CC BY
32
CLINICAL MOLECULAR STUDIES
КЛИНИЧЕСКИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2020
Лубова В.А.1, Леонова Г.Н.1, Шутикова А.Л.1, Бондаренко Е.И.2
ИНДИКАЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ КУ-ЛИХОРАДКИ НА ЮГЕ ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА
1ФГБНУ «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г. П. Сомова» Министерства
высшего образования и науки РФ, 690087, Владивосток, Россия;
2AO «Вектор-Бест», 630559, п. Кольцово, Новосибирская область, Россия
Ку-лихорадка (коксиеллёз) - широко распространенное в мире природно-очаговое заболевание. Возбудитель коксиеллёза -грамотрицательная бактерия Coxiella burnetii, отличающаяся высокой контагиозностью и низкой вирулентностью. Основными переносчиками C. burnetii являются иксодовые клещи, которые в антропургических очагах питаются на домашних и сельскохозяйственных животных.
Для решения вопроса о возможной циркуляции C. burnetii на территории Приморского края исследовано 334 образца разнообразного природного материала, собранного в весенне-летний период 2019 г. В окрестностях Владивостокского городского округа (на о. Рейнеке) генетические маркёры C. burnetii выявлены в 19,7% у всех видов клещей. В Ханкайском районе ДНК коксиелл чаще (в 6,3%) выявляли в клещах D. si^arum^ клещах I. persulcatus и H. japonica обнаружено по 1 случаю. Из 56 экз. иксодовых клещей, присосавшихся к людям, ДНК C. burnetii выявлена в клещах I. persulcatus в 38,8%, H. concinna - в 14,3%. В сыворотках крови сельскохозяйственных животных детектировано наличие коксиелл у овец в 3-х образцах, у лошадей - в двух. Секвенирование полученных последовательностей показало в сыворотках крови животных наличие C. burnetii. В клещах, присосавшихся к людям, в 6 образцах идентифицированы C. burnetii, в 6 образцах -Coxiella-like endosymbiont. Представленные результаты свидетельствуют о циркуляции C. burnetii на территории Приморского края. Для получения более полной характеристики сложившейся эпидемиологической ситуации необходимо провести более широкие исследования природного материала и крови людей с подозрением на Ку-лихорадку.
Ключевые слова: Coxiella burnetii; Coxiella-like endosymbiont; Ку-лихорадка; ПЦР-РВ; диагностика; Приморский край.
Для цитирования: Лубова В.А., Леонова Г.Н., Шутикова А.Л., Бондаренко Е.И. Индикация возбудителя Ку-лихорадки
на юге Дальнего востока. Клиническая лабораторная диагностика. 2020; 65 (11): 724-728.
DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2020-65-724-728
Lubova V. A.1, Leonova G. N.1, ShutikovaA. L.1, Bondarenko E. I.2
INDICATION Q FEVER PATHOGEN IN THE SOUTH OF FAR EAST
1Somov Institute of Epidemiology and Microbiology, 690087, Vladivostok, Russia;
2AO «Vector-Best», 630559, Koltsovo, Novosibirsk region, Russia
Q fever (coxiellosis) is a widespread natural focal disease in the world. The causative agent of coxiellosis is the gram-negative bacterium Coxiella burnetii, which is highly contagious and low virulence. The main carriers of C. burnetii are ixodid ticks, which feed on domestic and farm animals in anthropurgic foci. To address the possible circulation of the Q fever pathogen in the territory of the Primorsky Territory, 334 samples of various natural material collected in the spring-summer period of 2019 were studied. In the vicinity of the Vladivostok (on Reineke island), genetic markers ofC. burnetii were detected in 19.7% of all tick species. In the Khankai.sk region, coxiella DNA was detected more often (in 6.3%) in ticks of D. silvarum, in ticks of I. persulcatus and H. japonica, 1 case was detected. From 56 copies. ixodid ticks sucked to humans, C. burnetii DNA was detected in ticks of I. persulcatus in 38.8%, H. concinna - in 14.3%. In the serum of farm animals, the presence of coxiella in sheep in 3 samples was detected, in horses - in two. Sequencing of the obtained sequences showed the presence of the pathogen C. burnetii in the blood serum of animals. The ticks have stuck to people in 6 samples were identified C. burnetii and 6 samples -Coxiella-like endosymbiont. The presented results indicate the circulation of the causative agent of Q fever in the territory of the Primorsky Territory. To obtain a more complete description of the current epidemiological situation, it is necessary to conduct more extensive studies of natural material and blood ofpeople with suspected Q fever.
