CC BY
10© Коллектив авторов, 2014 УДК 612.112.94.017.085.2
ИНДУКЦИЯ ГАЛЕКТИНОМ-1 МИТОХОНДРИАЛЬНОГО ПУТИ АПОПТОЗА CD4+-ЛИМФОЦИТОВ
В.Д. Якушина, О.А. Васильева, кандидат медицинских наук, Н.В. Рязанцева, доктор медицинских наук, профессор, В.В. Новицкий, доктор медицинских наук, профессор, Е.Г. Старикова, кандидат медицинских наук, Л.А. Таширева, И.С. Небесная
Сибирский государственный медицинский университет Минздрава России, Российская Федерация, 634050, Томск, Московский тракт, д. 2 E-mail: yakushinavd@mail.ru
Введение. Связываясь с гликопротеинами клеточной поверхности, галектин-1 участвует в кооперации клеток иммунной системы. Предполагается, что СБ4+-лимфоциты могут являться мишенями иммуносупрессорного действия галектина-1. Однако нет достаточных данных о влиянии данного белка на процессы пролиферации, дифференцировки, функциональной активности и гибели СБ4+-лимфоцитов.
Цель исследования. Изучить влияние галектина-1 на апоптоз СБ4+-лимфоцитов in vitro.
Материал и методы. Мононуклеарные лейкоциты здоровых доноров активировали с помощью антител к CD3 и CD28 и культивировали с добавлением рекомбинантного галектина-1. Определяли активность апоптоза по связыванию CD4+-лимфоцитами аннексина-Vи 7ААД, а также деполяризацию митохондриальной мембраны и содержание белковBcl-2 и Bax.
Результаты. Добавление галектина-1 в дозе >2,5 мкг/мл приводило к повышению содержания аннексин+7ААД+-клеток. При этом наблюдались деполяризация митохондриальной мембраны, снижение содержания антиапоптотического белка Bcl-2 и повышение уровня проапоптотического белка Bax.
Заключение. Впервые показано, что галектин-1 индуцирует запуск митохондриального пути апоптоза при действии на активированные CD4+-лимфоциты.
Ключевые слова: галектины, лимфоциты, апоптоз, митохондриальный потенциал, белок Bcl-2, белок Bax
GALECTIN-1 INDUCES MITOCHONDRIAL APOPTOTIC PATHWAY INCD4+ T-CELLS V.D. Yakushina, O.A. Vasileva, N.V. Ryazantseva, V.V. Novitsky, E.G. Starikova, L.A. Tashireva, I.S. Nebesnaya
Siberian State Medical University, Russian Federation, 634050, Tomsk, Moskovsky trakt, 2
Introduction. Galectin-1 binds to cell surface glycoprotein and participates in cooperation of immune cells. It is supposed that the CD4+-lymphocytes can be target for immunosuppressive activity of galectin-1. However, there is no sufficient information about effect of the protein on the proliferation, differentiation, functional activity and apoptosis of CD4+-lymphocytes.
The aim of the study. To investigate the influence of galectin-1 on apoptosis of CD4+-lymphocytes in vitro.
Methods. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were obtained from healthy volunteers, activated with antibodies to CD3 and CD28 and cultured with recombinant galectin-1. Apoptosis of CD4+-lymphocytes, depolarized mitochondrial membrane potential and the level of Bcl-2 and Bax proteins were assessed.
Results. When galectin-1 was added in the concentration of 2.5 mkg/ml it led to an increase of the percentage of annexin+7AAD+ cells. The depolarization of the mitochondrial membrane, reduction of anti-apoptotic protein Bcl- 2 level and the increase in pro-apoptotic protein Bax level were observed.
Conclusion. For the first time it was shown that galectin-1 induces apoptosis via mitochondrial pathway in activated CD4+-lymphocytes.
