CC BY
146
УДК 615.37:547.466.46:616.89-092.9
ИММУНОТРОПНЫЕ ЭФФЕКТЫ L-ЛИЗИНА В ИСХОДНОМ СОСТОЯНИИ И В УСЛОВИЯХ ЭМОЦИОНАЛЬНО-БОЛЕВОГО СТРЕССА
© Долгинцев М.Е., Северьянова Л.А., Бобынцев И.И.
Кафедра патофизиологии Курского государственного медицинского университета, Курск
E-mail: [email protected]
Исследовано влияние сравнительно малых доз L-лизина на эффекторные звенья гуморального и клеточного иммунного ответа и активность нейтрофилов у крыс в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса. Установлено, что в исходном состоянии аминокислота оказывала дозозависимое влияние на развитие гуморального иммунного ответа, реакции гиперчувствительности замедленного типа и активность бактерицидных кислородзависимых и фагоцитарных механизмов нейтрофилов. В условиях стресса L-лизин проявлял выраженное стресслимитирующее действие в отношении гуморального и клеточного звеньев иммунного ответа.
Ключевые слова: L-лизин, стресс, иммунный ответ, активность нейтрофилов.
IMMUNOTROPIC EFFECTS OF L-LYSINE IN THE NON-STRESS AND EMOTIONALLY-PAINFUL
STRESS CONDITIONS
Dolgintsev M.E., Severyanova L.A., Bobyntsev I.I.
Pathophysiology Department of the Kursk State Medical University, Kursk
The influence of relatively small doses of L-lysine on the effector components of the humoral and cellular immune response and neutrophil activity in rats in non-stress and emotionally-painful stress conditions was investigated. It was found that in non-stress condition amino acid dose-dependently influenced the humoral immune response, the development of the delayed-type hypersensitivity and bactericidal oxygen-dependent and phagocytic neutrophil activity. In stress condition L-lysine showed essential stresslimiting action on the humoral immune response.
Key words: L-lysine, stress, immune response, neutrophil activity.
К настоящему времени на основании значительного количества исследований выявлен целый ряд иммунотропных эффектов некоторых аминокислот [1, 2, 3]. Известны отдельные работы, посвященные изучению влияния L-лизина на механизмы иммунологической реактивности, результаты которых позволяют рассматривать эту аминокислоту в качестве возможного иммуномодулятора или иммунокорректора [3, 5, 10, 19]. Однако в литературе отсутствуют данные об эффектах L-лизина, являющегося важным компонентом белков мозга [14, 24], на реактивность иммунной системы в условиях стресса. В то же время в последние годы показано влияние L-лизина на некоторые нейротрансмиттерные системы головного мозга. В частности, данная аминокислота оказывает антисудорожное действие за счет усиления аффинности ГАМК-бензодиазепин-рецепторного комплекса [16]. При этом роль нейротрансмитте-
ра или нейромодулятора в центральных тормозных системах ГАМК отводится главному метаболиту L-лизина в ткани мозга - пипеко-ловой кислоте [21]. С помощью радиоли-гандного связывания было также показано, что L-лизин может являться частичным антагонистом рецепторов серотонина [26].
Цель данного исследования: выявить возможное влияние аминокислоты L-лизина на развитие иммунного ответа и активность неспецифических факторов защиты в исходном состоянии и в условиях эмоциональноболевого стресса.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследование выполнено на 320 половозрелых крысах-самцах Вистар массой 180280 г и 106 мышах-самцах линии CBA массой 20-25 г, полученных из питомника РАМН
"Столбовая". Животные были разделены на группы по 10 особей в каждой. В опытах использовали крыс и мышей, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков заболеваний. Лабораторных животных выводили из эксперимента путем передозировки эфирного наркоза.
Развитие гуморального иммунного ответа оценивали на 5-й день после иммунизации стандартным Т-зависимым антигеном (эритроциты барана) по количеству антителообразующих клеток (АОК) в селезенке и по количеству лимфоцитов в органе (клеточность). АОК определяли методом прямого локального гемолиза в камерах Каннигэма [8] в расчете на 106 кариоцитов и на селезенку.
