CC BY
18
УДК 612.018:616.45-001.1:616.155.34-097
ЭФФЕКТЫ АНАЛОГА ГОНАДОТРОПИН-РИЛИЗИНГ ГОРМОНА СУРФАГОНА НА ИММУННЫЙ ОТВЕТ И АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ В ИСХОДНОМ СОСТОЯНИИ И В УСЛОВИЯХ СТРЕССА
Бобынцев И.И., Северьянова Л.А., Смахтин М.Ю.
Кафедра патофизиологии Курского государственного медицинского университета
Синтетический аналог гонадотропин-рилизинг гормона сурфагон при внутрибрюшинном введении в дозах 0,1 и 5 мкг/кг 1 раз в сутки оказывал дозозависимое влияние на количество антителообразующих клеток в селезенке у крыс и на функциональную и фагоцитарную активность нейтрофилов у мышей в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса. При введении меньшей дозы данные показатели возрастали, при большей дозе - снижались. Кастрация вызывала достоверное снижение иммунного ответа и активности нейтрофилов. У кастрированных животных действие пептида сохранялось и в обеих дозах имело однонаправленный стимулирующий характер, что указывает на возможность его проявления без участия половых стероидов. Стресс не оказывал существенного влияния на эффекты пептида. Высокая нейротропная и эндокринная активность сурфагона позволяет предположить включение данных механизмов в реализацию исследованных эффектов, которые в зависимости от дозы могут иметь как стресс-лимитирующую, так и стресс-реализующую направленность.
Ключевые слова: гонадотропин-рилизинг гормон, сурфагон, кастрация, иммунный ответ, фагоцитоз, нейтрофи-лы, эмоционально-болевой стресс.
Gonadotropin-releasing hormone synthetic analogue (surfagon) injected intraperitoneally one time a day in doses 0,1 and 5 mcg/kg exerted dose dependent influence on number of plaque forming cells in rat spleens and on phagocytic and functional activity of mice neutrophils in initial state and in painfull stress. These values increased in case of small dose and decreased in big dose. Castration induced reliable decrease of immune response and neutrophil activity. In castrated animals peptide effect in different doses was primary stimulating in its character. It may be concluded that the surfagon effect is not mediated by steroids. Stress didn't have expressed influence on peptide effects. The high neurotropic and endocrine surfagon activity allows to propose the participation of such mechanisms in realization of investigated effects, which can have as stress-limiting as stress-releasing direction depending on dose.
Key words: gonadotropin-releasing hormone, surfagon, castration, immune response, phagocytosis, neutrophils, stress.
Изучение взаимодействия нервной, эндокринной и иммунной систем является актуальным и интенсивно исследуемым вопросом [9, 11]. В проведенных ранее исследованиях нами были выявлены выраженные нейро-тропные эффекты высокоактивного аналога гонадотропин-рилизинг гормона (Гн-РГ) сурфагона [6, 7, 8]. Вызываемые им изменения функционального состояния нервной и эндокринной систем могут приводить к существенным сдвигам в иммунологической реактивности [9, 11]. Вместе с тем, значение ги-поталамо-гипофизарно-гонадной системы во взаимодействии данных регуляторных систем в настоящее время остается актуальным и недостаточно изученным вопросом.
Целью данного исследования являлось изучение влияния сурфагона на гуморальный иммунный ответ и активность нейтрофилов в
исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты выполнены на половозрелых крысах-самцах линии Вистар массой 180-200 г. и мышах-самцах линии СВА массой 22-25 г, разделенных на группы по 10 животных. Сурфагон (пГлю-Гис-Трп-Сер-Тир-D-Ала-Лей-Арг-Про-этиламид) синтезирован в Кардиологическом научном центре РАМН.
Эмоционально-болевой стресс создавали градуально нарастающим раздражением попарно сгруппированных животных в камере с электрифицированным полом. Для крыс максимальное напряжение на решетке составляло 60 В, для мышей - 40 В. Проводили 2 воз-
действия подряд с интервалом 1 мин и общим временем действия электрического тока 2 мин.