Key words: Coxiella burnetii; Coxiella-like endosymbiont; Q fever; PCR-RV; diagnostics; Primorsky Territory. For citation: Lubova V.A., Leonova G.N., Shutikova A.L., Bondarenko E.I. Indication Q fever pathogen in the south of Far east. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics). 2020; 65 (11): 724-728 (in Russ.). DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0869-2084-2020-65-724-728
For correspondence: Lubova V.A., junior researcher of natural-focal transmissible infections laboratory; e-mail: valeri_priority@mail.ru Information about authors:
Lubova V.A., ORCID: https://0000-0002-4290-6164; Shutikova A.L., ORCID: https://0000-0002-6803-0439; Leonova G.N., ORCID: https://0000-0001-5387-1127; Bondarenko E.I. ORCID: https://0000-0002-4699-9548. Conflict of interests. The authors declare absence of conflict of interests. Acknowledgment. The study had no sponsor support.
Received 08.05.2020 Accepted 19.06.2020
Для корреспонденции: Лубова Валерия Александровна, мл. науч. сотр. лаб. природно-очаговых трансмиссивных инфекций; е-mail: valeri priority@mail.ru
Возбудитель коксиеллёза - грамотрицательная бактерия Coxiella burnetii с внутриклеточным механизмом жизнедеятельности, отличающаяся низкой вирулентностью, но высокой контагиозностью (при аэрогенном пути инфицирования даже единичная бактерия может привести к заболеванию) [1].
На территории Российской Федерации за весь период изучения показатель заболеваемости колебался от 1,0 на 100 тыс. населения в 1957 г. до 0,02 - в 2014 г. По данным Федерального центра гигиены и эпидемиологии в 2018 г. абсолютное число заболевших составило 110 случаев [2]. В последние годы коксиеллёз регистрируется на 50 административных территориях РФ. При этом наибольшее количество выявленных случаев Ку-лихорадки приходится на Южный Федеральный округ [3]. В Приморском крае с 2009 г. по настоящее время официально не зарегистрировано ни одного случая заболевания коксиеллёзом [4], но при этом исследования сельскохозяйственных животных и клещей, собранных с растительности в этот период, не проводились.
Основными резервуарами коксиелл в природе являются иксодовые клещи, а так же их прокормители -теплокровные животные (мелкие грызуны, крупные и мелкие копытные). Клещи при питании на прокорми-теле выделяют экскременты, содержащие коксиеллы, которые рассеиваются воздушными потоками, конта-минируя окружающую среду [5]. В антропургических очагах основным резервуаром и источником инфекции для человека являются домашние животные (крупный рогатый скот, овцы, лошади, козы, кошки, собаки и другие) [6]. Заражение сельскохозяйственных животных в очагах может происходить как от инфицированных клещей во время выпаса, так и при совместном содержании здоровых и больных животных. У домашних животных коксиеллёз часто протекает как латентная инфекция, обостряющаяся в период беременности и родов [7]. Особую опасность в плане заражения для скота и для человека представляют заражённые возбудителем плацента и околоплодная жидкость. Трансмиссивный путь заражения человека маловероятен [7], тем не менее, исследования образцов смывов, взятых у пациентов с места присасывания клеща, в Республике Алтай в 2017 г. показали наличие генетического маркёра C. burnetii у двух лихорадящих больных. Результаты секвенирования выделенной ДНК по гену IS1111 подтвердило данные ПЦР-анализа о наличии ДНК-маркёра коксиеллёза [8]. В антропургических очагах человек может инфицироваться алиментарным путём (при употреблении инфицированного молока, заражённой воды), воздушно-пылевым (при вдыхании пыли) или контактным (через слизистые оболочки или поврежденные участки кожи) [7, 9]. Для коксиеллёза характерна весенняя сезонность. Наибольшее число случаев заболевания регистрируется в марте-мае, как раз во время массового отёла и окота животных. Среди заболевших коксиеллёзом чаще встречаются мужчины, занятые сельскохозяйственными работами, животноводством, убоем, обработкой шкур и шерсти животных, птичьего пуха и т. д. [9].