Для оценки влияния L-лизина на клеточный иммунный ответ использовали реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) [12]. При постановке ГЗТ мышам для сенсибилизации внутрибрюшинно вводили эритроциты барана (ЭБ) в виде 0,1 мл 0,5% взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия, содержащей 106 клеток. На 5-й день после сенсибилизации в подушечку стопы (под апоневроз) правой лапки вводили 108 ЭБ в 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия (разрешающая доза), а в подушечку левой - 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия (контроль). Развитие ГЗТ оценивали по интенсивности воспалительной реакции через 24 часа после введения разрешающей дозы антигена. Для этого, тотчас после забоя мышей, отрезали обе лапки на уровне голеностопного сустава, взвешивали их и определяли индекс воспаления (ИВ) [13] по разнице массы подопытной и контрольной лап.
Активность кислородзависимых бактерицидных механизмов нейтрофилов оценивали в спонтанном и стимулированном зимозаном тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) [6]. Определяли уровни спонтанной активности нейтрофилов (сНСТ), а также активности нейтрофилов, индуцированной опсонизированным зимозаном (о/зНСТ) и индуцированной неопсонизированным зимо-заном (н/зНСТ). Показатели регистрировали фотометрически при помощи аппарата Mul-tiskan MCC/340 ("Labsystems", Финляндия).
Результаты тестов отражали в mOD. На основании данных показателей определяли резервы функциональной активности клеток, которые оценивали по коэффициентам активации (КАо - отношение о/зНСТ к сНСТ и КАн -отношение н/зНСТ к сНСТ). Степень дискретности клеточной активности на различные стимулы отражал коэффициент опсони-зации (КО - отношение о/зНСТ к н/зНСТ).
Фагоцитарную активность нейтрофилов исследовали после их инкубации в течение 30 мин при 37оС с латексом [15]. При этом фагоцитарное число (количество частиц латекса, захваченных одним нейтрофилом, ФЧ) и фагоцитарный индекс (процент нейтрофи-лов, участвующих в фагоцитозе, ФИ) определяли в мазках, окрашенных по Романовско-му-Гимза.
Опыты поставлены на животных, находившихся в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса, который создавали градуально нарастающим раздражением в камере с электрифицированным полом. Максимальное напряжение на решетке составляло 60 В. Проводили 2 воздействия подряд с интервалом 1 мин в одно и то же время 1 раз в сутки на протяжении 4-х дней после иммунизации крыс и на протяжении 5 -ти дней после сенсибилизации мышей ЭБ через 15 мин после введения L-лизина или физиологического раствора [4].
L-лизин (фирма "ICN") растворяли в изотоническом растворе хлорида натрия и вводили внутрибрюшинно в дозах 0,15; 0,5; 1,5; 5; 15; 50; 150 и 450 мкг/кг при оценке гуморального иммунного ответа и в дозах 0,5; 5; 50 и 500 мкг/кг при исследовании активности нейтрофилов. Аминокислоту вводили 1 раз в сутки на протяжении 4-х дней после иммунизации крыс. При исследовании гиперчувствительности замедленного типа L-лизин вводили внутрибрюшинно в дозах 5, 15 и 50 мкг/кг 1 раз в сутки в течение 6 дней эксперимента по схеме: с сенсибилизирующей дозой ЭБ, 4 дня на протяжении развития ГЗТ, с разрешающей дозой ЭБ. Контрольные животные получали физиологический раствор из расчета 1 мл на 1 кг массы тела животного.
Достоверность полученных результатов определяли по параметрическому t-критерию Стьюдента [9].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
L-лизин в большинстве использованных доз оказывал существенное влияние на развитие гуморального иммунного ответа (рис. 1). Так, применение аминокислоты в дозах 15 мкг/кг и 50 мкг/кг вызывало наибольшее и достоверное увеличение количества АОК, как в расчете на 106 ядерных клеток селезенки (на 118-169%, p<0,01 -0,001), так и в расчете на весь орган (на 176-182%, p<0,05-0,01). Подобные изменения наблюдались также в подопытной группе животных, получавших L-лизин в дозе 5 мкг/кг (на 71-91%, p<0,05-0,01) и при расчете на 106 кариоцитов, и в расчете на орган. Однако значительного изменения числа лимфоцитов в селезенке не отмечалось: оно или незначительно повышалось при введении L-лизина в дозах 15 и 50 мкг/кг (на 7-10%, p>0,05), или снижалось при дозе 5 мкг/кг (на 11%, p>0,05). Достоверное увеличение количества АОК в расчете на 106 кариоцитов селезенки было выявлено также при использовании препарата в дозах 5, 150 и 450 мкг/кг (на 74-147%, p<0,01 -0,001). При
этом статистически значимого изменения числа АОК в расчете на орган и клеточности селезенки не наблюдалось.
