CC BY
7УДК 615.849.12 DOI: 10.29039/2224-6444-2023-13-2-25-31
ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЛОКНИСТОГО КОМПОНЕНТА КОЖИ ПОСЛЕ ОДНОКРАТНОГО И ФРАКЦИОННОГО ЛОКАЛЬНОГО ОБЛУЧЕНИЯ ЭЛЕКТРОНАМИ
Марукян А. Х.1, Шаповалова Е. Ю.1, Вадюхин М. А.2, Корякин С. Н.3
'Институт «Медицинская академия имени С. И. Георгиевского» ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет им. В. И. Вернадского», 295051, бульвар Ленина, 5/7, Симферополь, Россия
2ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова (Сеченовский Университет), 119048, ул. Трубецкая, 8 стр.2, Москва, Россия
Национальный медицинский исследовательский центр радиологии Минздрава России (НМИЦ радиологии), 249036, ул. Королева, 4, Обнинск, Россия
Для корреспонденции: Шаповалова Елена Юрьевна, д.м.н., профессор, заведующая кафедрой гистологии и эмбриологии Института «Медицинская академия имени С. И. Георгиевского», ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет имени В. И. Вернадского»; e-mail: Shapovalova_l@mail.ru
For correspondence: Shapovalova Yelena Yu., MD, Head of the Department of Histology and Embryology, Medical Academy named after S. I. Georgievsky of Vernadsky CFU, e-mail: Shapovalova_l@mail.ru
Information about authors:
Marukyan A. Kh., https://orcid.org/0000-0002-4619-7385 Shapovalova E. Y., http://orcid.org/0000-0003-2544-7696 Vadyukhin M. A., https://orcid.org/0000-0002-6235-1020 Koryakin S. N., https://orcid.org/0000-0003-0128-4538
РЕЗЮМЕ
При неэффективности оперативного лечения немеланомного рака кожи в качестве паллиативной или адъювантной терапии часто применяют лучевую терапию. Наиболее распространенным поздним осложнением лучевой терапии является фиброз структур кожи, патогенез которого нуждается в уточнении для разработки этиопатогенетической профилактики. Дисбаланс синтеза и метаболизма различных типов коллагена играет важную роль в формировании радиационно-индуцированного фиброза кожи. Цель исследования -иммуногистохимическая оценка уровней экспрессии коллагенов I и III типов в коже, локально облученной электронами в однократном и фракционном режимах. Материал и методы. Крысы линии Вистар (n=50) были поделены на четыре группы: I - контрольная (n=20); остальным животным проводили локальное облучение кожи: II (n=10) - разовая облучающая доза 8 Гр; III (n=10) - разовая облучающая доза 40 Гр; IV (n=10) - 6 циклов ежедневно в дозе 13 Гр, суммарная облучающая доза составила 78 Гр. Полученные образцы исследовали гистологическим и морфометрическим методами на 10 сутки после однократного лучевого воздействия и на 15 сутки от начала фракционированного облучения. Результаты. Наибольшие показатели интенсивности иммуномечения и средней плотности коллагеновых волокон I типа наблюдали в группе фракционного облучения в суммарной дозе 78 Гр по сравнению с контрольной группой. Достоверное снижение степени маркирования и средней плотности обнаружили в той же группе при окрашивании на коллагеновые волокна III типа. После однократного облучения в дозах 8 Гр и 40 Гр интенсивность окрашивания и средняя плотность коллагеновых волокон I и III типов изменилась незначительно сравнению с контрольной группой. Заключение. На фоне локального облучения электронами во фракционном режиме в суммарной дозе 78 Гр происходит значительное увеличение экспрессии коллагенов I и III типов и развитие признаков радиационно-индуцированного фиброза кожи. В то же время, после однократного облучения в дозах 8 Гр и 40 Гр описанные иммуногистохимические изменения были незначительными и напрямую коррелировали с дозой ионизирующего излучения.
Ключевые слова: кератиноцит, облучение электронами, радиационно-индуцированный фиброз, коллагеновые волокна, иммуногистохимическое исследование.