Коксиеллёз характеризуется полиморфизмом клинических проявлений [10]. В связи с различием путей передачи возбудителя человеку, разнообразием симптомов, отсутствием патогномоничных признаков заболевания при коксиеллёзе для подтверждения диагноза требуется использование комплекса методов лабораторной диагностики.
КЛИНИЧЕСКИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Методами диагностики коксиелёза являются имму-ноферментный анализ (ИФА) и полимеразная цепная реакция (ПЦР).
Цель работы - показать возможную циркуляцию опасной для человека C. burnetii на приграничных и прилежащих к Владивостоку территориях Приморского края.
Материал и методы. Для решения вопроса о возможной циркуляции C. burnetii на территории Приморского края исследовано 334 образца разнообразного природного материала, собранного в весенне-летний период 2019 г. в окрестностях с. Новокачалинск (Ханкай-ский район), на о. Рейнеке (Владивостокский городской округ). Иксодовых клещей с растительности собирали на флаг стандартным способом согласно методическим указаниям [11]. На о. Рейнеке собрано 71 экз., в Ханкай-ском районе - 86 экз. иксодовых клещей.
В Ханкайском районе, используя живоловки, отловлены 34 экз. мелких грызунов. Ловушки выставляли в вечернее время в местах травянисто-леспедецивой границы между сельскохозяйственными полями прямой линией с интервалом 5 метров, [12]. Для исследования у грызунов забирали внутренние органы (мозг, сердце, печень, селезёнка).
При содействии КГБУ «Хорольская ветеринарная СББЖ «Ханкайская станция по борьбе с болезнями животных»» собраны 52 пробы крови от крупного и мелкого рогатого скота.
Исследованы 56 экз. иксодовых клещей, присосавшихся к людям и 35 образцов сывороток крови людей, пострадавших от укусов клеща на территории, прилежащей к г. Владивостоку.
Клещей промывали в 96%-м этаноле, затем в физиологическом растворе. Образцы помещали в пробирки, добавляли по 250 мкл охлажденного раствора для подготовки образцов (РПО) из набора реагентов для выделения нуклеиновых кислот «РеалБэст экстракция 100» АО «Вектор-Бест» (Новосибирск). Клещей измельчали на гомогенизаторе TissueLyser LT(Qiagenhilden, Германия).
Выделение нуклеиновых кислот исследуемых образцов проводили с использованием набора реагентов «РеалБест экстракция 100», согласно инструкции производителя.