При использовании L-лизина в минимальных дозах - 0,5 и 1,5 мкг/кг, напротив, отмечалось достоверное снижение показателей интенсивности гуморального иммунного ответа - числа АОК на 106 кариоцитов селезенки (на 44%, p<0,01), а также в расчете на орган (на 39-40%, p<0,05). Подобная тенденция наблюдалась и у животных, получавших аминокислоту в дозе 0,15 мкг/кг. Статистически значимых изменений клеточности селезенки не было выявлено.
Сравнение показателей гуморального иммунного ответа контрольных групп интакт-ных животных и животных, подвергавшихся воздействию эмоционально-болевого стресса (рис. 2), показало выраженное уменьшение количества АОК в расчете на орган и на 106 кариоцитов (на 65%, p<0,01-0,001). При этом клеточность селезенки достоверно возрастала (на 57%, p<0,01). Полученные результаты согласуются с данными литературы о развитии иммуносупрессии под влиянием стресса [7].
%
200
150
100
50
* *
-100
0,15
мкг/кг
0,5
мкг/кг
1,5
мкг/кг
5
мкг/кг
15
мкг/кг
50
мкг/кг
150
мкг/кг
450
мкг/кг
Рис. 1. Изменения показателей гуморального иммунного ответа после введения L-лизина. Условные обозначения: столбики - изменение количества АОК из расчета на орган (заштрихованные), АОК на 106 (белые) и количества лимфоцитов в селезенке (темные) в процентах по отношению к их величинам в контрольных условиях, * - p<0,05-0,001.
*
*
*
%
500
400
300
200
100
* *
* *
-100 V* *
К + стресс 0,15
мкг/кг
*
0,5 1,5 5 15
мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг
*
*
50 150 450
мкг/кг мкг/кг мкг/кг
Рис. 2. Изменения показателей гуморального иммунного ответа под действием эмоциональноболевого стресса и после введения L-лизина.
Условные обозначения: до перерыва на линии абсцисс столбики - изменение показателей гуморального иммунного ответа при стрессе в процентах по отношению к контрольным величинам; после перерыва - изменение тех же показателей после введения L-лизина в условиях стресса в процентах по отношению к их величинам при стрессе без введения аминокислоты, * - p<0,05-0,001.
*
*
*
*
*
0
Введение L-лизина во всех дозах в условиях эмоционально-болевого стресса вызывало существенное, статистически достоверное повышение показателей гуморального иммунного ответа по сравнению с их величинами в контрольной группе, и, таким образом, выраженность эффектов аминокислоты возрастала (рис. 2). При этом увеличение числа АОК в расчете на 106 ядерных клеток селезенки достигало 131-458% ф<0,01-0,001) и сочеталось с возрастанием этого показателя в расчете на орган - на 83-457%, ф<0,05-0,001). Следует отметить, что наибольший прирост количества АОК наблюдался при введении L-лизина в дозе 450 мкг/кг, превышая контрольные величины почти в 4,5 раза. Что же касается изменений числа кариоцитов селезенки под влиянием препарата в условиях стресса, то они были преимущественно однонаправленными (сниженными) и статистически достоверными при дозах аминокислоты 5, 50 и 150 мкг/кг. Степень снижения этого показателя достигала 25-48% ф<0,05-0,001). Использование L-лизина в дозах 0,15; 0,5 и 1,5 мкг/кг в условиях стресса вызывало
противоположный по направленности эффект в сравнении с применением этих же доз аминокислоты у интактных животных.
Таким образом, в условиях эмоциональноболевого стресса L-лизин оказывал выраженное иммуностимулирующее действие в широком диапазоне разовых доз, характеризующееся однонаправленным характером и статистической значимостью эффекта. Поскольку аминокислота устраняла вызванную эмоционально-болевым стрессом иммуносупрессию, правомочно сделать заключение об устойчивом стресслимитирующем действии препарата.
