах цельной крови доноров. Сравнительный анализ показал, что антигены штамма “Priscilla” обладали большей цитокининдуцируещей активностью, по сравнению с антигенами штамма "Nine-Mile”. Способность грамотрицательных микроорганизмов индуцировать продукцию цитокинов обычно связывают с присутствием в их клеточной стенке липополисахаридов (ЛПС). Это положение вполне применимо и к коксиеллам, которые содержат в поверхностных структурах биологически активный ЛПС. Дополнительно была изучена зависимость цитокинин-дуцирующих свойств коксиеллезных антигенов от перехода коксиелл из I фазы (вирулентной) во И фазу (авирулентную), сопряженного со снижением содержания липополисахаридов в их клеточной стенке. Уровни секреции TNFa, индуцированной антигенами с наибольшим содержанием ЛПС, были статистически достоверно выше уровней секреции, индуцированной антигенами с наименьшим содержанием ЛПС. Индуцированные коксисллезными антигенами I и II фазы уровни секреции IL-6 различались менее значительно. При изучении секреции IL-8 в культурах цельной крови доноров зависимости цитокининдуцирующей активности коксиеллезных антигенов от содержания ЛПС в их клеточной стенке обнаружено не было.

Таким образом, представленные результаты свидетельствуют о способности коксиеллезных антигенов индуцировать секрецию провоспалительных цитокинов клетками цельной крови доноров. Этот эффект лишь частично опосредован ЛПС. Получены дополнительные сведения о разной биологической активности штаммов возбудителя Ку-лихорадки, вызывающих острое или хроническое течение инфекции.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ПРИ ВВЕДЕНИИ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПОЛИКОМПОНЕНТНОЙ ВАКЦИНЫ (ВП-4) ЛИЦАМ ПОЖИЛОГО ВОЗРАСТА

Кузьмина Л.А., Поддубиков А.В., Грубер И.М.

Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова РАМН,

Москва, Россия

Результаты многих исследований свидетельствуют о том, что при старении организма отчетливо проявляются два вида дисфункции иммунной системы: иммунодефицитные состояния и аутоиммунные реакции. В НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова разработана и разрешенна к применению в практике здравоохранения поликомопнентная вакцина (ВП-

4) из антигенов Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Escherichia coli, обладающая специфической иммуногенной активностью в отношении ряда этиологически значимых возбудителей многих воспалительных заболеваний и способностью корригировать факторы песпецифичес-кой реактивности организма.

Целыо настоящего исследования являлось изучение иммунологических показателей при профилактическом введении ВП-4 лицам пожилого возраста, являющихся одной из групп риска возникновения ОРЗ и обострения хронических воспалительных заболеваний. Исследование проведено в пансионате ветеранов труда г. Москвы.

“Дни иммунологии в СПб ‘2001 ’

Медищтакая iшлiyitология

Вакцинопрофилактику проводили лицам от 45 до 90 лет (п=21). ВГ1-4 вводили назально-пероральным методом, - двукратное закапывание вакцины в нос (по 2 капли в каждый носовой ход) с последующим 6-8 кратным пероральным введением вакцины с интервалом 3-4 дня. До введения ВП-4 и через 3 дня после окончания курса вакцинации у привитых брали кровь и слюну. В крови и слюне определяли титры антител к антигенам, входящим в состав вакцины в РПГА. Уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови и слюне определяли методом радиальной нммуноднффузии. Определение аутоантител к органонеспецифическим и оганоспецпфичес-ким антигенам проводили с помощью твердофазного И ФА при использовании иммуноферментных тест-систем, разработанных в НИИВС' нм.И.М.Мечникова.

После введения ВП-4 у 55,0± 11,0% обследованных было регистрировано нарастание уровня IgA в сыворотке крови, при отсутствии повышения уровня IgE. В системе местного иммунитета уровни иммуноглобулинов в слюне до проведения профилактики находились на уровне нижней границы возрастной нормы. Вакцинация способствовала повышению уровней IgA и slgA (р<0,05). В слюне увеличивались также уровни антител к антигенам Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli (p<0,01; 0,05).

Полученные данные свидетельствуют о том, что лица старших возрастных групп отвечают на введение ВП-4 адекватными иммунологическими сдвигами, что позволяет сделать вывод о возможности и целесообразности вакцинации поли-компонентной вакциной лиц данной категории риска.

ОСОБЕННОСТИ ПРОДУКЦИИ цитокинов ПРИ ЗАТЯЖНОМ И ХРОНИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ В

Любимов А.С., Калинина Н.М., Сысоев К.А.

Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия, Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины,

Санкт-Петербург, Россия

Считается, что острые вирусные инфекции, в том числе острый гепатит В (ОГВ), сопровождаются гиперпродукцией провоспалительных цитокинов. Между тем, продукция цитокинов при затяжных и хронических формах гепатита В изучена недостаточно.

Нами проведено сравнительное изучение содержания интерлейкина- 1 (3 (IL-1Р), интерлейкина-8 (IL-8) и фактора некроза онухоли-а (TNF-cc) в сыворотке крови в динамике у 10 больных хроническим гепатитом В (ХГВ) и 13 больных затяжной формой гепатита В (ЗГВ). Диагноз у всех больных был подтвержден обнаружением специфических маркеров ГВ в сыворотке крови и данными ультразвукового исследования печени.

Повышение уровня IL-1 (3, TNF-a наблюдалось у большинства больных ЗГВ и ХГВ в течение всего госпитального периода (5-7 недель) и сохранялось при выписке. Содержание 1L-8 в сывортке крови превышало норму только у части обследованных больных. Увеличение концентрации IL-lp отмечено у 100% больных ЗГВ и 66,7% больных ХГВ, IL-8 - у 50% и 33,3% больных, TNF-a - у 70% и 92,3% больных соответственно. У больных ЗГВ, у которых цитолитический синдром был более выраженным, содержание TNF-a в сыворотке крови было выше, чем у больных ХГВ.

Таким образом, повышенная продукция IL-1P и TNF-a наблюдается у большинства больных ЗГВ и ХГВ в период сохранения активности заболевания и является следствием систем-

ного ответа организма на HBV . Полученные данные свидетельствуют о наличии определенных различий в продукции IL-1Р, IL-8, TNF-a при ЗГВ и ХГВ, которые определяются, по всей видимости, характером течения патологического процесса.

ИММУНОДЕПРЕССИВНОЕ ДЕЙСТВИЕ ВИРУСА КОРЕВОЙ ВАКЦИНЫ Л-16 IN VIVO И IN VITRO

Ляшснко В.А., Юминова Н.В., Александер С.К., Лавров В.Ф., Ковалёва Л.Г.

НИИ Вирусных Препаратов им. О.Г.Анд.жапаридзе, РАМН

Иммунодспрсссивиое действие коревой инфекции ранее было установлено по последующему повышению чувствительности к другим инфекционным заболеваниям. Попытка использовать в Африке высокодозную коревую вакцину для 5-6 месячных детей также привела к длительному снижению активности их иммунной системы. Нами было установлено, что иммунизация взрослых добровольцев приводит к снижению способности их лимфоцитов отвечать бласттрансформацией на воздействие ФГА in vitro, определяемой в течении 14 дней. Интенсивность подавления бласттрансформации мало зависела от исходного наличия антител в крови добровольцев. Подавление способности лимфоцитов к поликлональной пролиферации сочеталось с нарастанием способности их пролиферировать в присутствии коревых антигенов (т.е. с формированием специфического их клона). Упомянутое проявление иммунодепрессии было более выражено при подкожном, менее - при интра-назальном введении вакцины. Феномен подавления бласттрансформации удалось воспроизвести in vitro - при инкубации лимфоцитов человека одновременно с вирусом коревой вакцины и фитогемагглютинином. В сходной системе обнаружено также изменение свойств гранулоцитов крови в присутствии вируса коревой вакцины: повышение уровня их адгезивной способности и активности в тесте с нитротетразолиевым синим. Следовательно, иммуномодулирующее действие коревой вакцины носит сложный, комплексный характер.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА В КОМПЛЕКСЕ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ У БОЛЬНЫХ С ОЖОГОВОЙ ТРАВМОЙ

Максютова Л.Ф., Алсынбаев М.М., Хунафин С.Н., Зинатуллин P.M., Дмитриев Д.М., Медведев Ю.А., Пуцман А.И.

ГКБ№18, ГУП “Иммунопрепарат”, Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа, Башкортостан, Россия

Ожоговая травма является фактором, существенно изменяющим характер функционирования и реагирования иммунной системы. Церулоплазмин как один из препаратов экстраиммун-ной иммунотерапии (нормализация кислородзависимого метаболизма; стимуляция эритропоэза и другие варианты биологического действия) должен служить ведущим компонентом проведения консервативной терапии больных ожоговой болезнью.

Препарат церулоплазмина использован в лечении более 30 пациентов с ожоговой травмой. Помимо выраженного эффекта препарата как стимулятора эритропоэза и отмеченной у больных нормализации гемодинамики, отмечено его позитивное влияние на показатели иммунного статуса больных. В сравнении с не получавшими препарат больными, у пациентов после

2-3 кратного введения церулоплазмина в лечебных дозах отме-

чсно увеличение содержания лимфоцитов, в том числе CD3 Т клеток, а также иммуноглобулинов, в том числе сывороточного IgA. Применение церулоплазмина обеспечило значительное сокращение необходимых в лечении больных инфузионных вмешательств, в том числе и гемотрансфузий.

ФЕРРИТИН СЫВОРОТКИ КРОВИ И ПОКАЗАТЕЛИ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ С

Маммаев C.H., Лукина Е.А., Луговская С.А., Шульпекова Ю.О., Левина A.A., Почтарь М.E., Ивашкин В.Т.

Московская медицинская академия им.И.М. Сеченова, Гематологический научный центр PAMI1,

Московская медицинская академия последипломного образования М3 РФ.

Москва, Россия

Кислые изоформы ферритнна обладают подавляющим влиянием на бласттраисформацию Т-лимфоцитов в исследованиях in vitro.

Цель исследования. Изучить взаимосвязь между содержанием ферритина в сыворотке и показателями иммунного статуса у больных хроническим вирусным гепатитом С (ХВГ С).

Материалы и методы. Исследовано 45 больных ХВГ С (HCV RNA ). Контрольную группу составили 20 здоровых доноров. Ферритин сыворотки определяли иммунорадиомет-рическим методом с применением стандартных наборов ИРМО. Экспрессию антигенов на лимфоцитах исследовали на проточном цитофлуориметрс (Partec,CLLIA) с помощью моноклональных антител CD3, CD4, CD 16, CD25, меченных FITC и CD8-RPE ( Caltag, США).

Результаты исследования. У больных ХВГ С среднее значение уровня сывороточного ферритнна составило 986,9±86 мкг/л, что достоверно превышает показатель контроля (296,9±34,3 мкг/л; р<0,01). Выявлено снижение процента клеток, экспрессирующих молекулы CD3 , CD4 , CD 16 и CD25 на лимфоцитах крови, тогда как экспрессия CD8 была увеличена у больных ХВГ С по сравнению с контролем. При этом экспрессия антигенов CD4 , CD16 и CD25 достоверно (р<0,05) отличалась от показателей нормы. Обнаружена отрицательная корреляция между уровнем сывороточного ферритина и экспрессией антигенов CD4 и CD25 на лимфоцитах крови (г= - 0,39; т= - 0,54; р<0,05 соответственно).

Заключение. Достоверная отрицательная связь между уровнем сывороточного ферритнна и содержанием CD4 , CD25 клеток согласуется с результатами экспериментальных исследований, выявивших иммунодепресснвное действие кислых изоферритипов на Т-лимфопоэз.

ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ СИСТЕМЫ ЦИТОКИНОВ ПРИ НОЗОКОМИАЛЬНЫХ ПНЕВМОНИЯХ (НП)

Маркелова Е.В., Силич Е.В., Корнвчепкова И.В., Костюшко A.B., Недобыльская Ю.П..

Владивостокский государственный медицинский университет, Россия

Целыо настоящего исследования явилось изучение содержания цитокинов в сыворотке крови больных НП и характеристика спонтанной и индуцированной их продукции клетками крови этих пациентов. В наше исследование были вклю-

чены 198 больных с НП. Все пациенты с НП были распределены по степени тяжести. В качестве материала исследования проводился забор венозной крови. Определение цитокинов (TNF-a, IL-la, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IFNy) в сыворотке крови и супернатантах проводили специфическим ИФА с использованием реактивов ”R & D Diagnostics Inc.” (USA), согласно прилагаемой инструкции.

Выявлено, что у пациентов с НП зарегистрирована гипер-цитокинемия как про-, гак и противовоспалительных цитокинов с наиболее резким увеличением TNFa IL-6, 8, 10. Их количество нарастает при “вентилятор-ассоциированной” НП. В динамике заболевания содержание провоспалительных цитокинов зависело от активности патологического процесса в легких и повышалось при утяжелении клинического течения НП. Исключением была динамика IFNy, содержание которого при тяжелых НП, напротив, снижается. С целью изучения прогноза течения и исхода НГ1 нами исследовано содержание цитокинов в сыворотке крови выживших и умерших пациентов. Выявлена прямая корреляционная связь (r=+0,87; р<0,01) между высоким уровнем 1L-6 и показателем летальности и обратная корреляционная зависимость с количеством IFNy (i=-0,65; р<0,05) в сыворотке крови. Зарегистрировано повышение 1L-10 при неблагоприятном прогнозе НП. Корреляционный анализ данных выявил наличие слабой прямой связи (г=+0,31; р>0,05). Существенное уточнение результатов получено при изучении способности клеток крови обследуемых продуцировать ци гокины в условиях in vitro. Установлено, что у пациентов с НП резко повышается спонтанная способность клеток периферической крови продуцировать большинство цитокинов, что является признаком их активации in vivo. Исключение составляют IFNy и IL-la: спонтанная продукция IL-la при НП практически не отличается от показателей контроля (2,81±0,7 пг/мл против 1,7±0,1 пг/мл, р>0,05), тогда как продукция IFNy при НП достоверно снижена (22,0±2,5 пг/мл против 48,0±4,9 пг/мл, р<0,001). Важна не просто констатация факта изменения спонтанной продукции цитокинов, но и регистрация нарушения соотношения их по сравнению со здоровыми, с преобладанием активации Th2 клеток, что указывает на дисбаланс регуляторных процессов, ответственных за поддержание оптимального уровня клеточной активности. Индуцированная ЛПС продукция цитокинов клетками крови больных с НП, напротив, снижена, что приводит к значительному уменьшению индекса ст имуляции. Это свидетельствует о снижении резервного потенциала иммунокомпетет ных клеток больных НП.

ОСОБЕННОСТИ КЛЕТОЧНОГО И ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЯХ У ДЕТЕЙ

Мартынова Г.П., Савченко A.A., Котова Я.А.

Красноярская государственная медицинская академия, Институт медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск, Россия

В инфекционной патологии детского возраста острые кишечные инфекции (ОКИ) заипмают ведущее место. В отличие от ряда других рег ионов, на территории Красноярского края преобладают инвазивные формы: шигеллез, сальмонеллез, кишечный исрсиниоз. Динамичное наблюдение за детьми больными ОКИ в течение 10 последних лет указывает на значительное утяжеление их клинической картины, увеличение удельного веса затяжных форм. Вероятно, причинами выявленных особенностей являются не только изменение этиологической структуры заболеваний, ухудшение преморбид-

но го фона детей и социального уровня семей, но и изменение иммунологической реактивности организма заболевшего ребенка.

Обследованы здоровые дети и больные ОКИ в возрасте от

3-6 лет. Популяционный и субпопуляционпый состав лимфоцитов крови оценивали с помощью непрямой иммунофлуоресценции с использованием моноклональных антител. Концентрацию иммуноглобулинов класса IgA, IgM, IgG определяли методом иммунодиффузии по Манчини.

У детей больных ОКИ обнаружены значительные изменения параметров гуморального и клеточного иммунитета. Независимо от тяжести инфекционного процесса снижается концентрация лейкоцитов крови и, соответственно, абсолютное содержание лимфоцитов. У детей со среднетяжелой и тяжелой формами инфекционного процесса снижается абсолютное и относительное содержание CD4 -лимфоцитов, но увеличивается концентрация CD8 -лимфоцитов. Кроме того, у детей с тяжелой формой ОКИ повышение абсолютного содержания CD8 -лимфоцитов достоверно превалирует над изменениями их концентрации у больных со среднетяжелыми формами болезни. Изменение регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов приводит к снижению иммунорегуляторного индекса у детей с ОКИ. Независимо от тяжести процесса у pvex больных понижается концентрация IgM и IgG в сыворотк,- крови. Содержание IgA в обеих группах больных снижается: у детей с тяжелой формой ОКИ это снижение более выражено, по сравнению с показателями при среднстяжелой форме болезни. Снижение концентрации иммуноглобулинов у больных ОКИ выявляется на фоне понижения относительной концентрации С072+-лимфоцитов.

Таким образом, у детей с ОКИ значительно изменяются величины параметров клеточного и гуморального иммунитета. В целом можно конст атировать наличие выраженного им-мунодефицитного состояния, прежде всего, по клеточному типу. Снижение регуляторного влияния Т-лимфоцитов, характеризующееся снижение концентрации хелперной фракции и повышение содержания Т-супрессоров, приводит к снижению концентрации основных классов иммуноглобулинов в сыворотке крови. Результаты исследования определяют необходимость проведения пммуиокоррекции на фоне базисной антибактериальной терапии.

ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИЯ ФАГОЦИТОВ КРОВИ ДЕТЕЙ С МИКОТИЧЕСКОЙ ЛЕГОЧНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ

Медведев Ю.А., Хайруллина P.M., Рыбаков И.Д., Фархугдннов P.P., Коцеико Т.М., Алсыпбаев М.М.

ДРКБ, Башкирский государственный медицинский университет, ГУН “Иммунопрепарат ”, г. Уфа, Башкортостан, Россия

Хсмнлюминссценция крови, усиливаемая люминолом (XJI), отражает уровень генерации клетками активных форм кислорода. Основным их продуцентом среди клеток крови являются полиморфно-ядерные и мононуклеарные фагоциты, в ходе активации которых биологические оксиданты выступают важными факторами антимикробного действия, а при ряде патологии -- аутоповреждающими факторами. Регистрация ХЛ широко апробируется в качестве метода оценки функционального состояния фагоцитирующих клеток, а также средства антиген-снецифической диагностики заболеваний аллергической природы. В последнем случае обоснованием подхода выступают известные феномены вовлечения фагоцитов в реакции с участием антиген - распознающих факторов иммунитета - лимфоцитов и антител.

Нами проведено исследование ХЛ крови детей с заболеваниями легких инфекционной и неинфекционной природы, так или иначе связанных с условно-патогенными дрожжеподобными и плесневыми грибами, кандидоз и плесневые микозы легких с наличием и отсутствием клинических проявлений аллергии, атопическая бронхиальная астма на антигены грибов или домашнюю пыль при наличии выраженной реакции на плесневые антигены. Подтверждение соответствующих диагнозов осуществлялось на основании клинико - лабораторных данных, микологического обследования и с помощью иммунологических методов - оценки иммунного статуса и результатов серологических реакций и кожно-аллергических проб с антигенами грибов. Уровень ХЛ отмечали в термостати-руемом хемилюминомере - спонтанный при инкубации ге-паринизированной крови, а также в присутствии гистамина и растворимых антигенов Candida albicans, Aspergillus и Phialophora spp. В ходе исследования показано существенное различие в уровне спонтанной ХЛ крови больных микозами вне аллергии, ее снижение на фоне иммунодефицитных состояний с пониженной активностью фагоцитарных процессов, и возрастание или снижение в зависимости от наличия или отсутствия приступа, а также модифицирование реакции в присутствии гистамина, при инфекционой и неинфекционной микогенной аллергии. Результаты исследования ХЛ крови здоровых лиц и больных с легочной аллергией микотической и немикотической природы в присутствии аллергенов - индукторов сенсибилизации и аллергенов, не выступающих таковыми, включая антигены грибов и аллергены иного происхождения, указывают на возможность адаптации метода для диагностики микогенной аллергии и оценки ее характера. Дальнейшая разработка вопроса может позволить использование метода ХЛ для существенного уточнения механизмов патогенеза разных форм микозов и микоген-нон неинфекционной аллергии и улучшения качества диагностики у пациентов с соответствующими заболеваниями.

ПРОДУКЦИЯ ЦИТОКИНОВ КЛЕТКАМИ КРОВИ ПРИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЯХ И ДРУГИХ ФОРМАХ ПАТОЛОГИИ

Мезенцева М.В., Наровлянский A.H., Оспельникова Т.П., Щербенко В.Э., Вершинина М.Ю., Ершов Ф.И.

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН,

Москва, Россия

В настоящее время проводится интенсивное изучение роли цитокинов при различных формах патологии, а так же начато целенаправленное применение цитокинов для лечения различных заболеваний. Иммунотерапия с использованием препаратов IFN и других цитокинов требует постоянного контроля состояния больного и динамики показателей иммунитета. В последнее время разработано ряд методов индивидуального подбора иммуномодулирующих препаратов. В настоящей работе нами предложена и аппробирована оригинальная методология, позволяющая определить возможный терапевтический эффект препаратов и уточнить направление коррекции цитокипового профиля.

Обследовано 5 больных с верифицированным диагнозом рассеянный склероз (PC), 5 больных с диагнозом острый ви-

русныи гепатит С (ГС). 5 пациентов с новообразованиями (ОН). 9 больных с хламидиозом и герпесом (ВПГ-2) (УГ). Контрольную группу составляли 4 здоровых донора (Д). У всех обследованных людей определяли показатели расширенного интерферонового (1Р1М) статуса биологическим методом. Количественное содержание И_-1а, [Ь-4, 1Ь-6, ТЫР-ос и ШМ-а в сыворотке н пробах цельной крови определяли методом И ФА.

При определении цитокинового и 1ГЫ статуса были выявлены определенные нарушения способности к продукции 1Ь^-сх и 1Р]М-у У обследованных больных, а так же изменения содержания цитокииов и их продукции у больных с разными формами патологии по сравнению с здоровыми донорами. Мами показана целесообразность параллельного определения цитокинового и 1РЫ статусов у больных для подбора наиболее эффек тивных лекарственных препаратов (иммуномодуляторов и препаратов 1РЫ). При таком подходе появляется возможность определить особенности нарушений продукции интерферонов и цитокинов у конкретного больного. Тем самым, создается возможность индивидуальной научно-обоснованной коррекции нарушений цитокино-вой регуляторной сети.

Разработана методология одновременного определения продукции цитокинов и интерферонов клетками крови больных. Проведеное исследование интерферонового и цитокинового статусов позволяет научно обосновать возможность коррекции обнаруженных нарушений с помощью иммуномодулирующих препаратов.

ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ИММУНОПАТОГЕНЕЗА ЛАТЕНТНЫХ ФОРМ ХРОНИЧЕСКИХ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ ВИС

Никитин В.Ю., Жданов К.В., Сухина И.А.

Военно-Медицинская Академия.,

Санкт-Петербург, Россия

Данные отечественных и зарубежных исследователей последних лет указывают на возрастающий интерес к изучению бессимптомных форм хронических вирусных гепатитов. Многие аспекты латентных форм НВУ- и НСУ-ин-фекций остаются нерешенными, а некоторые нуждаются в уточнении (например трактовка такого понятия, как “носи-тельство”). В частности, до конца не выяснен иммунопатогенез латентных форм данных инфекций, механизмы перси-стенции возбудителей вследствие их сложных взаимодействий с иммунной системой, характер иммуноморфологи-ческих изменений в печени в зависимости от биологических свойств вирусов и состояния иммунного ответа организма, их диагностическая значимость, основные причины прогрессирования скрыто протекающего инфекционного процесса и его исходы.

Цель работы. Изучение особенностей иммунопатогенеза латентных форм НВУ- и НСУ-инфекции на основе комплексного клинико-иммунологического обследования больных.

Материалы и методы. Обследовали больных, инфицированных вирусом ГВ: из 179 человек у 141 диагностирова-

ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТОВ И ИНДУКТОРОВ IFN НА ПРОДУКЦИЮ ЦИТОКИНОВ У ЗДОРОВЫХ ДОНОРОВ И БОЛЬНЫХ С РАЗЛИЧНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ IN VITRO

Продукция

цитокинов

ПРЕПАРАТЫ

Ридостин

Циклоферон

Фоспренил

Кагоцел

IFN-a

IFN-у

/L-Іа

повышение снижение PC PC Д, PC PC д Д.гс.он д, рс

IL-4

повышение Д РС Д, ГС

снижение Д Д.ГС.РС

IL-6

повышение снижение Д.УГ.РС РС УГ Д.УГ.РС УГ,РС УГ.РС ГС,УГ,РС Д, ГС.РС УГ, РС

TNF-а

повышение снижение Д,ГС,УГ,0Н Д, РС ОН.РС ГС.РС ОН.РС ГС, он Д,ГС,0Н,РС Д,ГС,УГ,0Н

IFN-a

повышение снижение Д д д,УГ.РС Д.УГ.РС УГ

мы латентные формы; у больных вирусом ГС из 309 человек у 169 диагностированы латентные формы.

Клинико-иммунологическое обследование включало в себя: иммунологические исследования крови, исследование крови на специфические маркеры вирусных гепатитов, молекулярно-генетические исследования крови (при НСУ-инфек-ции и ткани печени) с использованием ПЦР и последующим гено'шпировапием вируса ГС, осмотр больного по орг анам и системам, УЗИ органов брюшной полости, общеклинпческие анализы крови и мочи, биохимическое исследование крови, пункционпую биопсию печени с последующим проведением иммуногистологического и иммуногистохимического исследований бноптатов тканей.

Результаты и обсуждение. Установлено, что в основе иммуно-патологнчсских изменений при латентных формах НВУ-инфекции лежит наличие активной вирусной репликации. При этом не наблюдается выраженной количественной и функциональной недостаточности того или иного звена иммунитета. Обнаруженный дисбаланс в цитокнновой регуляции в основном клеточного звена иммунитета, в первую очередь за счет функциональных нарушений в продукции 1Ь-2, приводит к неполноценному иммунному ответу, предрасполагая к длительной псрсистенции возбудителя, протекающей бессимптомно. В результате, в большинстве случаев, происходит интеграция генетического аппарата ВГВ с геномом ге-патонита. Это делает вирус недосягаемым для иммунного контроля и является одним из главных механизмов хрониза-ции.

Что же касается скрытых форм НСУ-инфекции, то в основе иммуно-патологнчсских изменений при латентных формах НСУ-ннфскции находится постоянная вирусная репликация. При этом не наблюдается количественной и функциональной недостаточности того или иного звена иммунитета. Более того, антигенная стимуляция приводит к некоторой активации гуморального звена, повышенной продукции провосиалительных цнтокинов (1Ь-1 (3, 1Ь-8), 1ГЫ-а, увеличению естественных киллеров. В отличие от ГВ, где неполноценный иммунный ответ обусловлен функциональными нарушениями в продукции некоторых ЦИТО-кинов, при ГС “неадекватность” иммунных реакций определяется биологическими свойствами самого патогена, в частности, его слабой иммуногенностью, быстрой изменчивостью и способностью к “ускользанию” из-под иммунного пресса, что предрасполагает к хронизации и длительной перснстенции возбудителя, протекающей бессимптомно. Все больные латентными формами ГС являются РНК-позитивными, что свидетельствует о постоянной вирусной репликации. При этом РНК НСУ обнаруживается одновременно в крови и печени в 46,4%. Реже РНК НСУ выявляется только в печени (32,2%), еще реже - только в крови (21,4%). Как правило, в печени формируются патологические процессы двух типов. Один - внутридольковый, обусловленный непосредственным гепатоцитопатическим действием вируса и приводящий к развитию цитолитического синдрома. Другой - с преимущественной локализацией в портальных трактах. Он в существенной степени зависит от наличия РНК НСУ в крови и достоверно определяет выраженность морфологических изменений за счет иммуно-опосредованного (аутоиммунного) компонента воспаления. Установленные закономерности патогенеза латентной НСУ-инфскции диктуют необходимость проведения диспансерного наблюдения за данными пациентами дифференцированно в зависимости от преобладания патологического процесса в печени с целью определения исходов, возможного лечения и принятия экспертного решения.

ПОКАЗАТЕЛИ СОСТОЯНИЯ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗНЫМ СПОНДИЛИТОМ

Новикова Н.С., Шендерова Р.И.*, Алешина Г.М., Якунова O.A.*, Берлов М.H., Корнева Е.А., Кокряков В.Н.

Научно-исследовательский

институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт Фтизиопульмонологии М3 РФ*, Санкт-Петербург, Россия

Нейгрофильные гранулоциты (НГ) являются ключевыми клетками системы врожденного иммунитета. Они содержат широкий спектр антимикробных соединений (дефенсины, лакто-феррин, миелопероксидаза, лизоцим и др.), которые обеспечивают завершенность фагоцитоза и определяют его защитную направленность. В последние годы показано, что этот тип лейкоцитов играет важную защитную роль при микобактериаль-ной инфекции. Поэтому изучение структурно-функциональных параметров НГ при различных формах заболеваний туберкулезной этиологии может давать информацию о состоянии некоторых иммунных реакциях организма и об эффективности проводимого лечения.

Цель работы - выявить состояние системы нейтрофиль-ных гранулоцитов у больных активным и неактивным туберкулезным спондилитом. Задача исследования состояла в параллельном определении антимикробных белков НГ (миелоперок-сидазы и лактоферрина) в сыворотке крови и внутриклеточного содержания дефенсинов у больных туберкулезом. Исходные показатели при активном и неактивном туберкулезном спондилите были получены до и после хирургического лечения больных, находящихся в стационаре. Внутриклеточный микробо-цидный потенциал НГ оценивали с помощью цитохимического лизосомально-катионного тсста (J1KT), который выявляет дефенсины и родственные им пептиды в лизосомном аппарате лейкоцитов периферической крови. Методом твердофазного им-муноферментного анализа исследовали содержание индивидуальных лизосомных катионных белков нейтрофилов: миелопе-роксидазы (МПО) и лактоферрина (ЛФ) в сыворотке крови.

В ходе работы было установлено, что для больных с активным туберкулезным спондилитом характерны высокие значения как среднего цитохимического коэффициента ЛКТ нейт-рофильных гранулоцитов крови - 1,69±0,2 (при норме 1,56±0,19), так и значительное увеличение общего и удельного (из расчета на один НГ) содержания в сыворотке крови этих больных МПО и ЛФ, которое в 2-3 раза превышало верхнюю границу физиологической нормы. Это свидетельствует об активации системы нейтрофильных гранулоцитов, заключающейся в повышенном биосинтезе антимикробных белков и их усиленной секреции в плазму крови. После оперативного лечения исследуемые показатели снижаются только на 20-25%, не достигая значений показателей физиологической нормы. Подобное обследование больных с неактивной формой туберкулезного спондилита выявило у них превышение содержания МПО и ЛФ в сыворотке крови только в 1,5-2 раза относительно нормы, а содержание дефенсинов в НГ заметно варьировало (1,3-1,7) в зависимости от сопутствующих заболеваний. После проведенного лечения наблюдается снижение анализируемых показателей, до верхней границы нормы, что, по-видимому, отражает нормализацию биосинтеза антимикробных пептидов и белков в ИГ и процесса их секреции.

Полученные данные позволяют заключить, что динамика изменений анализируемых показателей объективно отражает

состояние системы НГ. В связи с чем совокупность рассматриваемых тестов рекомендуется использовать для оценки эффективности проводимого лечения.

Работа поддержана грантом РГНФ № 00-06-00202а.

ПОЛУЧЕНИЕ АНТИПЕПТИДНЫХ АНТИТЕЛ К УЧАСТКАМ СВЯЗЫВАНИЯ БЕЛКА Е2 ВИРУСА ГЕПАТИТА С CD81

Оленина JI.B., Колесанова Е.Ф., Гервазиев Ю.В., Зайцева И.С.*, Кураева Т.Е., Соболев Б.Н., Арчаков А.И.

Научно-исследовательский институт биомедицинской химии РАМН,

Москва,

*Научно-исследовательский институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов, Россия.

Вирус гепатита С (ВГС) один из основных человеческих патогенов, вызывающий с высокой частотой хронический гепатит, цирроз и гепатоцеллюлярную карциному. Высокий уровень вариабельности оболочсчных белков El и Е2 вируса гепатита С осложняет поиск антигенных участков для создания эффективных вакцин против различных изолятов ВГС. Недавняя идентификация клеточного поверхностного маркера CD81 (ТАРА-1) как одного из клеточных рецепторов для ВГС создает предпосылки для разработки антигенных конструкций, направленных на индукцию антител, предотвращающих связывание ВГС с CD81. Анализ литературных данных и сравнение их с картой консервативности аминокислотных позиций Е2, полученной нами ранее позволили нам выбрать два фрагмента последовательности белка Е2, отвечающих за связывание с CD81 и содержащих высоко консервативные кластеры аминокислотных остатков в центре и менее консервативные фланкирующие участки и исследовать их антиген-ность. Соответствующие пептиды длиной 15 (пептид 1) и 19 (пептид 2) аминокислотных остатков были синтезированы и использованы для получения антипептпдных антител в экспериментальных животных - беспородных мышах. Пептиды были использованы в виде гаптенов, сконыогированных с белками-носителями гемоцианином и овальбумином, а также с коллоидным золотом (пептид 1). Титр и специфичность антител в полученных сыворотках определяли с помощью им-муноферментного анализа и пептидного сканирования шес-тичлениыми пептидами, иммобилизованными на полипропиленовых иглах. Почти все мыши, ироиммунизированные ко-ныогатами с овальбумином дали специфический гуморальный ответ к пептидам 1 и 2 (титр от 1:1600 до 1:51200), тогда как при использовании коныогатов с гемоцнанпном специфический ответ был слабым или недетсктируемым. С помощью пептидного сканирования был картирован линейный В-клеточный эпитоп длиной шесть аминокислотных остатков внутри последовательности пептида 2 в наиболее консервативном его участке. Мы не смогли детектировать линейный эпитоп для пептида 1, даже у сывороток с самым высоким титром, что свидетельствует о конформационном характере эпитопа, предположительно сформированного внутренней петлей, замкнутой с помощью дисульфидного мостика. Принципиально иные результаты были получены при иммунизации мышеи коныогатом пептида 1 с коллоидным золотом. Только у двух из шести мышей мы выявили продукцию специфических антител, что свидетельствует о Т-зависимом характере иммунного ответа на данный антиген и о наличии уз-

наваемого Т-хелперного мотива в составе самого пептида. По данным пептидного сканирования сильный ответ был индуцирован против шестичленного линейного эпитопа, расположенного в N-концевой части пептида 1. Из приведенных данных следует, что участки взаимодействия Е2 с CD81 слабо иммуногенные при натуральной инфекции могут проявлять высокую иммуногенность в составе искусственных антигенных конструкций. Мы также идентифицировали два линейных эпитопа внутри исследуемых участков впервые. Антитела к линейным антипептидным эпитопам, как правило, способны узнавать такие эпитопы в любом контексте, в том числе и на поверхности нативного белка. Дальнейшие эксперименты необходимы для оценки протективного эффекта полученных антипептидных антител.

