CC BY
20
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
ТАБЛИЦА. ПРОДУКЦИЯ ЦИТОКИНОВ ПРИ СТИМУЛЯЦИИ КСИЛОМАННАНОМ МОНОНУКЛЕАРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОМ КРОВИ (М±т) (К ТЕЗИСАМ БЛЯХЕР М.С. И ДР.)
Виды воздействия TNFa IL-10 IL-1 ß IL-6 IL-8
ксиломаннан + NaHCO3 300*±47 494*±106 1507*±361 17116+1461 40395*±2837
NaHCO3 143±22 311±58 1125±233 14088±1333 31071+3129
Примечание. * — статистически значимое отличие от парной пробы NaHCO.
Цель. Изучить влияние ксиломаннана, выделенного из G. lucidum, на продукцию цитокинов мононуклеарами периферической крови человека.
Материалы и методы. Из крови 22 здоровых доноров были выделены мононуклеары. Взвесь мононуклеаров стимулировали ФГА, ЛПС, ксиломаннаном, растворителем ксиломаннана (NaHCO3) или без индукторов (спонтанная продукция). После инкубации в планшете при 37 °С в атмосфере 5% СО2 в течение 20 часов, были получены супернатанты в которых, методом ИФА была определена концентрация TNFa, IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-10. Отработана доза ксиломаннана, не токсичная для клеток и обладающая стимулирующим воздействием. Определение концентрации цитокинов проводилось на ИФА-тест-системах российского производства ЗАО «Вектор-Бест» (Россия) и ООО «Цитокин» (Россия).
Статистическая обработка проведена с использованием программы Statistica 6.0 и MS Excel. Сравнение вариационных рядов осуществляли с помощью непараметрического U-критерия Манна—Уитни.
Результаты. При сравнении уровня продукции TNFa под влиянием разных стимуляторов: ФГА, ЛПС или ксиломаннана, выявлено, что ксиломаннан стимулирует продукцию этого цитокина сопоставимо с ФГА и ЛПС и значимо выше, чем под влиянием среды культивирования (спонтанная продукция) и NaHCO3 (значимо при p = 0,002).
Исследование влияния ксиломаннана на продукцию других цитокинов мононуклеарами периферической крови человека продемонстрировало, что данное вещество способствует повышению продукции мононуклеа-рами периферической крови таких цитокинов как IL-10, IL-1ß, IL-6, IL-8. Поскольку ксиломаннан был растворен в NaHCO3, проведено сравнение величины воздействия этого вещества и NaHCO3, что видно в таблице.
Во всех случаях ксиломаннан в большей степени воздействовал на продукцию цитокинов, чем растворитель, а для большинства цитокинов (TNFa, IL-10, IL-1ß, IL-8) — статистически достоверно (величина р колебалась от 0,03 до 0,005).
Заключение. Противоопухолевые свойства ксиломан-нана связанны с его способностью активировать клеточный и гуморальный иммунитет. Ксиломаннан проявил себя в данном исследовании как индуктор активации мононуклеаров периферической крови. Он индуцировал продукцию TNFa, который играет важную роль в противоопухолевом иммунитете. Увеличение продукции TNFa в культурах, стимулированных ксиломаннаном, у большинства доноров сопровождалось увеличением продукции IL-1ß, IL-6, IL-8, IL-10.
ИММУНОХИМИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ ДЛЯ СЕЛЕКТИВНОГО И ГРУППОВОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СОЕДИНЕНИЙ
Буркин М.А.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова», Москва, Россия
Иммунохимические методы активно используются для выявления разнообразных биологически активных низкомолекулярных агентов, в том числе лекарственных соединений. По своим аналитическим характеристикам практический интерес представляют варианты иммуноанализа с избирательным и групповым распознаванием анализируемых соединений. Первые предназначены для идентификации конкретного аналита, вторые позволяют в одной пробе выявлять максимально возможное число структурных аналогов. Так, для скринниговых целей эффективным решением являются методы, обладающие групповой специфичностью. Необходимость идентифицировать отдельное соединение среди близких структурных аналогов может диктоваться его особой активностью, токсичностью или особенностями использования. Подобные системы анализа конструируются на основе антител с разной эпитопной специфичности (к общим или индивидуальным субмолекулярным структурным элементам, эпитопам), а их создание требует дифференцированного подхода. Аффинная хроматография, гибридомная технология и технологии дисплея позволяют выделять и селекционировать поликлональные, моноклональные или ре-комбинантные антитела определенной эпитопной направленности из целого репертуара специфичностей. Альтернативный подход заключается в селекции in situ — избирательном связывании антител специфичных к отдельным эпитопам, происходящем в ходе анализа. Избирательность такого взаимодействия обеспечивается благодаря презентации и/или экранированию на антигенах групповых или индивидуальных эпитоп-ных структур.
Цель и задачи. Конструирование конъюгированных антигенов и создание на их основе систем для селективной и групповой иммунодетекции лекарственных соединений.
Результаты. На основе 7 тетрациклиновых антибиотиков, конъюгированных с белковыми носителями, создана панель антигенов. В конкурентном ИФА, при иммобилизации полученных конъюгатов на твердой фазе, исследованы профили перекрестного взаимодействия поликлональных антител к БСА-ТЦ с каждым из 7 антибиотиков и найдены условия для наилучшего группового распознавания тетрациклина, хлортетрациклина, ок-ситетрациклина и доксициклина, регламентированных в продуктах питания (Food Agric. Immunol., 2009, 20, 245-252).