При исследовании влияния L-лизина на развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа в исходном состоянии препарат в наибольшей использованной дозе 50 мкг/кг угнетал развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа и, следовательно, клеточные механизмы иммунного ответа. При этом уменьшение индекса воспаления достигало 28% ф<0,05) (рис. 3). В группе животных, получавших L-лизин в дозе 15 мкг/кг, значения индекса воспаления
практически не отличались от показателей контрольной группы. Уменьшение вводимой дозы препарата до 5 мкг/кг приводило к недостоверному снижению указанного показателя (на 3%, p>0,05).
Действие L-лизина на развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа отмечалось и в условиях эмоциональноболевого стресса (рис. 4). Сравнение показателей контрольных групп подвергавшихся и не подвергавшихся стрессорному воздействию животных выявило значительное сни-
жение под действием стресса индекса воспаления (на 21%, p>0,05).
В условиях эмоционально-болевого стресса направленность и выраженность эффектов L-лизина на клеточные механизмы иммунного ответа существенно отличались от изменений в исходном состоянии. Использование препарата в дозе 5 мкг/кг, как и у ин-тактных мышей, приводило к недостоверному уменьшению значений индекса воспаления (на 11%).
Рис. 3. Изменение индекса воспаления в реакции гиперчувствительности замедленного типа после введения L-лизина.
Условные обозначения: столбики - изменение значений индекса воспаления в процентах по отношению к их величинам в контроле, * - p<0,05.
50
40
30
20
10
0
-10
-20
%
стресс 5 мкг/кг 15 мкг/кг 50 мкг/кг
Рис. 4. Изменение индекса воспаления в реакции гиперчувствительности замедленного типа под действием эмоционально-болевого стресса и после введения L-лизина.
Условные обозначения: до перерыва на линии абсцисс столбики - изменение значений индекса воспаления при стрессе в процентах по отношению к контрольным величинам; после перерыва - изменение тех же показателей после введения L-лизина в условиях стресса в процентах по отношению к их величинам при стрессе без введения аминокислоты, * - p<0,05.
Однако с увеличением дозы аминокислоты, напротив, наблюдалось повышение данного показателя. В подопытной группе животных, получавших L-лизин в дозе 15 мкг/кг, прирост индекса воспаления составил 29% не достигая при этом статистически значимого уровня. Обращает на себя внимание тот факт, что у мышей, не подвергавшихся воздействию эмоционально-болевого стресса, введение данной дозы аминокислоты, напротив, имело тенденцию к снижению выраженности воспалительной реакции.
Введение L-лизина в дозе 50 мкг/кг вызывало наиболее выраженное увеличение индекса воспаления (на 42%, p<0,05). При этом абсолютные значения данного показателя в этой подопытной группе даже несколько превосходили значения индекса воспаления у животных, не подвергавшихся стрессорному воздействию. Представляется очевидным, что в указанной дозе L-лизин эффективно стимулировал развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа, препятствуя тем самым действию стресса, проявляющемуся в уменьшении выраженности воспалительной реакции у контрольных животных.
Результаты исследования влияния L-лизина на показатели активности нейтрофилов представлены в табл. 1. Введение аминокислоты в минимальной использованной
дозе 0,5 мкг/кг приводило к снижению всех показателей активности кислородзависимых бактерицидных механизмов полиморфноядерных лейкоцитов, с достижением достоверных различий для н/зНСТ (на 15%, p<0,05). При этом отмечено снижение фагоцитарного индекса на 14% ф<0,05) и фагоцитарного числа на 25% ф<0,01). Применение L-лизина в дозе 5 мкг/кг вызывало лишь статистически достоверное уменьшение фагоцитарного числа на 22% ф<0,05).
С увеличением дозы препарата, напротив, отмечалось повышение активности нейтро-филов, которое проявилось в увеличении показателей сНСТ на 47% ф<0,01) и о/зНСТ на 47% ф<0,01) у подопытных животных, получавших L-лизин в дозе 50 мкг/кг. КАн при этом достоверно снижался (на 25%, p<0,05), что свидетельствует об уменьшении функционального резерва. Использование препарата в максимальной дозе 500 мкг/кг также вызывало значительную стимуляцию активности кислородзависимых бактерицидных механизмов нейтрофилов: увеличение сНСТ на 51% ф<0,05), о/зНСТ на 46% ф<0,05) и н/зНСТ на 34% ф<0,05). Статистически достоверных изменений функционального резерва, фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа не отмечалось.