Работа выполнена в рамках Межведомственной научно-технической программы “Вакцины нового поколения и медицинские диагностические системы будущего”, договор №01.02/137.

ИММУНОТРОПНЫЙ ЭФФЕКТ СОЧЕТАННОГО НИЗКОИНТЕНСИВНОГО ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ ПРИ ЛЕЧЕНИИ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ

Пармон Э.М., Борщевский В.В., Борткевич Л.Г., Шпаковская Н.С., Дюсьмикеева М.И.

НИИ пульмонологии и фтизиатрии М3 РБ,

Минск, Республика Беларусь

Изучена способность сочетанного низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) модифицировать функцию системы иммунитета при различных формах туберкулеза почек. В основную группу вошли 54 больных от 14 до 68 лет, разделенных в зависимости от клинического диагноза на 3 подгруппы: туберкулезный папиллит, кавернозный и поликаверноз-ный туберкулез почек. Проведено 10 процедур ВЛОК в сочетании с наружным облучением проекции почек. Группу сравнения составили 57 больных с таким же диагнозом, но прошедшими только базовую традиционную химиотерапию. Определение иммунологических показателей проведено общепринятыми методами клинической иммунологии. При анализе результатов, учитывая различные исходные значения показателей в контрольной и основной группах больных, нами была введена величина относительного индекса нормы (ОИН). Для этого дискриминировали различия показателей между контрольной и основной группой до начала лечения. Оценка иммунологических сдвигов в ходе лечения локального туберкулезного процесса на основании данных, свидетельствующих о состоянии системного иммунитета, проводилась нами с учетом клинических, урологических и биохимических показателей с экстраполяцией их на возможное развитие патологического туберкулезного очага в почках. Так, на фоне терапии у больных отмечалось снижение ОИН по содержанию в периферической крови лимфоцитов, в т.ч. CD3 ,CD3 /CD4 , CD3 /CD8 иммунофенотипов. С учетом положительной клинической динамики мы расценили эти факты, как показатель хоминга Т-хелперных и Т-киллерных лимфоцитов в регионарные параиефральиые лимфатические узлы и внутрипочечные лимфоидные образования, усиления их участия в формировании специфического пула Т-хелперов 1 типа и активации внутриклеточных бактерицидных механизмов макрофагов и киллерных клеток в гранулеме. Перераспределение иммуно-цитов из периферической крови в очаг, их способность специфически взаимодействовать с микобактериями туберкуле-

“Дни иммунологии в СПб ‘2001 ’

Медицинская иммунология

за является не только противовоспалительным фактором, но и предотвращает метастазирование возбудителя болезни. С другой стороны, повышение ОИН содержания в периферической крови IgM в результате воздействия НИЛИ, расценивалось нами как усиление первичного иммунного ответа на появление в крови дополнительного антигенного материала разрушенных микобактерий. Снижение ОИН IgG и IgA в периферической крови, возможно, отражает состояние активизации мукозо-ассоципрованной лимфоидной ткани мочевыводящих путей, преимущественно синтезирующей IgAs, и повышение их концентрации in loco. Таким образом, на основании анализа иммунологических показателей периферической крови получены данные, свидетельствующие о том, что в интервале от 3 недель до 3 месяцев после НИЛИ в почках больных нсфротуберкулезом создаются условия, способствующие резорбции микробного очага, снижению интенсивности микробного воспаления и предотвращению диссеминации микобактерий по почечной ткани. Сравнительное патоморфологическое исследование почек, удаленных у больных обеих групп, выявило наличие признаков репарации и очищение каверн в основной группе.

КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВСПЫШКИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ, ОБУСЛОВЛЕННОЙ S.ENTERITIDIS

Пашинцсва И.Р., Мартыненко Л.Д., Симованьян Э.М., Мапохова Л.Б., Сшиотин Н.В., Маалел Тауфик.

Кафедра детских инфекционных болезней Ростовского Государственного Медицинского Университета,

Ростов-на-Дону, Россия

Под наблюдением находилось 16 организованных детей в возрасте от 2,5 до 7 лет, больных сальмонеллезом, вызванным S. enterilidis. Большинство детей были госпитализированы в первый день заболевания. В целом заболевание протекало в срсднстяжслой форме и характеризовалось умеренными симптомами интоксикации, повышением температуры тела до фебрильных цифр в течение 1-3 дней у 85,7±9,2% больных, рвотой 2-10 раз в сутки у 85,7±9,2%, болями в животе у всех детей, диареей до 4,6±2,3 раз в сутки и длительностью 3,9± 1,0 дня, с примесями слизи у 85,7±9,2%, зелени у 43,5±12,4%.

По возрасту дети были распределены следующим образом: 1-ая группа от 2,5 до 5 лет и 2-ая - от 5 до 7 лег. Отличительной особенностью течения заболевания в младшей группе была более частая рвота в среднем 3,2 раза в сутки по сравнению с детьми 2-ой группы, где рвота отмечена в среднем 2,7 раз в сутки. Кратность жидкого стула и длительность диа-рейного синдрома также были выше у детей 1-ой группы, в среднем 5,2 раза в сутки при средней продолжительности 4,2 дня, против 4,2 раза в сутки и 3,6 дня соответственно у детей в возрасте 5-7 лет.

Данные иммунологического обследования показали, что у 81,3±9,7% детей в крови содержался LT - энтеротоксин, хотя уровень его был невысоким (1:50-1:400; х=163), при этом у детей до 5 лет отмечалось более высокое содержание LT - эн-теротоксипа (1:50- 1:400; х= 126), в отличие от детей старше 5 тет (1:50-1:200; х=43). и у 3 детей этой же группы LT - энтеротоксин не обнаружен.

Выявлена взаимосвязь выраженности диарейного синдрома и рвоты от количества свободного LT-энтсротоксина в крови.

У всех детей были обнаружены АТ к ЬТ - энтеротоксину. В 1-ой группе доминировали ^М-апп-ЬТ-Юх, во 2-ой -аип-ЬТ-Юх. Содержание ^М-ап^-ЬТЧох в 1-ой группе составило 1:50-1:200 у 66,6±19,3% больных, х=142, во 2-ой группе

- 1:50-1:400 у 90,0±9,5% детей, х=80. ^С-апП-ЬТ-Юх обнаружены во 2-ой группе у 40± 15,5% больных в диапазоне 1:50-1:400; х= 119), тогда как в 1-ой группе у 66,6±19,3% детей -1:50-1:100; х=59. Таким образом, у детей старше 5 лет уровень иммунного ответа на энтеротоксин выше, чем у детей от 2,5 до 5 лет.

Высокий уровень ^ А, ^М, 1^0 отмечен в двух группах детей. Во 2-ой группе, в отличие от 1-ой, обнаружено более высокое содержание (1:200-1:6400; х=1492 и 1:200-1:800;

х=449 соответственно) и (1:100-1:400 у 90±9,5% больных,

х=216, и 1:100-1:800 у 66,6±19,3%, х=200). В 1-ой группе отмечена тенденция к более высокому содержанию ^А - в диапазоне 1:100-1:400 у 83,3±15,2% детей, х=230, по сравнению со 2-ой группой- 1:100-1:800 у 80,0±12,6%; х= 183.

Высокий уровень ^А, ^М, у детей старше 5 лет связан с быстрым накоплением и переключением на синтез что говорит о более полноценном иммунном ответе.

По уровню гемагглютининов в крови существенных отличий у детей этих групп не отмечено.

Таким образом, вспышка сальмонеллеза, вызванная 5. етегШсИх, имела среднетяжелое течение. У детей в возрасте до 5 лет отмечались более выраженные (по частоте и длительности) основные клинические симптомы заболевания, что, по-видимому, связано с более высоким содержанием ЬТ-энтеро-токсина. У детей старше 5 лет отмечен более высокий уровень иммунного ответа и на антиген и на энтеротоксин.

ВЛИЯНИЕ СЛЕЗНОЙ ЖИДКОСТИ И АУТОПЛАЗМЫ КРОВИ НА ФАГОЦИТАРНУЮ АКТИВНОСТЬ ГРАНУЛОЦИТОВ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ГЛАЗ

Платова Л.А., Шилов Ю.И., Черешнева М.В.

Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН,

Пермь, Россия

Цель работы. Изучить регуляторные, в частности, опсо-низирующие эффекты слезной жидкости и сыворотки крови на фагоцитарную активность гранулоцитов больных с воспалением сосудистой оболочки глаза туберкулезной этиологии.

Материалы н методы. Обследовано 18 пациентов с острыми (6 человек) и рецидивирующими (12 человек) передними увеитами туберкулезной этиологии до проведения туберку-линодиагностики и специфического лечения в возрасте от 20 до 67 лет. Контролем служили здоровые люди-добровольцы (21 человек в возрасте от 20 до 61 лет). Выделение гранулоцитов из венозной крови проводили в градиенте плотности фиколл-верографина (<1=1,111 г/л) при 400 ° в течение 40 мин. После двукратного отмывания суспензию доводили до концентрации 5х10(' клеток/мл в среде 199 с добавлением 10 мМ Нерез и 2 мМ ¿-глутамина. В полипропиленовых микропробирках с ан-тиадгезивным покрытием смешивали 25 мкл клеточной суспензии с 12,5 мкл аутоплазмы (1-я проба), или с 12,5 мкл супернатанта слезной жидкости (2-я проба), затем в каждую пробу вносили 12,5 мкл объектов фагоцитоза (формалинизирован-ные эритроциты барана в концентрации 200х106/мл) и инкубировали при 37°С в течение 20 минут. Фагоцитарную активность нейтрофилов и эозинофилов учитывали микроскопически. Контролем служила проба, где клеточную суспензию инкубировали с таким же объемом питательной среды.

ТАБЛИЦА. ВЛИЯНИЕ АУТОПЛАЗМЫ И СЛЕЗНОЙ ЖИДКОСТИ НА НЕЙТРОФИЛЬНЫЙ И ЭОЗИНОФИЛЬНЫЙ ФАГОЦИТОЗ

Группа нейтрофильиый фагоцитоз эозинофильный фагоцитоз

число индекс % % акт. клеток Число индекс % % акт. клеток

I группа - больные передним туберкулезным увеитом

аутоплазма 2,04+0,14Ь 2,68+0,12ь 74,94+2,21ь 51,36±3,03ь 1,55±0,12Ь 2,36+0,14ь 65,99±4,15ь 44,04+3,12Ь

слеза 1,14±0,10 2,08±0,10 53,28±2,79 30,88±2,60ь 0,76+0,08а 1,63±0,13 45,71±2,52а 18,62±3,53а

среда 1,08+0,06“ 2,10+0,08 51,33±2,19а 25,92+1,59а 0,75±0,09а 1,58±0,15а 46,89+2,68® 15,57+3,08а

II группа - здоровые добровольцы (контроль)

аутоплазма 1,87+0,16ь 2,68±0,13ь 67,46±3,27ь 46,47±3,75ь 1,42±0,16 2,04+0,14ь 66,28+4,90 41,93+5,34

слеза 1,28±0,06 2,15±0,08 59,32+1,52 32,81 ±1,87 1,02±0,06ь 1,66±0,08ь 61,82±2,76 28,65±2,93ь

среда 1,40±0,11 2,17+0,10 62,81+2,23 36,49±2,55 1,14±0,14 2,45±0,26 58,10±2,88 36,50±3,39

а - /КО,05 в сравнении с контролем, Ь - то же в сравнении с пробами со средой; отмечены показатели, отличающиеся хотя бы по одному из использованных статистических критериев.

Основные результаты. Установлено, что слезная жидкость у здоровых людей увеличивает показатели эозинофильного фагоцитоза (таблица), что может быть связано с опсо-низнрующим действием содержащихся в слезе антител и белков системы комплемента, либо других факторов. Существенного влияния слезной жидкости на нейтрофильиый фагоцитоз пс выявлено. В присутствии аутоплазмы значительно повышаются показатели как нейтрофильного, так и эозинофильного фагоцитоза. Таким образом, в отличие от плазмы крови слеза обладает значительно менее выраженным оп-сонизирующим действием, проявляющимся только по отношению к эозинофилам. У больных туберкулезным увеитом опсонизирующее действие слезы обнаружено лишь к активным нейтрофилам. В контрольной пробе со средой наблюдается снижение фагоцитарной активности нейтрофилов и эозинофилов в сравнении с контрольной группой. Однако, опсонизирующее действие аутоплазмы на нейтрофильиый и эозинофильный фагоцитоз повышается, что может быть следствием ответной реакции на инфекцию.

Заключение. Таким образом, полученные результаты указывают на недостаточность гуморальных факторов местного иммунитета в слезной жидкости у больных туберкулезным увеитом.

ТАБЛИЦА 1. СУБПОПУЛЯЦИОННАЯ СТРУКТУРА, МИТОГЕННЫЙ У ДЕТЕЙ С БОС.

СУБПОПУЛЯЦИОННАЯ СТРУКТУРА, МИТОГЕННЫИ ОТВЕТ И АП0ПТ03 ЛИМФОЦИТОВ В ОСТРОЙ ФАЗЕ РЕСПИРАТОРНОЙ ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ {РВИ) У ДЕТЕЙ С БРОНХИАЛЬНОЙ ОБСТРУКЦИЕЙ

Погорецкая С.А.. Сибиряк С.В.*, Файзуллина P.M.

Башкирский медицинский университет, Уфа, Россия; *Всероссийский центр глазной и пластической хирургии, Уфа, Россия.

Исследования последних лет показывают, что нарушение адекватного “острофазного ответа”, как физиологической реакции на патоген, могут служить важным фактором, предрасполагающим к нарушениям специфической иммунореактивности и формированию атопического характера реагирования. Ранее было выявлено, что в остром периоде РВИ у детей с бронхообструктивным синдромом (БОС) отмечалась низкая экспрессия активационных антигенов (CD71, CD25, HLA-DR, CD23, CD95), отсутствие нарастания уровня сывороточного TNFoc и резкое снижение спонтанной и ЛПС-индуцирован-ной продукции TNFoc в культуре (Погорецкая С.А. 2000).

В настоящей работе представлены результаты оценки основных субпопуляций лимфоцитов: непрямой иммунофермен-

ОТВЕТ И АП0ПТ03 ЛИМФОЦИТОВ В ОСТРОЙ ФАЗЕ РВИ

% содержание СВ-позитивных клеток (M±SD)

1 группа (п=15) 2 группа (п-15) 3 группа (п=15) 4 группа (п=10)

CD3+ 62,6 ±5,4 64,4±9,9 58,2 ±10,4 58,1 ±11,4

CD4+ 44,4+7,2 52,0±7,4* 45,6 ±10,3 40,1 ±11,5*

О о оо + 29,2±6,7 30,1 ±10,1 23,5+6,6* 25,2 ±5,2*

CD19+ 17,1 ±4,9 29,5± 10,4* 25,6 ±8,1* 22,0±7,9

CD16+ 24,0±8,7 31,5±11,9* 23,5 +8,1 22,4+8,6

РБТЛ, ИС 17,5 ±12,6 27,5 ±10,5* 21,4 ±10,4 19,8 ±10,4

Hoechst+ клетки 16,2 +11,0 44,8 ±21,4* 19,2+12,4* 25,3 ±22,2*

Примечание: *- различия статистически достоверны Р < 0,05

тный метод, с использованием стандартной панели моноклональных антител (МКА) серий LT и ICO; определение числа лимфоцитов с морфологическими признаками апоптоза (окраска Hoechst 33342); митогениого ответа Т-клеток при стимуляции МКА aHTH-CD3 (2,5 мкг/мл). Были обследованы здоровые доноры (1 группа), дети в острой фазе РВИ (2 группа), дети в острой фазе РВИ с БОС (3 группа), дети в острой фазе РВИ с бронхиальной астмой (БА) (4 группа). Результаты иллюстрирует таблица 1.

Обнаружено, что в острой фазе РВИ отмечается статистически значимый CD4 лимфоцитоз, В-лимфоцитоз, КК-лим-фоцнтоз, увеличение митогениого потенциала Т-клеток, а также увеличение содержания лимфоцитов с морфологическими признаками фрагментации ядра, что является закономерным отражением активационного апоптоза. У детей с БОС содержание Т-лимфоцитов и их субпопуляций, В-лимфоци-тов и NK-лимфоцитов было ниже и не отличалось от группы здоровых детей. Пролиферативный ответ Т-клеток имел отчетливую тенденцию к снижению. Содержание апоп готиру-ющих клеток было значительно ниже, чем во 2 группе, хотя и превышало таковое в группе здоровых детей. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии адекватной реакции иммунной системы у детей с БОС.

ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ У ТУБИНФИЦИРОВАННЫХ ДЕТЕЙ

Полонская Ж.Г., Куртасова Л.М., Двоеконко A.A., Ольховский И.А., Дорохина H.A., Савченко A.A.