Key words: galectins, lymphocytes, apoptosis, mitochondrial potential, the Bcl-2 protein, Bax protein
ВВЕДЕНИЕ
Галектин-1 представляет собой белок с молекулярной массой 15 кДа, имеющий в своей структуре углевод-распознающий домен (CRD) размером около 130 аминокислот. Секретируясь в центральных и периферических органах иммунной системы, в том числе эпителиальными клетками тимуса, активированными лимфоцитами и макрофагами, галектин-1 участвует в кооперации клеток иммунной системы. В результате связывания с гликоконъюгатами
клеточной поверхности (CD45, CD43, CD7, CD2, CD3, ганглиозидом ОМ1, ламинином и фибро-нектином), данный белок оказывает разнонаправленное влияние на клетки-мишени. Способность галектина-1 снижать активность аллергических и аутоиммунных реакций, продемонстрированная на экспериментальных моделях, обусловливает высокий интерес к изучению влияния данного белка на лимфоциты, лейкоциты, макрофаги и дендритные клетки [1—4].
Предполагается, что галектин-1 участвует в регуляции гомеостаза CD4+-лимфоцитов, определяющих характер иммунного ответа. Известно, что нарушение баланса субпопуляций, неконтролируемая или недостаточная активация CD4+-лимфоцитов лежат в основе патогенеза иммуноопосредованных заболеваний. Так, согласно клиническим и экспериментальным данным, чрезмерная активация Th1-, Th2- и Th17- лимфоцитов, а также недостаточность Т^-лимфоцитов имеют патогенетическое значение в развитии аутоиммунных и аллергических заболеваний [5]. Модуляция дифференцировки, функциональной активности и апоптоза CD4+-лимфоцитов рассматривается в качестве возможного механизма иммунорегуляторного действия галектина-1.
Работ по изучению влияния галектина-1 на апоп-тоз лимфоцитов немного, в основном они выполнены на клеточных линиях, преимущественно Jurkat, MOLT-4, CEM и ARR [6, 7]. Кроме того, в литературе приводятся данные исследований апоптоза, индуцированного галектином-1, в общей популяции Т-лимфоцитов, децидуальных лимфоцитов и тимо-цитов. Однако полученные результаты часто оказываются противоречивыми. Вероятно, это связано с изменением чувствительности клеток к галектину-1 в зависимости от субпопуляционной принадлежности, стадии лимфопоэза и статуса активации [8].
Целью исследования явилась оценка влияния га-лектина-1 на апоптоз CD4+-лимфоцитов in vitro.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Исследование проводилось на мононуклеарных клетках, выделенных методом градиентного центрифугирования на слое фиколла (Pharmacia, Швеция) плотностью 1,077 из крови, полученной у 15 здоровых доноров, средний возраст которых составил 26±4 года. Культивирование клеток осуществляли в СО2-инкубаторе при 37°С в полной питательной среде RPMI 1640 (ЗОА «Вектор», Новосибирск). С целью активации лимфоцитов в 1-е сутки в среду инкубации добавляли анти-CD3 (1 мкг/мл) и анти-CD28 (2 мкг/ мл) антитела (BD Pharmingen™, США). Рекомби-нантную форму галектина-1 (RnDSystems, США) добавляли в 1-е сутки в концентрации от 0,1 до 4,0 мкг/ мл. Контрольную группу составили клетки, культивированные в отсутствие галектина-1.
Через 18 ч экспозиции клеток с рекомбинант-ным галектином-1 оценивали активность апоптоза CD4+-лимфоцитов, изменение митохондриального потенциала лимфоцитов и содержание белков Bcl-2 и Bax.
Активность апоптоза CD4+-лимфоцитов определяли по выходу фосфатидилсерина на внешнюю поверхность плазматической мембраны и увеличению проницаемости для витального красителя 7-амино-актиномицина D (7ААД). Для этого клетки окрашивали анти-CD4-ФИТЦ антителами (ООО «Сорбент», Россия), аннексином-V, меченным фикоэритрином (eBioscience, США), и 7ААД (RnDSystems, США)
согласно протоколам фирм-производителей. Содержание CD4+-лимфоцитов, связавших аннексин-V и 7ААД, определяли на проточном цитофлюориметре FACSCanto II (BD, США).
