CC BY
76
ченных сывороток с аналогичными данными при других схемах иммунизации совершенно очевидно преимущество разработанных схем с тимогеном и иммунофаном.
Таким образом, по результатам исследования разработаны эффективные схемы иммунизации для получения гипериммунных сывороток, основанные на оптимальной комбинации специфических белковых антигенных комплексов с иммунокорректорами ти-могеном либо иммунофаном, обеспечивающие высокий специфический иммунный ответ у 100% животных, значительное сокращение сроков иммунизации, материальных и трудозатрат.
Полученные гипериммунные сыворотки являются высококачественным биологическим сырьем для их применения при изготовлении различных иммунобиологических препаратов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Алиева Е.В., Тюменцева И.С., Афанасьев Е.Н. Разработка схем иммунизации животных кампилобактериозными и листериозными антигенами // Вестник Российской военномедицинской академии. - СПб., 2006. - Приложение 1 (15). - С. 192.
2. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л.: Медгиз, 1962. - 180 с.
3. Демидов С.В., Костромин А.П., Чернушен-ко Е.Ф. и др. Влияние тимических иммуномодуляторов на систему циклических нуклеотидов Т-лимфоцитов селезенки при вакцинации БЦЖ // Проблемы туберкулеза. - 1990. -№ 10.- С. 63-65.
4. Карпенко В.В., Сачков В.И. Обезболивание животных в эксперименте // Методические рекомендации. - М., 1985. - 53 с.
5. Кирдей Е.Г., Пинигина Н.М., Тюменцев С.Н. и др. Способ стимуляции антителообразова-ния у животных: А. С. СССР № 1390836, 1986.
6. Колиснык А.В. Иммуноглобулиновая природа преципитирующих антител к основным антигенам холерного вибриона // Иммунология
и иммунопрофилактика чумы и холеры. - Саратов, 1980.- С. 198-201.
7. Куфлина С.А., Павлова Т.Н. Эвтаназия экспериментальных животных // Методические рекомендации по выведению животных для экспериментов. - М., 1985. - 9 с.
8. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. - М.: Медицина, 1985. - 255 с.
9. Практическая химия белка. - М.: Мир,
1989. - С. 22-23.
10. Приказ № 1179 от 10 октября 1983 г. Об утверждении нормативов затрат кормов для лабораторных животных в учреждениях здравоохранения. - Москва, 1983.
11. Сызранцев П.И. Простые способы вычисления основных статистических величин // Социалистическое зерновое хозяйство. - 1978. -№ 3.- С. 185-203.
12. Тюменцева И.С., Афанасьев Е.Н., Ефремен-ко В.И., Базиков И.А., Алиева Е.В. Способ получения диагностической сыворотки. - Патент РФ № 2135210. Бюллетень № 24 от 27.08.99.
13. Урбах В.Ю. Статистические методы в биологических и медицинских исследованиях. -М.: Медицина, 1975. - 296 с.
14. Фонталин Л.Н., Певницкий Л.А. Иммунологическая толерантность. - М., 1978. - 282 с.
15. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г. Тималин - имму-
номодулирующий препарат из тимуса // Тимус и его влияние на организм. - Томск: Изд-во Томского университета, 1982. -
С.201-203.
16. Чард Т. Радиоиммунологические методы. -М.: Мир, 1981. - 246 с.
17. Hum B.A.L., Chantler S.M. Production of reagent antibodies // Methods in Enzymology. -1980. - Vol. 70, N 5. - P. 104-142.
18. Nossal G.J.V., Szenberg A., Ada G.L. et al. Single cell studies 19S antibody production // J. Exp. Med. - 1964. - Vol. 119, N 3. - P. 485-502.
19. Ouchterlony O. Antigen-antibody reactions in gel. // Arkiv for Kemi. Mineral. O Ged. - 1949. -Vol. 261, N 14. - P. 1-9.
20. Warburg O., Christian W. Isolierung und Kristallisation des Garugsterments Enolase // Biochem. Z. - 1941. - Vol. 310. - P. 384-421.
21. Weller T.H., Coons A.H. Fluorescent antibody studies with agents of varicella and herpes zoster propagated in vitro // Proc. Soc. Exp. Biol. -1954. - Vol. 86. - P. 789-794.
УДК 616.34-007.272-092.9:577.175.823
ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ СОЧЕТАННОГО ПРИМЕНЕНИЯ ЭССЕНЦИАЛЕ, ВИТАМИНОВ И РЕГУЛЯТОРОВ ЭНЕРГЕТИЧЕСКОГО ОБМЕНА
ПРИ КРОВОПОТЕРЕ
© Бровкина И.Л., Лосенок С.А., Прокопенко Л.Г.