Краевой центр по профилактике и борьбе со СПИД, Красноярская государственная медицинская академия,

Красноярск, Россия

Одной из самых острых медико-социальных проблем современного общества является проблема туберкулеза. В основе клинической симптоматики заболевания и прогрессирования инфекционного процесса лежат нарушения в иммунной системе, возникающие в результате действия микобактерий туберкулеза и развития вторичных иммунопатологических состояний. Учитывая, что основными эффекторами антимикробной резистентности в организме человека являются полиморфно-нуклеарные фагоциты, исследование функционального состояния нейтрофилов у тубинфицированных детей представляется целесообразным.

Целыо данной работы явилось изучение функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у тубинфицированных детей.

Обследованы 42 тубинфицированных ребенка в возрасте 7-14 лет до проведения специфической терапии. Контрольную группу составили 35 здоровых детей аналогичного возраста. Фагоцитарная активность нейтрофильных гранулоцитов периферической крови определялась в тесте с латексом. Оценка спонтанной и индуцированной хемилюминесценции проводилась по методу De Sole Р. et al. (1983).

Результаты исследования показателей фагоцитарной активности выявили у наблюдаемых детей снижение процента фагоцитирующих нейтрофильных гранулоцитов на фоне сохранения поглотительной способности. Оценивая исходный уровень генерации активных форм кислорода нейтрофильных гранулоцитов крови, обнаружили увеличение площади хеми-люминесцентной кривой у наблюдаемых детей по сравнению с показателями контрольной группы (Р<0,001).

Изучение продукции активных форм кислорода нейтрофильных гранулоцитов в ответ на стимуляцию опсонизиро-ванным зимозаном показало статистически значимое увеличение времени реагирования на стимул у тубинфицированных детей (Р<0,001), повышение площади и максимального значения хемилюминесцентной кривой (Р<0,01) относительно параметров контроля. При этом индекс стимуляции у наблюдаемых детей статистически значимо не различался с показателями контрольной группы, что отражает сохранение способности нейтрофильных гранулоцитов к мобилизации резервных метаболических возможностей.

Таким образом, результаты проведенных исследований установили у тубинфицированных детей снижение киллин-говой активности нейтрофильных гранулоцитов на фоне уменьшения числа активно фагоцитирующих клеток. Принимая во внимание факт, что нейтрофильных гранулоцитов вносят существенный вклад в механизмы иммунобиологической реакции по ограничению и подавлению микробной инфекции нарушение их функциональной активности необходимо учитывать при разработке иммунореабилитационных программ у данной категории больных.

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ИММУНОРЕАКТИВНОСТЬ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ РАЗЛИЧНЫХ ЛОКАЛИЗАЦИЙ

Потапенко Е.И., Якунова O.A., Кусурсуз М.О., Короленок О.Я., Сушкова Е.А., Шендерова Р.И.

Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии М3 РФ, Санкт-Петербург, Россия

Широко известна ведущая роль иммунореактивности в возникновении туберкулеза и его дальнейшем течении. Цель работы - сравнение комплексного иммунного ответа у больных легочным и внелегочным туберкулезом (J1T, ВЛТ) для повышения качества диагностики. Использованы иммунофлюоресценция, иммуноферментный анализ (ИФА) и другие методы оценки иммунитета. Объектом исследования были 416 больных J1T, туберкулезным спондилитом (ТС), Т почек (ТП), Т глаз (TT), Т женских гениталий (ТЖГ), периферических лимфатических узлов (ТПЛУ), находившихся в фазе максимальной активности.

Было установлено, что от 35 до 76% больных каждой локализации имели нормальное содержание CD3 клеток и их субпопуляции CD8 . От 20 до 50% больных имели нормальное содержание CD4 Т-хелперов. Пониженное число CD4 лимфоцитов встречалось заметно чаще, чем повышенное. При всех локализациях Т уровень CD8 достоверно коррелировал с уровнем CD 16 лимфоцитов (г>0,62; р<0,05). Четкая прямая корреляция установлена для непосредственно зависящих друг от друга популяций и субпопуляций Т лимфоцитов (CD3 / CD4 , CD3 /CD8 ). Уровень CD 16 клеток был нормальным у 5-22% больных, у остальных - одинаково часто повышался и понижался. При всех локализациях Т отмечена сильная коррелятивная связь (г=0,7-0,9) между числом CD3 клеток и содержанием CD 16 лимфоцитов. Впервые установлено, что у 40-80% обследованных снижено число CD25 клеток, представляющих активированные Т- и В- лимфоциты, несущие рецептор к 1L-2. Возможно, это имеет существенное отношение к силе и направлению развития иммунного ответа, так как может блокировать трансдукцию активационного сигнала. У больных активным ЛТ отмечено; снижение пролиферативного ответа в РБТЛ на ФГА до 40 - 20% и до 0-3,0% в присутствии ППД; обнаружен дисбаланс содержания IgM,

IgG, IgA; одновременно нормальное содержание всех 3-х классов lg отмечено не более чем у 20% больных. У 87% больных ЛТ выявлены повышенные значения противотуберкулезных антител (ПТАТ) в комплексе из 4-х серологических реакций.

О заметной напряженности специфического клеточного и гуморального ответа у больных с ТС и ТП свидетельствовали данные об антигенной стимуляции пролиферативной активности Т-клеток (РБТЛ с ПГ1Д > 5,0%) и продукции различных ПТАТ (титры в 3-4 раза выше диагностических). Сочетание выраженного клеточного ответа (РБТЛ с ППД > 5,0%) и слабого гуморального отмечено при ограниченных формах ВЛТ

- ТГ, ТПЛУ, ТЖГ.

В ходе работы выявлены характерные особенности нмму-пореактивностн больных ЛТ и ВЛТ: различные уровни CD4 , CD25 клеток; отличия в специфической пролиферативной активности Т-клеток и интенсивности антителообразования. Уровни CD3 , CD8 , CD 16 клеток, концентрации IgG и IgM у изученных больных с различными локализациями туберкулеза были практически одинаковыми.

ИММУНОГЕННЫЕ И АПОПТОГЕННЫЕ СВОЙСТВА ВИРУСОВ ГРИППА А В ЗАВИСИМОСТИ ОТ АТТЕНУАЦИИ, ГЕНЕТИЧЕСКОЙ РЕАССОРТАЦИИ И ИНАКТИВАЦИИ ШТАММОВ

Рекстин А.Р., Найхин А.Н., Баранцева И.Б., Дони-на С.А., Руденко Л.Г.

Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург, Россия

Одной из главных задач вакцинологии является накопление детальных данных о связи физико-биологических форм вводимых антигенов с безвредностью и иммуногенностью конструируемых вакцинных препаратов. В этой связи проведена экспериментальная работа по сравнительному анализу иммуногенных и апоптогенных качеств вирулентного для мышеи вируса гриппа A(H1N 1), его аттенуированного и инактивированного вариантов, а также вирусов этого серотипа с генетически встроенными внутренними генами от вируса другого еероподтипа - A(H2N2). Все эти биологические приемы используются при создании живых и инактивированных вакцин. Однако вопрос об их влиянии на эффективность вакцинных препаратов остается открытым.

В эксперименте на мышах, подвергшихся интраназально-му заражению живыми вирулентными, аттенуированными и реассортантными вирусами, а также внутрибрюшинной инокуляции инактивированного вируса, проведено количественное определение ЦТЛ-иммунного ответа и пролнферативной активности лимфоцитов селезенки после стимуляции in vitro вирусными антигенами и конканавалином А, раннего и позднего апоптоза тех же лимфоцитов (аннексин-пропидиевый тест в проточной цитофлуорометрии) и вирусспецифических антителосекрстирующих IgA. IgM, и IgG В-клеток. Перечисленные факторы иммунитета изучены в динамике через 12, 24, 48 часов и 14 дней после первичного и повторного заражения.

Атгенуация патогенных вирусов гриппа приводила к снижению их способности индуцировать первичный, но не вторичный В-клеточный иммунный ответ. Геуетическая реассор-тация вирусов сопровождалась снижением функциональной активности в большей степени ЦТЛ первичного иммунного ответа, чем ЦТЛ памяти. Все живые вирусы гриппа индуцировали апоптоз лимфоидных клеток, но в гораздо большей

степени это касалось патогенного штамма. Пик апоптотичес-кой активности наблюдался через 24 часа после заражения. Очень слабой апоптотической активностью обладал инактивированный вирус. Генетическая реассортация штаммов не влияла на уровень апоптотичеекого воздействия на сплено-циты. Отмечено кратковременное снижение функциональной активности лимфоцитов через 24 часа после введения всех вариантов вируса гриппа A(H1N1).

Полученные результаты свидетельствуют, что ни аттенуация, ни генетическая реассортация живых вирусов гриппа А не влечет за собой каких-либо существенных потерь в индукции местного и системного иммунитета. Предварительные данные об апоптозе дают основание предположить, что введение живых аттенуированных вирусов не приводит к дисбалансу в естественно запрограммированной гибели иммунных клеток.

ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУННОГО ОТВЕТА, ИНДУЦИРОВАННОГО ДНК- ВАКЦИ НАМ И ПРОТИВ ВИЧ-1 У МЫШЕЙ ЛИНИИ BALB/C

Романович А.Э., Мурашёв Б.В., Креславский Т.Ю., Климов H.A. Козлов А.П.

Лаборатория молекулярной вирусологии,

ГНЦ ГНИИ особо чистых биопрепаратов, Санкт-Петербург, Россия

Введение. ДНК-вакцины представляют собой плазмидный вектор, несущий ген, кодирующий белки патогена или опухоли, и представляют собой новый механизм экспрессии антигена in vivo, благодаря которому генерируется гуморальный и клеточный иммунный ответ. Подобно живым или аттенуированным вирусам ДНК-вакцины эффективно вызывают активацию МНС I и МНС II зависимых путей презентации антигена, что приводит к стимуляции CD4 и CD8 клеток.

Цель и задачи: Целыо данной работы является исследование иммунного ответа, индуцированного рядом ДНК-вак-цин, экспрессирующих ген env ВИЧ-1, под контролем различных эукариотических промоторов.

Материалы и методы: Мышам линии BALB/c 9-12 недельного возраста внутримышечно вводили 25 мкг ДНК-вак-цины.Через7, 14,21 и 28 дней животных забивали, в асептических условиях выделяли сслсзёнки и определяли уровень специфической цитотоксичности спленоцитов с помощью колориметрического набора CytoTox 96 (Promega Inc, USA). Уровень гуморального ответа на рекомбинантный gpl20 анализировали с помощью стандартного твёрдофазного ИФА. Данные были статистически достоверны при Р<0,05. На 50 день после праймирования животных бустировали сингенны-ми фибробластами F160, экспрессирующими ген env ВИЧ-1. Через 7, 14, 21 и 28 дней после бустирования животных забивали и проводили анализ вторичного иммунного ответа.

Результаты: Все ДНК-вакцины индуцируют цитотокси-ческий ответ в независимости от типа эукариотического промотора, регулирующего экспрессию гена env ВИЧ-1. Максимальный уровень специфического лизиса наблюдается на 7 день после иммунизации и достигает порядка 50-55% при соотношении эффекторных и клеток мишеней 75:1 и 30-35% при 25:1. Уровень специфического лизиса снижается до контрольного значения на 21 -28 день после иммунизации и сохраняется на этом уровне до бустирования. Полученные результаты свидетельствуют об эффективной презентации антигена на МНС I в ходе ДНК-иммунизации и генерации популяции специфических цитотоксических Т-лимфоцитов.

Бустирование фибробластами F160 на 50 день после прай-мирования индуцирует значительный цитотоксический ответ, превышающий первичный. Вторичный иммунный ответ достигает максимума на 7 день после бустирования и составляет 60-65% при соотношении клеток-эффекторов и клеток-мишеней 75:1 и 40-45% при соотношении 25:1. Поскольку вторичный иммунный ответ развивается более интенсивно по сравнению с первичным, можно сказать, что праймирование животных ДНК-вакциной приводит к формированию клеток иммунологической памяти.

Уровень антител на рекомбинантный gp 120 достигал максимума на 14 день после иммунизации и соотношение OD450nm/ (OD , control) составляло 1,5-1,7 при разведении сыворотки 1:50. На 21-28 день после праймирования уровень антител снижался до контроля. На 14 день после бустирования фибробластами F160 уровень антител достигал максимального значения, составляющего ODJ50nm/(OD450iim control) 2,5-3,0 при разведении сыворотки 1:50 и снижался до уровня контроля на 28 день.

Заключение. Все ДНК-вакцины, экспрессирующие ген ет> ВИЧ-1, индуцируют сильный цитотоксический и гуморальный ответ у мышей линии BALB/c. ДНК-иммунизация приводит к образованию В- и Т-клеток памяти.

ИЗМЕНЕНИЯ ОТДЕЛЬНЫХ ЗВЕНЬЕВ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ КЛИНИЧЕСКОЙ ФОРМЫ ОСТРОГО КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА

Рыжаенков В.Г., Шилов Ю.И.

Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН,

Лаборатория клинической иммунологии и диагностики СПИДа,

Пермь, Россия

В России клещевой энцефалит (КЭ) занимает существенное место по заболеваемости населения среди других природно-очаговых арбовирусных инфекций. Особенностью КЭ является очень широкий диапазон его проявлений от тяжелых очаговых до бессимптомных форм. Показано, что иммунные механизмы играют существенную роль в патогенезе КЭ и обусловливают клинический полиморфизм этого заболевания, степень поражения нервной системы, исход патологического процесса [В.В.Погодина с соавт., 1986, Конев В.П. с со-авт., 1996, Oschmann Р. с соавт., 1999].

Было обследовано 58 больных КЭ в возрасте от 22 до 65 лет, находившихся на лечении в клинической инфекционной больнице № 1 г. Перми в 1999-2000 гг. Из них у 18 больных диагностирована лихорадочная форма КЭ, у 27 - менинге-альная, у 13 - очаговая форма. Диагноз был подтвержден лабораторно с помощью выявления специфических IgM-анти-тел методом иммуноферментного анализа и РНК вируса клещевого энцефалита в полимеразной цепной реакции. Контрольная группа включала 15 практически здоровых людей в возрасте от 25 до 55 лет. Все иммунологические параметры оценивали в гепаринизированной (25 ЕД/мл) венозной крови. Фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови оценивали по поглощению формалинизированных эритроцитов барана. Концентрацию IgG, IgA и IgM определяли методом радиальной иммунодиффузии. Пролиферативный ответ лимфоцитов оценивали в культурах с фитогемаг-глютинином (ФГА, Difco, США, в концентрациях 12,5; 25; 50; 100; 200 и 400 мкг/мл). Через 48 часов культивирования в СО:-инкубаторс при 37°С в атмосфере 5%-ного СО,, вно-

сили по 1 мкКи метил-Н3-тимидина. Уровень пролиферации определяли через 72 часа на жидкостном сцинтилляцион-ном счетчике Wallac. Степень фрагментации ДНК клеток культур оценивали методом электрофореза. Для экстракции ДНК применяли набор фирмы “ЛИТЕХ” (Москва, Россия) с использованием лизирующего раствора гуанидина (guanidine) и осаждением ДНК на суспензии сорбента. После экстракции в ТЕ-буфере и центрифугирования супернатант вносили в ячейки геля агарозы, содержащего 5% бромистого этидия. После электрофореза результат просматривали на трансиллюминаторе.

При очаговой форме КЭ выявлена абсолютная лимфопе-ния, развитие нейтрофильного лейкоцитоза, снижение количества эозинофилов, резко выраженное повышение абсолютных и относительных показателей фагоцитоза, а также повышение общей гемолитической активности комплемента. Особенностью менингеальной формы КЭ является активация фагоцитоза при отсутствии выраженных изменений числа лимфоцитов и других параметров иммунограммы. Характерное проявление лихорадочной формы - лимфоцитоз. При очаговой форме КЭ наблюдалась глубокая депрессия бласт-трансформации лимфоцитов со сдвигом оптимума концентрации митогена до 200 мкг/мл. Менее выраженное, но статистически достоверное угнетение пролиферативного ответа с частичным сдвигом оптимума концентрации митогена отмечено при менингеальной форме, в то время как при лихорадочной форме изменения пролиферации были минимальными. Таким образом, отмечена прямая взаимосвязь между тяжестью клещевого энцефалита и выраженностью угнетения Т-клеточного пролиферативного ответа. Важно отметить, что количество лимфоцитов, вносимое в культуру, было стандартным, поэтому угнетение пролиферативного ответа лимфоцитов на ФГА связано с нарушением их функций. При электрофорезе выделенной клеточной ДНК из культуры мо-нонуклеарных клеток у больных очаговыми формами выявлена фрагментация ДНК. Поэтому, на наш взгляд, угнетение пролиферативного ответа Т-лимфоцитов на митогены и уменьшение их числа может быть связано с их выходом в апоптоз, либо прямым цитодеструктивным действием вируса клещевого энцефалита.

Таким образом, вирус клещевого энцефалита, первоначально реплицирующийся в клетках регионарных лимфатических узлов, при адекватном иммунном ответе в мало восприимчивом организме вызывает развитие сравнительно легких клинических форм заболевания. При прямом повреждении клеток и органов иммунной системы, приводящем к тяжелому вторичному иммунодефициту, развиваются наиболее тяжелые очаговые формы клещевого энцефалита.

КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ДЕТЕЙ, БОЛЬНЫХ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ А

Самохина Э.А.