Таблица 1
Показатели (M±m) активности нейтрофилов после введения L-лизина
в исходном состоянии
Группа Показатель Контроль 0,5 мкг/кг 5 мкг/кг 50 мкг/кг 500 мкг/кг
НСТ-спонтанный (mOD) 1,19±0,13 0,92±0,09 1,14±0,09 Н< 1,76±0,08 Н< 1,80±0,15
НСТ-стимулированный опсонизированным зимозаном (mOD) 1,20±0,07 1,20±0,06 1,45±0,16 * 1,75±0,14 * 1,75±0,16
НСТ-стимулированный неопсонизированным зимозаном (mOD) 1,47±0,09 * 1,25±0,04 1,38±0,10 1,72±0,12 * 1,97±0,12
Коэффициент активации опсонизированный 1,10±0,11 1,47±0,21 1,35±0,17 1,04±0,11 1,01±0,09
Коэффициент активации неопсонизированный 1,32±0,11 1,52±0,18 1,26±0,11 * 0,99±0,08 1,15±0,09
Коэффициент опсонизации 0,83±0,05 0,98±0,07 1,08±0,13 1,10±0,15 0,92±0,11
Фагоцитарный индекс (%) 59,27±2,75 Н< 51,20±2,91 57,60±2,0 57,80±2,22 66,0±4,47
Фагоцитарное число 1,23±0,08 * 0,92±0,08 * 0,97±0,08 1,15±0,08 1,38±0,11
Примечание: * - p<0,05-0,01 по сравнению с показателями контрольной группы.
Таблица 2
Показатели (М±т) активности нейтрофилов после введения Ь-лизина в условиях
эмоционально-болевого стресса
Группа Показатель Контроль без стресса Контроль 0,5 мкг/кг 5 мкг/кг 50 мкг/кг 500 мкг/кг
НСТ- спонтанный (mOD) 1,19±0,13 1,07±0,08 0,96±0,11 * 0,72±0,05 1,18±0,09 * 1,28±0,06
НСТ- стимулированный опсонизи-рованным зимо-заном (mOD) 1,20±0,08 1,21±0,10 1,06±0,06 1,04±0,08 1,28±0,10 1,19±0,05
НСТ- стимулированный неопсони-зированным зи-мозаном (mOD) 1,47±0,09 1,34±0,09 1,32±0,07 1,31±0,06 1,40±0,14 1,34±0,06
Коэффициент активации опсонизирован- ный 1,10±0,11 1,15±0,08 1,25±0,17 * 1,49±0,13 1,12±0,08 0,95±0,07
Коэффициент активации неопсонизиро- ванный 1,32±0,11 1,30±0,12 1,55±0,20 * 1,89±0,14 1,23±0,12 1,07±0,07
Коэффициент опсонизации 0,83±0,05 0,90±0,04 0,82±0,06 0,80±0,05 0,96±0,09 0,90±0,04
Фагоцитарный индекс (%) 59,27±2,75 71,60±3,51+ * 60,40±2,60 * 55,20±2,98 * 53,0±1,69 * 59,55±3,18
Фагоцитарное число 1,23±0,08 1,51±0,20 * 0,99±0,06 * 0,89±0,07 * 0,77±0,04 * 0,96±0,06
Примечание: + - р<0,05 в сравнении со значениями нестрессированных животных, * - р<0,05-0,001 в сравнении с показателями контрольной группы.
Влияние Ь-лизина на активность нейтрофилов сохранялось и в условиях эмоционально-болевого стресса (табл. 2). При сравнении показателей контрольных групп нестрессиро-ванных и стрессированных животных отмечалось повышение у последних фагоцитарного индекса (на 21%, р<0,05). Применение Ь-лизина в дозе 5 мкг/кг вызывало статистически достоверное понижение сНСТ (на 32%, р<0,01). При этом отмечался существенный рост функционального резерва: КАо увеличился на 30% (р<0,05), а КАн - на 45% (р<0,01). Показатели фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа у животных данной
подопытной группы снижались на 23% и 41% (р<0,01) соответственно.