ПЦР в режиме реально времени выполняли с помощью экспериментальной лабораторной версии тест-системы «Coxbur-1», представляющей набор реагентов для обнаружения ДНК-маркёра C. burnetii (фрагмент генома IS1111) методом ПЦР с гибриди-зационно-флуоресцентным учётом результатов, разработанной АО «Вектор-Бест» (Новосибирск). В состав теста «Coxbur-1» входят лиофильно высушенные ПЦР-смеси, содержащие праймеры Cbur-IS-F5 (AGAGTCTGTGGTTAAAAGCAC), Cbur-IS-R2 (TATTCGCTAACGCCACACA), зонд Cbur-IS-Z2(ROX-TCATTGAGCGCCGCGGAATGAATCG-(BHQ-2)), с конечной концентрацией в реакции 0,5 мкМ и 0,25 мкМ, соответственно. Использована программа амплификации: 1 стадия: 50° С - 2 мин; 2 стадия: 95° С - 2 мин; 3 стадия: 50 циклов (94° С - 10 сек, 60° С - 20 сек). Измерение флуоресценции проводилось при температуре 60° С. Все постановки реакции сопровождались отрицательными и положительными контролями. В качестве набора сравнения использована тест-система «АмплиСенс Coxiella burnetii-FL» (ЦНИИ эпидемиологии, Москва) согласно инструкции производителя. Амплификацию
CLINICAL MOLECULAR STUDIES
положительных образцов ДНК C. burnetii по участку гена IS1111 проводили с использованием пары прайме-ров PKO-Cbur-F4 (AAGAGTCTGTGGTTAAAAGCA) и PKO-Cbur-R2 (TATTCGCTAACGCCACACA), обеспечивающих наработку ампликона длиной 390 п. нк. Амплификацию ДНК Coxiella-like endosymbiont) по участку гена 16SrRNA размером 419 п. нк. осуществляли с использованием комбинации праймеровС-Lk-F2 (TCGGGTTGTAAAGCACTTTC) и C-Lk-R5 (AGCTAGTTCTCATCGTTGAC). Для амплификации ДНК-фрагментов микроорганизмов использовали 45 мкл выделенных из образца суммарной ДНК при концентрации праймеров 0,5 мкМ. Использована программа амплификации: 1 стадия: 94° С - 1 мин; 2 стадия 5 циклов: 94° С - 15 сек., 62° С - 20 сек., 72° С - 20 сек.; 3 стадия 45 циклов: 94° С - 15 сек., 60° С - 30 сек., 72° С - 30 сек.
Для проведения электрофоретического анализа полученных ампликонов применяли 1,5% агарозный гель. Секвенирование проводилось по методу Сэнгера на секвенаторе ABIPrism 3100 GeneticAnalyzer (Applied-Biosystems, США) в Центре коллективного пользования «Геномика» СОРАН (г. Новосибирск). Полученные в результате секвенирования данные сопоставляли с ну-клеотидными последовательностями ДНК коксиелл, представленными в международной базе данных КСВ1 с помощью приложения BLAST.
Результаты и обсуждение. Видовой состав ик-содовых клещей о. Рейнеке представлен I. persulcatus (26,8%), H. concinna (56,3%), H. japonica (8,5%), D. silvarum (8,5%) (табл. 1). С помощью экспериментального ПЦР-теста «СохЬиг-1» установлено, что генетический маркёр C. burnetii, фрагмент генома IS1111, выявляли у всех видов клещей, что составило 19,7% положительных результатов. ДНК-маркёр коксиелл чаще детектировали в клещах H.concinna - 27,5% (в 11 из 40 случаев). В суспензиях остальных видов клещей генетический маркёр выявлен по одному случаю (см. табл. 1).
В Ханкайском районе из 86 исследованных клещей, собранных с растительности, на долю I. persulcatus пришлось 2,3%, H. concinna - 1,2%, H. japonica - 3,5%. Клещи D. silvarum составили самую многочисленную группу - 93% (80 из 86). ДНК коксиелл чаще (в 6,3%) выявляли в клещах D. silvarum, в клещах I. persul-catus, H. japonica - по 1 случаю. В клещах H. concinna генетический маркёр C. burnetii не обнаружен. Общая заражённость клещей коксиеллами на данной территории составила 8,1% (7 случаев) (см. табл. 1).
Из 56 образцов иксодовых клещей, присосавшихся к людям в 2019 г., видовой состав представлен в
следующем соотношении: I. persulcatus - 87,5%, H. concinna - 12,5%. С помощью экспериментального теста «Coxbur-1» ДНК-маркёр выявлен в клещах I. persulcatus в 38,8% (в 19 из 49), у представителей H. concinna в одном случае (см. табл. 1).
В положительных образцах, содержащих исследуемую ДНК-мишень возбудителя, при постановке ПЦР-РВ значения Ct варьировали от 34 до 38 цикла, что свидетельствовало о невысокой нагрузке ДНК коксиелл в исследуемых суспензиях клещей.