Кафедра спортивной медицины и медицинской реабилитации, кафедра военной и экстремальной медицины, кафедра биологической химии Курского государственного медицинского университета
Установлено, что кобаламин, филлохинон и полиненасыщенные фосфолипиды в парных комбинациях коррегируют состояние мембран гепатоцитов, окислительно-энергетический потенциал эритроцитов и функционально-метаболическую активность иммуноцитов при кровопотере. Эссенциале оказывает селективное влияние на протективную активность мексидола, кудесана и гипоксена в отношении функций гепатоцитов, иммуноцитов и миоцитов при кровопотере. Модифицированные под их влиянием эритроциты также оказывали гепато- и актопротекторное действие.
Ключевые слова: иммуномодуляция, кровопотеря, эссенциале, витамины, регуляторы энергетического обмена.
IMMUNE METABOLIC EFFECTS OF THE COMBINED ADMINISTRATION OF ESSENTIALE, VITAMINS AND ENERGY EXCHANGE REGULATORS IN HAEMORRHAGE Brovkina I.L., Losenok S.A., Prokopenko L.G.
The Department of Sports Medicine and Medical Rehabilitation, the Department of Military and Extreme Medicine, Biochemistry Department of the Kursk State Medical University Cobalamine, Philloquinon and poly-non-saturated phospholipids in pair combinations have been established to correct the state of hepatocyte membranes, the oxidation-energy potential of erythrocytes and the functional-metabolic activity of immunocytes in haemorrhage. Essentiale selectively influences the protective activity of Mex-idole, Cudesane and Hypoxene relating to the function of hepatocytes, immunocytes and myocytes in haemorrhage. Erythrocytes modified by their influence have also exerted hepato- and acto-protective effect.
Key words: immune modulation, loss of blood, Essentiale, vitamins, energy exchange regulators.
Эффективность иммуномодулирующего действия витаминов и регуляторов энергетического обмена в значительной степени определяется состоянием цитоплазматической и внутренних мембран клеток [13]. Массивная кровопотеря вызывает существенное нарушение структуры мембран, обусловленное усилением процессов перекисного окисления их фосфолипидной матрицы. Есть основания предполагать, что эффективность иммуноме-таболического действия регуляторов энергетического обмена и витаминов может быть повышена стабилизаторами клеточных мембран, обладающих антиоксидантными свойствами.
Высокой антиоксидантной активностью обладают полиненасыщенные фосфолипиды, выделенные из растительных объектов, содержащие преимущественно 1,2-диацилфос-фатидилхолин. В организме животных и че-
ловека фосфолипиды такого состава содержатся в незначительных количествах [6, 10].
Полиненасыщенные фосфолипиды модифицируют состав наружного слоя цитоплазматических мембран клеток, солюбилизируют избыток содержащегося в нем холестерина, оказывают влияние на конформацию гли-копротеидной структуры эпитопов. Кроме того они обладают антиоксидантными свойствами и могут стабилизировать структуру мембран за счет снижения в ней процессов перекисного окисления липидов и белков [7]. Все это может быть причиной изменения под влиянием полиненасыщенных фосфолипидов структурной организации мембран и функциональной активности иммуноцитов и клеток их микроокружения - эритроцитов и тромбоцитов.
Иммуномодулирующее действие полине-насыщенных фосфолипидов обусловлено их
стабилизирующим влиянием на цитоплазматическую мембрану гепатоцитов и модифицирующим влиянием на эпитопные структуры тяжелых эритроцитов [22, 23].
Энергетический дисбаланс иммуноцитов и клеток их ближайшего окружения (эритроцитов) обусловлен снижением содержания в них витаминов [14]. Принимая во внимание изложенное, можно было предположить, что совместное применение препаратов полине-насыщенных фосфолипидов, регуляторов энергетического обмена и витаминов позволит эффективно корригировать нарушенный кровопотерей иммунометаболический статус животных.
Целью настоящей работы была проверка этого предположения.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты проведены на крысах Ви-стар массой 180-200 г. У животных, находящихся под легким этаминаловым наркозом, из бедренной артерии одномоментно извлекали кровь в объеме, ориентировочно составляющем 1% массы тела. Крысам, разделенным на группы (по 8-10 животных), вводили эссенциале (внутривенно, 2 мг/кг), ретинола ацетат (внутрижелудочно, 15 мг/кг), токоферола ацетат (внутрижелудочно, 30 мг/кг), филлохинон (внутрижелудочно, 10 мг/кг), тиамин (внутримышечно, 2 мг/кг), пиридок-син (внутримышечно 2,5 мг/кг), фолат (внутримышечно, 1 мг/кг) и кобаламин (внутримышечно, 15 мг/кг), мексидол (внутримышечно, 2 мг/кг), кудесан (внутрижелудочно 1 мг/кг) и гипоксен (внутрижелудочно, 10 мг/кг). Препараты вводили 5-кратно с интервалом 12 часов. Получение фрагментов стромы легких и тяжелых эритроцитов (ФСЛЭ и ФСТЭ) и включение в них препаратов проводили методом гипоосмотического гемолиза [5]. В эритроцитах определяли активность супероксиддисмутазы [19] и глутатионредук-тазы [16], содержание ацетилгидроперекисей и малонового диальдегида [2], концентрацию 2,3-бисфосфоглицерата (БФГ) и аденозин-трифосфата (АТФ) [4].