Снижение митохондриального потенциала исследовали с помощью набора DePsipher™Kit (Trevigen, США). Клетки в количестве 1*106 отмывали от куль-туральной среды фосфатно-солевым буфером и добавляли реакционный буфер, содержащий 5 мкг/мл DePsipher™ (JC1), инкубировали при 37°С, 5% CO2 в течение 20 мин. Распределение лимфоцитов по каналам флюоресценции FL1 (JC-мономеры) и FL2 (JC-агрегаты) анализировали на проточном цитофлюори-метре FACSCanto II (BD, США) [9].
Содержание белков Bcl-2 и Bax в клетках при действии галектина-1 in vitro определяли методом вестерн-блоттинга, используя специфические первичные антитела и вторичные антитела с пероксидаз-ной меткой (RnDSystems, США). Детекцию результатов осуществляли с помощью хемилюминесцентного субстрата (NOVEX ECL Chemiluminescent Substrate Reagent kit, Invitrogen, США) на рентгеновской пленке (Kodak X-ray film). О содержании исследуемого белка в клетке судили по отношению величины сигнала метки искомого белка к величине сигнала белка глицеро-3-фосфатдегидрогеназы, используя программное обеспечение TotalLab v.2.01. Результаты выражали в условных единицах.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы SPSS 13.0. Проверку нормальности распределения исследованных признаков осуществляли с помощью критерия Шапиро—Уилка. Для оценки достоверности различий использовали непараметрический Т-критерий Уилкоксона для зависимых выборок. Достоверными считали различия при уровне значимости p<0,05. Результаты выражали в виде медианы (Ме), 1-го (Q1) и 3-го (Q3) квартилей.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Было исследовано in vitro влияние галектина-1 на митохондриальный путь апоптоза CD4+-лимфоцитов, активированных с помощью антител к CD3 и CD28. Использование активирующих антител позволило in vitro воспроизвести модель взаимодействия лимфоцитов с антигенпрезентирующими клетками: связывание CD3 (Т-клеточного рецептора) с комплексом HLA-антигенный эпитоп и костимуляция через рецептор CD28, приводящие in vivo к пролиферации и дифференцировке лимфоцитов [10].
АКТИВНОСТЬ АПОПТОЗА CD4+-
ЛИМФОЦИТОВ ПОД ДЕЙСТВИЕМ
РЕКОМБИНАНТНОГО ГАЛЕКТИНА-1
На 1-м этапе исследования были определены дозы рекомбинантной формы галектина-1, индуцирующие апоптоз CD4+-лимфоцитов.
Установлено, что в дозах до 1 мкг/мл галектин-1 не приводит к статистически значимым изменениям активности апоптоза CD4+-лимфоцитов (p>0,05).
Добавление галектина-1 в концентрации 2,5 мкг/мл и выше сопровождалось увеличением содержания апоп-тотически измененных CD4+-лимфоцитов (рис. 1). При действии рекомбинантной формы галектина-1 в дозе 2,5 мкг/мл количество CD4+Annexin+7ААД+-лимфоцитов было статистически значимо выше (р<0,05), чем в контрольной группе: соответственно 16,57 (9,51-36,53)% и 2,82 (2,42-3,32)%. Добавление галектина-1 в культуру активированных клеток в дозе 3,5 и 4,0 мкг/мл проводило к увеличению количества CD4+Annexin+7ААД+-лимфоцитов соответственно до 51,90 (41,85-55,10)% и 91,15 (88,50-94,85)%. Сравнение значений данного показателя при добавлении в культуральную среду 2,5; 3,5 и 4,0 мкг/мл галектина-1 выявило достоверные различия (р<0,05). Количество CD4+Annexin-7ААД--лимфоцитов статистически значимо не различалось в зависимости от дозы ре-комбинантного галектина-1 (р>0,05).
Таким образом, проапоптотическое действие ре-комбинантного галектина-1 обнаружено при его добавлении в дозах 2,5, 3,5 и 4,0 мкг/мл, что проявлялось двойным окрашиванием клеток аннексином-У-РЕ и витальным красителем 7ААД. Связывание клетками аннексина-У свидетельствует о переходе фосфати-дилсерина на внешнюю поверхность плазматической мембраны. Известно, что переход фосфатидилсерина является ранним обратимым признаком апоптоза и связан с действием фермента скрамблазы, активирующейся в ответ на повышение концентрации Ca2+ [11, 12]. Увеличение проницаемости плазматической мембраны для витального красителя 7ААД соответствует необратимым изменениям клетки в процессе как апоптоза, так и некроза. На основании двойного окрашивания клеток, можно предположить, что при действии на активированные CD4+-лимфоциты га-лектин-1 запускает реакции, реализующие программированную гибель клеток.