IMMUNOHISTOCHEMICAL CHARACTERISTIC OF FIBROUS COMPONENT IN THE SKIN AFTER SINGLE AND FRACTIONAL LOCAL ELECTRON IRRADIATION
Marukyan A. Kh.1, Shapovalova E. Yu.1, Vadyukhin M. A.2, Koryakin S. N.3
'Institution «Medical Academy named after S. I. Georgievsky» of Vernadsky CFU, Simferopol, Russia 2I. M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University), Moscow, Russia 3National Medical Research Centre of Radiology, Obninsk, Russia
SUMMARY
Radiation therapy is often used as a palliative or adjuvant therapy when non-melanoma skin cancer surgery has failed. The most common late complication of radiation therapy is fibrosis of skin structures, the pathogenesis of which needs to be clarified in order to develop etiopathogenetic prophylaxis. An imbalance in the synthesis and metabolism of various types of collagen plays an important role in the formation of radiation-induced skin fibrosis. The aim of the study was an immunohistochemical assessment of the expression levels of type I and III collagens in skin locally ir-
radiated with electrons in single and fractional modes. Material and methods. Mature Wistar rats (n=50) were divided into four groups: I - control (n=20); the rest of the animals after depilation underwent local irradiation of the skin on the outer surface of the thigh: group II (n=10) - a single irradiation dose of 8 Gy; group III (n=10) - a single irradiation dose 40 Gy; group IV (n=10) - 6 cycles daily at a dose of 13 Gy, the total irradiating dose was 78 Gy. The obtained samples were examined on the 10th day after a single radiation exposure and on the 15th day from the start of fractionated irradiation by histological and morphometric methods. Results. The highest indices of immunolabeling intensity and average density of type I collagen fibers were observed in the fractional irradiation group at a total dose of 78 Gy compared to the control (p<0.05). A statistically significant decrease in the degree of immunolabeling and average density was found in the same group when stained for type III collagen fibers. After a single irradiation at doses of 8 Gy and 40 Gy, the intensity of staining and the average density of collagen fibers of types I and III changed slightly compared to the control group. Conclusion. Against the background of local electron irradiation in fractional mode at a total dose of 78 Gy, there is a significant increase in the expression of type I and III collagens and the development of signs of radiation-induced skin fibrosis. At the same time, after a single irradiation at doses of 8 Gy and 40 Gy, the described immunohistochemical changes were insignificant and directly correlated with the dose of ionizing radiation.
Key words: keratinocyte, electron irradiation, radiation-induced fibrosis, collagen fibers, immunohistochemistry.
Среди злокачественных новообразований кожи выделяют меланому и немеланомные типы (базальноклеточный и плоскоклеточный) [1; 2]. При неэффективности оперативного лечения не-меланомного рака кожи в качестве паллиативной или адъювантной терапии часто применяют лучевую терапию (брахитерапия, фракционированные режимы): X- и у-излучением, электронами, фотонами [3-5]. При этом в коже происходят дозозависимые повреждения паратуморальной ткани: пигментные изменения, десквамация эпителия, фиброзирование, атрофия кожи, а также некроз хрящевой и мягких тканей [5]. Одним из наиболее новых и безопасных методов считается электронотерапия, при котором эффект «наблюдателя» остается малоизученным.
При всех видах ионизирующего излучения взаимодействие с тканями происходит прямым и косвенным путями. Электроны вызывают дву-цепочечные разрывы ДНК (прямой эффект), индуцируя сигнальные пути, ответственных за апоптоз [6]. Энергия ионизирующего излучения также воздействует на молекулы клеточной воды с образованием реактивных форм азота (РФА) и активных форм кислорода (АФК) - супероксида, перекиси водорода и гидроксильных радикалов, приводя к дальнейшему повреждению ДНК, клеточных мембран, белков, липидов и прочих макромолекул (косвенный эффект) [7; 8]. Гибель клеток происходит апоптозом и / или некрозом, с высвобождением молекул, ассоциированных с повреждением (DAMP): белков теплового шока, HMGB1, фрагментов гиалуронана и др. [9; 10].