Животных иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) (внутрибрюшинно 10 клеток на 100 г массы тела). Устанавливали функци-
онально-метаболическую активность (ФМА) нейтрофилов по величинам индекса фагоцитарной активности (ИФА), окислительного резерва нейтрофилов (ОРН) [18, 25], и активности на ДФН-оксидазы [21], определяли выраженность гуморального иммунного ответа (ГИО) и гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) по количеству антителообразующих клеток (АОК) в селезенке и разнице массы регионарного и контрлатерального лимфатических узлов (РМЛ) [24].
В плазме крови определяли активность аланин- и аспартатаминотрансферазы (АЛТ и АСТ), щелочной фосфатазы, концентрацию общего билирубина, глюкозы и лактата [12], в ткани печени и мышц устанавливали содержание гликогена [21]. Об антитоксической функции печени судили по времени наркотического сна после введения тиопентала натрия. Физическую работоспособность тестировали по времени плавания с грузом 8% от массы тела [3]. Результаты экспериментов подвергали статистической обработке [15].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Изучено влияние эссенциале, примененного в сочетании с препаратами водо- и жирорастворимых витаминов на ФМА нейтро-филов, развитие ГИО и ГЗТ, индуцированных ЭБ, активность супероксиддисмутазы и глу-татионредуктазы, концентрацию БФГ и АТФ, содержание ацилгидроперекисей и малонового диальдегида в эритроцитах после одномоментной кровопотери (1% массы тела).
Введение полиненасыщенных фосфолипидов здоровым животным или крысам, подвергнутым кровопусканию (КПК), не оказывало влияния на ФМА ПЯЛ, развитие ГИО и ГЗТ, индуцированных ЭБ. Инъекции тиамина, пиридоксина, фолата или кобаламина не изменяли активность нейтрофилов периферической крови и иммунологическую реактивность у здоровых крыс, но повышали выраженность иммунологических функций у КПК. Наиболее выраженным было иммуномодулирующее действие пиридоксина, однако даже в случае введения этого витамина параметры иммунологических функций не нормализовались полностью.
Сочетанное применение полиненасыщен-ных фосфолипидов с тиамином, пиридокси-ном, фолатом или кобаламином вызывало у КПК существенное повышение всех показателей, характеризующих ФМА нейтрофилов и выраженность развития ГИО на ЭБ, однако только при сочетании полиненасыщенных фосфолипидов с кобаламином их величины достигали контрольного уровня (табл. 1).
Таким образом, полиненасыщенные фосфолипиды проявляли себя как усилитель иммуномодулирующей активности тиамина, фолата и особенно кобаламина. Совместное введение полиненасыщенных фосфолипидов с пиридоксином не усиливало иммуномодулирующей активности последнего. Это, вероятно, объясняется биокаталитической самодостаточностью пиридоксина, коферментная форма которого, фосфопиридоксаль, участвует в катализе большого числа реакций аминокислотного, витаминного и гормонального метаболизма. Совокупность этих реакций, по видимому, достаточна для коррекции иммунологических функций при кровопотере без изменения скорости процессов, активируемых полиненасыщенными фосфолипидами.
В крови КПК имело место снижение содержания эритроцитов и гемоглобина. В эритроцитах уменьшалась концентрация мак-роэргических соединений (БФГ и АТФ), ак-
тивность антиоксидантных ферментов супе-роксиддисмутазы и глутатионредуктазы, повышалось содержание продуктов ПОЛ (ацил-гидроперекисей и малонового диальдегида). Легкие эритроциты КПК при аллогенном переносе угнетали ФМА нейтрофилов, развитие ГИО и ГЗТ на ЭБ.
Введение после кровопотери витаминов по отдельности не оказывало существенного влияния на энергетический и антиоксидант-ный потенциал эритроцитов, на содержание в них продуктов ПОЛ и иммуносупрессирую-щие свойства легких клеток. Полиненасы-щенные фосфолипиды с тиамином повышали концентрацию БФГ и АТФ, активность супе-роксиддисмутазы и глутатионредуктазы, снижали содержание ацилгидроперекисей и малонового диальдегида в эритроцитах КПК. В легких эритроцитах эти сдвиги были выражены сильнее, чем в тяжелых. Введение по-линенасыщенных фосфолипидов с фолатом или кобаламином уменьшало выраженность метаболических изменений преимущественно в тяжелых эритроцитах.