ИЗМЕНЕНИЯ ТРАНСМЕМБРАННОГО
ПОТЕНЦИАЛА МИТОХОНДРИЙ В УСЛОВИЯХ
ДЕЙСТВИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО
ГАЛЕКТИНА-1 N У1ТЮ
Согласно данным литературы, вероятным механизмом реализации программированной клеточной гибели, индуцированной галектином-1, является митохондриальный путь [7]. Универсальным признаком данного пути гибели клеток является снижение трансмембранного потенциала митохондрий, образованного градиентом протонов Н+, за счет активации специфических каналов во внешней митохондриаль-ной мембране [9, 13].
Нами изучены изменения трансмембранного потенциала митохондрий в лимфоцитах при действии рекомбинантного галектина-1 в дозах от 2,5 до 4,0 мкг/мл. Деполяризация митохондриальной мембраны детектировалась по накоплению клетками .ГС-1 в форме мономеров [9].
В диапазоне выбранных доз галектин-1 приводил к статистически значимому (р<0,05) увеличению со-
держания клеток с деполяризованной митохондриальной мембраной. Так, при действии галектина-1 в дозе 2,5 мкг/мл количество лимфоцитов, содержащих JC-мономеры, повышалось в 2 раза по сравнению с таковым в контроле (см. таблицу). Увеличение концентрации галектина-1 до 3,5 и 4,0 мкг/мл сопровождалось увеличением количества лимфоцитов с деполяризованной митохондриальной мембраной в 3 раза. Достоверных различий при сравнении данного показателя между группами с добавлением га-лектина-1 в разных дозах не выявлено (p>0,05).
Снижение трансмембранного потенциала митохондрий при действии галектина-1 на Т-клеточные линии MOLT-4 и CEM отмечали также H. Hahn и соавт. [11].
ИЗМЕНЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ БЕЛКОВ
СЕМЕЙСТВА Bcl-2 В УСЛОВИЯХ ДЕЙСТВИЯ
РЕКОМБИНАНТНОГО ГАЛЕКТИНА-1 IN VITRO
Для оценки участия механизмов регуляции митохондриального пути в индуцированном галекти-ном-1 апоптозе CD4+-лимфоцитов было исследовано изменение уровня белков Bcl-2 и Bax в клетках при действии рекомбинантного галектина-1 в дозе 3,5 мкг/мл. Указанная доза была выбрана потому, что соотношение жизнеспособных и апоптотически измененных CD4+-лимфоцитов в данном случае было наиболее приближено к значению 1:1 (см. рис. 1).
Добавление галектина-1 приводило к достоверному (p<0,05) снижению содержания антиапопто-тического белка Bcl-2 до 4,70 (1,70—5,63) усл.ед.; в контрольной группе — 11,11 (7,67—13,54) усл.ед.
Концентрация галектина-1, мкг/мл -л- Аннексин+7ААД+ -о- Аннексин+7ААД--о- Аннексин-7ААД-
Рис. 1. Количество апоптотически измененных и живых CD^-лимфоцитов, активированных антителами к CD3 и CD28, в зависимости от концентрации рекомбинантного галектина-1 в культуральной среде Примечание: * — р<0,05 по сравнению с показателем в интактной культуре лимфоцитов; ** — с показателем при действии галектина-1 в дозе 2,5мкг/мл; *** — в дозе 3,5 мкг/мл.