Иммунный ответ оценивали у крыс по количеству антителообразующих (АОК) в селезенке на 5 день после иммунизации Т-зави-симым антигеном - эритроцитами барана [2]. Пептид вводили внутрибрюшинно 1 раз в сутки в дозах 0,1 и 5 мкг/кг по следующим схемам: 1 - до и после иммунизации (9 дней), 2 -до иммунизации эритроцитами барана в течение 4-х дней (индуктивная фаза иммунного ответа), 3 - после иммунизации в течение 4-х дней (продуктивная фаза иммунного ответа). Контрольным группам вводился физиологический раствор в эквивалентных объемах. В условиях стресса эффекты сурфагона изучались только при введении после иммунизации.
При исследовании функциональной и фагоцитарной активности нейтрофилов у мышей пептид вводили внутрибрюшинно в течение 4 дней 1 раз в сутки в дозах 0,1 и 5 мкг/кг. Для получения достаточного количества нейтрофилов индуцировали перитоне-альный экссудат внутрибрюшинной инъекцией 0,5 мл 10% стерильного пептона за 2,5 ч до взятия клеток [5]. Функциональную активность нейтрофилов оценивали микроскопически по количеству (в %) диформазан-
В индуктивную фазу иммунного ответа сур-фагон в дозе 0,1 мкг/кг способствовал увеличению в селезенке количества АОК (на 77%,
положительных нейтрофилов в спонтанном и стимулированном тесте восстановления нит-росинего тетразолия (НСТ-тест) [1]. В качестве стимулирующего фактора использовали вакцину из штамма S. marcescens. Фагоцитарную активность нейтрофилов исследовали после их инкубации в течение 30 мин при 37оС со Staphylococcus albus [2]. При этом фагоцитарное число (количество микробов, захваченных одним нейтрофилом) и фагоцитарный индекс (процент нейтрофилов, участвующих в фагоцитозе) определяли в мазках, окрашенных по Романовскому.
Все серии опытов были поставлены с использованием интактных и кастрированных животных. Кастрацию выполняли под гексе-наловым наркозом через срединный разрез мошонки [3]. Животные поступали в опыт через 12 дней после операции. Достоверность полученных результатов определяли по t-критерию Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Проведенные эксперименты позволили установить выраженное влияние пептида на развитие гуморального иммунного ответа при всех схемах его введения (таблица 1).
Таблица 1
р < 0,05), а в дозе 5 мкг/кг не вызывал достоверных сдвигов иммунного ответа. Полученные результаты свидетельствуют о дозозави-
Изменение количества АОК (тыс./орган, M±m) в селезенке крыс после введения сурфагона
Серия Интактные Кастрированные
Контроль 0,1 мкг/кг 5 мкг/кг Контроль 0,1 мкг/кг 5 мкг/кг
Введение до иммунизации ЭБ 33,5±6,6 59,4±10,2* 22,5±2,8 19,0±4,1 33,1±6,9 27,4±7,1
Введение после иммунизации ЭБ 31,5±8,9 57,2±11,6* 16,0±3,6* 16,2±2,7 41,1±5,7* 35,6±4,4*
Введение до и после иммунизации ЭБ 27,8±7,7 61,7±12,7* 34,2±11,7 42,9±5,8 32,7±4,9 24,5±3,3
Введение после иммунизации ЭБ + стресс 32,2±8,4 46,0±10,4* 15,0±1,6* 16,8±1,9 30,9±3,0* 25,2±2,3*
Примечание: * - р < 0,05-0,001 по сравнению с контрольной группой.
симом характере эффектов сурфагона в индуктивную фазу гуморального иммунного ответа. Данная разнонаправленность эффектов возросла при введении пептида после иммунизации ЭБ. Так, в опытной группе, получавшей сурфагона в большей дозе, отмечалось значительное снижение количества АОК (на 49%, р < 0,05). Напротив, использование пептида в дозе 0,1 мкг/кг, как и в индуктивную фазу, сопровождалось стимуляцией иммунного ответа и увеличением числа АОК на 45% (р < 0,05). Более длительное введение пептида одновременно на протяжении индуктивной и продуктивной фаз гуморального иммунного ответа (до и после иммунизации ЭБ) также сопровождалось иммуностимулирующим влиянием в дозе 0,1 мкг/кг и увеличением количества АОК на 122% (р < 0,05). Использование большей дозы пептида не было эффективным.
С использованием интактных, ложноопе-рированных и кастрированных крыс было установлено, что количество АОК в селезенке кастрированных животных было меньше, чем у интактных и ложнооперированных, на 42 и 88% соответственно (р < 0,05), что свидетельствует о супрессирующем влиянии кастрации на развитие гуморального иммунного ответа.