Введение КПК витаминов снижало, но не отменяло иммуносупрессирующую активность легких эритроцитов и индуцировало появление иммуностимулирующих свойств у тяжелых клеток.
Таблица 1
Влияние полиненасыщенных фосфолипидов на иммуномодулирующую активность тиамина, пиридоксина, фолата и кобаламина при кровопотере
Условия опыта ИФА ОРН АОК РМЛ
1. Контроль 53,б±5,1 2б,4±2,8 27,5±3,0 5,8±0,б
2. Кровопотеря 14,9±2,1*1 11,2±1,4*1 9,2±1,1*1 2,4±0,2*1
3. Кровопотеря, введение ПНФ и тиамина 4б,4±4,3*1,2 23,0±2,2*1,2 23,5±2,4*1,2 4,9±0,5*1,2
4. Кровопотеря, введение ПНФ и пиридоксина 41,0±4,3*1-3 22,3±2,1*1,2 22,1±2,б*1,2 4,7±0,4*1,2
5. Кровопотеря, введение ПНФ и фолата 44,8±4,7*1,2 21,б±2,0*1,2 21,8±2,5*1,2 4,7±0,4*1,2
б. Кровопотеря, введение ПНФ и кобаламина 55,2±5,1*2-5 27,3±2,б*2-5 29,0±3,3*2-5 б,1±0,б*2-5
Примечание: * - р<0,05 по сравнению со значениями групп 1-5.
Влияние полиненасыщенных фосфолипидов (ПНФ) и жирорастворимых витаминов на ФМА ПЯЛ и иммуномодулирующую реактивность крыс, подвергнутых кровопусканию
Условия опыта ИФА ОРН АОК РМЛ
1. Контроль 53,б±5,1 2б,4±2,8 27,5±3,0 5,8±0,б
2. Кровопотеря 14,9±2,1*1 11,2±1,4*1 9,2±1,1 1 2,4±0,2*1
3. Кровопотеря, введение ПНФ и ретинола ацетата 38,5±3,9*1,2 21,7±2,0*1,2 20,3±2,4*1,2 4,7±0,5*1,2
4. Кровопотеря, введение ПНФ и токоферола ацетата 25,7±2,9*1-3 1б,3±1,8*13 14,3±1,5*13 3,б±0,3*1-3
5. Кровопотеря, введение ПНФ и филлохинона 4б,3±4,2*1-4 24,1±2,б*2,4 25,9±2,8*2-4 5,7±0,б*2-4
Примечание: * - р<0,05 по сравнению со значениями групп 1-4.
Кровопотеря приводила к усилению гемолиза эритроцитов и накоплению в крови ФСЛЭ и ФСТЭ. Учитывая это, интересно было выяснить влияние препаратов на иммуномодулирующие действие ФСЛЭ и ФСТЭ.
Оказалось, что ФСЛЭ и ФСТЭ КПК не влияют на развитие ГИО и ГЗТ, индуцированных ЭБ у интактных крыс. Не обладала иммунотропной активностью также строма эритроцитов КПК, получавших инъекции по-линенасыщенных фосфолипидов и тиамина. ФСЛЭ КПК, получавших полиненасыщенные фосфолипиды и фолат или кобаламин, была не активна, а ФСТЭ крыс, которым после кровопотери вводили препараты, при алло-генном переносе стимулировали развитие ГИО на ЭБ. В большей степени это было выражено при введении полиненасыщенных фосфолипидов с кобаламином.
Большой интерес представляет изучение иммуномодулирующего действия полинена-сыщенных фосфолипидов и жирорастворимых витаминов. Проведенные ранее исследования показали важную интегрирующую роль эритроцитов в реализации иммуномодулирующего действия пиридоксина, фолата, кобаламина и жирорастворимых витаминов (в первую очередь нафтохинонов). Введение КПК ретинола ацетата, токоферола ацетата и филлохинона повышали (но не нормализовали) ФМА нейтрофилов, иммунологическую реактивность в организме в отношении ЭБ. Инъекции полиненасыщенных фосфолипидов не влияли на эффекты, вызываемые токоферола ацетатом, но усиливали иммуномодули-
рующее действие ретинола ацетата и, особенно, филлохинона (табл. 2).
Совместное введение КПК полиненасы-щенных фосфолипидов и филлохинона не влияло на иммунометаболическое состояние легких эритроцитов, но уменьшало выраженность сдвигов показателей, характеризующих энергетический потенциал, антиоксидантный статус и интенсивность ПОЛ тяжелых эритроцитов, а также индуцировало появление иммуностимулирующих свойств у этих клеток. Выраженной иммуностимулирующей активностью обладали ФСТЭ КПК, получавших инъекции филлохинона и полиненасы-щенных фосфолипидов.