Однако увеличение вводимой дозы аминокислоты приводило, как и у интактных крыс, к повышению активности кислородза-висимых бактерицидных механизмов нейтрофилов. Так, статистически достоверно возрастали значения сНСТ при использовании Ь-лизина в дозе 500 мкг/кг (на 20%, р<0,05). Фагоцитарный индекс и фагоцитарное число при этом снижались на 17-36% (р<0,05). Использование препарата в дозах 0,5 мкг/кг и 50 мкг/кг не вызывало достоверных изменений активности нейтрофилов в НСТ-тесте, однако приводило к уменьшению
фагоцитарного индекса (на 16-26%, p<0,05-0,001) и фагоцитарного числа (на 34-49%, p<0,05-0,01).
Таким образом, L-лизин в использованном диапазоне доз в условиях эмоциональноболевого стресса оказывал менее выраженное влияние на показатели активности кислород-зависимых бактерицидных механизмов. Стресслимитирующий эффект аминокислоты отмечен лишь при введении в максимальной (500 мкг/кг) дозе. Однако в условиях стресса проявилось угнетающее влияние L-лизина на эволюционно более ранние врожденные механизмы защиты, к которым относится фагоцитарная активность полиморфноядерных лейкоцитов.
Исследование влияния L-лизина на показатели гуморального и клеточного звеньев иммунного ответа, а также факторы врожденной защиты у животных позволило нам установить целый ряд эффектов. Так, показано преимущественно стимулирующее действие аминокислоты в широком диапазоне достаточно малых доз (от 5 до 450 мкг/кг) на развитие гуморального иммунного ответа у крыс в исходном состоянии. Лишь при введении минимальных из использованных доз (0,5 и 1,5 мкг/кг) отмечена тенденция к снижению количества АОК в расчете на 106 ядерных клеток селезенки и на весь орган. Однако устойчивая стимуляция гуморального иммунного ответа после введения L-лизина в больших дозах свидетельствует о достаточной выраженности указанного эффекта аминокислоты.
Необходимо отметить, что препарат вводили только один раз в сутки в течение 4 дней после иммунизации животных ЭБ и, следовательно, воздействие на иммунный ответ имело физиологический, а не фармакологический характер. При этом в нескольких подопытных группах животных количество АОК в расчете на 106 ядросодержащих спле-ноцитов увеличивалось в 2-3 раза в сравнении с контрольными значениями. Выраженный характер установленных изменений гуморального иммунного ответа позволяет сделать заключение о высокой иммунотропной активности L-лизина [11].
Приведенные результаты исследования согласуются с данными литературы, по которым использование аминокислоты может вы-
зывать повышение титра антител у групп животных, получавших БСО-антиген или ИБвЛ§ [20]. Вместе с тем необходимо учитывать роль Ь-лизина в процессах межклеточного взаимодействия посредством изменения активности нейротрансмиттерных систем [17,
18, 22]. Полученные нами результаты, свидетельствующие о существенных и длительных изменениях в регуляции гуморального иммунного ответа, дают основание предполагать наряду с возможным прямым иммуно-тропным действием препарата развитие эффектов, реализуемых через его активные метаболиты.
Тот факт, что Ь-лизин устранял вызванную эмоционально-болевым стрессом иммуносупрессию дает основание сделать вывод об устойчивом стресслимитирующем действии препарата. Данный вывод находит подтверждение в ряде работ, в которых показан анксиолитический эффект аминокислоты [23,
25, 27, 28]. В нашем исследовании иммуно-тропное действие Ь-лизина не только сохранялось, но значительно усиливалось при стрессе, что также позволяет рассматривать иммуностимулирующий эффект препарата. Известно, что Ь-лизин способен угнетать связывание серотонина с 5-НТ4-рецепторами и тем самым снижать опосредованную этими рецепторами тревогу при стрессе [26]. Этот механизм может лежать в основе установленного нами стресслимитирующего эффекта аминокислоты. По материалам исследования был получен патент на изобретение № 2324512 от 20.05.2008 г. "Способ стимуляции иммунной функции в условиях эмоционально-болевого стресса".
Влияние Ь-лизина на клеточные механизмы иммунного ответа в исходном состоянии проявилось в подопытной группе, получавшей наибольшую из использованных доз препарата (50 мкг/кг), снижением выраженности воспалительной реакции. Следовательно, действие аминокислоты на иммунный ответ зависело от механизма его развития и проявлялось преимущественно стимулирующим влиянием на гуморальный иммунный ответ и супрессирующим - на клеточный.