Наблюдавшиеся у интактных животных иммунотропные эффекты сурфагона сохранялись у кастрированных животных. Наиболее значительные сдвиги отмечались при введении пептида после иммунизации ЭБ. В опытной группе, получавшей препарат в дозе 0,1 мкг/кг, количество АОК возрастало на 154% (р < 0,01). Использование большей дозы также сопровождалось выраженным увеличением количества АОК (на 120%, р < 0,01). Следует отметить, что величина стимулирующего эффекта в опытных группах была приблизительно равной. При введении до иммунизации ЭБ наиболее значительные изменения происходили в группе животных, получавших пептид в дозе 0,1 мкг/кг: количество АОК возросло на 65% (р < 0,05). При большей дозе эффект пептида был менее выраженным. Введение сурфагона одновременно до и после иммунизации ЭБ сопровождалось снижением иммунного ответа, наиболее выраженным при использовании дозы пепти-
да 5 мкг/кг. Количество АОК при этом уменьшилось на 43% (р < 0,05). В группе животных, получавших пептид в дозе 0,1 мкг/кг, снижение количества АОК было незначительным.
Таким образом, исследование влияния внутрибрюшинного введения сурфагона в дозах 0,1 и 5 мкг/кг в различные фазы развития гуморального иммунного ответа установило выраженный дозозависимый характер изменения количества АОК в селезенке. Меньшая доза пептида при всех использованных схемах введения оказывала иммуностимулирующее действие. Напротив, использование большей дозы препарата в индуктивную фазу вызывало достоверное снижение показателей иммунного ответа, тогда как при остальных схемах введения существенных изменений не происходило. Кастрация вызывала достоверное снижение гуморального иммунного ответа. Эффекты сурфагона у кастрированных животных имели однонаправленный, преимущественно стимулирующий характер. Достоверное снижение иммунного ответа отмечалось только при введении сурфагона в большей дозе одновременно на протяжении индуктивной и продуктивной фаз.
Сравнение показателей контрольных групп, подвергавшихся и не подвергавшихся воздействию эмоционально-болевого стресса животных, показало значительное снижение в условиях стресса количества АОК (на 65%, p < 0,05), что свидетельствует о достаточной интенсивности и длительности стрессорного воздействия в использованной модели стресса для развития иммуносупрессии.
Введение сурфагона интактным животным вызывало выраженные сдвиги в иммунном ответе. В опытной группе крыс, получавших пептид в дозе 0,1 мкг/кг, количество АОК возрастало на 42% (р < 0,05). Напротив, при введении в дозе 5 мкг/кг он оказывал су-прессирующее влияние на развитие иммунного ответа, что проявлялось уменьшением количества АОК на 53% (р < 0,05). Следовательно, у интактных животных в условиях стресса сурфагон оказывал дозозависимое влияние на развитие гуморального иммунного ответа. При этом необходимо отметить почти полное сохранение иммунотропных
эффектов пептида, наблюдавшихся у не-стрессированных крыс. Введение пептида в обеих дозах кастрированным крысам сопровождалось существенным увеличением количества АОК (на 50-84%, р < 0,05), и сурфагон в использованных дозах в условиях стресса оказывал однонаправленное стимулирующее влияние на развитие иммунного ответа.
Таким образом, в условиях эмоционально-болевого стресса отмечено сохранение имму-нотропных эффектов сурфагона, наблюдав-
спонтанном и стимулированном НСТ-тесте возрастало количество диформазан-положи-тельных нейтрофилов на фоне увеличения их функционального резерва и фагоцитарного индекса. В группе животных, получавших пептид в дозе 5 мкг/кг, отмечались противоположные изменения.
Сравнение функциональной и фагоцитарной активности в контрольных группах ин-тактных и кастрированных животных показало, что после кастрации количество диформа-зан-положительных нейтрофилов в спонтанном НСТ-тесте уменьшилось на 28% (p <
шихся у интактных и кастрированных крыс, не подвергавшихся стрессорному воздействию. Стрессовая реакция не оказывала выраженного влияния на проявление иммуно-тропного действия пептида, что косвенно указывает на различные механизмы их реализации.