Все изложенное позволяет постулировать участие триады "полиненасыщенные фосфолипиды - кобаламин - филлохинон" в механизме индукции иммуномодулирующих свойств у тяжелых эритроцитов. Для подтверждения этого постулата проведены следующие варианты экспериментов: после кро-вопотери животным, получавшим инъекции полиненасыщенных фосфолипидов, вводили эктракорпорально обработанные кобалами-ном или филлохиноном ФСТЭ интактных крыс (вариант 1); КПК, получавшим инъекции кобаламина или филлохинона, вводили экстракорпорально обработанные полинена-сыщенными фосфолипидами ФСТЭ интакт-ных крыс (вариант 2).
В первом варианте имел место иммуномодулирующий эффект, во втором такой эффект не выявлен (табл. 3). Это позволяет считать, что участие кобаламина и филлохинона
Таблица 3
Влияние витаминов и ФСТЭ здоровых животных, экстракорпорально обработанных витаминами, на ФМА нейтрофилов и иммунологическую реактивность крыс, подвергнутых кровопусканию
Условия опыта ИФА ОРН АОК РМЛ
1. Контроль 53,6±5,1 26,4±2,8 27,5±3,0 5,8±0,6
2. Кровопотеря 14,9±2,1*1 11,2±1,4*1 9,2±1,1 1 2,4±0,2М
3. Кровопотеря, введение ПНФ и ФСТЭ, обработанных кобаламином 31,8±3,2*1,2 17,4±1,4*12 18,2±2,3*1,2 3,6±0,3*1,2
4. Кровопотеря, введение ПНФ и ФСТЭ, обработанных филлохиноном 46,4±4,6*1-3 22,1±2,3*1-3 23,3±2,5*1-3 4,7±0,5*1-3
5. Кровопотеря, введение кобаламина и ФСТЭ, обработанных ПНФ 16,1±1,5*1,34 12,8±1,3*134 10,1±1,2*134 2,6±0,7*1,3,4
6. Кровопотеря, введение филлохинона и ФСТЭ, обработанных ПНФ 16,9±1,6*134 12,2±1,0*134 8,8±0,9*1,3,4 2,4±0,2*1,3,4
Примечание: * - р<0,05 по сравнению со значениями групп 1-4.
в индукции иммуностимулирующих свойств у тяжелых эритроцитов реализуется на уровне их взаимодействия с мембранными структурами клеток, а полиненасыщенные фосфолипиды являются активатором эффектов, вызываемых кобаламином и филлохино-ном в мембране эритроцитов. Для проверки последнего предположения ФСТЭ экстракорпорально обрабатывали кобаламином и по-линенасыщенными фосфолипидами, филло-хиноном и полиненасыщенными фосфолипидами, или сочетанием всех трех соединений.
Установлено, что ФСТЭ, обработанные кобаламином и полиненасыщенными фосфолипидами, при аллогенном переносе не вызывают иммуномодулирующего эффекта, ФСТЭ, инкубированные с филлохином и по-линенасыщенными фосфолипидами обладали слабо выраженной активностью, а строма, экстракорпорально взаимодействовавшая с кобаламином, филлохиноном и полиненасы-щенными фосфолипидами значительно повышала ФМА нейтрофилов и иммунологическую реактивность у КПК (табл. 4).
Кобаламин, филлохинон и полиненасы-щенные фосфолипиды в парных комбинациях коррегируют состояние мембран гепатоци-тов, окислительно-энергетический потенциал эритроцитов и функционально-метаболическую активность иммуноцитов. Кобаламин ограничивает угнетающе влияние кровопоте-
ри на ФМА нейтрофилов. Это, по видимому, обусловлено стимулирующим влиянием ко-баламина на ферменты гликолиза, являющегося основным источником энергообеспечения клеток этого типа. Филлохинон предотвращает вызываемые кровопотерей проявление иммуносупрессирующих свойств у легких эритроцитов. В основе этого лежит нормализующее влияние филлохинона на окислительно-энергетический потенциал эритроцитов [20]. Полиненасыщенные фосфолипиды стабилизируют клеточные мембраны за счет антиоксидантного и заместительного эффектов [14]. Стабилизация мембран служит необходимым условием эффективного действия витаминов, этим объясняется высокая эффективность после кровопотери изученных парных сочетаний препаратов.
Эффективность действия регуляторов энергетического обмена в значительной степени зависит от состояния мембраны клеток и, в частности, их фосфолипидной основы. В связи с этим, большой интерес представляет вопрос об иммуномодулирующей активности совместного применения препарата полине-насыщенных фосфолипидов эссенциале и регуляторов энергетического обмена.