Ростовский государственный медицинский университет

Огромные затраты на купирование эпидемических вспышек гепатита A (Zucicni et at., 1998), возникающие как в результате употребления инфицированных продуктов (М.Д.А-лейник и соавт., 1992), так и при нарушении санитароно-ги-гиенических норм, привлекает внимание исследователей к расшифровке интимных механизмов формирования желтушных и безжелтушных форм этой инфекции с целью разработки наиболее адекватных методов прогнозирования и лечения,

при этом следует отмстить, что наиболее низкая частота встречаемости антител к ВГА, свидетельствующая об отсутствии иммунной защиты, встречается преимущественно у школьников 10-15 лет, как у девочек, так и у мальчиков (Benin et at,

1997), что обуславливает закономерности формирования этой инфекции (С.Л.Мукомолов, 1999).

Цслыо работы явилось изучение клинико-иммунологических особенностей гепатита А у детей 10-15 лет, (20 чел.) поступивших па стационарное лечение в гспатологический центр в остром периоде с жалобами на высокую температуру, недомогание, анорексию, тошноту. Контрольную группу составили 15 практически здоровых школьников того же возраста. При оценке иммунного статуса исследовали содержание CD3, CD4, CD8, CD 16. CD20, CD95, CD 1 lb, Th 1, Th2 с помощью проточной цитометрии (Coulter), содержание IgA, IgM, IgG , оценивали по Манчини, спонтанную и стимулированную активность фагоцитов в НСТ-тссте, содержание циркулирующих иммунных комплексов по Phoskovi. Исследование проводили при поступлении и спустя месяц (стадия реконва-лесценции).

Установлено, что в остром периоде заболевания содержание CD3 лимфоцитов существенно не отличается от контрольной группы и в среднем составляет 62,3±3,4%. В то же время следует отметить существенные сдвиги в соотношении иммунорегуляторных субпопуляций, заключающееся в выраженной редукции CD 4 Т-лимфицитов (26,3±4,8%), при этом количество CD8 'Г-лимфоцитов существенно не отличается от донорских показателей 22,1 ±3,5%. Отмечается умеренно выраженное накопление CD16 клеток до 15,3±4,3%, количество клеток, экспрессирующих CD95 незначительно -8,2±1,5% и 10,2±1,7% соответственно. Анализ показателей гуморального звена выявил гипергаммаглобулинемию IgM 1,4±0,2 г/л высокое содержание ЦИК 195±32 у.е. снижение адаптационных резервов нейтрофилов Кет. = 1,3±0,1 у.е. В стадии рсконвалесценции существенных изменений не отмечено за исключением тенденции к увеличению CD4 лимфоцитов 30,1 ±2,3%.

Несмотря на исчезновение клинических симптомов, выраженные изменения иммунного статуса продолжают сохранятся у пациентов спустя месяц после начала заболевания, что обуславливает необходимость иммунореабилитационной терапии.

ОСОБЕННОСТИ ЦИТОКИНОВОГО СТАТУСА ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ.

Середа В.Г., Маркелова Е.В.

Владивостокский государственный медицинский университет

Патоморфоз туберкулеза определяет значительные трудности дифференциальной диагностики и терапевтической тактики у детей с различными формами туберкулеза. Развитие заболевания туберкулезом сопровождается изменениями состояния системного и местного иммунитета. Иммунная недостаточность при этом обусловлена токсическим действием микобактерий туберкулеза на иммунокомпетентные клетки и иммуносупрсссивным влиянием антибактериальных препаратов. Исследованиями последних лет убедительно показана важная роль цитокииов, которые продуцируются активированными клетками и участвуют как в иммунной защите, так и в процессах воспаления и деструкции тканей. Однако, роль цитокинов при повреждениях легких, в том числе при туберкулезе изучена недос гаточно.

Целью исследования явилось изучение уровня цитокинов IL-la, IL-8, IFNy и IL-10 в сыворотке крови детей и подростков, больных разными формами туберкулеза. Было обследовано 79 человек в возрасте от 3 до 16 лет. Пациенты были распределены на три группы: первую группу составили 46 детей с впервые выявленным туберкулезом внутригрудных лимфоузлов (ТВГЛУ), вторую группу - 12 детей с инфильт-ративным туберкулезом легких и третью группу составили дети с нарастающей или гиперергической чувствительностью к туберкулину, с риском развития туберкулеза (21 ребенок).

Исследование сывороточного содержания цитокинов проводилось метедом иммуноферментного анализа с помощью коммерческих тест-систем “R&D diagnostics Inc.”, USA. Дополнительно определялись основные показатели иммунного статуса: IgM, IgG, IgA, ЦИК и их размеры, показатели фагоцитоза.

В результате проведенных исследований установлены иммунные нарушения разной степени выраженности во всех обследованных группах. Глубина иммунных дефектов была максимальной у детей с инфильтративным туберкулезом легких. Зарегистрировано, что IL-la определяется в сыворотке крови практически у трети детей, больных разными формами туберкулеза во всех обследованных группах с наибольшей концентрацией у детей с впервые выявленным ТВГЛУ. В этой же группе отмечено незначительное увеличение IFNy и IL-10. У детей с инфильтративным туберкулезом легких отмечено значительное угнетение синтеза всех исследуемых цитокинов. IL-10 не выявлен ни у одного ребенка с инфильтративным туберкулезом легких. При этом уровень IL-la у детей с повышенными показателями ЦИК был умеренно снижен по сравнению с инфицированными детьми и с ТВГЛУ с нормальным уровнем ЦИК. Концентрация IFNy в сыворотке крови в группе с ТВГЛУ не отличались от группы инфицированных. У детей с ТВГЛУ отмечалось значительное снижение IL-8, но при повышении ЦИК было выше чем с нормальным уровнем комплексов в крови. IL-10 увеличивался только на фоне нормальных показателей ЦИК.

Рассмотрение группы инфицированных детей позволило говорить о появлении иммунных нарушений еще на стадии инфицированное™ с дальнейшим углублением иммунодефи-цитного состояния при развитии туберкулеза. Реакция иммунной системы при разных формах туберкулеза заметно различалась. Вероятно, реагирование иммунной системы на возбудитель инфекции определяет характер развития туберкулеза и форму туберкулезного процесса. Более глубокое изучение цитокиновой регуляции позволит определить риск развития туберкулеза у инфицированных детей, характер развития туберкулезного процесса, обосновать показания и разработать оптимальные схемы иммунокоррегирующей терапии.

ПРОДУКЦИЯ IL-8 МОНОНУКЛЕАРАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ

*Сероокая Т.Н., **3афрапская М.М., *Косгикова Л.И., ***Дубовик O.A., *Глазовский В.А.

* Республиканский центр профилактики СПИД,

**Международный экологичеекмй университет им. А Д.Сахарова, ***Республиканская больница для осужденных КИН МВД РБ,

Минск, Беларусь

В последние годы активно обсуждается роль хемокинов в патогенезе СПИДа. Основной представитель этого семейства

- интерлейкин-8 (IL-8), которому отведена ключевая роль растворимого сигнала. Основные клетки-продуценты IL-8 - моноциты/макрофаги и эндотелиоциты. Установлено, что прогрессирование заболевания сопровождается переходом от преимущественно макрофаготропных штаммов ВИЧ к лимфо-цитотропным, однако роль макрофагального звена в формировании того или иного процесса до конца не выявлена.

Цель работы заключалась в изучении сывороточной концентрации и продукции IL-8 мононуклеарами периферической крови (МИК) у ВИЧ-позитивных пациентов.

Материалом для исследования послужила стерильная венозная периферическая кровь и моча 13 парентеральных наркоманов с диагнозом: ВИЧ-инфекция, стадия II (асимптомная), подтвержденным серологически с помощью выявления тотальных антител методом ИФА тест-системами фирм "Abbott”- США, ‘’Sanofi D. Pasteur” - Франция, ‘’Organon Teknika”- Нидерланды и НПО "М.М.С.”- Беларусь и подтверждения в реакции иммунного бпочтинга при наличии полного набора вирусных белков тест-системой "NEW LAV BLOT 1” фирмы "Sanofi D. Pasteur”). Контрольную группу составили 10 доноров аналогичного возраста. Продукцию IL-8 оценивали культуральным методом под влияние ЛПС. Концентрацию IL-8 сыворотке крови, моче и супернатантах клеточных культур определяли методом ИФА с применением тест-систем ТОО "Цитокнн” НИИ Особо чистых биопрепаратов г.Санкт-Петербург. Количественное содержание субпопуляций Т-лимфоцитов оценивалось иммуноферментным тестом для определения CD4 и CD8 Т-лимфоцитов методом иммунозахвата с помощью парамагнитных частиц, покрытых антителами ("СарееШа CD4/CD8" фирмы Sanofi D. Pasteur-Франция).

В результате проведенных исследований нами установлено достоверное увеличение концентрации IL-8 в сыворотке крови ВИЧ-инфицированных по сравнению с контрольной группой. Как в исследуемой группе, так п в контроле в 50% случаев уровень IL-8 в сыворотке был ниже порога чувствительности тест-системы. Известно, что индукция синтеза IL-8 клетками моно-цит/макрофагальной системы может осуществляться как прямой активацией синтеза вирусами, так и стимуляцией синтеза IL-8 цитокинами и другими биологически активными веществами, появляющимися в очаге воспаления. При индукции синтеза IL-8 с помощью ЛГ1С in vitro нами на данном этапе исследований не было установлено достоверных различий в концентрации изучаемого цитокнна при спонтанной его продукции и при индуцированной как у больных, так и у здоровых. Отмечался большой индивидуальный разброс в индуцированной ЛПС концентрации IL-8 ВИЧ - позитивных пациентов, причем в 45,5% случаев происходило угнетение продукции при стимуляции МПК ЛПС. Достоверных изменений концентрации IL-8 в моче исследуемых групп также установлено не было и составило 19+1,8 пг/мл у ВИЧ-инфицированных и 17 ±1,1 rir/мл в контрольной группе соответственно. Интересными представляются результаты оценки корреляционной зависимости изучаемых показателен с абсолютным содержанием CD4 и CD8 Т-лимфоцитов. У обследуемых пациентов, которые отнесены к асимптомной стадии заболевания, наблюдалось достоверное снижение абсолютного числа CD4 субпопуляцпн Установлена слабая отрицательная корреляционная зависимость между абсолютным содержанием CD4 лимфоцитов крови и спонтанной продукцией IL-8 (г=-0,58; р<0,05) н между CD4 клетками и индуцированной продукцией IL-8 (г=0,86; р<0,05).

Изучение роли IL-8 в иммунопатологии ВИЧ-инфекции позволит разработать эффективный показатель активности инфекционного процесса, клинической стадии и прогноза заболевания, а также расширит возможности вмешательства в цитокино-вую сеть с целью предотвращения и коррекции нарушений функционирования иммунной системы при ВИЧ-инфекции.

РОЛЬ АЛЛЕЛЬНОГО ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНА IL-4 В ФОРМИРОВАНИИ ИММУННОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПРИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

Сизякина Л.П., Коненков В.И., Талеб Э.

НИИ клинической иммунологии Ростовского государственного медицинского университета, Ростов-на-Дону, Россия

Учитывая важную роль IL-4 в регуляции Т111/ТЬ2-балан-са в динамике антителогенеза, его многовекторные эффекты на иммунокомпетентные клетки и возможность регуляции экспрессии на них хемокиновых рецепторов становится очевидной необходимость изучение закономерностей синтеза IL-4, а также кодирующего его гена при ВИЧ-инфекции.

Целью настоящего исследования явилось изучение иммунопатогенеза особенностей ВИЧ-инфекции (субтип А) при аллельных вариантах промотора гена IL-4. Представлены данные, полученные при иммунологическом скрининге 69 ВИЧ-инфицированных в возрасте от 20 до 40 лет в стадии генерализованной лимфаденопатии (ГЛАП) 41 человек и в стадии пре-СПИД 28 человек. Для оценки иммунного статуса использовались мультипараметрическая проточная цитометрия с определением числа CD3+, CD4+, CD8 , CD45RA+, CD4CD45RA , Th 1 и Th2 клеток, твердофазный иммуноферментный анализ, специфическая полимеразная цепная реакция с последующим рестрикционным анализом амплификатов эндонуклеазой BsmFl и определением аллельных вариантов промотора гена IL-4.

Установлено, что в стадии ГЛАП у лиц с гомозиготным вариантом С/С промотора гена 1L-4 отмечается высокая способность к синтезу IL-4 по сравнению с гетерозиготным вариантом С/T (1520,7±178 пкг/мл и 616,2±82 пкг/мл соответственно).

Разнонаправленность синтеза IL-4 у лиц с аллельными вариантами промотора гена IL-4 отражается и на функциональной активности антител. Выявлено, что титры анти-ВИЧ-антител находились на более высоком уровне у больных с гомозиготным вариантом С/С, чем у гетерозиготных САГ (ГЛАП-C/C-Ig 4,79±1,2; С/ T-lg 4,52± 1,25 пре-СПИД C/C-Ig 5,32± 1,30; СЛГ-Ig 4,85± 1,21). При этом необходимо подчеркнуть, что аффинность специфических анти-ВИЧ-антител была выше во всех стадиях заболевания - RHAV ГЛАП С/С-1027 у.е.; С/Т-1136 у.е. RHAV пре-СПИД С/С-1216 у.е.; С/Т-1355 у.е., у лиц с гомозиготным С/С вариантом.

Таким образам, наличие у ВИЧ больных гомозиготного аллельного варианта С/С промотора гена IL-4 способствует более благоприятному течению заболевания, а наличие гетерозиготного варианта С/T, ассоциировано с неблагоприятным прогнозом заболевания.

ОСОБЕННОСТИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ФАГОЦИТОВ В ДИНАМИКЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ

Сизякина Л.П., Андреева И.И., Шемшура А.Б., Чумакова Е.А.

Ростовский государственный медицинский университет, Ростов-на-Дону, Россия

Исследованию функционирования фагоцитарной системы при ВИЧ-инфекции в настоящее время придается большое значение (Laurence А., 1999, Gomatos R., 2000). Это обусловлено ведущей ролыо поломок фагоцитоза в возникновении бактериальных, грибковых и вирусных оппортунистических инфекций при прогрессировании ВИЧ-инфекции, главным образом, в стадии пре-СПИД (Saito A. et al., 1998; Larric G., 2000), a также непосредственным участием макрофагов и ией-

трофилов в формировании противовирусного иммунитета (Ерохин В.В., 1990, Lin, S.J. et al., 1998).

В связи с этим, целью нашего исследования явилось изучение функциональной активности макрофагов (Мф) и нейт-рофилов (Нф) при развитии ВИЧ-инфекции у детей в стадии пре-СПИД. Клинико-иммунологические наблюдения проведены у 64 пациентов в возрасте от 4 до 6 ле г и от 7 до 14 лет, находившихся в стадии прс-СПИД (30 и 34 чел). Методы исследования включали определение экспрессии на мембране фагоцитов Fey- и С,Ь-рецепторов с помощью проточной ци-тофлюориметрии, изучение фагоцитарной активности клеток с помощью бактериального фагоцитоза, оценка интенсивности спонтанного и индуцированного кислородзависимого метаболизма в HCT-тесте, определение содержания основных провоспалительных цитокннов IL-lß и TNFa в ИФА.

Установлено, что у больных как младшей, так и старшей возрастной группы при прогрессировании ВИЧ-инфекции в стадии пре-СПИД отмечались однонаправленные изменения показателей Мф и Нф, заключающиеся в повышении экспрессии мембранных Fcy-рецеиторов (Мф - младш. 31±1,1%, старш. 24±1,4%; Нф - младш. 61±2,3%. старш. 84±3,1%) и С,Ь-рецеп-торов (Мф - младш. 39± 1,8%, старш. 33±1,2%; Нф - младш. 60±3,5%, старш. 91 ±4.3%), поглотительной фагоцитарной активности (Мф - младш. 30±1,5%, старш. 25±1,1%; Нф - младш. 96±3,1 %, старш. 98±2.5%) и кислородзависимого метаболизма клеток (Мф - младш. 114±4,8 у.е., старш. 91 ±4,3 у.е.; Нф - младш. 141±8,6 у.е., старш. 160±9,1 у.е.).

В то же время у всех ВИЧ-инфицированных пациентов, по мере прогрессирования инфекционного процесса, в стадии пре-СПИД регистрировалось снижение удельной фагоцитарной активности (Мф - младш. 1,21±0,06 у.е., старш. 1,28±0,03 у.е.; Нф - младш. 7,5±3,1 у.е., старш. 8,5±2.7 у.е.) и резервных метаболических возможностей (Мф - младш. 1,17±0,04 у.е., старш. 1,23±0,02 у.е.; Нф - младш. 1,13±0,05 у.е., старш. 1,32±0,04 у.е.). Продукция основных провоспалительных медиаторов в стадии пре-СПИД неуклонно увеличивалась (IL-lß - младш. 240±41 пкг/мл, старш. 112±23 пкг/мл; TNFa - младш. 420±58 пкг/мл, старш. 371 ±39 пкг/мл), отражая нарастающий дисбаланс цито-киновой регуляции.

Таким образом, в стадии пре-СПИД нами выявлены сходные закономерности изменения основных параметров функционирования как нейтрофильного, так и макрофагального звена, заключающиеся в неадекватной стимуляции рецепторной и метаболической активности клеток, уменьшении их резервных адаптационных возможностей, а также гиперпродукции провоспалительных цитокинов. Указанные изменения в большей степени выражены у детей младшего возраста. Выявленные нарушения приводят к снижению эффективности фагоцитоза, срыву антпоксидантной системы, и, в конечном итоге, к формированию тотального дефицита фагоцитарного звена.

ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ ЛОКАЛИЗОВАННОЙ ФОРМЫ ДИФТЕРИИ РОТОГЛОТКИ У ДЕТЕЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СОСТОЯНИЯ АНТИТОКСИЧЕСКОГО ИММУНИТЕТА

Симованьнн Э.Н., Титирян K.P., Мартыненко Л.Д., Рогозин П.Ф., Маалел Тауфик

Кафедра детских инфекционных болезней Государственного медицинского университета, Ростов-на-Дону, Россия

Под наблюдением находился 171 ребенок с локализованной формой дифтерии ротоглотки с различным прививочным анамнезом, из них 52,6±3,8% составили дети, привитые вне

схемы; 32,2±3,6% - привитые по календарю прививок; 15,2±2,7% - непривитые дети.

При иммунологическом обследовании в момент поступления в стационар до введения противодифтерийной сыворотки установлено, что, по данным РПГА, титр антитоксических антител у 66,6% непривитых детей был низким (1:10 - 1:40), у 33,4% - средним (1:80 - 1:640), а у 19,2% - отсутствовал.

Среди детей, привитых вне схемы, 6,7% больных были серонегативными. Титры антитоксических антител у серопозитивных детей распределялись по трем группам: низкие (1:10-1:40) - у 25,0%, средние (1:80-1:320) - у 34,5%, высокие (1:640- 1:5120)-у 40,5%.

У привитых по календарю титры антител также распределялись по трем группам, но распределение было иным: низкие титры (1:10- 1:40)-13,2%, средние (1:80-1:640) - у 54,7%, высокие (1:1280 - 1:5120) - у 32,1 % детей. Серонегативными оказались 3,6% больных.

Средний геометрический титр (х J антител у привитых по схеме составил 1:400, у привитых вне схемы - 1:235, у непривитых - 1:35.

Обращает на себя внимание тот факт, что большинство привитых детей, имеющих высокие титры антитоксических антител, поступали в поздние сроки (позже 4 дней) от начала заболевания. Время от последней прививки против дифтерии составляло 2,8±0,4 года для привитых по схеме и 4,3±0,7 года для привитых вне схемы детей.

Выявлена зависимость клинического течения дифтерии от напряженности антитоксического иммунитета. Так, у непривитых при низких титрах антител длительность налетов составила 3,25±0,2 дня, а при средних титрах - 2,0±0,3 дня (р<0,01).

У привитых по схеме температурная реакция сохранялась достоверно дольше при низких титрах (4,1±0,3 дня), чем при средних титрах (3,3±0,2 дня, р<0,05) и при высоких титрах (2,8±0,3 дня, р<0,01).

У привитых вне схемы продолжительность температуры при низких и средних титрах составила 4,1 ±0,5 и 5,0±0,4 дня, соответственно против 2,9±0,4 дней при высоких титрах (р<0,01). Длительность налетов при низких и средних титрах была одинаковой (2,8±0,4 и 2,9±0,3 дня, соответственно), тогда как при высоких титрах - 1,9±0,3 дня (р<0,02).

Таким образом, локализованная форма дифтерии ротоглотки развивается как у непривитых, так и у привитых детей. Большинство непривитых детей (85,8%) оказались при поступлении в стационар либо серонегативными, либо с низкими титрами антитоксических антител (1:10 - 1:40). У 86,8% привитых по схеме и 75,0% привитых вне схемы детей титры антител при поступлении были достаточно высокими (1:80 -1:5120), что можно объяснить поздними сроками госпитализации, а также сохранением напряженности поствакциналь-ного антитоксического иммунитета.

Впервые выявлена взаимосвязь уровня антитоксических антител и клинических проявлений заболевания, что может служить критерием прогноза тяжести течения заболевания.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА СУПЕРЛИМФ

Снимщикова.И.А*, Юдина С.М., Баранова В.В., Крестинин В.О., Архипова A.B., Чуева Е.Н.*

Курский медицинский университет, Курск,

Орловский государственный университет*,

Орел, Россия

Развитие бактериальных инфекций протекает на фоне иммунной депрессии, обусловленной накоплением в организ-

“Дни иммунологии в СПб ‘2001 ’

Медицинская иммунология

ме микробных токсинов и антигенов, медиаторов воспаления, протеолитических ферментов, иммунных комплексов и др. Явления иммунодефицита усугубляет дисбаланс продукции цитокинов, всегда сопровождающий инфекционный процесс. Поэтому комплексная терапия инфекционных заболеваний должна включать средства, нормализующие цитокиновыи статус. Показана высокая клиническая эффективность применения препаратов цитокинов при лечении различных бактериальных инфекций. Однако механизмы протективного действия цитокинов при этих процессах недостаточно изучены. Есть основание полагать, что эффекты препаратов не ограничиваются только иммуномодулирующей активностью. В настоящий работе изучено антибактериальное действие препарата Суперлимф, содержащего естественный комплекс природных цитокинов: IL-1, IL-2, IL-6, TNFa, IFNy, MIF, TGFj3. Для определения антибактериальной активности препарата Суперлимф в качестве тест-культур использовали штаммы Staphylococcus aureus. Streptococcus pyogenes, Pseudomonas aerugenosa, Escherichia coli, которые культивировали в присутствии препарата в концентрациях 5 и 10 мкг/мл в течение 18-20 часов при 37°С. Проведенные эксперименты показали, что в препарате Суперлимф обнаруживается достаточно высокая антистафилококковая и антистрептококковая активность. Исходя из полученных данных, нами проведен сравнительный анализ исходов абсцессов легкого и острого гайморита, в зависимости от характера бактериальной микрофлоры, на фоне локального применения препарата Суперлимф. У больных острыми абсцессами легких при выделении из очага деструкции кокков полное выздоровление наблюдалось в 100%. При обнаружении синегнойной палочки в ассоциации с кокковой флорой отмечено клиническое улучшение у 71,4% больных, а у 28,6% - полное выздоровление. У больных острыми гайморитами, у которых Суперлимф применялся в виде монотерапии, выздоровление достигнуто в 100% случаях, а сроки лечения сократились с 12 до 7 дней, по сравнению с традиционной терапией.

Таким образом, полученные данные по антибактериальной актвности препарата Суперлимф в отношении кокковой флоры подтверждаются его высокой клинической эффективностью у больных с острыми бактериальными инфекциями.

ИЗУЧЕНИЕ ПОПУЛЯЦИОННОГО СОСТАВА И ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК СИСТЕМЫ ФАГОЦИТИРУЮЩИХ МОНОНУКЛЕАРОВ В ПРОЦЕССЕ ИММУНОГЕНЕЗА К ЧУМЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ ПРОТОЧНОГО РАСПРЕДЕЛИТЕЛЬНОГО КЛЕТОЧНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

Стукова Н.Ю., Фирстова В.Ф., Журавель В.А., Вихрев Д.В., Ледванов М.Ю.

Пензенский государственный университет, г.Пенза, Россия; РосПИПЧИ "Микроб ", г. Саратов, Россия

Фундаментальными исследованиями В.Л.Пустовалова с соавт. (1984); Г.И.Васильевой с соавт. (1990-1998); М.Ю.Лед-ванова с соавт. (1990-1997); А.Л.Кравцова (1994) было доказано, что течение вакцинного и инфекционного процессов при чуме в значительной степени зависит от исхода взаимодействия клеток макрофагального звена с возбудителем инфекции. Мононуклсарные фагоциты выполняют множество функций в большинстве из которых участвует клеточная поверхность и большое количество мембраносвязанных молекул.

Необычайная сложность проблемы гетерогенности фагоцитарных клеток требует разработки новых нетрадиционных подходов к ее анализу. Одним из методов тестирования функционального состояния клеток СМФ является определение их электрофоретической подвижности (ЭФП), обусловленной величиной электрического заряда клеток. Электрический заряд, структура поверхностной мембраны и функциональные свойства клетки находятся в тесной взаимосвязи. Метод проточного распределительного клеточного электрофореза в свободном потоке дает возможность изучить характер изменений ЭФП клеток под действием на организм или непосредственно на мононуклеарные фагоциты различных антигенов и вакцин. В связи с этим целью работы явилось изучить влияние чумного микроба и его антигенов на функционально-метаболическую активность электрокинетически гетерогенных популяций фагоцитирующих клеток, определить возможность использования показателей электрофоретической подвижности фагоцитов для оценки иммунобиологических свойств чумного микроба и его антигенов, а также иммуномониторинга противочумного вакцинного процесса.

Проведенные исследования показали что иммунизация белых мышей вакцинным штаммом Yersinia pestis EV сопровождается снижением электрофоретической подвижности основного пула перитонеальных макрофагов и появлением электрофоретически гетерогенных популяций. Обнаружено, что изменения электрокинетических свойств макрофагов в процессе иммуногенеза к чуме зависят от генотипа животных. Инбредная линия мышей CC57W реагирует меньшим, по сравнению с беспородными, снижением электрофоретической подвижности (ЭФП) макрофагов. Выявлены характерные для линии CC57W особенности формирования электрофоретически гетерогенных популяций перитонеальных макрофагов. Установлено, что иммунизация белых мышей основным соматическим и капсульным антигенами чумного микроба вызывает снижение ЭФП основной массы макрофагов, формирующих в большинстве сроков исследования две электрофоретически различающиеся популяции. Капсульный антиген обладает более выраженной, по сравнению с основным соматическим, способностью снижать ЭФП фагоцитов. Макрофаги неиммунизированных морских свинок формируют пять электрофоретически гетерогенных популяций. Иммунизация морских свинок капсульным антигеном сопровождается резким снижением ЭФП макрофагов и преобладанием трех элекрофоретически различающихся популяций клеток.

Комплексный анализ функциональной (фагоцитарного индекса и фагоцитарной активности) и метаболической активности различных типов фагоцитов позволил выявить наличие стереотипной реакции мембран в процессе активации клеток, выражающейся в снижении их электрокинетического потенциала.

РЕЗУЛЬТАТЫ ПРОВЕДЕННОГО КУРСА ВАКЦИНОТЕРАПИИ ВП-4 ЛИЦАМ ПОЖИЛОГО ВОЗРАСТА

Сходова С.А., Краснопрошина Л.И., Курбатова Е.А., Егорова Н.Б.

Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова РАМН, Москва, Россия

Введение. Имеются возрастные особенности иммунореактивности у лиц старше 40 лет, что приводит к частым простудным, острым, хроническим воспалительным и онкологи-

ческим заболеваниям. Для профилактики респираторных и бронхолегочных заболеваний нашим Институтом разработана вакцина ВГ1-4, состоящая из растворимых антигенов клеб-сиеллы, протея, стафилококка и кишечной палочки.

Цель и задачи исследования. Изучение особенностей иммунного статуса у лиц пожилого возраста и коррекция выявленных нарушений вакциной ВП-4 с целью предотвращения простудных заболеваний.

Материалы и методы. У 33 человек в возрасте от 40 до 90 лет определяли базовые показатели иммунного статуса, до и после проведения курса вакцинотерапии. В течение месяца по стандартной схеме 23 человека принимали перорально вакцину ВГ1-4, 10 человек были в контрольной группе - получали физиологический раст вор. Субпопуляционный состав лимфоцитов определяли с помошыо моноклональных антител ООО "Сорбент" на проточном цитомере "FACScalibur”, функцию нейтрофилов оценивали но способности поглощать латекс, для оценки кислородного метаболизма нейтрофилов использовали тест восстановления нитро-синего тетразолия (ИСТ-тест).

Результаты. Индивидуальный анализ субпопуляционно-го состава лимфоцитов показал снижение относительного показателя (%) CD3 Т-лимфоцитов в 59% случаев, снижение хелперпой популяции CD4 Т-лимфоцитов в 50% случаев .

Под влиянием ВП-4 статистически достоверно повысился относительный показатель Т-лимфоцитов, число CD3 клеток от 56,4± 1,73 до 63.0±2,0 и числоС04 клеток от 28,8±1,42 до 47,0±2,43. Процент фагоцитирующих нейтрофилов ие изменялся от 48,2±3,0% до 43,5±3,7%; р>0,05, отмечено увеличение относительного показателя (%) содержания формазан-позптивных клеток с 15,05±2,13 до 30,81 ±7,0, а также цитологического показателя активности нейтрофилов с 0,26±0,05 усл.ед. до 0,76±0,16 усл.ед.; р< 0,05.

Заключение. ВГ1-4 вакцина способна оказывать иммуно-модулпрующее действие на показатели иммунного статуса у лиц пожилого возраста, одновременно стимулируя кислородозависимый метаболизм нейтрофилов.

ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО РЕАГИРОВАНИЯ НА АНТИГЕНЫ ГРИБОВ-ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БОЛЬНЫХ .АТИПИЧНЫМИ ФОРМАМИ ЗООНОЗНЫХ И АНТРОПОНОЗНЫХ ДЕРМАТОФИТИЙ

Tepei улова Г.А., Левченко Т.С., Демина Н.В., Гущина Р.Н., Магазова P.A., Медведева Е.А., Медведев Ю.А.

Башкирский государственный медицинский университет, Республиканский кожновенерологический диспансер, г. Уфа, Башкортостан, Россия.

Дерматофитии - инфекции, вызываемые разными видами патогенных грибов - дерматофитов, характеризуются типическими проявлениями поражения кожи, обусловленными иммунной реакцией на соответствующий возбудитель. Типичное течение предполагает возникновение на коже локализованных поверхностных (антропофильные трихофитии и руб-ромикоз, зооаитропонозная микроспория) или инфильтратив-но-нагноительных (зооаитропонозная трихофития ) поражений. Вопрос о причинах возникновения атипичных форм этих микозов до нас тоящего времени не прояснен. Ввиду этого у больных с атипичными формами различных дерматофитий было проведено исследование иммунного статуса и показателей ин тенсивности иммунного о твета на антигены грибов-воз-будителей.

Материалы получены в результате клинико-лабораторного обследования более 200 с типичным течением дерматофитий и 17 больных атипичными вариантами этих инфекций: поверхностной зооантропонозной трихофитии, инфильтратив-ной и инфильтративно-нагноитсльной микроспории и генерализованного поверхностного рубромикоза гладкой кожи (соответственно 5, 4 и 8 больных). При исследовании иммунного статуса существенных изменений в иммунограммах больных не наблюдалось. В то же время оценка характера иммунного ответа на антигены грибов (цитоплазматические антигенные комплексы Trichophyton mentagrophytes и rubrum, Microsporum ccmis) в серологических реакциях (реакции иммунодиффузии в геле (РИ) и пассивной гемагглютинации (РПГА) и реакциях клеточного типа, в частности реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) выявила существенные изменения иммунного реагирования больных в сравнении с таковым у пациентов при типичном течении микоза. У всех больных с атипичными формами дерматофитий выявлен неадекватно высокий уровень специфических антител против антигенов гриба-возбудителя - наличие преципитирую-щих антител и титры РПГА 1:8-1:64 (при типично протекающих зооантропонозных дерматофитиях - как правило отрицательные реакции, рубромикоз - титры РПГА 1:4-1:8); в то же время интенсивность клеточно-опосредованного иммунного ответа по результатам РТМЛ была снижена. РТМЛ при генерализованных формах рубромикоза - отрицательна, при поверхностной зооантропонозной трихофитии и инфильтративно-нагноитсльной микроспории - индекс угнетения миграции соответственно на 30-50% ниже и на 35-70% выше, чем при типично протекающих микозах. Можно заключить, что атипичное течение дерматофитий в значительной степени обусловливается нарушениями иммунного реагирования на возбудитель, в основном в Т-клсточно опосредованном его звене. Эффективная терапия больных такими микозами должна включать адекватные средства коррекции механизмов иммуногенеза у больного.

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ У ПАЦИЕНТОВ ГЕМОДИАЛИЗА, ИНФИЦИРОВАННЫХ ВИРУСАМИ ГЕПАТИТОВ ВИС

Тефанова В., Луман М.*, Талло Т., Приймяги Л.

Институт экспериментальной и клинической медицины, *Больница Пелгулинна,

Таллинн, Эстония

Введение. Вирусы гепатита В (HBV) и С (HCV) вызывают выраженные изменения функциональных свойств не только клеток печени, но и иммунных клеток, определяющих реакции клеточного и гуморального иммунитета. Изменение активности и функциональных резервов полиморфноядерных лейкоцитов (ПЯЛ) используются в качестве диагностических и прогностических критериев многих патологических процессов инфекционной, в том числе и вирусной, природы.

Цель. Исследовать функциональную активность ПЯЛ у пациентов с хронической почечной патологией, инфицированных HBV или HCV.