Существенное влияние сурфагон оказывал и на неспецифические факторы резистентности (таблица 2). После введения пептида интактным животным в дозе 0,1 мкг/кг в
- р < 0,05-0,001 по сравнению с контрольной
0,05), в стимулированном - на 32% (p < 0,05). Функциональный резерв снизился на 37% (p < 0,05). У кастрированных мышей отмечалось и снижение фагоцитарной активности: фагоцитарный индекс уменьшился на 25% (p < 0,05), фагоцитарное число - на 15% (p > 0,05). Полученные данные свидетельствуют об ингибирующем влиянии кастрации на функциональную и фагоцитарную активность нейтрофилов.
У кастрированных животных влияние сурфагона на активность нейтрофилов в основном сохранялось. У животных, полу-
Таблица 2
Показатели (M±m) функциональной и фагоцитарной активности нейтрофилов после введения сурфагона_
Показатель 1нтактные Кастрированные
Контроль 0,1 мкг/кг 5 мкг/кг Контроль 0,1 мкг/кг 5 мкг/кг
БЕЗ СТРЕССА
Спонтанный НСТ-тест (%) 16,2+0,8 22,1+1,8* 12,6+1,0* 11,7+1,31 17,7+1,7* 16,4+1,3*
Стимулированный НСТ-тест (%) 30,9+1,4 43,9+3,6* 23,8+2,0* 20,9+2,41 35,5+4,0* 28,5+2,3*
Фагоцитарный индекс (%) 39,8+3,6 58,1+4,0* 32,0+2,2* 29,8+2,91 45,6+5,0* 40,6+4,2*
Фагоцитарное число 2,0+0,3 2,5+0,2 1,9+0,3 1,7+0,3 2,5+0,3* 2,3+0,3
СТРЕСС
Спонтанный НСТ-тест (%) 10,5+1,11 14,9+1,7* 8,2+1,0 8,8+1,2 17,3+2,5* 14,4+2,0*
Стимулированный НСТ-тест (%) 17,2+1,61 28,3+3,1* 14,2+1,7 14,5+1,6 27,9+3,6* 21,7+2,9*
Фагоцитарный индекс (%) 24,1+2,71 36,7+3,9* 18,2+3,0 20,8+2,6 30,4+2,9* 25,4+2,4
Фагоцитарное число 1,5+0,2 1,9+0,3 1,3+0,2 1,4+0,2 2,1+0,3 1,8+0,2
Примечание: * - р < 0,05-0,001 по сравнению с контрольной группой; группой нестрессированных животных.
чавших пептид в дозе 0,1 мкг/кг, повышалось количество активных нейтрофилов как в спонтанном, так и в стимулированном НСТ-тесте (на 73 и 70% соответственно, p < 0,05), при значительном (на 93%, p < 0,01) росте функционального резерва и фагоцитарной активности.
Сравнение показателей контрольных групп животных, находившихся в исходном состоянии и в условиях стресса, показало, что у стрессированных мышей количество активных нейтрофилов в спонтанном НСТ-тесте уменьшалось на 35% (p < 0,05), в стимулированном - на 44% (p < 0,05). Еще более значительным было снижение функционального резерва (на 54%, p < 0,05). Ингибирующее влияние стресс оказывал и на процесс фагоцитоза: фагоцитарный индекс уменьшился на 47% (p < 0,05).
Использование сурфагона в дозе 0,1 мкг/кг у некастрированных мышей в условиях стресса стимулировало неспецифические факторы защиты. Количество диформа-зан-положительных нейтрофилов в спонтанном и стимулированном НСТ-тесте существенно увеличивалось (на 42 и 65% соответственно, p < 0,05) и достигало значений контрольной группы нестрессированных животных. Функциональный резерв также значительно возрастал (на 115%, p < 0,05), однако его абсолютный уровень оставался существенно ниже, чем у животных вне стресса. Данный результат свидетельствует о неполном восстановлении кислородзависимых механизмов защиты в нейтрофилах даже на фоне их активации, вызванной введением сур-фагона. Фагоцитарный индекс в данной группе приближался к значениям контрольной группы нестрессированных мышей. Следовательно, введение сурфагона в дозе 0,1 мкг/кг способствовало повышению функциональной и фагоцитарной активности нейтро-филов и в значительное мере устраняло негативные последствия воздействия эмоционально-болевого стресса. Напротив, при использовании сурфагона в дозе 5 мкг/кг изменение исследованных показателей было незначительным.
Однако введение данной дозы животным, не подвергавшимся стрессорному воздействию, сопровождалось достоверным ослабле-
нием активности нейтрофилов. В связи с этим на основании полученных результатов можно предположить, что в данной опытной группе не произошла суммация негативных влияний стресса и пептида, а напротив, ослабление ингибирующих эффектов последнего.