В качестве диагностического набора сравнения использован ПЦР-тест «АмплиСенс Coxiella burnetii-FL», с помощью которого показано, что только в 14 пробах из 20 положительных клещей, снятых с людей после присасывания, присутствовала ДНК C. burnetii. С помощью комбинации праймеров PKO-Cbur-F4, PKO-Cbur-R2 и секвенирования ДНК по фрагменту генома IS1111 подтверждено присутствие C. burnetii в 6 образцах, в которых ДНК-маркёры C. burnetii выявлены обоими тестами. Другие же 8 положительных образцов, результаты которых получены с помощью обоих тестов, не удалось сек-венировать из-за низкой нагрузки возбудителя в пробах.
Полученные в результате секвенирования последовательности в 100% идентичны последовательностям C. burnetii str. RSA439 (CP040059), str. 2014-PE-15890 (CP032542), str. 18430 (CP014557) и другим последовательностям этого вида, представленным в базе данных NCBI. В результате секвенирования по участку гена 16SrRNA получены дополнительные данные о том, что в других 6 из 20 положительных пробах, обследованных с помощью теста «Coxbur-1» выявлен ДНК-маркёр не C. burnetii, а коксиелла-подобного микроорганизма (Coxiella-like endosymbiont). Полученные нами и секвенированные с помощью комбинации прайме-ров C-Lk-F2 и C-Lk-R5 последовательности ДНК в 98,6% идентичны Coxiella-like endosymbiont isolate Iran/1943/49 (MN612068). Эти образцы (n=6), содержащие ДНК коксиеллоподобные микроорганизмы, показали отрицательные значения ПЦР-РВ при использовании набора сравнения «АмплиСенс Coxiella burnetii-FL», попытки секвенировать их по фрагменту генома IS1111 C. burnetii не удались. В клещах, присосавшихся к людям на территории Приморского края, детектированы как ДНК возбудителя коксиеллеза - C. burnetii, так и ДНК Coxiella-like endosymbiont (см. табл. 2).
До настоящего времени в литературе нет сведений о причастности коксиелла-подобных бактерий к случаям заболевания у людей, известно, что возбудителем летальной инфекции у домашних птиц является Coxiella-like endosymbiont [13].
Таблица 1
Видовой состав иксодовых клещей на различных территориях Приморского края и выявление в них генетического маркёра
коксиел с помощью экспериментального теста «Coxbur-1»
Вид иксодовых клещей о. Рейнеке Ханкайский район Пригородная территория Владивостока (клещи, присосавшиеся к людям)
Всего образцов ДНК C. burnetii Всего образцов ДНК C. burnetii Всего образцов ДНК C. burnetii
абс % абс % абс % абс % абс % абс %
Ixodes persulcatus 19 26,8 1 5,3 2 2,3 1 49 87,5 19 38,8
Haemaphysalis concinna 40 56,3 11 27,5 1 1,2 0 7 12,5 1 14,3
Haemaphysalis japonica 6 8,5 1 16,7 3 3,5 1 33,3 0 0
Dermacentor silvarum 6 8,5 1 16,7 80 93 5 6,3 0 0
Всего 71 14 19,7 86 7 8,1 56 20 35,7
КЛИНИЧЕСКИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Таблица 2
ПЦР-индикация генетических маркёров Coxiella burnetii и Coxiella-like endosymbiont в клещах, присосавшихся к людям в лесной
зоне пригорода Владивостока
Пары сравнения использованных тестов Комбинация результатов ПЦР-анализа Количество образцов сравнения Результаты секвенирования
«Coxbur-1» «АмплиСенс Coxiella burnetii-FL» положительный положительный 14 В 6-тиобразцах выявлена Coxiella burnetii (фрагмент генома IS1111)
«Coxbur-1» «АмплиСенс Coxiella burnetii-FL» положительный отрицательный 6 В 6-ти образцах выявлена Coxiella-like endosymbiont (фрагмент генома 16SrRNA)
«Coxbur-1» «АмплиСенс Coxiella burnetii-FL» отрицательный отрицательный 36 0
Таблица 3
Детекция генетического маркёра C. burnetii в сывороток крови домашних животных
Сельскохозяйственные животные Всего образцов, абс. ДНК Coxiella burnetii, абс. /%
Овцы 10 3/30
Лошади 5 2/40
Коровы 37 0
Всего 52 5/9,6
Из 34 экз мелких грызунов, отловленных в Ханкай-ском районе, видовой состав представлен Apodemus agrarius - 79,4% (27 особей), Apodemus peninsulae - 5,9% (2 особи), Microtus fortis - 14,7% (5 особей). С помощью обеих тест-систем в суспензиях органов диких грызунов ДНК C. burnetii не обнаружена.
