CC BY
9
погибающие клетки и фрагменты миелина, участвуют в процессах ремоделирования и устранения ненужных синапсов, в регуляции нейрогенеза, ремоделировании сосудистой сети, оказывают нейропротективное действие и обеспечивают гомеостаз в ЦНС. Пул клеток МГ поддерживается на постоянном уровне в результате сбалансированных процессов их пролиферации под действием С8Р-1 и гибели путем апоптоза. При нейродегенеративных заболеваниях разного генеза, в том числе в отдаленный период после облучения опухолей мозга, активированные клетки МГ определяют развитие длительного нейровоспаления и повреждение нейронов под действием медиаторов воспаления и непосредственного повреждения нейронов с участием системы комплемента. Одним из разрабатываемых подходов к лечению таких состояний является снижение количества клеток МГ при использовании ингибиторов рецептора СБР-1, в том числе перед облучением мозга. Цель работы — изучение степени снижения и восстановления количества клеток МГ в мозге после введения мышам ингибитора такого типа пексидартиниба (Р1_Х3397, ПД) в сравнении с уровнем нейровоспаления в гиппокампе и состоянием когнитивных функций. ПД вводили по двум схемам: только в течение 1 недели (40 мг/кг ежедневно) пред у-облучением головы в дозе 8 Гр (I) и пред облучением головы, а затем в отдаленный период во время развития нейровоспаления (II).
Клетки покоящейся МГ определяли в суспензии клеток мозга как популяцию С011Ь+/С045'°™, а активированной — как С011Ь+/Ш45М|911 с помощью проточной цитоме-трии. Нейровоспаление оценивали по уровню экспрессии генов провоспалительных цитокинов в гиппокампе с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени, состояние когнитивных функций — с помощью тестов «распознавание нового объекта» (РНО) и «водный лабиринт Морриса» (ВЛМ).
После окончания введения ПД по схеме (I) количество клеток МГ снижалось до 14,4 ± 2,9%, а спустя 2 месяца оно восстанавливалось и составляло 85,2 ± 7,5%, а при схеме (II) — 75,1 ± 6,8% %. Показано более быстрое восстановление сниженного после облучения головы количества клеток МГ в случае облучения мозга после введения мышам ПД. Введение ПД приводило к снижению повышенного после облучения уровня экспрессии генов провоспалительных цитокинов Т|\1Ра и !Ыр в гиппокампе и сохранению экспрессии генов цитокинов И_-6, _ 10 и !_-4 на уровне контроля, что свидетельствует о снижении уровня нейровоспаления. Через 2 месяца после облучения головы у мышей обнаружено снижение эпизодической и пространственной памяти. Введение перед облучением ПД обеспечивало сохранение эпизодической памяти, но пространственная память оставалась сниженной. У контрольных мышей ПД не влиял на состояние эпизодической и пространственной памяти.
АНАЛИЗ ФУНКЦИОНАЛЬНОСТИ И БИОРАСПРЕДЕЛЕНИЯ В НЕРВНОЙ СИСТЕМЕ СВИНЕЙ АДЕНОАССОЦИИРОВАННОГО ВИРУСА СЕРОТИПА OLIG001, КОДИРУЮЩЕГО КДНК ГЕНА АРИЛСУЛЬФАТАЗЫ А
A.И. Муллагулова, А.А. Шаймарданова,
B.В. Соловьева, Я.О. Мухамедшина, А.А. Костенников, A.A. Ризванов
Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Россия
e-mail: aisilu.mullagulova@Yandex.ru
Ключевые слова: Метахроматическая лейкодистрофия, аденоассоциированный вирус, нейродегенерация.
Метахроматическая лейкодистрофия (МЛД) — ау-тосомно-рецессивное наследственное нейродегенера-тивное заболевание, относящееся к группе лизосомных болезней накопления (ЛБН), которое характеризуется поражением миелиновой оболочки, покрывающей большинство нервных волокон центральной (ЦНС) и периферической нервной системы (ПНС). МЛД возникает вследствие дефицита лизосомного фермента арилсульфатазы A, которая приводит к нарушению двигательной функции, спастическому тетрапарезу, атаксии, судорогам, атрофии зрительного нерва и когнитивным расстройствам. Целью данной работы является создание генного препарата на основе рекомбинантного аденоассоциированно-го вируса серотипа 0lig001 (AAB0lig001).
