CC BY
81
© М.МАлсынбаев, М.М.Туйгунов, Р.Р.Фархутдинов, Ю.А.Медведев, А.Г.Исрафилов, К.С. Мочалов, 2006 УДК.615.37.015.44:611-018.53
М.М.Алсынбаев, М.М.Туйгунов, Р.Р.Фархутдинов,
Ю.АМедведев, А.Г.Исрафилов, К.С. Мочалов
ИММУНОВЕНИН КАК СТИМУЛЯТОР ЗАЩИТНОЙ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТОВ
Филиал ФГУП "НПО "Микроген"МЗи СРРФ "Иммунопрепарат",
Башкирский государственный медицинский университет, Уфа.
Препарат иммуноглобулинов для внутривенного введения "Иммуновенин "стимулирует поглотительную способность фагоцитов крови крыс и вызывает активацию в них кислородзависимого метаболизма по результатам тестов восстановления нитросинего тетразолия и люминолзависимой хемилюминесценции. В реакции люминолзависимой хемилюминесцен-ции показано, что иммуновенин и другие препараты иммуноглобулинов для внутривенного введения способны оказывать стимулирующие влияние на защитную активность фагоцитов крови, степень которого вариирует у разных препаратов.
Ключевые слова: иммуноглобулины, иньекции внутривенные, фагоцитоз.
М.М. Alsynbaev, M.M. Tujgunov, R.R .Farhutdinov,
Ju. A. Medvedev, A.G. brafflof, K.S. Mochalov IIMMUNOVENIN AS A STIMULATOR OF PHAGOCYTE DEFENSIVE ACTIVITY
The preparation ofimmunoglobulin for intravenous injection “Immunovenin " stimulates absorbtion ability of rats bloodphagocytes and activates his oxygen -dependent metabolism according to the tests results ofnytroblue tethrasolium recovery and luminold-ependent chemiluminescense. Luminoldependent chemiluminescense reaction demonstrates, that Immunovenin and other immunoglobulin preparations for intravenous injection are capablefor stimulating influence on defense activity ofblood phagocytes in degree, that varies, as far as different preparations are concerned.
Key words: immunoglobulins, intravenous injections, phagocytes.
Препараты иммуноглобулинов, в том числе и препараты иммуноглобулинов человеческих нормальных для внутривенного введения, применяются в комплексной терапии, для лечения тяжелых системных и местных инфекций [2,3,5,7,13]. Препараты иммуноглобулинов человеческих нормальных для внутривенного введения, производства разных изготовителей ввиду особенностей технологии получения существенно различаются по составу и соответственно, биологическим свойствам, в том числе и защитной эффективности при лечении инфекций [12]. Одним из основных иммунных механизмов защитного действия иммуноглобулинов при инфекциях является активация процессов поглощения и инактивации микробов -возбудителей или их киллинг с использованием других механизмов (контактное взаимодействие, экзоцитоз) фагоцитирующими клетками макроорганизма [7,8,12].
В то же время известно, что различным препаратам иммуноглобулинов для внутривенного введения может быть свойственно противовоспалительное действие, и ряд данных препаратов используется для купирования воспалительного ответа [17] и явлений воспалений аутоиммунной и аллергической природы [3,10]. Одним из ведущих компонентов данного действия является угнетение различных проявлений активности фагоцитирующих клеток, в том числе и их кислородзависимых микробицидных факторов [16]. С учетом этого для прояснения проведено исследование влияния препарата "Иммуновенин" (ИВ) - иммуноглобулинов нормальных донорских для внутривенного введения, производимого ФГУП "НПО "Микроген" МЗ и СР РФ "Иммунопрепарат" в г. Уфе, на функционально-метаболическую активность фагоцитов
крыс.
Материал и методы.
Влияние препарата на функционально-метаболические свойства фагоцитов оценивали по изменениям их поглотительной способности и активности кислородзависимого метаболизма, обеспечивающего наработку фагоцитами микробицидных биооксидантов. Периферическая венозная ге-паринизированная (50 ЕД/мл) кровь интактных крыс (содержание лейкоцитов 5,7x109 /л) в количестве 0,09 мл., вносилась в лунки 96-луночного пластикового планшета. В лунки исследуемых образцов добавляли 0,01 мл препарата "Иммунове-нин" (в контрольные лунки адекватный объем среды 199). После предварительной инкубации при 37°С в течение 30 минут во все лунки добавляли по 0,01 мл суспензии микросфер латекса (1010/л) и дополнительно инкубировали при 37°С в течение 15 минут. Определение уровня люминолзависимой хемилюминесценции (ЛЗХЛ), отражающей интенсивность генерации клеткой микробицидных биоокислителей, проводили следующим образом - 0,1 мл, клеточных суспензий вносили в 2,0 мл физиологического раствора pH=7s2 с растворенными в нем 0,1.106 М люминола и определяли светосумму ХЛ на приборе ХЛ-003 с компьютерным режимом регистрации (производство Межвузовской лаборатории технических систем медико-биологических исследований Уфимского государственного авиационного технического университета, г.Уфа) в течение 10 минут [14]. В материале из параллельных лунок исследуемых и контрольных образцов определяли поглотительную способность фагоцитов и индуцируемую латексом активацию кислородзави-симого метаболизма фагоцитов в НСТ-тесте об-
щепринятыми методами. Результаты регистрировали микроскопией и выражали: уровень поглотительной активности - вычислением фагоцитарного индекса (процент поглотивших объекты лейкоцитов из числа потенциальных фагоцитов) и фагоцитарного показателя (количество поглощенных частиц в перерасчете на один потенциальный фагоцит), активации кислородзависимого метаболизма
- процент активированных в НСТ-тесте клеток и цитохимического индекса активации [11]. В параллельных экспериментах были использованы препараты иммуноглобулинов для внутривенного введения других производителей - Хумоглобулин и Пентаглобин. Статистическую обработку данных проводили на ПВЭМ с использованием средств MS Excel 4.0, MS Word 6.0. с стандартными методиками вариационной статистики, включая вычисление t-критерия Стъюдента для оценки достоверности различия при парных измерениях показателей.