Материалы и методы. Под наблюдением находились 38 пациентов (27 мужчин, 11 женщин, в возрасте 22 - 70 лет, средний возраст - 46) из отделения гемодиализа Таллиннской больницы Пелгулинна. Хронический гломерулонефрит, хронический пиелонефрит и поликистоз почек были основными причинами почечной патологии. Специфические маркеры HBV и

1 ICV инфекции тестировали ИФА-методом, используя ком-

мерческие тсст-систсмы 2-го и 3-го поколения. Результаты серологического скрининга позволили разделить всех пациентов на 2 группы: 13 больных с маркерами HBV или HCV инфекции и 25 неинфицированных пациентов. Лейкоцитарную взвесь получали осаждением гепаринизированной венозной крови в 1% растворе желатина. Исследовали адгезивную (АДГ) способность ПЯЛ, спонтанную и стимулированную опсонизированным зимозаном продукцию супероксид-аниона в НСТ-тесте, активность ферментов миелопероксидазы (МПО) и кислой фосфатазы (КФ), а также количество катионных белков (КБ) колориметрическим методом. Вычисляли индекс стимуляции. Результаты обозначали в условных единицах (сд.опт.пл. х 10’)- Фагоцитарную активность (ФА) определяли в тесте фагоцитоза частиц латекса па плас тике. Дополнительно определяли концентрацию сывороточных иммуноглобулинов (lg) IgG, IgA и IgM, уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) и интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ). Контролем служили аналогичные показатели 24 практически здоровых лиц.

Результаты. Достоверное снижение средних значений КФ (Р<0,05) и IgM (PcO.OOl) и высокий уровень ПОЛ (Р<0,001) были выявлены у пациентов гемодиализа независимо от диагноза и инфицированное™ 11BV или HCV но сравнению с контролем. Спонтанная и стимулированная продукция супероксид-аниона в НСТ-тесте, показатели активности МПО и количество КБ были снижены примерно у 50% всех больных. Высокие значения ФА и АДГ имели 40% пациентов гемодиализа без маркеров HBV или HCV инфекции.

Заключение. У пациентов гемодиализа изменение функциональной активности ПЯЛ зависит преимущественно от диагноза. Инфицировапность 1TBV или HCV без клинических и биохимических признаков активного вирусного процесса существенно не влияет на функциональную способность ПЯЛ.

ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ АССОЦИИРОВАННОГО СТАФИЛ0-ПР0ТЕЙН0-СИНЕГН0ЙН0Г0 АНАТОКСИНА (СПСА-ВАКЦИНА) В УСЛОВИЯХ ОЖОГОВОЙ ТРАВМЫ

Тимербаева Д.А., Медведев Ю.А., Хунафин С.Н., Зинатуллпп Р. М., Дмитриев, Олейников С.И.

Институт последипломного образования БГМУ, ГКБ 18, г. Уфа, Башкортостан, Россия

Проблема термических повреждений занимает одно из центральных мест в хирургии и травматологии. В Республике Башкортос тан ожоги составляют 4,5-5,6% всех видов травм и отравлений (Муртазин З.Я., Зинатуллин P.M., 1999). Ожоговая травма закономерно сопровождается развитием в гой или иной степени выраженного иммунодефицитного состояния (Федоров Н.А. и др., 1985, Галеев Ф.С'., 1995). В сочетании с повреждением барьерных функций поврежденных кожи и слизистых оболочек, формирующийся иммунодефицит благоприятствует проникновению в пораженный организм условно-патогенных микроорганизмов. Ввиду перечисленного, гнойно-септические инфекции выступают частым осложнением ожоговой травмы, характер и течение которых во многом определяют длительность и исходы лечения больных.

Основными возбудителями ожоговой инфекции выступают условно-патогениые микроорганизмы. Наиболее часто в качестве таких возбудителей регистрируются стафилококк, синегнойная палочка , протей и их ассоциации (Орлов А.И. 1983, Михайлова М.А. и др. 1993). Лекарственная по-лирсзистентность госпитальных штаммов названных мик-

робов существенно затрудняет лечение больных с данными инфекциями.

Одним из методов иммунопрофилактики гнойно-септических осложнений является специфическая вакцинация. Проведение активной антигенспецифической профилактики позволяет формировать длительно сохраняющуюся невосприимчивость к возбудителям инфекции Медведев Ю.А., Алсын-баев М.М., 2000).

Нами использована СПСА- вакцина, выпускаемая Уфимским ГУП “Иммунопрепарат”. Это ассоциированная стафи-ло- протейно- синегнойная вакцина, состоящая из анатоксина синегнойной палочки, протейной химической вакцины, стафилококкового анатоксина и цитоплазматического антигена стафилококка. Компоненты сорбированы на гидроокиси алюминия, что неспецифически стимулирует иммунный ответ на антигены (Медведев 10.А., Алсынбаев М.М., 2000).

Иммунизация больных проводилась на фоне комплекса традиционных лечебных мероприятий в наиболее ранние сроки после поступления, повторная иммунизация - через 14 суток. Контроль уровня специфических антител в крови проводили с использованием эритроцитарных диагностикумов -стафилококкового, синегнойного, протейного, в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

Клиническая эффективность определялась при сравнении контрольной и опытной групп. Контрольная группа составила 30 человек. Сравнительная характеристика складывалась из оценки частоты развития гнойно- септических осложнений, рспаративных процессов, а также длительности и методов лечения.

Микрофлора ожоговых ран при бактериологическом исследовании контрольной и иммунизированной групп распределилась таким образом: стафилококк - у 88,5% больных, синегнойная палочка - у 37,1%, протей - у 28%, прочие возбудители - у 14,2 больных.

Исходный уровень антител против возбудителей инфекции в сыворотке крови был 1:8-1:32 титров РПГА. После однократной вакцинации выявлено 2-6 кратное возрастание титра антител. После ревакцинации отмечен дальнейший прирост ти гра антител в 10-12 раз от исходного.

На фоне вакцинации у ожоговых больных уменьшилось число нагноения ожоговых ран, обссмененность ран снизилась в 2 раза. У вакцинированных больных расход антибиотиков сократился на 30%, сократилось пребывание больных на койке на 15%.

ОСОБЕННОСТИ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИММУНИТЕТА У ДЕТЕЙ, РОЖДЕННЫХ ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫМИ МАТЕРЯМИ

Фомин В.В., Бейкин Я.Б.,Патрушева Н.Б., Зыкова C.H., Дегтярева Г.Н., Маркова Н.В., Ищенко Н.В., Сбнтнева H.H., Фадеева М.М., Лившиц A.A.

Диагностический центр (лабораторной диагностики ВИЧ, инфекционной патологии и болезней матери и ребенка), Екатеринбург, Россия

Введение. Для диагностики ВИЧ-инфекции у детей, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями, использовали длительное диспансерное наблюдение с исследованием в динамике показателей иммунного статуса и иммунного блота (ИБ).

Цель и задачи. Оценка показателей иммунного статуса детей от ВИЧ-инфицированных матерей.

Материалы и методы. Для выявления антител к ВИЧ использовали наборы для ИФА, “Блот ВИЧ” компании “Биосервис”. Клеточное звено иммунитета изучали методом проточной цитофлуорометрин с использованием моноклональных антител на приборе “FACScan” фирмы. “Becton Dickinson”. Иммуноглобулины определяли по Манчини, фагоцитоз - по методу Бермана-Славской, комплемент - по 50% гемолизу. ЦИК - методом нефелометрии. Статистические методы - определение доверительных границ средней величины.

Основные результат ы. Обследовано 24 ребенка от матерей с ВИЧ-инфекцей. В возрасте до 1 месяца все дети имели положительные результаты ИБ идентичные ИБ матерей. Выявлено, что клеточное звено иммунитета в данной возрастной группе не страдало, наблюдалась тенденция к повышению некоторых показателей иммунитета. Так, уровень лимфоцитов составили 4,8 - 7,1 х 101, CD3 Т-лим-фоцитов - 3,3 -5,1 х 10'’. CD4 Т-хелперов - 2,41 - 3,89 х 10\ соотношения CD4 /CD8 — 3,1- 4,4, IgM — 0,61 -1,1 г/л, комплемента - 53,4 - 60.3 ед., ЦИК - 23,7 - 43 ед. Показатели фагоцитарной активности нейтрофилов оставались в пределах нормы. В возрасте 3 месяца было обследовано 9 детей, у 4 зарегистрирован отрицательный ИБ, 4 - сомнительный и 1 - положительный. У всех детей с отрицательным ИБ показатели клеточного звена иммунитета были в пределах возрастной нормы, но имело место снижение уровня IgA и повышение ЦИК и СН50. В возрасте 7-12 месяцев было обследовано 4 ребенка, у 3 выявлен отрицательный ИБ (у 2 он уже был отрицательным в 3 месяца) и у 1 -положительный. У детей с отрицательным ИБ наблюдалось снижение CD8 клеток, IgA и ЦИК и увеличение соотношения CD8 /CD4 . У ребенка с сохранившимся положительным ИБ страдало и клеточное, и гуморальное звено иммунитета (имело место резкое увеличение IgM, IgA, IgG, в возрасте 4 месяца, повышение значений ЦИК с 10 ед. в 3 месяца до 441 ед. в 9 месяцев, постепенное снижение количества CD8 с 0,63 х 10’ в 3 месяца до 0,29 х 103 в 9 месяцев и повышение соотношения CD4 /CD8 .

Заключение. Результаты могут быть использованы для углубленного мониторинга детей от ВИЧ-инфицированных матерей.

ВЛИЯНИЕ АНТИОКСИДАНТОВ НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ С

Фридлянд И.Ф., Просенко А.Е., Клепикова С.Ю., Кандалинцева Н.В., Леплина О.Ю.,

Тихонова М.А., Останин А.А., Черных Е.Р.

Институт клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, Россия

Введение. Исследованиями последних лет установлена возможность интеграции и репликации гепатотропных вирусов не только в гепатоцитах, но и мононуклсарных клетках (МИК) периферической крови. Внутриклеточная перси-стенция вирусов приводит к высвобождению реактивных метаболитов кислорода и нарушению окислительно-восстановительного баланса. У больных хроническим гепатитом С (ХГС) отмечается усиление перекисного окисления и окислительного взрыва в гепатоцитах и фракции мононуклеар-ных клеток, что может играть негативную роль в патогенезе заболевания, обусловливая повреждения гепатоцитов, нарушение функциональной активности иммунокомпетентных клеток и способствуя репликации вирусов. Поэтому подав-

ление оксидантной активности при лечении ХГС рассматривается в качестве важной мишени для терапевтического воздействия.

Цель исследования. Изучение иммуномодулирующего и противовирусного эффектов полифункциональных антиоксидантов (4-гидроксиарил)алкилтиосульфоната Na (ГАТ) и бис(4-гидроксиарил)алкилсульфида (БГАС) у больных ХГС.

Материалы и методы. Группы обследованных лиц составили 30 здоровых доноров и 40 больных ХГС, 15 из которых в течение 30 дней получали БГАС. У всех больных исследовались биохимические показатели крови, наличие в сыворотке и популяции МИК нуклеотидных последовательностей вируса гепатита С; пролиферативная активность МИК, стимулированных конканавалином А (КонА) или анти-СОЗ-антителами (анти-СОЗ). Кроме того, in vitro оценивалось влияние водорастворимого антиоксиданта ГАТ на пролиферативную активность МИК больных ХГС.

Результаты. Согласно полученным данным наличие нуклеотидных последовательностей вируса гепатита С в периферической крови выявлялось у 26 из 40 (65%) пациентов, в том числе во фракции МНК - в 60% случаев. В целом по группе у больных ХГС по сравнению со здоровыми донорами отмечалось снижение пролиферативной активности МНК при стимуляции КонА (36.986±3.591 против 49.600±4.160 имп/мин; р<0,05). При этом в подгруппе больных с наличием вирусной РНК во фракции МНК уровень митоген-индуцированного пролиферативного ответа клеток был значимо ниже, чем у пациентов, МНК которых были негативны по РНК вируса гепатита С (29.345±3.205 против 42.552±5.230 имп/мин; р<0,01). Добавление в культуры МНК этих пациентов водорастворимой формы антиоксиданта ГАТ в дозе 0,2 мкг/мл приводило к усилению пролиферативной активности МНК у 75% больных ХГС. Так, уровень КонА-стимулированного ответа в присутствие антиоксиданта значимо превышал аналогичный показатель в контрольных культурах (34.572±2.500 против 20.775±5.872 имп/мин; р<0,05). Пятнадцать пациентов ХГС в репликативной фазе инфекции, подтвержденной наличием нуклеотидных последовательностей вируса гепатита С в МНК, в дизайне пилотных исследований получали БГАС. Пероральное использование жирорастворимой формы антиоксиданта в течение 30 дней в курсовой дозе 5 гр. сопровождалось существенным усилением пролиферативной активности у 73,3% (11 из 15) больных. В целом по группе пролиферативная активность в КонА-стимулированных культурах возросла с 30.639±4.753 до 46.404±4.703 имп/мин (р<0,05), в культурах, стимулированных 3hth-CD3 - с 26.600±3.953 до 32.323±3.952 имп/мин (р<0,05). Усиление митогенстиму-лированного ответа было ассоциировано с исчезновением нуклеотидных последовательностей вируса во фракции МНК у 6 из 11 пациентов. В то же время у 4 больных, не ответивших на лечение усилением пролиферативной активности МНК, наличие вирусной РНК сохранялось.

Заключение. Полученные данные свидетельствуют об угнетении функциональной активности Т-клеток у больных ХГС. Подавление КонА- и анти-СОЗ-стимулированного ответа наиболее выражено у пациентов с наличием в МНК нуклеотидных последовательностей вируса гепатита С. Подавление оксидантной активности in vivo и in vitro сопровождается усилением пролиферации МНК, что по предварительным данным ассоциировано с исчезновением вирусной РНК в 40% случаев.

“Дни иммунологии в СПб '2001

Медицинская иммунология

РОЛЬ АП0ПТ03А И ПОВЫШЕННОЙ ПРОДУКЦИИ ОКСИДА АЗОТА В РАЗВИТИИ ТУБЕРКУЛИНОВОЙ АНЕРГИИ У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ

Хонина H.A., Сахмо Л.В., Норкмпа О.В, Норкпн М.H., Никонов С.Д, Черных Е.Р., Остапнн A.A.

Институт клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, Россия

Введение. Возникновение и характер течения туберкулезной инфекции по многом зависит от эффективности функционирования иммунной системы, в том числе формирования антигенспецифического ответа. В то же время, известно, что у больных туберкулезом легких (ТЛ), особенно, на фоне тяжелых сопутствующих заболеваний или при активном, прогрессирующем клиническом течении инфекции часто обнаруживается дефект антигенспецифического иммунного ответа, проявляющийся развитием туберкулиновой анергии. Данный феномен, как известно, может регистрироваться в культуре in vitro в виде угнетения пролиферации лимфоцитов или продукции цитокинов в ответ на стимуляцию туберкулиновым очищенным белковым дериватом (ППД). В настоящее время механизмы нарушения антигенспецифического ответа остаются во многом невыясненными. Кроме того, разноречивой остается трактовка патогенетической значимости туберкулиновой анергии в развитии туберкулезной инфекции.

Целью настоящей работы явилось исследование феномена туберкулиновой анергии у больных ТЛ и изучение роли апоптоза и продукции оксида азота (N0) как возможной причины дефекта ППД-стимулированного пролиферативного ответа Т-лимфоцитов.

Материалы и методы. Исследования были проведены в группе 57 больных с различными нозологическими формами и вариантами клинического течения туберкулеза легких. Интенсивность пролиферации оценивали радиометрически в 6-дневной культуре клеток, стимулированных ППД в дозе 100 мкг/мл. Количество аиоптотических лимфоцитов определяли методом проточной цитофлюориметрии, используя двойное окрашивание клеток прогтидиум иодидом и флуоресцеиндиа-цетатом. Уровень продукции NO оценивали на 6 сутки по накоплению нитритов в культуральных супернатантах.

Результ аты. При исследовании больных туберкулезом легких выявлена их гетерогенность по степени выраженности ППД-стнмулпрованной пролиферации и уровню продукции N0. Так, у 46,7% пациентов регистрировалось глубокое угнетение ответа на ППД, выходящее за нижнюю границу диапазона нормы (<5300 имп/мин). Нарушение антигенспецифического ответа было сопряжено с высокой N0 продукцией. Было установлено, что у больных с нормальным уровнем продукции N0 лимфоциты сохраняли ППД-реактивность, тогда как у больных, характеризующихся высокой N0 продукцией (более 4,7 мкМ, т.е. выше верхней границы диапазона нормативных значений), ППД-пндуцированный пролиферативный ответ был резко угнетен. Исследование апоптоза выявило существенное усиление спонтанной и ППД-индуцированной гибели лимфоцитов в группе ППД-арсактивных больных и наличие достоверной обратной корреляционной зависимости между уровнем апоптоза и ППД-стимулированным ответом. Повышенный апоптоз был сопряжен с увеличением относительного содержания Fas+ лимфоци тов, причем, содержание Fas+ клеток обратно коррелировало с уровнем ППД-стимулированной пролиферации. Наличие ППД-ареактивности ассоциировалось с более тяжелым клиническим течением туберкулеза легких (преобладание фиброзно-кавернозной формы, наличие синдрома эндогенной интоксикации, большая давность заболевания). Кроме того, больные со сниженной реактивностью к туберкулину

и высоким уровнем продукции N0 характеризовались более низкой эффективностью лечения.

Заключение. Совокупность полученных данных позволяет заключить, что у больных туберкулезом легких нарушение антигенспецифического иммунного ответа обусловлено усилением апоптоза ППД-реактивных лимфоцитов, индуцированного действием различных экзогенных (например, антигены микобактерий) либо эндогенных (например, высоких концентраций оксида азота) факторов. Обнаружение у больного феномена туберкулиновой анергии свидетельствует о неблагоприятном варианте развития заболевания, поскольку выявленный функциональный дефект ППД-реактивных лимфоцитов четко ассоциируется с более тяжелым клиническим течением туберкулеза легких и резистентностью к проводимой противотуберкулезной химиотерапии.