КОЛИЧЕСТВО ЛИМФОЦИТОВ, СОДЕРЖАЩИХ JC-МОНОМЕРЫ, ПРИ ДОБАВЛЕНИИ ПРОАПОПТОТИЧЕСКИХ ДОЗ РЕКОМБИНАНТНОГО ГАЛЕКТИНА-1 К КЛЕТКАМ, АКТИВИРОВАННЫМ АНТИТЕЛАМИ К СЭ3 И СЭ28 [Ме (025-075)]
Показатель Содержание г-галектина-1, мкг/мл (n=15)
0,0 2,5 3,5 4,0
Количество лимфoцитoв, 12,55 (ц,10—14,10) 27,0* (22,95-31,25) 38,80* (35,75-42,98) 49,10* (43,83 - 51,43) содержащих JC-мономеры, %
Примечание: * — р<0,05 по сравнению с контролем.
(рис. 2). Уровень проапоптотического белка Bax статистически значимо (p<0,05) повышался под действием галектина-1, составив 0,62 (0,48—0,90) усл. ед.; в контрольной группе (клетки, культивированные без добавления галектина-1) — 0,06 (0,02—0,09) усл.ед.
Таким образом, нами показано, что при действии галектина-1 происходит снижение содержания белка Bcl-2 и увеличение — белка Bax. Снижение экспрессии гена bcl-2 при увеличении содержания фосфо-формы белка Bcl-2, а также повышение содержания белка Bad под действием галектина-1 отмечено и B. Brandt и соавт. [6] на клетках линии Jurkat E6.1. Белок Bax, в норме ингибированный белком Bcl-2, в ответ на проапоптотические сигналы претерпевает конформационные изменения и, олигомеризуясь, пермеабилизует внешнюю мембрану митохондрий [3, 13, 14]. Через образованные белком Bax поры выходят цитохром С, участвующий в активации каспа-зы 9, а также AIF и эндонуклеаза G, осуществляющие фрагментацию хроматина [15].
Исходя из полученных нами результатов и работ других исследователей, можно предположить, что действие галектина-1 на клетки приводит к изменению соотношения антиапоптотических и проапоп-тотических белков семейства Bcl-2 и увеличению проницаемости митохондриальной мембраны, что запускает каскад реакций апоптотической гибели активированных CD4+-лимфоцитов.
Программированная клеточная гибель является необходимым механизмом контроля иммунного ответа на разных стадиях лимфопоэза [16, 17]. Кооперация клеток, опосредованная галектином-1, происходит как в ходе селекции лимфоцитов в тимусе, презентации антигена дендритными клетками и макрофагами,
Рис. 2. Внутриклеточное содержание антиапоптоти-ческого белка Bcl-2 и проапоптотического белка Bax в лизатах мононуклеарных лейкоцитов при действии in vitro рекомбинантного галектина-1
так и в очаге опухолевого роста [1, 2, 4, 18]. При этом апоптоз активированных CD4+-лимфоцитов под действием галектина-1 может иметь как физиологическое, так и патогенетическое значение.
С одной стороны, таким образом может осуществляться ауторегуляция, направленная на предотвращение избыточной активации иммунных реакций и защиту здоровых тканей от иммуноопосредованного повреждения. Данное предположение подтверждается терапевтическим эффектом галектина-1, показанным на различных экспериментальных моделях аутоиммунных заболеваний: миастении Гравис, энцефаломиелита, артрита, гепатита, болезни трансплантат против хозяина, увеита и диабета [3].
С другой стороны, гибель лимфоцитов под действием галектина-1, секретируемого опухолевыми клетками, способствует опухолевой прогрессии в результате иммуносупрессии. Способность секрети-ровать галектин-1 показана для клеток гепатоцеллю-лярной карциномы, рака молочной железы, желудка, легких и новообразований других локализаций. В этом случае галектин-1 может рассматриваться в качестве терапевтической мишени с целью предотвращения гибели опухоль-специфических лимфоцитов [18].
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В результате проведенного исследования установлено, что галектин-1 дозозависимо индуцирует апоптоз активированных CD4+-лимфоцитов. При этом происходят деполяризация митохондриальной мембраны, снижение содержания антиапоптотиче-ского белка Вс1-2 и повышение уровня проапоптотического белка Вах, что свидетельствует о вовлечении митохондриального пути апоптоза. Полученные данные вносят вклад в понимание иммунорегуляторных механизмов галектина-1, что необходимо для оценки галектина-1 соответственно в качестве молекулярной мишени либо как агента новых методов терапии опухолевых и аутоиммунных заболеваний.