В опытной группе кастрированных стрес-сированных мышей, получавших пептид в дозе 0,1 мкг/кг, наблюдалось значительное усиление активности нейтрофилов. Наиболее выраженным было увеличение количества активных клеток в спонтанном и стимулированном НСТ-тесте (на 97 и 92% соответственно, p < 0,05) и функционального резерва (на 86%, p < 0,05). Подобное изменение данных показателей указывает на достаточно высокие функциональные возможности ней-трофилов в данной группе. Фагоцитарный индекс и фагоцитарное число возрастали в 1,5 раза (p < 0,05). Полученные данные свидетельствуют о полном сохранении в условиях стресса после кастрации стимулирующих эффектов сурфагона, наблюдавшихся у ин-тактных животных.
Сходные результаты наблюдались и при введении сурфагона в дозе 5 мкг/кг. Увеличение количества диформазан-положитель-ных клеток в спонтанном и стимулированном НСТ-тесте составляло на 64 и 50% соответственно (p < 0,05), однако функциональный резерв оставался на уровне контрольных значений. Также существенно не изменялась и фагоцитарная активность нейтрофилов.
Таким образом, у интактных мышей сур-фагон оказывал дозозависимое действие на кислородзависимые механизмы и фагоцитарную активность нейтрофилов, стимулируя их при малой дозе и угнетая при большой. У кастрированных животных активность пептида сохранялась, а эффекты в обеих дозах имели стимулирующий характер. В условиях эмоционально-болевого стресса влияние препарата имело ту же направленность, что и у не-стрессированных животных.
При анализе механизмов выявленных им-мунотропных эффектов при многократном введении сурфагона закономерно встает вопрос об участии в их реализации гипоталамо-гипофизарно-гонадной системы. У интактных животных, как было нами ранее установлено, многократное введение обеих доз практиче-
ски в равной степени вызывает снижение уровня тестостерона в крови, однако изменения показателей иммунного ответа в опытных группах не имели одинаковой направленности. Полученные результаты указывают на отсутствие существенной взаимосвязи между уровнем тестостерона в крови и характером иммунного ответа, и следовательно, предполагают наличие стероидонезависимых механизмов. Данное предположение подтверждается наличием иммунотропных эффектов сурфагона у кастрированных крыс. Об этом ясно свидетельствует сохранение после кастрации направленности и степени выраженности изменения иммунного ответа, выявленных у интактных животных, получавших пептид в дозе 0,1 мкг/кг.
У интактных животных участие андроге-нов в развитии иммунного ответа могло быть достаточно существенным [16]. В реализации иммунотропных эффектов сурфагона вполне реально участие гонадотропинов гипофиза, способных самостоятельно оказывать влияние на иммунную систему [11, 12]. В частности, ЛГ и ФСГ ингибируют секрецию растворимых рецепторов ИЛ-2 мононуклеарными клетками периферической крови [14, 15]. Данный механизм может иметь место при отмеченном снижении гуморального иммунного ответа после кастрации вследствие значительного повышения у крыс уровня гона-дотропинов в крови. Введение пептида кастрированным животным вызывает десенсити-зацию гипофиза и снижение секреции гона-дотропинов, что могло в определенной степени способствовать наблюдавшемуся усилению иммунного ответа в обеих опытных группах.
Нельзя исключать и прямого влияния сурфагона на клетки иммунной системы. Так, в опытах in vitro установлено, что синтетические аналоги Гн-РГ стимулировали синтез ИЛ-2 мРНК и способствовали дифференци-ровке Т-клеток селезенки мыши [4].
При периферическом введении сурфагона могли включаться и нервные механизмы регуляции иммунного ответа. При этом пептид через участки повышенной проницаемости в гематоэнцефалическом барьере может достигать гипоталамических структур, которые принимают участие в модуляции иммунного
ответа. В частности, вентральные ядра при их электрической стимуляции супрессируют иммунные функции спленоцитов через активацию симпатического отдела нервной системы [13]. Нервные центры заднего гипоталамуса и бугристой зоны оказывают модулирующее влияние на иммунные реакции в зависимости от природы антигена [10]. В пользу нервных механизмов реализации эффектов пептида свидетельствуют наши предыдущие исследования, в которых показано выраженное дозозависимое действие сурфагона на эмоционально-подкрепляющие системы мозга, которые оказывают значительное влияние как на механизмы иммунитета, так и на факторы неспецифической защиты организма. В частности, нами установлено прямое нейро-тропное влияние на агрессивно-оборонительное поведение животных и болевую чувствительность в условиях отрицательного эмоционального подкрепления (эмоционально-болевой стресс) [6], а также показаны стерои-донезависимые эффекты в условиях положительного эмоционального подкрепления
[7, 8].