В этом исследовании был создан AAB0lig001-ARSA, который содержит уникальную кодон-оптимизирован-ную нуклеотидную последовательность гена ARSA. Полученный AAB0lig001-ARSA вводили интратекаль-но (1,45х1012 геномных копий/кг) двум мини-свиньям. Результаты сравнивали с группой интактных животных. Ферментативную активность ARSA в динамике анализировали в спинномозговой жидкости (СМЖ) и в образцах плазмы. Органы центральной нервной системы (ЦНС) использовали для анализа экспрессии ARSA с использованием количественной ПЦР и иммуногистохимии (ИГХ). Ферментативную активность ARSA в лизатах клеток, плазме, СМЖ в гомогенате органов ЦНС животных анализировали с помощью pNCS (#N7251, SIGMA). ИГХ проводили с использованием моноклональных антител к ARSA (#MAG619HU21, Cloud-Clone Corp).
Обнаружено повышение активности ARSA в плазме и СМЖ на 14-28 сутки. С помощью кПЦР подтвердили наличие мРНК ARSA в ЦНС. ИГХ анализ показал экспрессию белка ARSA в ЦНС.
Таким образом, мы показали, что после интратекаль-ного введения AAB0lig001-ARSA достигает ЦНС и приводит к сверхэкспрессии ARSA. Работа выполнена при поддержке Программы стратегического академического лидерства Казанского (Приволжского) федерального университета (ПРИ0РИТЕТ-2030) и за счет средств субсидии, выделенной Казанскому федеральному университету для выполнения государственного задания № 06712020-0058 в сфере научной деятельности.
ПЛАЗМЕННОЕ ЭЛЕКТРОЛИТИЧЕСКОЕ ОКСИДИРОВАНИЕ ДЛЯ ФОРМИРОВАНИЯ ПОВЕРХНОСТИ ДЕНТАЛЬНЫХ ИМПЛАНТАТОВ
А.А. Мураев1, А.И. Мурзабеков2, Е.А. Орлов3, Ю.В. Тарасов3
1 Российский университет дружбы народов, Москва, Россия
2 Центр оказания медицинской помощи при стоматологических заболеваниях, ФГБУ ЦКБ
с поликлиникой Управления Делами Президента Российской Федерации, Москва, Россия
3 ООО «Бета-Тех Медицина», Москва, Россия
e-mail: muraev_aa@pfur.ru
Ключевые слова: дентальные имплантаты, остеоинтегра-ция, поверхность дентального имплантата, технологии обработки поверхности, плазменное элетролитическое оксидирование, микродугового оксидирование, гидроксиаппатит, гидроксифосфат кальция.
Современные дентальные имплантаты обеспечивают предсказуемые долгосрочные результаты
протезирования и прочно вошли в повседневную стоматологическую практику [1, 2, 3]. В настоящей работе представлены результаты исследования применения технологии плазменного электролитического оксидирования (ПЭО) для модификации поверхности дентальных имплантатов из медицинского сплава титана Grade IV, изучены остеоинтегративные свойства модифицированных дентальных имплантатов.
Для исследования были изготовлены 25 дентальных имплантатов ИРИС (Москва, Россия) длиной 10 мм и диаметром 4 мм, из сплава Grade IV. Далее поверхность всех имплантатов была подвергнута модификации методом ПЭО. После чего все образцы были поштучно упакованы, в зоне ламинарного тока воздуха (с обеспечением чистоты ИСО 7), в герметичную упаковку, пронумерованы и прошли гамма-стерилизацию. Для дальнейших исследований имплантаты были распределены генератором случайных чисел. У 5 им-плантатов поверхность была изучена на сканирующем электронном микроскопе «Hitachi FlexSem1000 II» и энергодисперсионном рентгеновском спектрометре «Bruker Quantax 80», с автоматическим получение спектра элементов. У 10 имплантатов была изучена микротвёрдость поверхности по Виккерсу (наноинтен-дометр NanoTest 600 Platform 3). Оставшиеся 10 им-плантатов были установлены экспериментальным животным, овцам, на нижней челюсти по стандартному хирургическому протоколу. Через 2, 4 и 8 недель, был проведён забор материала и проведена микрокомпьютерная томография (Bruker-microCT, Бельгия). Контролем в исследовании выступали фрезерованные имплантаты с гладкой необработанной поверхностью.
У образцов после модификации поверхности методом ПЭО формируется высокоразвитая поверхность с микропорами 1,5 мкм, площадь поверхности увеличивается в 2,7 раз. Атомный состав поверхности P-2,53%, C-1,88%, Ca-4,0%, 0-49,58, Ti -41,66%. Микротвёрдость поверхности гладкой поверхности составила 280 HV, модифицированной поверхности - 400-800 HV.