***
Исследование выполнено при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ в рамках ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 гг. (ГК №16.740.11.0636; соглашение №8302), а также при финансовой поддержке Совета по грантам при Президенте РФ (договор №16.120.11.614-НШ, №16.120.11.1233-МД) и Российского фонда фундаментальных исследований (договор №12-04-31224 мол_а).
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1. Якушина В.Д., Васильева О.А., Рязанцева Н.В. Новицкий В.В., Савельева О.Е., Прохоренко Т.С., Старикова Е.Г., Зима А.П. Галектин-1: роль в формировании особенностей врожденного и приобретенного иммунитета. Медицинская иммунология. 2012; 14 (1-2): 21-32.
[Yakushina V.D., Vasilyeva O.A., Ryazant-seva N.V., Novitsky V.V., Savelyeva O.E. Prokhorenko T.S., Starikova E.G., Zima A.P. Galectin-1 and its role in development of innate and adaptive immunity. Medical. Immunology. 2012; 14 (1-2): 21-32 (in Russian)]
2. Якушина В.Д., Васильева О.А., Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., Чечина О.Е., Прохоренко Т.С., Старикова Е.Г. Роль галектина-1 в регуляции гомеостаза Т-лимфоцитов. Бюллетень сибирской медицины. 2011; 10 (6): 93-9. [Yakushina V.D., Vasiliyeva O.A., Ryazant-seva N.V., Novitsky V.V., Chechina O.Ye., Prokhorenko T.S., Starikova Ye.G. The role of galectin-1 in the T-lymphocytes homeos-tasis. Bulletin of Siberian medicine. 2011; 10 (6): 93-9 (in Russian)]
3. Perone M.J., Bertera S., Shufesky W.J. Divito S.J., Montecalvo A., Mathers A.R., Larregina A.T., Pang M., Seth N., Wucherpfennig K.W., Trucco M., Baum L.G., Morelli A.E. Suppression of autoimmune diabetes by soluble galectin-1. J. Immunol. 2009; 182 (5): 2645-53.
4. Yang R.Y., Rabinovich G.A., Liu F.T. Ga-lectins: structure, function and therapeutic potential. Expert Rev. Mol. Med. 2008; 13 (10): e17.
5. Jager A., Kuchroo V.K. Effector and regulatory T-cell subsets in autoimmunity and tissue inflammation. Scand J. Immunol. 2010; 72 (3): 173-84.
6. Brandt B., Abou-Eladab E.F., Tiedge M. Role of the JNK/c-Jun/AP-1 signaling pathway in galectin-1-induced T-cell death.
Cell Death and Disease. 2010; (1), e23; doi:10.1038/cddis.2010.1.
7. Hahn H.P., Pang M., He J. et al. Galectin-1 induces nuclear translocation of endo-nuclease G in caspase- and cytochrome c-independent T celldeath. Cell Death Differ. 2004; 11 (12): 1277-86.
8. Toscano M.A., Bianco G.A., Ilarregui J.M. Differential glycosylation of TH1, TH2 and TH-17 effector cells selectively regulates susceptibility to cell death. Nat. Immunol. 2007; 8 (8): 825-34.
9. Galluzzi L., Zamzami N., de La Motte Rouge T. et al. Methods for the assessment of mito-chondrial membrane permeabilization in apoptosis. Apoptosis. 2007; 12 (5): 803-13.
10. Choudhuri K., Dustin M.L. Signaling microdomains in T cells. FEBS Lett. 2010; 584 (24): 4823-31.
11. Verhoven B., Schlegel R.A., Williamson P. Mechanisms of phosphatidylserine exposure, a phagocyte recognition signal, on apoptotic T lymphocytes. J. Exp. Med. 1995; 182 (5): 1597-1601.
12. Williamson P., Christie A., Kohlin T. et al. Phospholipid scramblase activation pathways in lymphocytes. Biochemistry. - 2001; 40 (27): 8065-72.