Было изучено влияние сочетанного применения препарата полиненасыщенных фосфолипидов эссенциале и регуляторов энергетического обмена мексидола, кудесана и ги-
Влияние ФСТЭ здоровых крыс, экстракорпорально обработанных полиненасыщенными фосфолипидами (ПНФ), кобаламином и филлохиноном, на ФМА нейтрофилов и иммунологическую реактивность крыс, подвергнутых кровопусканию
Условия опыта ИФА ОРН АОК РМЛ
1. Контроль 53,6±5,1 26,4±2,8 27,5±3,0 5,8±0,6
2. Кровопотеря 14,9±2,1*1 11,2±1,4*1 9,2±1,1*1 2,4±0,2*1
3. Кровопотеря, введение ФСТЭ, обработанных ПНФ и кобаламином 15,6±1,9*12 12,7±1,6*1 10,7±1,1*1 2,6±0,3*1
4. Кровопотеря, введение ФСТЭ, обработанных ПНФ и филлохиноном 23,7±2,8*1-3 19,4±2,2*1-3 18,3±2,1*1-3 3,1±0,3*1-3
5. Кровопотеря, введение ФСТЭ, обработанных ПНФ, кобаламином и филлохиноном 41,8±4,3*1-4 23,1±2,5*1-4 23,6±2,7*1-4 4,5±0,4*1-4
Примечание: * - р<0,05 по сравнению со значениями групп 1 -4.
поксена на иммунологические функции, метаболические процессы в печени и физическую работоспособность после острой крово-потери (1% массы тела). Установлено, что в эритроцитах КПК снижалась концентрация БФГ и АТФ, активность супероксиддисмута-зы и глутатионредуктазы, повышалось содержание ацилгидроперекисей и малонового диальдегида. Легкие эритроциты крыс при аллогенном переносе вызывали иммуносу-прессирующий эффект. В плазме крови повышалась активность АЛТ, АСТ и щелочной фосфатазы, снижалась концентрация глюкозы и увеличилось содержание лактата. В печени и мышцах снижалось содержание гликогена. У КПК увеличивалось время наркотического сна после введения тиопентала натрия, уменьшалось время плавания с грузом 8% от массы тела. Кровопотеря подавляла ФМА лейкоцитов, угнетала развитие ГИО и ГЗТ, индуцированных ЭБ.
Введение каждого из исследованных препаратов по отдельности не оказывало существенного влияния на величины определявшихся параметров. Мексидол в сочетании с кудесаном уменьшал выраженность снижения показателей, характеризующих ФМА лейкоцитов и развитие ГИО или нормализовал их величины. На развитие ГЗТ сочетание указанных препаратов не оказывало существенного влияния (табл. 5). Мексидол, введенный с гипоксеном, повышал концентра-
цию глюкозы и снижал концентрацию лактата в крови, увеличивал содержание гликогена в печени и мышцах, повышал возможность крыс, подвергнутых кровопотере, выполнять физическую нагрузку (табл. 6). Оба парных сочетания препаратов снижали активность АЛТ, АСТ и щелочной фосфатазы, повышали концентрацию общего билирубина, а также сокращали время наркотического сна (табл. 7). Таким образом, иммунологические функции эффективно корригируются сочетанным применением мексидола с кудесаном, физическая работоспособность - введением мек-сидола с гипоксеном, а метаболическая активность гепатоцитов - применением обоих сочетаний препаратов.
Во всех парных сочетаниях препараты повышали активность антиоксидантных ферментов и снижали содержание продуктов ПОЛ в эритроцитах (табл. 8), но не влияли на концентрацию в них макроэргических соединений. Совместное введение препаратов после кровопотери не уменьшало выраженность иммуносупрессирущих свойств эритроцитов КПК.
Обращает на себя внимание тот факт, что мексидол в сочетании с кудесаном не влиял на иммуносупрессирующие свойства эритроцитов, но повышал ФМА лейкоцитов и иммунологическую реактивность в отношении ксеногенных эритроцитов. Вероятно, сов-
Курский научно-практический вестник "Человек и его здоровье", 2008, № 1 местное применение мексидола с кудесаном по-
Таблица 5
Иммуномодулирующее действие мексидола, кудесана и эссенциале после кровопотери
Показатели Контроль Кровопотеря Кровопотеря, введение мекси-дола и кудесана Кровопотеря, введение эссен-циале и кудесана
ИАФ, ед. 64,3±6,2 38,5±4,1*1 59,5±6,1*2 69,7±7,2*2
ОРН, ед. 17,8±1,6 9,2±0,8*1 16,9±1,7*2 19,0±1,8*2
НАДФН - оксидаза, пкмоль/мин 1,31±0,25 0,52±0,08*1 0,64±0,13*1,2 1,15±0,16*2
АОК, 103 тыс./селезенка 26,2±2,9 10,3±1,5*1 22,8±2,7*2 23,8±2,7*2
РМЛ, мг 4,6±0,4 2,6±0,2^ 2,9±0,3М 4,2±0,4*2
Примечание: * - р<0,05 по сравнению со значениями групп 1 -2.