Наиболее распространенным поздним осложнением лучевой терапии является фиброз структур кожи, патогенез которого нуждается в уточнении, что необходимо для проведения этио-патогенетической профилактики. Дисбаланс синтеза и метаболизма различных типов коллагена играет важную роль в формировании фиброза [11]. Коллаген является основным структурным белком кожи и составляет 70-80% ее сухой мас-
сы. Он синтезируется фибробластами и состоит на 80-85 % из коллагена I типа и на 10-15 % из коллагена III типа [12]. Коллагеновые волокна I типа придают жесткость и устойчивость дерме, а коллаген III типа обеспечивают упругость и прочность на растяжение. Деградация фибриллярных коллагенов I и III типов инициируется матрикс-ными металлопротеиназами-1 (ММР-1) и ММР-3 соответственно [13; 14].
Было показано увеличение синтеза коллагена после воздействия ионизирующего излучения кожи. В исследовании Riekki R. с соавт. при помощи метода гибридизации in situ (ISH) было обнаружено увеличение синтеза РНК коллагенов I и III типов в поверхностных слоях дермы после облучения в высоких дозах по поводу рака молочной железы [15]. Иммуногистохимическое исследование показало увеличение уровня фибробластов, позитивных на аминотерминальные пропепти-ды коллагена I типа в облученной коже. Авторы пришли к выводу, что в результате воздействия облучения увеличивается экспрессия генов коллагенов кожи, что приводит к фиброзу и утолщению дермы [16]. Напротив, в последних исследованиях с применением X-излучения в дозе 15 Гр авторы отметили изменение структуры коллагеновых волокон в дерме на аморфную и временное повреждение сальных желез и волосяных фолликулов без признаков воспаления, пролиферации клеток или фиброза, что отличается от описанных ранее результатов в коже других частей тела [17].
Таким образом, проблема радиационно-ин-дуцированного фиброза (РИФ) по-прежнему остается актуальной [18]. В связи с противоречивостью информации в специализированной литературе, а также внедрением новых видов облучения, в частности, электронами, необходимо проведение доклинических исследований.
Цель исследования: иммуногистохимическая оценка коллагенов I и III типов в коже после локального однократного и фракционного облучения электронами.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Дизайн эксперимента. Крысы породы Вистар (n=50) были поделены на группы: I - контрольная (n=20), которым вводили физиологический раствор; опытные группы были подвергнуты локальному облучению электронами: II - 8 Гр (n=10; однократно), III - 40 Гр (n=10, однократно), IV -СОД 78 Гр (n=10; в фракциях по 13 Гр в течение 6 суток). Животных всех групп умерщвляли путем введения высоких доз анестетика через 10 суток после облучения электронами: I - III группы на 10 сутки, IV группы на 15 сутки эксперимента.
Все манипуляции осуществляли в соответствии с Международными рекомендациями (ЕЭС, Страсбург, 1985), Европейской конвенцией о защите позвоночных животных (ЕЭС, Страсбург, 1986), Руководствами по проведению медико-биологических исследований по уходу и использованию лабораторных животных (ILAR, DELS), Правилами лабораторной практики и приказом Минздрава России № 199н от 01.04.2016 «Об утверждении правил лабораторной практики».
Ионизирующее излучение. Животных подвергали локальному облучению кожи наружной поверхности бедра (мощность дозы 1 Гр/мин, энергия 10 МэВ и частота 9 Гц, размер поля - 0 100 мм) с использованием линейного акселератора («NOVAC-11», Радиологическое отделение экспериментального корпуса МРНЦ имени А.Ф. Цыба, г. Обнинск, Россия).