13. Старикова Е.Г., Рязанцева Н.В., Новицкий В.В. и др. Роль внутриклеточных газовых трансмиттеров сульфида водорода и оксида азота в регуляции апоптоза нормальных и бласттрансформированных клеток. Бюллетень сибирской медицины. 2011; 10 (6): 40-4.
[Starikova Ye.G., Ryazantseva N.V., Novitsky V.V., Tashireva L.A., Starikov Yu.V., Stepovaya Ye.A., Osikhov I.A., Vasiliyeva O.A., Yakushina V.D. The role of intracellular gaseous transmitters hydrogen sulfide and nitric oxide in apoptosis regulation of normal and cancer cells. Bulletin of Siberian Medicine. 2011; 10 (6): 40-4 (in Russian)]
14. Рязанцева Н.В., Старикова Е.Г., Таширева Л.А., Степовая Е.А., Стариков Ю.В., Осихов И.А., Новицкий В.В. Внутриклеточные газовые посредники оксид азота, монооксид углерода
и сульфид водорода участвуют в регуляции апоптоза. Цитология. 2012; 54 (2): 105-11.
[Ryazantseva N.V., Starikova E.G., Tashireva L.A., Stepovaya Ye. A., Starikov Yu.V., Osihov I.A., Novitsky V.V. Intracellular gaseous messengers, nitric oxide, carbon monoxide and hydrogen sulfide participate in apoptosis regulation. Cell and Tissue Biology. 2012; 54 (2): 105-11 (in Russian)]
15. Belizario J.E., AlvesJ., Occhiucci J.M., Garay-Malpartida M., Sesso A. A mechanistic view of mitochondrial death decision pores. Braz J. Med. Biol. Res. 2007; 40 (8): 1011-24.
16. Рязанцева Н.В., Новицкий В.В., Жукова О.Б., Сазонова Е.В., Чечина О.Е., Биктасова А.К., Байков А.Н. Молекулярные механизмы влияния интерлейкина-2 на апоптоз лимфоцитов крови. Клеточные технологии в биологии и медицине. 2010; 2: 116-20. [Ryazantseva N.V., Novitskii V.V., Zhukova O.B., Sazonova E.V., Chechina O.E., Bik-tasova A.K., Baikov A.N. Role of reactive oxygen species and Bcl-2 family proteins in TNF-a-induced apoptosis of lymphocytes. Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2010; 2: 116-20 (in Russian)]
17. Saveleva O.E., Litvinova L.S., Anishchenko E.S., Novitsky V.V., Riazantseva N.V. The role of transcription factors in cytokine-mediat-ed apoptosis of lymphcytes. International J. of Biology. 2012; 4 (1): 129-37.
18. Compagno D., Laderach D.J., Gentilini L., Jaworski F.M., Rabinovich G.A. Delineating the «galectin signature» of the tumor microenvironment. Oncoimmunology. 2013; 2 (4): e23565.
Поступила 15 ноября 2013 г.
Новости науки
В 14 ИНСТИТУТАХ США
НАЛОЖЕН ЗАПРЕТ НА ИССЛЕДОВАНИЯ
В ОБЛАСТИ ВИРУСОЛОГИИ
Мораторий на исследование ряда вирусов был объявлен в США 17 октября 2014 года. Был выпущен специальный документ, ограничивающий на неопределенный срок финансирование исследований вирусов гриппа, коронавируса, острого респираторного синдрома (SARS) и ближневосточного респираторного синдрома (MERS) а также ряда других вирусов, генетические манипуляции с которыми могут привести к непредсказуемым последствиям.
По замыслу авторов документа, следует провести тщательный анализ условий, в которых проводятся работы с этими вирусами, и оценить квалификациию сотрудников с точки зрения биобезопасности. Непривычные к таким резким мерам американские ученые выступают с заявлениями и письмами. В середине декабря намечено заседание Национального совета по биомедицинским исследованиям, однако в перспективе снятие моратория пока не предвидится.
[по материалам сайта http://news.sciencemag. о^/Ыо1о£у/2014/10/и-8-НаШ-/ипй1щ-пеу!-п8ку-у1гы8-зЫ^ез-саШ-уоШ^агу-тога^пит]