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммуномодуляторы эндогенной и экзогенной природы Immunomodulators of endogenous and exogenous nature
Антитела, полученные в результате иммунизации кроликов конъюгатом БСА c макролидным антибиотиком тилозином, могли быть разделены по эпитопной специфичности. В зависимости от дизайна иммобилизованного антигена разработаны три варианта ИФА для селективного определения тилозина, его совместного выявления с тилмикозином, а также для группового определения тилозина и спирамицина (Food Chemistry, 2012, 132 (2), 1080-1086).
Гликопептидные антибиотики эремомицин и ри-стомицин, конъюгированные с БСА использовались в качестве иммуногенов для получения специфических антисывороток, взаимодействие которых с конъюгатами гомологичных гаптенов обеспечивало избирательность распознавания этих соединений. Используя антигены на основе гетерологичных структурно родственных гап-тенов, ванкомицина и тейкопланина, несущих общие структурные детерминанты, оказалось возможным выявлять группу гликопептидов (J. Immunol., Methods 2013, 388, 60-67).
Аналогичный принцип позволил на основе антител к конъюгату БСА-сарафлаксацин создать тест для совместного и селективного иммуноферментного определения фторхинолонов, а также дифференцировать основное лекарственное средство дифлоксацин и его активный метаболит сарафлоксацин (Analytical Methods, 2016, 8, 5843-5850).
Заключение. Системы селективного и групп-специфического иммуноанализа, пригодные как для идентификации отдельных лекарственных соединений, так и для одновременного выявления целой группы структурно родственных соединений, могут быть реализованы на основе одних и тех же поликлональных антител, взаимодействующих с разными эпитопными мишенями, представленными на иммобилизованных антигенах.
ПРИНЦИПЫ ИММУНОТЕРАПИИ ПРИ ПСИХИЧЕСКИХ РАССТРОЙСТВАХ
Ветлугина Т.П., Никитина В.Б., Лобачева О.А., Невидимова Т.И.
Научно-исследовательский институт психического здоровья, Томский национальный исследовательский медицинский центр, Томск, Россия
Введение. Результаты многолетних исследований лаборатории клинической психонейроиммунологии НИИ психического здоровья показали, что нарушения параметров иммунитета при психических расстройствах, отражающих модуляцию психонейроиммунного взаимодействия, оказывают негативное влияние на течение психического заболевания и снижают эффективность терапии. В связи с этим выбор тактики лечения пациентов с психическими расстройствами должен опираться не только на клинико-психопатологические, но и на иммунобиологические критерии.
Цель. Разработка алгоритма оптимизации терапии психических расстройств.
Результаты. При обследовании пациентов с невротическими, связанными со стрессом, расстройствами (расстройства адаптации — 90 человек; ПТСР — 100 человек); непсихотическими органическими психическими расстройствами (232 пациента) сопутствующая соматическая патология и клинические синдромы вторичной иммунной недостаточности (ВИН) выявлялись в 60-90% случаев.
Разработаны программы с включением в комплекс психофармакотерапии широкого спектра иммуноактивных препаратов с учетом особенностей клинического течения психической дезадаптации, глубины иммунных нарушений, сопутствующей соматической патологии. Применение программ оказывает позитивный клинический эффект, сопровождающийся оптимизацией иммунной защиты, снижением в 3 раза количества пациентов с неспецифическими адаптационными реакциями хронического стресса и в 4 раза — с реакциями острого стресса.
Одной из причин, ухудшающих эффективность лечения больных шизофренией, является резистентность к психотропным препаратам. Проведены иммунологические исследования двух групп больных — резистентных (420 человек) и чувствительных (129 пациентов) к проводимой психофармакотерапии. Труднокурабель-ные больные по сравнению с группой чувствительных к терапии характеризовались статистически значимыми высокими значениями количества лимфоцитов CD3+, CD95+, факторов гуморального иммунитета (IgG, ЦИК), митогениндуцированной продукцией мононуклеарами TNFa; снижением количества лимфоцитов CD4+, CD8+, HLADR+, митогениндуцированной продукцией Ш-4. Для преодоления терапевтической резистентности разработаны различные программы с включением в комплекс лечения иммуноактивного препарата тимогена (синтетический дипептид L-глютамил- L-триптофан), которые были применены при лечении 175 трудноку-рабельных пациентов. Показано, что применение ти-могена позволяет преодолеть резистентность и повысить эффективность лечения у 60,6-72,7% пациентов по сравнению с 32,1-33,3% пациентов в группе сравнения (40 пациентов — стандартная терапия) и с 40,0% в группе плацебо (90 пациентов). Повторное лабораторное исследование показало, что клинический эффект комплексной терапии сопровождался позитивной динамикой ряда параметров иммунитета (CD4+, CD8+, HLADR+ лимфоцитов, ЦИК, ДО).
На основе полученных данных нами разработан алгоритм оптимизации терапии психических расстройств, который состоит из нескольких этапов. На первом этапе при психопатологическом обследовании пациентов (анамнез, нозологические критерии, синдромальная характеристика) особое внимание уделяется выяснению склонности заболевания к затяжному течению, резистентности к психофармакотерапии, в том числе во время предыдущих госпитализаций. На следующем этапе устанавливается наличие клинических синдромов ВИН (инфекционный, аллергический, аутоиммунный, смешанный синдромы), сопутствующей соматической патологии, определяется возможность применения немедикаментозного воздействия, опосредованно влияющего на иммунитет (психотерапия, адаптагены). Этап лабораторной диагностики дает возможность идентифицировать дефекты компонентов иммунной системы, определить уровень иммунных нарушений (изменения носят транзиторный характер, стойкие глубокие изменения с признаками иммунодефицита). На основе анализа всех трех этапов становится возможной разработка дифференцированных схем комплексной психофармакотерапии с определением круга иммуноактивных препаратов.
Заключение. Наиболее важными механизмами иммунотерапии при невротических расстройствах является превенция стресс-индуцированных иммунодефици-