Гистологическое исследование. Фрагменты кожи после фиксации в забуференном растворе формалина готовили по стандартному протоколу, окрашивали гематоксилином и эозином. Полученные гистологические микропрепараты анализировали в 10 полях зрения светового микроскопа. Микроскопический анализ выполнялся с помощью системы видео-микроскопии (микроскоп Leica DM2000, Германия; камера Leica ICC50 HD). Иммуногистохимическое исследование проводили по стандартному протоколу. В качестве первичных использовали моно-клональные антитела к ^llagen-I (ThermoFisher, Clone COL-1, 1:200), Collagen-III (ThermoFisher, Clone FH-7A, 1:50), а вторичные - универсальные антитела (HiDef Detection™ HRP Polymer system, «Cell Marque», США). Количество кол-лагеновых волокон в срезах измеряли с помощью компьютерной программы анализа изображений (программное обеспечение BMI plus, BumMi Universe Co.) и выражали в процентах площади, занимаемой коллагеновыми волокнами в верхнем слое дермы. Окрашенные срезы оценивались с использованием модифицированной числовой шкалы от 0 до 3 [19].
Статистический анализ. Полученные в результате подсчёта данные обрабатывали с использованием компьютерной программы SPSS 12 for Windows statistical software package (IBM Analytics, США). Данные выражены как среднее значение ± стандартная ошибка. Сравнения проводились с использованием дисперсионного анализа. Значение p <0,05 считалось статистически значимым.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Кожа контрольной группы состояла из эпидермиса, сосочкового и сетчатого слоев дермы и гиподермы с придатками и многочисленными волосяными фолликулами (рис. 1А). Повреждения кожи опытных групп напрямую коррелировали с дозой облучения. После РОД 8 Гр наблюдали локальное утолщение базального слоя и частичное расслоение рогового слоя, очаговую лейкоцитарную инфильтрацию сосочкового слоя дермы, периваскулярный отек, сладж эритроцитов в просвете расширенных кровеносных сосудов и сохраненные придатки кожи (рис. 1Б). После РОД 40 Гр отмечали уплощение и локальное отсутствие базального слоя и сглаженный сосочковый слой дермы, сладж эритроцитов в просвете расширенных кровеносных сосудов и деструкцию сальных желез, однако подкожно-жировая клетчатка и волосяные фолликулы оставались интактными. Кроме того, выявлены микрополости со слущенными кератиноцитами и полиморфно-ядерным инфильтратом, образовавшиеся в результате нарушения целостности эпидермально-дермального сочленения (рис. 1В). Наибольшее поражение кожи наблюдали после облучения электронами в фракционном режиме (СОД 78 Гр): локальное отсутствие эпителия, сосочковый слой дермы сглаженный с обильным полиморфно-ядерным инфильтратом, сетчатый слой дермы и гиподерма отечны, волосяные фолликулы и сальные железы деструктуриро-ваны. Структура коллагеновых волокон аморфна, а в расширенном просвете кровеносных сосудов сладж и агрегация эритроцитов с частичной отслойкой эндотелия (рис. 1Г).
При иммуногистохимическом исследовании образцов интенсивность окрашивания на коллагены I и III типов варьировала в зависимости от глубины повреждения кожи, индуцированного локальным облучением электронами. Наибольшую интенсивность иммуномечения на коллаген I типа наблюдали в группе фракционного облучения в СОД 78 Гр по сравнению с контрольной группой (p<0,05). Статистически достоверное снижение степени маркирования обнаружили в той же группе при окрашивании на коллаген III типа. Во II (РОД 8 Гр) и III (РОД 40 Гр) группах интенсивность окрашивания на коллагены I и III
Рис. 1. Фрагменты кожи на 10 сутки (I - III группы) и 15 сутки (IV группа); окраска - гематоксилином и эозином,увелич.*100. А-контроль;Б - послеоднократного облучения электронами в дозе8 Гр; В -после однократного облучения электронами в дозе 40 Гр; Г - после фракционного облучения электро-
намивсуммарной дозе78Гр.
типов незначительно изменилась по сравнению с контролем (табл. 1).