Результаты и осбуждение.
Как видно из материалов табл. 1, ИВ вызывал усиление функционально-метаболической актив-
Табпипа 1
Изменения функционально-метаболической активности фагоцитов крови крыс под влиянием препарата "Иммуновенин"
Показатели активности Контроль СИВ
Фагоцитарный индекс <%) латекс 55,77+1.85 58,60+4,12
стафилококк 5в,Ю±3,Й 61,1 5+4,43
Фагоцитарный показатель латекс 5,82±0,22 7,14±0,60*
стафилококк 7,18+0,34 8,43+0,22*
НСТ индуцированный <%> латекс 55,77+1,85 58.60+4,12
стафилококк 60,18+2,77 65,14+3,43
НСТ индуцированный (индекс активации) латекс 5,98±0,13 8,38±0,25+
стафилококк 8,14+0,16 9,46+0,36*
Светосумма ХЛ (у.е.) латекс 6,43+2,66 15,20+2,40*
стафилококк 18,3^+3,26 36,14±233*
но-метаболическую активность фагоцитов, распространяющееся и на процессы фагоцитоза микробных клеток.
Известно, что отклонения в интенсивности хе-милюминесценции фагоцитов от нормальных показателей (увеличение, снижение) в достаточной степени соответствуют изменениям поглотительной активности и уровню активации кислородзависимого метаболизма по результатам НСТ-теста
[9,14]. С учетом этого нами было оценено влияние разных препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения на индукцию ЛЗХЛ фагоцитами крови (табл. 2).
Как видно из материалов таблицы, Иммунове-нин и Пентаглобин вызывали достоверную комплемент зависимую активацию фагоцитов крови (активирующее воздействие зимозана обусловлено активацией на нем белков системы комплемента -С, и осуществляется присутствующие на мембране фагоцитов рецепторы для СЗЬ компонента комплемента), в то время как для Хумоглобулина такая активация не была достоверной.
Таблица 2
Уровень индуцированной зимозаном люминолзависимой хемилюминесценции лейкоцитов крови крыс после предварительной инкубации клеток с препаратом иммуноглобулинов для внутривенного введения
* Различие показателей с контролем (без препаратов) достоверно (р<0,05).
ности лейкоцитов. При этом стимулирующее влияние ИВ на фагоциты касалось в основном качественных, но не количественных показателей функционально-метаболической активности фагоцитов. После воздействия на фагоциты ИВ фагоцитарный индекс (процент активных фагоцитов) и процент фагоцитирующих клеток с активацией в них кислородзависимого метаболизма достоверно не изменялся, В то же время фагоцитарный показатель (активность поглощения частиц фагоцитами) после воздействия препарата достоверно возрастал в отношении как частиц латекса, так и живых микробных клеток (стафилококк). Уровень активации кислородзависимого метаболизма в каждом из активных фагоцитов после инкубации с ИВ (индекс активации) также достоверно возрастал, что сопровождалось достоверно более выраженной генерацией фагоцитами микробицидных биооксидантов, определяемой в реакции ХЛ.
Таким образом, одним из компонентов защитного действия препарата ИВ при инфекциях является его активирующее влияние на функциональ-
* Различие показателей с контролем (без препаратов) достоверно (р<0,05).
Таким образом, одним из компонентов защитного действия препарата ИВ при инфекциях является его активирующее влияние на функционально-метаболическую активность фагоцитов, распространяющееся и на процессы фагоцитоза микробных клеток.
Известно, что отклонения в интенсивности хе-милюминесценции фагоцитов от нормальных показателей (увеличение, снижение) в достаточной степени соответствуют изменениям поглотительной активности и уровню активации кислородза-висимого метаболизма по результатам НСТ-теста
[9,14]. С учетом этого нами было оценено влияние разных препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения на индукцию ЛЗХЛ фагоцитами крови (табл. 2).
•Как видно из материалов таблицы, Иммунове-нин и Пентаглобин вызывали достоверную комп-лементзависимую активацию фагоцитов крови (активирующее воздействие зимозана обусловлено активацией на нем белков системы комплемента -С и осуществляется присутствующими на мембране фагоцитов рецепторами для СЗЬ компонента комплемента), в то время как для Хумоглобулина такая активация не была достоверной.