ХАРАКТЕРИСТИКА МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА И МИКРОБНОГО БИОЦЕНОЗА КИШЕЧНИКА ПРИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ

Чайникова И.Н., Анисимова Т.М., Калинина Т.Н., Власова Е.В., Завертяева О.В., Валышев A.B.

Медицинская академия,

Оренбург, Россия

Введение. Состояние местного иммунитета как одного из первых барьеров защиты от микроорганизмов во многом определяет характер течения инфекционного процесса, его исход, включая и формирование бактерионосительства.

Целыо работы явилось изучение гуморальных факторов защиты слизистой толстого кишечника у здоровых и больных сальмонеллезом с учетом состояния микробного биоценоза.

Материалы и методы. Для оценки местного иммунитета была разработана методика подготовки копрофильтратов с использованием различных ингибиторов протеаз (ЭДТА, контри-кал, ингибитор трипсина из соевых бобов, PMCF), позволяющая исследовать в них уровень различных показателей специфической и неспецифической защиты слизистых. В копрофиль-тратах определялись с помощью ИФА- наборов: IgA, M,G, фракции IgG (1-4), секреторный IgA (slgA) и свободный секреторный компонент (SC) тест-системами, разработанными в лаборатории гибридомной технологии ЦНИРР (Санкт-Петербург), лак-тоферрин и общий IgE (“Вектор-Бест”); СЗ компонент комплемента (иммунодиффузия по Маичини); лизоцим (нефелометри-ческий метод); титр антител к О-антигену сальмонелл в РПГА, ЦИК в реакции иммунопрсципитации с ПЭГ. Биоценоз толстого кишечника исследовался бактериологическим методом.

Результаты. Установлено, что в копрофильтратах здоровых людей в низких концентрациях определяются практически все исследуемые показатели. СЗ компонент комплемента у здоровых лиц реакцией иммунодиффузии не выявлялся. При изучении мнкробиоценоза толстой кишки здоровых лиц было установлено, что у 50% из них выявлялась компенсированная форма дисбиоза с незначительными изменениями аэробной флоры. В острый период сальмонеллезной инфекции, независимо от вида выделяемых сальмонелл, в копрофильтратах в 2 раза увеличивалось содержание лизоцима, в 8-10 раз -лактоферрина, IgA, slgА и SC, в 2-4 раза - титр антител к О-антигену сальмонелл, ЦИК, IgG, IgM, в 1,5 раза - количество IgE. Увеличение уровня IgG происходило преимущественно за счет фракций IgGI и IgG3, в то время как количество IgG4 в острый период было ниже значений нормы, а количественных изменений фракции IgG2 не выявлялось. СЗ компонент комплемента обнаруживался в острый период у 30% обследуемых. В острый период у больных сальмонеллезом выяв-

лялся дисбактериоз 2 степени, сопровождающийся снижением количества лактозопозитивных кишечных палочек, увеличением содержания негсмолитических энтерококков, появлением K. pneumoniae, грибов рода Candida.

В период реконвалесценции на фоне клинического улучшения, нормализации копрограммы сохранялись значительные изменения в уровне факторов местного иммунитета. Так, лизоцим оставался повышенным по сравнению с нормой в 1,5 раза, лак-тоферрин, slgA, SC, IgA - в 4 раза. По сравнению с острым периодом в период реконвалесценици происходило нарастание уровня IgG преимущественно за счет увеличения содержания фракции IgGl. Оставался повышенным в копрофильтратах и уровень ЦИК. Отмечалось незначительное нарастание титра антител к О-антигену сальмонелл в РПГА. По отношению к острому периоду процесс реконвалесценции сопровождался ухудшением микроэкологических нарушений кишечника. У 80% обследуемых дисбиоз характеризовался 3-4 степенью нарушений со значительным снижением бифидофлоры, увеличением гемолитических штаммов условно-патогенных бактерий.

Заключение. Острая сальмонеллезная инфекция, сопровождающаяся развитием субкомпенсированного дисбиоза, характеризуется значительным изменением таких показателей местного иммунитета как лизоцим, лактоферрин, slgA, свободный секреторный компонент, IgA, ЦИК и менее выраженными изменениями уровня IgM, IgG и IgE, СЗ компонента комплемента. Выявленные и в период реконвалесценции существенные изменения показателей местного иммунитета являются отражением как микроэкологических нарушений кишечника, развивающихся на фоне проводимой антибиотикотсрапии, так и сохраняющейся местной воспалительной реакции.Следовательно. такие показатели местного иммунитета как лактоферрин, slgA и SC, лизоцим могут быть использованы как критерии оценки интенсивности местной воспалительной реакции при сальмонеллезной инфекции, а также использоваться для прогнозирования характера течения инфекционного процесса.

ОСОБЕННОСТИ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗНЫМ СПОНДИЛИТОМ

Шендерова Р.И., Иванов В.М., Гусева В.H., Потапенко Е.И., Якунова O.A., Косицкан JI.C., Новикова Н.С., Королеиок O.JI., Кусурсуз М.О., Сушкова Е.А.

Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиоиульмонологии М3 РФ, Санкт-Петербург, Россия

Резко изменившиеся в последние годы свойства возбудителя туберкулеза заметно повлияли на особенности клиники и течения туберкулезного спондилита (ТС), в свою очередь, во многом зависящие от иммунореактивности больных. Современный подход к изучению иммунного статуса пациентов, страдающих ТС, составил цель настоящей работы.

Под наблюдением находилось 43 активных больных обоего пола в возрасте 17-76 лет, госпитализированных для хирургического лечения в клинику института. Давность заболевания у 53,5% лиц не превышала 1 года, у остальных - до 3 лет. У половины больных было поражено но 2 позвонка, у остальных от 3 до 6 позвонков. У преобладающего большинства больных (32 человека) ТС был осложнен различными неврологическими расстройствами - от корешкового синдрома до глубоких парапарезов и плегии. Больные были обследованы в течение трех дней от момента госпитализации.

При изучении иммунного статуса особое внимание обращали на 1) пролиферативную активность в РБТ Т-лимфоцитов, секрецию TNF-a и 1L-2, оцениваемую с помощью иммунофермен-тных тест-систем фирмы “R&D Systems” в условиях стимуляции ФГА и туберкулином (Т); 2) содержание этих цитокинов в сыворотке крови (СК); 3) продукцию противотуберкулезных антител (ПТАТ) и уровень суммарного IgE, определенный с помощью иммуноферментных тест-систем фирмы “Полигност”; 4) функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов (НГ), по данным лизосомно-катионного теста (JIKT), содержанию ми-елопероксидазы и лактоферрина (МПО и ЛФ), установленному с помощью иммуноферментных тест-систем группы профессора В.Н. Кокрякова (ИЭМ РАМН, Санкт-Петербург).

Установили, что пролиферативная активность Т-клеток была снижена под влиянием ФГА (РБТЛ 30-42%) и, напротив, весьма высока под влиянием туберкулина (РБТЛ 7-15,7%). Уровень TNF-a в СК (< 100 пг/мл) был ниже, чем в надосадках клеточных культур, стимулированных ФГА и туберкулином (соответственно НКК-ФГА >150 пкг/мл; НКК-Т >300 пг/мл), хотя и митогенная, и антигенная стимуляция вызывала невысокую секрецию TNF-а. Уровень 1L-2 в СК, напротив, был выше, чем в НКК-ФГА и НКК-Т >150 пг/мл, <50 пг/мл и <80 пг/мл соответственно, что говорило о парадоксальной ответной реакции Т-лимфоцитов на митогенную и антигенную стимуляцию. Значения ЛКТ, концентрации МПО и ЛФ (>1,60 нг/мл; > 300 нг/мл и > 1500 нг/мл) свидетельствовали о повышенной активности НГ.

По результатам серологического обследования больных разделили на 33 серопозитивных пациентов и 10 серонегативных. Больные обеих групп имели одинаковые значения РБТЛ-ФГА, РБТЛ-Т, ЛКТ, сходные клинические признаки. При этом у серопозитивных уровень TNF-a во всех случаях был в 2-2,5 раза выше, чем у серонегативных. У преобладающего большинства серопозитивных уровень IgE > 700 кЕ/л. Напротив, у серонегативных было вдвое выше содержание IL-2 во всех образцах биологического материала, а концентрации МПО и ЛФ были в полтора раза выше, чем у серопозитивных. Отсутствие циркулирующих Г1ТАТ ассоциировалось с нормальным, либо относительно невысоким (<200 кЕ/л) содержанием Ig Е при Q=0,86.

Итак, к особенностям иммунореактивности больных ТС следует, по нашему мнению, отнести: 1) высокую пролиферативную активность сенсибилизированных Т-лимфоцитов и повышенную активность НГ; 2) “ножницы” в содержании и стимулированной секреции TNF-a и IE-2; 3) прямую связь между продукцией циркулирующих ПТАТ и суммарного Ig Е; 4) зависимость уровней TNF-a, IL-2, МПО и ЛФ от наличия или отсутствия циркулирующих ПТАТ.

ИММУНОСУПРЕССИВНОЕ ДЕЙСТВИЕ ТРАНСФОРМИРУЮЩЕГО ФАКТОРА РОСТА -10 (TGF-1P) ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ HCV-ИИФЕКЦИИ

Шульпекова Ю.О., Маммаев С.Н., Лукина Е.А., Луговская С.А., Левина А.А., Почтарь М.Е., Ивашкин В.Т.

Московская медицинская академия им.И.М. Сеченова, Гематологический научный центр РАМН,

Московская медицинская академия последипломного образования М3 РФ, Москва, Россия

Механизмы иммуносупрессивного влияния TGF-ip полностью не расшифрованы.

Цель исследования. Изучить взаимосвязь между уровнем TGF-13 и показателями клеточного иммунитета у больных хроническим вирусным гепатитом С (ХВГ С).

“Дни иммунологии в СПб '2001

Медицинская иммунология

Материал и методы. Исследовали 25 больных ХВГ С (HCV RNA ). Контрольную группу составили 20 здоровых доноров. Иммунофермснтным методом с использованием коммерческих тест-систем (R&D Systems, США) в сыворотке крови определяли концентрацию TGF-lß.

Экспрессию антигенов и рецепторов на лимфоцитах крови исследовали на проточном цитофлуориметре (Partec,CLLIA) с помощью моноклональных антител CD3, CD4, CD 16, CD25, меченных F1TC и CD8, меченных RPE (Caltag, США).

Результаты исследования. Уровень TGF-1 ß в сыворотке крови был повышен у 19 (76%) больных ХВГ С и достоверно превышал показатель контроля (р<0,05). Обнаружено снижение экспрессии молекул CD3 (р>0,05), CD4 (р<0,05), CD 16 (р<0,05) и CD25 (р<0,05) на лимфоцитах крови, тогда как экспрессия CD8 была повышена (р>0,05) у больных ХВГ С по сравнению с контролем. Корреляции между уровнем TGF-lß и экспрессией антигенов составили: с CD8 (г=+0,37), с CD4 (г=- 0,59) и CD 16* (г=-0,43).

Выводы. Высокая концентрация TGF-1 ß в сыворотке крови больных ХВГ С ассоциируется с достоверным снижением экспрессии CD4, CD 16, CD25 и выраженным дисбалансом в системе CD4, CD8, что может отражать депрессию клеточного звена иммунитета, ответственных за элиминацию внутриклеточных патогенов, в том числе вирусов.

РОЛЬ МУТАЦИИ ХЕМОКИНОВОГО РЕЦЕПТОРА CCR5 В РАЗВИТИИ КЛИНИЧЕСКОЙ КАРТИНЫ СПИД

Юлдашева НЛО., Залялиева М.В., Давидян М.И., Рузыбакиев P.M.

Институт Иммунологии АНРУз, Республиканский Центр СПИДа М3 РУз, Ташкент, Узбекистан, Уэллком траст Центр генетики человека. Оксфордский университет

Показано, что мутантный вариант хемокинового рецептора CCR5d32 у индивидуума замедляет или предотвращает развитие ВИЧ-1 инфекции.

Нами обследованы 17 ВИЧ инфицированных и больных СПИД с различными сроками заражения. Детекция CCR5 и мутация с132 были проведены методом ARMS - RCR. Гетеро-зиготность (CCR5/CCRd32) установлена у 2 обследованных. У одного из них развитие СПИД наступило через 9 лет после заражения и протекало клинически в течении 2 лет. У второго обследованного длительность периода после заражения составляет 4 года, однако признаков заболевания не наблюдается. У остальных обследованных с фенотипом CCR5 развитие клиники происходило в сроки от 1 года до 4 лет.

Таким образом, у лиц, имеющих мутантный вариант гена хемокинового рецептора CCR5/Ü32, отмечается значительная задержка наступления болезни.

ДИАГНОСТИКА В19 ПАРВОВИРУСНОЙ (ПВ) ИНФЕКЦИИ, ОСОБЕННОСТИ НАРУШЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОГО ИММУНИТЕТА НА ФОНЕ ИММУНОДЕФИЦИТА У ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ С АПЛАСТИЧЕСКИМИ КРИЗАМИ.

Ягужинская O.E., Пивпик A.B., Февралева И.С., Судариков А.Б., Лисовипа Ю.С., Логинова II.В., Шитарсва И.В., Варламова ЕЛО.

Гематологический научный центр РАМН, Москва

Введение. ПВ является детской инфекцией с клиникой угнетения эритроидного кроветворения. Инфицирование про-

нсходит воздушно-капельным путём, при переливаниях инфицированных компонентов и препаратов крови, при трансплантациях органов и тканей или через плаценту. Источником инфекции служит больной человек в период виремии. Виремия обычно развивается на 5-6 день после заражения, её пик приходится на 8-9 день. Примерно через 12 дней после инфицирования ПВ появляются антитела 1§М к вирусному белку УР-2, которые циркулируют несколько месяцев. В течение третьей недели заболевания появляются 1§в антитела к УР-1, которые будут выявляться в высоком титре в течение полутора-двух лет. Вырабатывается стойкий иммунитет, который сохраняется всю жизнь. Лечение цитостагическими и иммуносупрессивными средствами приводит к персистиро-ванию вируса. Диагностика ПВ особенно актуальна у пациентов гематологических и онкологических клиник, отделений трансплантации органов и тканей.

Цель исследования. Диагностика инфекции ПВ у больных апластическими кризами методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в комплексе с иммуноферментным анализом (ИФА) специфических иммуноглобулинов и 1§С.

Материалы и методы. Исследовали сыворотки крови 77 пациентов с подозрением на ПВ: с гемобластозами - 27 больных, из которых 24 с лимфомами, 3 с лейкозами, 27-е анемиями, 10-е идиопатической парциальной красноклеточной аплазией (ПККА) и 13 - ПККА совместно с гемобластозом. Всего 159 получено проб: 108 проб - выявление ДНК парво-внруса В19 с помощью ПЦР в авторской модификации и 110

- специфических иммуноглобулинов и ^О. Принципом исследования являлось одновременное измерение ДНК и иммуноглобулинов и в определенные сроки, установленные для стандартного течения заболевания.

Результаты. Суммарное количество больных, инфицированных парвовирусом в настоящем и в прошлом, выявленное по уровню специфических иммуноглобулинов и 1»М и наличию ДНК в сыворотках, составило около 60%. 21 из 77 больных были инфицированы ПВ. Персисгенция парвовиру-са наблюдалась среди них в 8 случаях (40%), если период виремии протекал на фоне иммунодефицита, обусловленного заболеванием или вызванного иммуносупрессивной терапией. При этом иммунитет к парвовирусу не вырабатывался: динамика экспрессии была такой же, как у больных без нарушения кроветворения, тогда как 1дй не выявлялся. Отсутствие специфического иммунитета к ПВ наблюдали у больных при лечении иммуносупрессивными препаратами вскоре после окончания периода виремии, на фоне высокого уровня 1§М и в начальной фазе синтеза ТцО. Динамика ^М, как и в предыдущем случае, не менялась; при этом уровень снижался и не выявлялся при последующих исследованиях. Наблюдали случаи реинфекции.

Заключение. Комплексное использование методов ПЦР и ИФА позволило оптимизировать диагностику инфекции ПВ у больных с гемолитическими кризами: среди них выявлялся высокий процент персистирования вируса. Больных дифференцировали по нозологическим единицам и провели лечение донорским иммуноглобулином. Выявили закономерности в нарушении специфического иммунитета и возникновения персистирования в зависимости от сроков иммунодефицита относительно периода виремии. Показали, что при отклонении от схемы нормального течения заболевания по уровням и 1^0 можно судить о наличии персистирующего вируса, состоянии специфического иммунного ответа к ПВ и возможности возникновения реинфекции. Надежность диагностики парвовирусной инфекции возможна только при одновременном использовании методов ПЦР и ИФА.

Особое внимание мы хотим привлечь к обнаруженному нами феномену - возникновению возможно вирус-индуци-рованной аутоиммунной гемолитической анемии при обнаружении у больных персистирующего парвовируса. Может быть, мы столкнулись с универсальным механизмом индукции вирусами аутоиммунных заболеваний - стимуляции ци-

тотоксического ответа к собственным антигенам, спровоцированного находящимся на клетке (“презентировнным”) вирусом - по аналогии с индукцией цитотоксичности к клеткам мышиной миеломы модификацией вирусными белками, которая не иммуногенна, так как ей не хватает собственных рецепторов.