В литературе имеются данные, свидетельствующие в пользу выраженного влияния лизина на интенсивность воспалительной реакции в разные сроки после травмы [5]. Следует
обратить внимание на то обстоятельство, что в нашем исследовании эффект Ь-лизина отмечался при использовании сравнительно низких доз и малой кратности введения -1 раз в сутки на протяжении 5 дней эксперимента.
Введение Ь-лизина в условиях эмоционально-болевого стресса, напротив, способствовало развитию реакции гиперчувствительности замедленного типа с наибольшим увеличением индекса воспаления в подопытной группе, получавшей препарат в дозе 50 мкг/кг. При этом абсолютные значения индекса воспаления в данной подопытной группе достигали уровня животных, находившихся в исходном состоянии. Развитию иммунной воспалительной реакции в этом случае, очевидно, способствовал выраженный стресслимитирующий эффект Ь-лизина, обеспечивавший сохранение клеточных механизмов иммунного ответа в условиях эмоционально-болевого стресса.
В этой связи представляется важным обратить внимание на то обстоятельство, что аминокислота проявляла указанное стрессли-митирующее действие при оценке обоих эф-фекторных звеньев иммунного ответа.
На основании полученных результатов можно заключить, что в проведенных экспериментах Ь-лизин оказывал дозозависимое влияние на активность кислородзависимых бактерицидных механизмов нейтрофилов у крыс, находившихся как в исходном состоянии, так и в условиях эмоционально-болевого стресса, в которых проявилось стресслимити-рующее действие аминокислоты. Напротив, действие Ь-лизина на фагоцитарную активность гранулоцитов носило ингибирующий характер вне зависимости от исходного состояния животных.
В целом, полученные результаты позволяют заключить, что активирующее влияние Ь-лизина на развитие антигенспецифического гуморального и клеточного иммунного ответа является более выраженным и устойчивым к стрессу, чем его действие на эволюционно более ранние врожденные механизмы защиты.
ЛИТЕРАТУРА
1. Белокрылое Г.А., Молчанова И.В., Сорочин-ская Е.И. Способность некоторых аминокислот, входящих в состав белка, стимулировать тимусзависимый иммунный ответ // Бюл. экс-перим. биологии и медицины. - 1986. -Т. 102, № 7. - С. 51-53.
2. Белокрылов Г.А., Деревнина О.Н., Попова О.Я. и др. Различия в иммунном ответе, фагоцитозе и детоксицирующих свойствах под влиянием препаратов пептидных и аминокислотных препаратов // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 1996. - Т. 121, № 5. - С. 509-512.
3. Белокрылов Г.А., Попова О.Я., Сорочинская Е.И. Сходство иммуно-, фагоцитозмодулирующих и антитоксических свойств дипептидов и составляющих их аминокислот // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 1999. - Т. 127, № 6.- С. 674-676.
4. Бобынцев И.И., Северьянова Л.А. Иммунотро-пные эффекты аналога гонадотропин-рили-зинг гормона у крыс в условиях эмоционально-болевого стресса // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2002. - Т. 133, № 5. -С.504-506.
5. ВологжанинД.А., КалининаН.М., СосюкинА.Е. и др. Метаболические основы формирования иммунной недостаточности при травматической болезни [Электронный ресурс] // Рос. биомед. журн. Medline. - 2005. - Т. 168, № 6. - С. 597-625. http://www.medline.ru
6. Зинкин В.Ю., Годков М.А. Способ количественной оценки кислородзависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов человека // Клин. лаб. диагностика. - 2004. - № 8.
- С. 26-29.
7. Кириллина Е.А., Захарова Л.А., МихайловаА.А., Василенко А.М. Т-супрессорный и опиатерги-ческий механизмы снижения иммунного ответа при стрессе // Иммунология. - 1990. -№ 3.- С. 68-70.
8. Мальберг К., Зигль Э. Метод локального гемолиза // Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля; Пер. с нем. А.П. Тарасова. -М.: Медицина, 1987. - С. 57-72.
9. Плохинский Н.А. Биометрия. - М.: Изд-во МГУ, 1970. - 367 с.
10. Ракитянская И.А., Кучер А.Г., Абрамова Т.В. Оценка влияния некоторых аминокислот из состава соевого изолята на функциональное состояние клеток крови, лимфо- и гранулоци-топоэза in vitro // Нефрология. - 2000. - Т. 4, № 1.- С. 59-62.