Исследование сывороток крови сельскохозяйственных животных с помощью экспериментальной тест-системы «Coxbur-1» показало наличие ДНК-маркёра коксиелл в 3 из 10 образцах сывороток обследованных овец, в 2 из 5 образцах лошадей. В сыворотках крови коров (37 проб) ДНК C. burnetii не обнаружена (см. табл. 3). Подобные результаты заражённости скота в хозяйствах Омской области получены в период 1997-2007 гг., в среднем этот показатель достигал 9,3±1,0% [14].
Электрофореграмма ампликонов по участку гена IS1111 длиной 390 п.нк. C. burnetii.
Дорожка № 8 - ампликон соответствующей длины наработанный с образца ДНК, выделенной из сыворотки крови лошади № 1; дорожки № 9 и 10 - наработка ампликона с образца ДНК, выделенной из сыворотки лошади № 2 в двух повторах; № 13 - "К+", № 14 - "К-", сыворотка крови коровы. С № 1 по № 7, а так же дорожки № 11 и № 12- отрицательные результаты с образцами ДНК, выделенными из сывороток других животных.
В 35 образцах крови людей, имеющих в анамнезе укус клеща, возбудитель коксиеллёза не выявлен.
Дополнительно проведённые исследования сельскохозяйственных животных с помощью диагностического набора «АмплиСенс Coxiella burnetii-FL» подтвердили наличие ДНК C. burnetii в сыворотках крови овец и лошадей. Результаты ПЦР-анализа, полученные с помощью теста «Coxbur-1» и «АмплиСенс Coxiella burnetii-FL» показали одинаковые результаты. Использование комбинации праймеров PKO-Cbur-F4 и PKO-Cbur-R2 обеспечило наработку ампликонов участка генома IS1111 C. burnetii длиной 390 п. нк. в пробах ДНК, выделенных из двух положительных образцов сывороток лошадей (см. рисунок).
Наработанные ампликоны успешно секвенированы. Анализ полученных последовательностей с помощью приложения BLAST показал, что они соответствуют последовательностям IS1111 C. burnetii, и в частности полностью гомологичны последовательности C. burnetii str. Namibia (CP007555).
Случаи заражения населения после укуса клеща на территории РФ, выявление C. burnetii и Coxiella-like endosymbiont в клещах, присосавшихся к людям в лесной зоне пригорода Владивостока, свидетельствуют о возможной трансмиссивной передаче возбудителя от клеща к человеку на территории юга Дальнего Востока.
Полученные в результате проведённого пилотного исследования иксодовых клещей и сельскохозяйственных животных свидетельствуют о выявлении C. burnetii на территории Приморского края. В первую очередь, это касается Ханкайского района, приграничных зон КНР, что указывает на необходимость проведения дополнительных исследований природного материала для более точной и полной оценки сложившейся эпидемиологической ситуации по распространению C. burnetii. Особое внимание следует уделить приграничным зонам, густонаселённым территориям и местам массового отдыха населения. Выполненные исследования пока не отвечают на вопрос, являются ли фермерские хозяйства антропургическими очагами Ку-лихорадки, или же в Приморском крае существуют природные очаги этого заболевания, в которых клещи принимают непосредственное участие. Последующие исследования необходимо направить на определение в крови ДНК-маркёров C. burnetii у работников ферм, где содержатся инфицированные животные, на выявление возможных случаев заболевания у людей.