После операции дентальной имплантации раны у всех животных заживали первичным натяжением. По данным микро-КТ вновь образованный объём костной ткани вокруг имплантатов составил: на 15 сутки — вокруг гладкого имплантата 42,7%, имплантат с ПЭО 43,9%; на 30 сутки — вокруг гладкого имплантата 20%, имплантат с ПЭО 40%; на 60 сутки — вокруг гладкого имплантата 30,9%, имплантат с ПЭО 49,8%.
Таким образом, проведённые in vitro и in vivo исследования свидетельствуют о том, что ПЭО является перспективным методом обработки для дентальных имплантатов, поверхность обладает высокой прочностью, чистотой и остеоинтегративным потенциалом. Выражаем благодарности компании Бета-Тех Медицина (Сколково, Россия, btmed.ru) за проведение модификации поверхности образцов дентальных имплантатов для исследования и компании ООО «НПК ЛИКОСТОМ» (Россия, iris.dental) за финансирование технических работ и самих исследований.
Литература:
1. Muraev A.A., et al. Stomatologiia (Mosk). 2016;95(1):18-20.
Russian
2. Gosteva E.A., et al. Biomimetics (Basel). 2021 Oct 18;6(4):61.
3. Разбицкая, Л. Е. et al. Международная научно-практическая
конференции им. Д.И. Менделеева, посвященная 90-летию
профессора Р.З. Магарила: Материалы конференции, Тюмень, 25-27 ноября 2021 года
ПОСТТРАВМАТИЧЕСКАЯ РЕГЕНЕРАЦИЯ
СПИННОГО МОЗГА: ОСНОВНЫЕ ПОДХОДЫ
ДЛЯ РЕШЕНИЯ МНОГОГРАННОЙ ПРОБЛЕМЫ
Я.О. Мухамедшина1, 2, А.А. Костенников1,
А.А. Ризванов1
1 Казанский (Приволжский) Федеральный Университет, Казань, Россия
2 Казанский государственный медицинский университет, Казань, Россия
e-mail: yana.k-z-n@mail.ru
Ключевые слова: регенерация, травма спинного мозга, генные и клеточные подходы.
Травма спинного мозга (ТСМ) приводит к стойким нарушениям чувствительной и двигательной функции нервной системы и как следствие этого к глубокой инвалиди-зации пострадавших. Несмотря на длительную историю исследований патогенеза нейротравм, до сих пор существуют не раскрытые вопросы и поиск новых терапевтических мишеней не закончен. В этой связи не удивительно, что в настоящее время сохраняется насущная потребность в разработке новых подходов к лечению пациентов с ТСМ, основанных на понимании молекулярных и клеточных механизмов, протекающих при данном заболевании.
В нашем докладе помимо исследований фундаментальных основ нейрорегенерации, будет раскрыт многолетний опыт применения с терапевтической целью современных генных и клеточных подходов при моделировании ТСМ на животных. Помимо оценки эффективности терапии с применением общепринятых критериев, таких как степень восстановления двигательной функции и сохранность нервной ткани, нами определены изменения реактивности глиальных клеток, а также уровень экспрессии мРНК генов, кодирующих синтез специфических белков нейроглии, ней-ротрофических факторов и других регуляторных молекул в области ТСМ. Следует отметить, что доклинические исследования эффективности генной и клеточной терапии чаще всего проводят на мелких лабораторных животных (крысы, мыши). Такие исследования достаточно часто показывают позитивные и вдохновляющие результаты по восстановлению структуры и функций травмированной ткани. Тем не менее, далеко не всегда возможно успешно экстраполировать накопленный опыт в клинику, что связано с очевидными различиями организмов человека и мелких лабораторных животных как на уровне анатомо-физиологических характеристик, механизма развития (патогенеза) заболевания, так и фенотипических проявлений, ошибок дизайна экспериментального исследования и невозможности проведения аутологичных трансплантаций. Именно поэтому одной из задач нашей работы является выполнение исследований на крупных животных (свиньи), с оценкой возможности воспроизведение результатов, наблюдаемых на крысах.
ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ TIL-B В ОТНОШЕНИИ ГЛИОБЛАСТОМЫ
М.С. Мызина2, А.А. Нестерова3, М.А. Иванов, А.А. Калинкин1, А.А. Бочаров1, Г.М. Юсубалиева1
1 ФНКЦ ФМБА России, Москва, Россия
2 Первый МГМУ им. Сеченова, Москва, Россия
3 РНИМУ им. Пирогова, Москва, Россия
e-mail: m.myzina77@mail.ru
Ключевые слова: иммунотерапия, глиобластома, инфильтрирующие опухоль В-клетки, T-клеточный иммунитет.