Таким образом, препараты иммуноглобулинов для внутривенного введения, в том числе ИВ, спо-
собны оказывать стимулирующие влияние на защитную активность фагоцитов крови, степень которого вариирует у препаратов разных производителей.
ЛИТЕРАТУРА
1. Алсынбаев М.М. Разработка алгоритма клинического применения иммуномодуляторов эндогенной природы для направленной иммунокоррекции при гнойно-септических заболеваниях: Автореф. дис. д-ра. мед. наук. - Челябинск, 2002. - 48 с.
2. Алсынбаев М.М., Ю.А.Медведев, Е.В.Бобкова, В.Ф.Кулагин, А.Г.Исрафилов, Е.П.Попова, А.А.Кор-женевский, Д.В.Пахомов, Л.Ф.Максютова, Р.Х.Гизатуллин. Возможности использования некоторых иммуномодуляторов эндогенной природы в лечении больных гнойно-воспалительной патологией // Медицинская иммунология. - 2001. - Т. 3, №2. - С. 302.
3. Анастасиев В. В. Применение иммуноглобулинов: Обзор.- Н. Новгород: Изд-во НГМИ, 1993.- 27 с.
4. Бодрова Г.Н., Клюкевин И.В., Кобаева Е.Н., Хватов В.Б., Михайлова НА, Садыкова А.Ф. Использование антитоксической противосинегнойной плазмы для профилактики гнойных осложнений у больных с открытыми переломами // Госпитальная инфекция в реанимации и интенсивная терапия. Актуальные вопросы анестезиологии и реаниматологии.- Уфа, 1996. -С. 59-60.
5. Гизатуллин Р.Х., Галеев Ф.С., Халикеева Е.Ю., Бадеев Б.В. Комплексное лечение инфекционно-воспалительных осложнений сочетанных и множественных повреждений с применением иммуновенина// Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии. Материалы Всероссийской конференции молодых ученых. - Уфа, 2004 - С. 201-203.
6. Каталог иммунобиологических препаратов и лекарственных средств. - Уфа: "Иммунопрепарат", 2005.-188 с.
7. Корженевский А.Д., Алсынбаев М.М., Медведев Ю.А., Кулагин В.Ф., Исрафилов А.Г. Особенности иммуномодулирующего действия препарата иммуноглобулинов для внутривенного введения у больных гнойно-септической хирургической инфекцией в зависимости от состояния В-звена иммунной системы // Материалы II Конференции иммунологов Урала. - Пермь, 2002.
8. Медведев Ю. А. Неспецифические механизмы и факторы иммунитета / Ю. А. Медведев, В. В. Сперанский, С. Н. Хунафин.- Уфа, 1994.- 32 с.
9. Медведев Ю.А., Фархутдинов P.P., Бондарев А.И. Функционально-метаболическая характеристика фагоцитоза дерматофитов // Восьмой Всесоюзный съезд дермато-венерологов: тезисы, докл. М., 1985. -С. 298.
10. Пат.2238106, РФ. Препарат противоаллергического внутривенного иммуноглобулина и способ его получения / М.М.Алсынбаев, А.Г.Исрафилов, С.А.Еникеева и др. - Заявл. 29.07.2002; Опубл. 20.10.2004//Бюл. - 2004. - №29.
И. Петров Р. В. Оценка иммунного статуса человека при массовых обследованиях / Р. В. Петров, Р М. Хаитов, Б.В. Пенегин // Методические рекомендации для научных работников и врачей практического здравоохранения (разработаны сотрудниками Института иммунологии МЗ России). // Иммунология.-1992.-№6.-С. 51-52.
12. Пинегин, Б.В. Иммунодиагностика и иммунотерапия хирургических инфекций / Б.В.Пинегин, Т.М.Андронова, Т.И.Юдина // Int. J. Immunorehabilitation. -1998. - № 10. - С. 86-99.
13. Сибиряк СВ., Садыков РФ., Магазов Р.Ш., Сергеева С.А. Иммуномодуляторы: справочник для врачей. -Уфа: ГУЛ "Иммунопрепарат", 1999. - 145 с.
14. Фархутдинов P.P., Лиховских В.А. Хемилюминесцентные методы исследования свободнорадикального окисления в биологии и медицине. - Уфа, 1995. -92 с.
15. Фархутдинова Л.В., Медведев Ю.А., Алсынбаев М.М. Диагностика и коррекция иммунной реактивности детей с заболеваниями респираторного тракта при различных вариантах нарушения функционального резерва фагоцитирующих клеток крови. - Уфа, 2005. -133 с.
16. Хаитов Р. М. Экологическая иммунология / Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин, X. И. Истамов. - М.: ВНИ-РО, 1995. - 220 с.
17. Хвойнов Д.В., Викторов В.В., Галлеев Ф.С. и др. Применение препарата "Иммуновенин" как компонента интенсивной терапии системного воспалительного ответа в детской неврологии, //Медицинские иммунобиологические препараты в XXI веке: разработка, производство и применение. - Уфа, 2005. 4.1.
- С. 24-28.