CLINICAL MOLECULAR STUDIES
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки. Работа выполнена в рамках научного проекта (0545-2019-0007) Министерства науки и высшего образования РФ.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Лобан К.М., Лобзин Ю.В., Лукин Е.П. Риккетсиозы человека: руководство для врачей. СПб: Элби; 2002.
2. Яковлев Э.А., Борисевич С.В., Попова А.Ю., Ежлова Е.Б., Демина Ю.В. Заболеваемость лихорадкой Ку в Российской Федерации и странах Европы: реалии и проблемы. Проблемы особо опасных инфекций. 2015; 4: 49-54.
3. О состоянии санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Российской Федерации в 2018 году: государственный доклад. М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; 2019. Available at: https://www.rospotrebnadzor.ru/upload/iblock/798/gosudarstven-nyy-doklad-o-sostoyanii-sanitarno_epidemiologicheskogo-blagopo-luchiya-naseleniya-v-rossiyskoy-federatsii-v-2018-godu.pdf .
4. О состоянии санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Приморском крае в 2018 году: государственный доклад. М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; 2018. Available at: http://25.rospotrebnadzor.ru/c/ document_library/get_file?uuid=66d89a32-b813-45f4-926a-0224e04a5f4a&groupId=10156.
5. Фрейлихман О.А., Панферова Ю.А., Сайнес Т.В., Шапарь А.О., Токаревич Н.К. Инфицированность клещей возбудителями инфекционного клещевого боррелиоза и лихорадки Ку на территории Санкт-Петербурга. Инфекция и иммунитет. 2016; 6 (3):118.
6. Злобин В.И., Рудаков Н.В., Малов И.В. Клещевые трансмиссивные инфекции. Новосибирск: Наука; 2015.
7. Дайтер А.Б., Рыбакова Н.А., Токаревич Н.К. Эпидемическая проекция внутристадных очагов лихорадки Ку. Журнал микробиология. 1988; 11: 51-6.
8. Шучинова Л.Д., Бондаренко Е.И. Случаи заражения людей Ку-лихорадкой трансмиссивным путем. В кн.: Материалы XI ежегодного Всероссийского конгресса по инфекционным болезням с международным участием (1-3 апреля 2019 г.). М.; 2019.
9. Малов В.А., Горобченко А.Н., Гюлазян Н.М., Немилостива Е.А., Каншина Н.Н., Нехаев С.Г. и др. «Неясная лихорадка»: восемьдесят лет спустя. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2017; 22 (4): 200-7.
10. Малов В.А., Пономарев С.В., Тарасевич И.В., Кубенский Е.Н., Го-робченко А.Н., Пантюхина А.Н., и др. Описание случая тяжёлого течения Q-лихорадки. Терапевтический архив. 2015; 11: 84-91.
11. МУ 3.1.3012-12 Сбор, учёт и подготовка к лабораторному исследованию кровососущих членистоногих в природных очагах опасных инфекционных болезней. Методические указания. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнад-зора; 2011.
12. МУ 3.1.1029-01 Отлов, учёт и прогноз численности мелких млекопитающих и птиц в природных очагах инфекций. Методические указания. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России; 2002.
13. Бондаренко Е.И., Кравцов В.Ю., Соловьёв А.И., Ракин А.И., Тимофеев Д.И., Швалов А.Н., и др. Молекулярно-генетиче-ское исследование аргасовых клещей Ornithodoros papillipes из коллекции академика Е.Н. Павловского. Новости «Вектор-Бест».2020; 1 (95): 7-15.
14. Красиков А.П., Рудаков Н.В. Риккетсиозы, коксиеллёз и анаплазмозы человека и животных. Омск: Омский научный вестник; 2013.