Таблица 6
Актопротекторное действие мексидола, гипоксена и эссенциале после кровопотери
Показатели Контроль Кровопотеря Кровопотеря, введение мексидола и гипоксена Кровопотеря, введение эссенциале и гипоксена
Глюкоза крови, моль/л 5,2±0,3 3,9±0,2*1 4,8±0,3*2 4,8±0,4*2
Лактат крови, моль/л 1,7±0,2 2,5±0,3*1 1,9±0,2*2 2,0±0,3*2
Гликокен печени, мг/г 215,7±17,2 152,8±13,4*1 194,6±15,3*12 188,2±15,0*12
Гликоген мышц, мг/г 24,0±1,7 15,2±1,2*1 22,8±1,6*2 19,3±1,5*12
Время плавания, мин. 8,2±1,3 4,0±0,7*1 7,1±1,2*1,2 7,8±1,2*2
Примечание: * - р<0,05 по сравнению со значениями групп 1 -2.
Таблица 7
Гепатопротекторное действие мексидола, кудесана, гипоксена и эссенциале после кровопотери
Показатели Контроль Кровопотеря Кровопотеря, введение мекси-дола и кудесана Кровопотеря, введение мек-сидола и гипоксена Кровопотеря, введение мек-сидола и эссенциале
АЛТ, моль/(ч*л) 0,8±0,2 5,6±0,9*1 2,1±0,7*1,2 2,7±0,8*1,2 1,0±0,3*2-4
АСТ, моль/(ч*л) 0,4±0,1 2,3±0,5*1 1,4±0,3*12 1,2±0,3*23 0,5±0,1*2-4
ЩФ, моль/(ч*л) 7,5±1,4 17,0±2,5*1 11,7±2,0*1,2 8,0±1,6*23 9,1±1,7*2-4
ОБ, мкмоль/л 8,7±0,9 12,5±1,4*1 9,3±0,8*2 9,1±0,8*2 9,8±1,2*1,2
ВНС, сек. 826±54 1406±77*1 1054±68*1,2 974±58*1,2 874±56*2-4
Примечание: * - р <0,05 по сравнению со значениями групп 1-4; ЩФ - щелочная фосфатаза, ОБ - общий билирубин, ВНС - время наркотического сна.
Влияние мексидола, кудесана, гипоксена и эссенциале на окислительно-энергетический потенциал
эритроцитов после кровопотери
Условия опыта СОД, ЕД/мл ГР, мкмоль/л АГП, ДБ233/мл МДА, моль/мл БФГ, мкмоль/мл АТФ, мкмоль/мл
1. Контроль 54,7±4,0 112,9±12,2 1,4±0,2 33,7±3,9 5,3±0,6 1,7±0,2
2. Кровопотеря 40,8±3,7*1 109,4±10,5 3,1±0,7*1 48,2±4,7*1 3,2±0,3*1 0,8±0,1*1
3. Кровопоте-ря,введение мексидола и кудесана 51,7±4,1*2 114,7±13,5 1,8±0,3*2 35,4±4,2*2 3,0±0,3*1 0,6±0,1*1
4. Кровопоте-ря,введение мексидола и гипоксена 46,8±4,3*1,2 117,1±11,4 1,5±0,2*2 35,0±3,8*2 3,4±0,3*1 0,8±0,1*1
5. Кровопотеря, введение кудесана и ги-поксена 49,8±4,5*2 106,0±10,8 1,7±0,3*2 36,9±4,0*2 3,1±0,3*1 0,7±0,1*1
6. Кровопотеря, введение эссенциале и мексидола 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1
7. Кровопоте-ря,введение эссенциале и кудесана 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1
8. Кровопотеря, введение эссенциале и гипоксена 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1 2,3±0,5*1
Примечание: * - р <0,05 по сравнению со значениями групп 1-2; СОД - супероксиддисмутаза, ГР - глутати-онредуктаза, АГП - ацилгидроперекиси, МДА - малоновый диальдегид.
вышало резистентность иммуноцитов к действию эритроцитов, приобретающих после кровопотери иммуносупрессирующие свойства.
Эффективность действия активаторов биологического окисления в значительной степени определяется состоянием мембран митохондрии. Структура последних при кро-вопотере существенно повреждается. Можно было ожидать, что коррекция этих повреждений повысит эффективность действия изученных препаратов. Универсальными стабилизаторами клеточных мембран являются по-линенасыщенные фосфолипиды. Учитывая это, изучено влияние эссенциале на протек-тивные эффекты, вызываемые мексидолом, кудесаном и гипоксеном в отношении мета-
болических процессов в печени, иммунологических функций и физической работоспособности.
Установлено, что введение крысам после кровопотери эссенциале с кудесаном нормализовало величины показателей ФМА ПЯЛ и иммунологической реактивности (табл. 5). Совместное применение эссенциале с гипо-ксеном восстанавливало сниженную крово-потерей физическую работоспособность (табл. 6). Эссенциале с мексидолом нормализовали большинство показателей метаболических функций печени (табл. 7). Каждое из парных сочетаний уменьшало выраженность изменений некоторых показателей других функций, однако избирательность влияния
эссенциале на действие мексидола, кудесана и гипоксена была очевидной.