Таким образом, синтетический аналог Гн-РГ сурфагон является пептидом с высокой полифункциональной биологической активностью в отношении регуляторных систем организма: нервной, эндокринной и иммунной. Влияние сурфагона на иммунологическую реактивность и факторы неспецифической резистентности может реализовываться как опосредованно через изменение активности нервных и эндокринных механизмов, так и в результате прямого действия на органы иммунной системы. Эффекты пептида сохраняются в условиях стрессорной нейроэндок-ринной активации и в зависимости от дозы могут иметь как стресс-лимитирующую, так и стресс-реализующую направленность.
ЛИТЕРАТУРА
1. Виксман М.Е., Маянский А.Н. Способ оценки функциональной активности ней-трофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия. - Казань, 1979. - 15 с.
2. Иммунологические методы / Под ред.
Г. Фримеля. - М.: Медицина, 1987. -472 с.
3. Кабак Я.М. Практикум по эндокринологии. - М.: МГУ, 1969. - 276 с.
4. Казакова Т.Б., Буров С.В., Головко О.И. и др. Биологическая активность аналогов пептидного гормона - люлиберина в регуляции иммунного ответа Т-лимфоцитов // Бюл. эксперим. биологии и медицины.-1996. - Т. 122, № 9. - С. 334-337.
5. Киселева Е.П., Огурцов Р.П., Попова О.Я. и др. Сравнительная характеристика двух пептидных иммуномодуляторов // Иммунология. - 1999. - № 1. - С. 23-26.
6. Северьянова Л.А., Бобынцев И.И. Нейро-тропные эффекты аналога люлиберина при внутрижелудочковом введении у крыс с различной чувствительностью к этанолу // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 1995. - Т. 119, № 2. -С. 129-132.
7. Северьянова Л.А., Бобынцев И.И. Влияние аналога люлиберина на формирование алкогольной мотивации у крыс // Физиол. журн. им. И.М. Сеченова. - 1993. - Т. 79, № 12.- С. 23-27.
8. Северьянова Л.А., Бобынцев И.И. Влияние аналога люлиберина (сурфагона) на выработку пищевого условного рефлекса у крыс с различной чувствительностью к этанолу // Физиол. журн. им. И.М. Сеченова. - 1997. - Т. 83, № 3. - С. 100-106.
9. Черешнев В. А., Юшков Б.Г., Климин В.Г.,
Лебедева Е.В. Иммунофизиология. - Екатеринбург: УрО РАН, 2002. - 259 с.
10. Baciu I. The role of nervous mechanisms in the immune response // Rev. Roum. Physiol. - 1992. -Vol. 29, № 1-2. - P. 5-11.
11. Besedovsky H.O., Rey A.D. Immune-neuro-endocrine interactions: facts and hypotheses // Endocrine Rev. - 1996. - Vol.17, № 1. - P. 64-102.
12. Draca S.R. The interrelationship between the immune system and sex steroids involves the hypothalamo-pituitary-gonadal axis. Panminerva med. 37 (2) : 71-76. 1995.
13. Hayashi S. Change in splenocyte immune functions after electrical stimulation of the ventronodial hypothalamic nucleus in rats // Jap. J. Vet. Res. - 1990. Vol. 40, № 1. -P. 29-32.
14. Komorowski J. Effect of luteinizing hormone alpha subunit on IL-2 and sIL-2 in vitro secretion from human peripheral blood mono-nuclear cells // Cytobios. - 1997. - Vol. 89, № 356. - P. 31-37.
15. Komorowski J., Jankiewicz J., Stepien H. Effect of thyrotropin, follicle stimulating hormone and luteinizing hormone on sIL-2R in vitro secretion from human peripheral blood mononuclear cells // Cytobios. - 1998. -Vol. 93, № 372. - P. 43-48.
16. Olsen N.J., Kovacs W.J. Gonadal steroids and immunity // Endocrine Rev. - 1996. -Vol. 17, № 4. - P. 369-384.
