CC BY
1Высокотехнологическая медицинская помощь: онкология, гематология, трансплантология и иммунология, анестезиология и реаниматология
IN VITRO МОДЕЛЬ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ФУНКЦИЙ ЦИС-РЕГУЛЯТОРНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ ГЕНА POU5F1
Ермакова В.В., Кузьмин А.А.
Институт цитологии Российской академии наук, Санкт-Петербург, Россия Научный руководитель: Томилин А.Н., член.-корр. РАН, д-р биол. наук, профессор
Эмбриональные стволовые клетки или индуцированные плюрипотентные клетки (ЭСК и иПСК) способны к неограниченному самообновлению и дифференцировке во все типы клеток в организме человека. Они обладают большим потенциалом для клеточной терапии неизлечимых в настоящее время заболеваний, включая нервные дегенеративные заболевания и сердечную недостаточность. На данный момент их применение в терапии ограничено по ряду причин, таких как: иммуногенность и геномная нестабильность. Продукт гена Pou5f1 - белок Oct4 является основным фактором поддержания плюрипотентного состояния клеток, но его экспрессия в дифференцированных клетках организма приводит к канцерогенезу и аномалиям эмбрионального развития. Однако ген Pou5f1 расположен в области кластера высокой плотностью генов, активно экспрессирующихся в неплюрипотентных клетках, что потенциально повышает вероятность снятия запрета на его экспрессию.
Мы предположили, что ген Pou5f1 имеет функции помимо кодирования его белкового продукта. По ряду признаков промотор гена Pou5f1 может являться эПромотором, то есть способен проявлять энхансерную активность.
При создании in vitro модели для изучения промотора Pou5f1 мы осуществили биаллельную делецию промотора Pou5f1 в ЭСК мыши и внедрили 9.8-тпн фрагмента гена Pou5f1 в локус с постоянной экспрессией Rosa26. Это позволило сохранить их плюрипотентные свойства. В качестве контрольных линий мы решили использовать клетки с нокаутом Pou5f1, структурно сохраненным промотором и первым экзоном и вставкой экзогенного Pou5f1 в Rosa26 (ЭСК Pou5f1-/-Rosa26Pou5f1/+), а также клетки с делецией промотора и первого экзона только на одной из аллелей локуса дикого типа (ЭСК Pou5fPox/ü).
Перенос одной копии гена Pou5f1 с минимальным набором энхансеров, необходимых для его экспресии, в эктопическое положение сохранил способность ЭСК Pou5f1NÜ Rosa26Pou5f1/+ экспрессировать основные маркеры плюрипотент-ности и поддерживать самообновление культуры. Сравнивая эту линию с контрольными ЭСК Pou5f1flox/flox и Pou5f1flox/A, мы наблюдали нарушение перехода клеток в «наивное», а затем и в «праймированное» состояние плюрипотентности из-за дисрегуляции работы гена Pou5f1, которая привела к нарушению сначала
Ранее было показано, что переход ПСК из «наивного» состояния в «праймированное» обусловлен прежде всего переключением активности проксимального и дистального энхансеров. Однако теперь встает вопрос о том, какие еще изменения структуры генома вовлечены в регуляцию гена Pou5f1. Выяснить это позволит полногеномный анализ экспрессии генов RNA-seq и Capture Hi-C.
МУТАЦИЯ В ГЕНЕ BRCA2 ПРИ ОПУХОЛИ КЛАЦКИНА Камалова М.А., Голубева С.А.
Московский научно-исследовательский онкологический институт имени П.А Гзрцена, Москва, Россия Научный руководитель: Пайчадзе А.А., канд. мед. наук
Актуальность. Опухоль Клацкина представляет собой злокачественное новообразование внепеченочных желчных протоков и составляет на сегодняшний день от 50 до 70 % всех холангиокарцином.
Описание случая. В сентябре 2012 года по данным ирригоскопии был установлен диагноз экзофитный рак сигмовидной кишки. 23.10.2012г проведено хирургическое лечение в объеме резекции сигмовидной кишки. ПГИ: низкодиф-ференцированная аденокарцинома, в одном из 5 л/у метастаз опухоли, установлен патоморфологический диагноз pT3N1M0. На онкологическом консилиум рекомендовано проведение 12 курсов ПХТ по схеме mFOLFOX6. С 11.2012 г. по 06.2013 г. проведено 12 курсов АПХТ по схеме mFOLFOX6. При контрольном обследовании в мае 2015 года, данных за рецидив рака сигмовидной кишки не получено, однако выявлено новообразование общего печеночного протока. Для дообследования обратилась в поликлинику МНИОИ им.П.А.Герцена. В ходе дообследования выявлена опухоль Клацкина