11. Северьянова Л.А., ДолгинцевМ.Е. Влияние аминокислоты L-лизина на нервную и им-
мунную регуляторные системы. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2008. - 132 с.
12. Федосеева В.Н., Порядин Г.В., Ковальчук Л.В. и др. Руководство по иммунологическим и аллергическим методам в гигиенических исследованиях. - М., 1993. - 319 с.
13. Хаитов Р.М., Гущин И.С., Пинегин Б.В., Зебрев А.И. Методические указания по изучению иммунотропной активности фармакологических веществ / В кн.: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М.: Минздрав РФ, ЗАО ИИА "Ремедиум", 2000. -С.257-258.
14. Худоерков Р.М. Цитохимия белков в раскрытии закономерностей структурной и функциональной организации мозга // Вестн. РАМН.
- 2001.- № 4. - С. 43-48.
15. Штельцнер А. Фагоцитоз // Иммунологические методы: пер. с нем. / под ред. Г. Фриме-ля. - М.: Мир, 1987. - С. 378-389.
16. Chang Y.F., Gao X.M. L-lysine is a barbituratelike anticonvulsant and modulator of the benzodiazepine receptor // Neurochem. Res. - 1995. -Vol. 20, N 8. - P. 931-937.
17. Chang Y.F., Gao X.M., Chen J.S. Correlation between enhancement of [3H]flunitrazepam binding and suppression of pentylenetetrazol-induced seizures by L-lysine // Eur. J. Pharmacol. - 1991. - Vol. 193, N 2. - P. 239-247.
18. Chang Y.F., Hargest V., Chen J.S. Modulation of benzodiazepine by lysine and pipecolic acid on pentylenetetrazol-induced seizures // Life Sci. -1988. - Vol. 43, N 15. - P. 1177-1188.
19. CrawfordD.H., Chen S., Boyd C.A.R. Cationic amino acid transport in human T lymphocytes is markedly increased in the CD45RA, CD8+ population after activation // Immunology. - 1994. -Vol. 82. - P. 357-360.
20. Dasgupta S., Chandran V., Bhinge A. et al. Role of L-lysine HCl in adoptive immune therapy towards development of suitable tuberculosis vac-
cination // Indian J. Exp. Biol. - 2004. - Vol. 42, N 8. - P. 758-765.
21. Fujita T., Fujita M., Kodama T. et al. Determination of D- and L-pipecolic acid in food samples including processed foods // Ann. Nutr. Metab. -2003. - Vol. 47. - P. 165-169.
22. Gao X.M., Chang Y.F. Enhancement of benzodiazepine receptor binding by L-lysine is chloride-dependent and due to increase in binding affinity // Eur. J. Pharmacol. - 1989. - Vol. 173, N 2-
3. - P. 197-200.
23. Jezova D., Makatsori A., SmrigaM. et al. Subchronic treatment with amino acid mixture of L-lysine and L-arginine modifies neuroendocrine activation during psychosocial stress in subjects with high trait anxiety // Nutr. Neurosci. -2005. - Vol. 8, N 3. - P. 155-160.
24. Murthy S.N., Janardanasarma M.K. Identification of L-amino acid/L-lysine alpha-amino oxidase in mouse brain // Mol. Cell Biochem. -1999. - Vol. 197, N 1-2. - P. 13-23.
25. Smriga M., Torii K. Prolonged treatment with L-lysine and L-arginine reduces stress-induced anxiety in an elevated plus maze // Nutr. Neuro-sci. - 2003. - Vol. 6, N 2. - P. 125-128.
26. Smriga M., Torii K. L-lysine acts like a partial serotonin receptor 4 antagonist and inhibits serotonin-mediated intestinal pathologies and anxiety in rats // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2003. -Vol. 100, N 26. - P. 15370-15375.
27. SmrigaM., KameishiM., Uneyama H., Torii K. Dietary L-lysine deficiency increases stress-induced anxiety and fecal excretion in rats // J. Nutr. - 2002. - Vol. 132, N 12. - P. 37443746.
28. SmrigaM., Ghosh S., Mouneimne Y. et al. Lysine fortification reduces anxiety and lessens stress in family members in economically weak communities in Northwest Syria // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2004. - Vol. 101, N 22. - P. 8285-8288.