REFERENCES
1. Loban K.M., Lobzin Y.V., Lukin E.P. Human Rickettsioses: A Guide for Physicians. [Rikketsiozy cheloveka: rukovodstvo dlya vrachey]. St. Petersburg: Alby; 2002. (in Russian)
2. Yakovlev E.A., Borisevich S.V., Popova A.Y., Ezhlova E.B., Demina Y.V. The incidence of Q fever in the Russian Federation and European countries: realities and problems. Problemy osobo opas-nykh infektsiy. 2015; 4: 49-54. (in Russian)
3. On the state of sanitary-epidemiological well-being of the population in the Russian Federation in 2018: State report. Moscow: Federal'naya sluzhba po nadzoru v sfere zashchity prav potrebiteley i blagopoluchiya cheloveka; 2019. Available at: http://25.rospotrebnad-zor.ru/c/document_library/get_file?uuid=66d89a32-b813-45f4-926a-0224e04a5f4a&groupId=10156 (accessed 7 April 2020). (in Russian)
4. On the state of the sanitary-epidemiological well-being of the population in the Primorsky Territory in 2018: State report. Moscow: Federal'naya sluzhba po nadzoru v sfere zashchity prav potrebiteley i blagopoluchiya cheloveka]. 2018. Available at: http://25. rospotrebnadzor.ru/c/document_library/get_file?uuid=66d89a32-b813-45f4-926a-0224e04a5f4a&groupId=10156 (accessed 7 April 2020). (in Russian)
5. Freylikhman O.A., Panferova Y.A., Saynes T.V., Shapar' A.O., To-karevich N.K. Tick infection by pathogens of tick-borne borrelio-sis and Q fever in St. Petersburg. Infektsiya i immunitet. 2016; 6 (3):118. (in Russian)
6. Zlobin V.I., Rudakov N.V., Malov I.V. Tick-transmitted diseases. [Kleshchevye transmissivnye infektsii]. Novosibirsk: Nauka; 2015. (in Russian)
7. Dayter A.B., Rybakova N.A., Tokarevich N.K. Epidemic projection of the intraocardial foci of Q fever. Zhurnal mikrobiologiya. 1988; 11: 51-6. (in Russian)
8. Shuchinova L.D., Bondarenko E.I. Cases of human exposure to Q-fever by vector-borne transmission. In: Proceedings of the XI Annual All-Russian Congress on Infectious Diseases with International Participation (April 1-3, 2019). Moscow; 2019: 234-5. (in Russian)
9. Malov V.A., Gorobchenko A.N., Gyulazyan N.M., Nemilostiva E.A., Kanshina N.N., Nekhaev S.G. et al. "Unclear fever": eighty years later. Epidemiologiya i infektsionnye bolezni. 2017; 22 (4): 200-7. (in Russian)
10. Malov V.A., Ponomarev S.V., Tarasevich I.V., Kubenskij E.N., Gorobchenko A.N., Pantyuhina A.N. et al. Description of severe Q fever. Terapevticheskiy arkhiv. 2015; 11: 84-91. (in Russian)
11. Guidelines 3.1.3012-12 Collection, accounting and preparation for laboratory research of blood-sucking arthropods in natural foci of dangerous infectious diseases: Methodological instructions. Moscow: Federal'ny tsentr gigieny i epidemiologii Rospotrebnadzora; 2011. (in Russian)
12. Guidelines 3.1.1029-01 Catching, accounting and forecasting the number of small mammals and birds in natural foci of infections: Guidelines. Moscow: Federal'ny tsentr gossanepidnadzora Minz-drava Rossii; 2002. (in Russian)
13. Bondarenko E.I., Kravcov V.Y., Solov'yov A.I., Rakin A.I., Timofeev D.I., Shvalov A.N. et al. Molecular genetic study of Ar-gas ticks Ornithodoros papillipes from the collection of Academician E.N. Pavlovsky. Novosti «Vektor-Best».2020; 1 (95): 7-15. (in Russian)
14. Krasikov A.P., Rudakov N.V. Rickettsioses, coxiellosis and ana-plasmoses of humans and animals. [Rikketsiozy, koksiellyoz i ana-plazmozy cheloveka i zhivotnykh]. Omsk: Omskiy nauchnyi vest-nik; 2013. (in Russian)
Поступила 08.05.20 Принята к печати 19.06.20