Эссенциале в сочетании с мексидолом повышал активность антиоксидантных ферментов и снижал содержание продуктов ПОЛ в эритроцитах, совместное применение эссен-циале с кудесаном или гипоксеном наряду с антиоксидантным эффектом повышали в эритроцитах концентрацию макроэргических соединений (табл. 8). Эссенциале с мексидо-лом предотвращали появление в крови КПК легких эритроцитов, обладавших иммуносу-прессирующими свойствами, а эссенциале с кудесаном, помимо указанного эффекта, индуцировали появление у тяжелых эритроцитов иммуностимулирующей активности. Введение эссенциале с гипоксеном не оказывали влияния на иммунологическую активность легких и тяжелых эритроцитов. Сопоставление особенностей сочетанного влияния эс-сенциале с другими препаратами на метаболическое состояние эритроцитов и их иммунологическую активность позволяет считать, что нормализация окислительно-
энергетического потенциала эритроцитов является необходимым условием отмены им-муносупрессирующих свойств у легких и появления иммуностимулирующей активности у тяжелых клеток.
Результаты проведенных исследований показывают, что эссенциале оказывает селективное влияние на протективную активность мексидола, кудесана и гипоксена в отношении функций гепатоцитов, иммуноцитов и миацитов при кровопотере. Они свидетельствуют о важной роли эритроцитов в регуляции иммунологических функций. Не исключено, что, модифицированные под влияние эссенциале и стимуляторов биологического окисления, эритроциты оказывают также ге-пато- и актопротекторное действие.
В клинической практике эссенциале используется для восстановления структуры, свойств и функций мембран гепатоцитов при инфекционных, токсических, сосудистых и аутоиммунных поражениях печени [8, 11, 17].
Полиненасыщенные фосфолипиды активизируют поглотительную и переваривающую функции макрофагов. Они стимулируют развитие Т-зависимого иммунного ответа в состоянии покоя, усиливают выраженность Т-зависимого и Т-независимого иммунного
ответа при токсическом поражении печени, физических нагрузках, алиментарных нарушениях липидного обмена, холодовом стрессе [1, 9, 22].
Есть основание считать, что совместное применение полиненасыщенных фосфолипидов и регуляторов энергетического обмена окажется эффективным средством коррекции иммунометаболических процессов при различных формах стресса и патологии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Байбурин Ф.Я., Бровкина И.Л., Прокопенко Л.Г. Коррекция иммунометаболических последствий нарушений липидного обмена. -Курск, 2000. - 140 с.
2. Бенисевич В.И., Идельсон Л.И. Образование перекисей непредельных жирных кислот в оболочке эритроцитов при болезни Мар-киафава - Микели // Вопр. мед. химии. -1973. - Т. 19, № 6. - С. 596-599.
3. Бобков Ю.Г., Виноградов В.М., Катков В.Ф. и др. Фармакологическая коррекция утомления. - М.: Медицина, 1984. - 208 с.
4. Виноградова И.Л., Багрянцева С.Ю., Дер-виз Г.В. Метод одновременного определения 2,3 ДФГ и АТФ в эритроцитах // Лаб. дело, 1980. - № 7.- С. 424-426.
5. Генинг Т.П., Колкер И.Н., Жумадилов Ж.Ш. Использование форменных элементов крови для направленной доставки химиотерапевтических и диагностических препаратов в очаг поражения // Антибиотики и химиотерапия. -
1988. - Т. 33, № 11. - С. 867-871.
6. Гордиенко А.Д. Фармакологические и биохимические эффекты ненасыщенных фосфолипидов. // Фармакология и токсикология. -
1990. - Т. 53, № 5. - С. 78-84.
7. Гордиенко А.Д. Влияние гепатопротекторов на функциональную активность митохондрий гепатоцитов крыс в системах in vitro и in vivo // Эксперим. и клинич. фармакология. -1992. - Т. 55, № 4. - С. 18-19.
8. Карагазян К.Г., Енгибарян А.А., Варосян М.А. Влияние эссенциале форте на биосинтез нуклеиновых кислот и некоторые гемодинамиче-ские показатели поврежденного миокарда кроликов // Бюлл. экспер. биол. и мед. -
1989. - № 11. - С. 548-550.
9. Конопля Е.Н., Прокопенко Л.Г. Эссенциале как иммуномодулятор при токсическом поражении печени // Эксперим. и клинич. фарма-кол. - 1992. - Т. 55, № 6. - С. 49-51.
10. Кунц Э., Гундерман К., Шнайдер Э. Эссенци-альные фосфолипиды в патологии (экспери-