Кроме того, выявлено незначительное снижение средней плотности коллагеновых волокон I типа после однократного облучения электронами в дозе 8 Гр по сравнению с контрольной группой, а после однократного облучения электронами в дозе 40 Гр - ее увеличение. После фракционного облучения электронами в суммарной дозе 78 Гр наблюдали статистически значимое увеличение
по сравнению с контрольной группой. Аналогичную иммуногистохимическую картину отмечали при окрашивании фрагментов кожи с антителами к коллагену III типа с достоверным увеличением их средней плотности в IV группе по сравнению с контролем. В образцах кожи опытных групп после облучения отмечали увеличение количества ИГХ-позитивных на коллагены I и III типов фи-бробластов, наиболее выраженное в группе фракционного облучения в СОД 78 Гр (рис. 2, рис. 3).
Группа Коллаген I типа M±SE Коллаген III типа M±SE
Контроль 1,33±0,20 1,57±0,21
Однократное облучение, 8 Гр 1,25±0,17 1,20±0,17
Однократное облучение, 40 Гр 1,57±0,22 1,33±0,21
Фракционное облучение, 78 Гр 2,17±0,20* 0,63±0,11*
Примечание: *достоверно значимое различие по сравнению с контролем, p<0,05
Таблица 1
Балльная оценка интенсивности иммуномечения на коллагены I и III типов.
Рис. 3. Иммуногистохимическая картина кожи в контрольной и опытных группах. Докрашивание -
гематоксилином,ув елич. х400.
ОБСУЖДЕНИЕ
Настоящее исследование посвящено имму-ногистохимической оценке влияния на синтез коллагена кожи и степень радиационно-индуци-рованного фиброза локального облучения электронами в разовых облучающих дозах (РОД) 8 Гр и 40 Гр и в фракционном режиме в суммарной облучающей дозе (СОД) 78 Гр.
Обнаруженное незначительное снижение плотности коллагеновых волокон после однократного локального облучения электронами
в дозе 8 Гр объясняется относительно низкой повреждающей способностью такой дозы [20], при которой микроскопический анализ кожи демонстрировал лишь частичное утолщение базального слоя и расслоение рогового слоя эпидермиса. При этом дерма оставалась интактной, что объясняет отсутствие различий метаболизма коллагена в этой группе по сравнению с контролем, так как большая часть коллагеновых волокон и фибробластов, продуцирующих их, расположена преимущественно в сосочковом слое дермы [21].
Ii , I
0,2 0,1 0
А В С
■ Коллаген I типа ■ Коллаген III типа
Рис. 2. Средняя плотность котшагеновых волокон вфрагментах кожи,иммуномеченныхантите-лами к Collagen I и Collagen III. А - контрольная группа, В - группа, однократно облученная електронамнв дозе 8 Гр, С - группа,однок°атно облученная электронами в ооае 40Га, Do- групп а, фракаионно облученнаянлекоронамн в суммарной дозе 78 Гр. Результаты представлены в виде средних значений ± SE (n = 10). # - достоверное различие (p<0,05) между контрольной группой и группой, фракционно облученной электронами.
Известно, что организация структурных компонентов кожи происходит при многих повреждающих воздействиях: ранение, термические и химические ожоги, облучение. В целом, во многих исследованиях сообщалось о фиброзе кожи после воспаления. В свою очередь, воспаление (радиационно-индуцированный дерматит, РИД) описывается как следствие воздействия ионизирующего излучения, которое способствует разрушению макромолекул и клеточных мембран с образованием активных форм кислорода (АФК), развивается оксидативный стресс, что подтверждается воспалительной инфильтрацией и нарушением строения соединительной ткани (т.е. уменьшением плотности коллагеновых волокон) [22; 23]. Например, АФК разрушают эндотелий кровеносных сосудов мелкого калибра, запуская клеточный воспалительный процесс [8]. Кроме того, сообщается об увеличении количества АФК-ассоциированных ферментов, которые направлены на захват и разрушение АФК, тем самым уменьшая повреждение кожи. Ключевая роль принадлежит металлопротеиназе-9, которая отвечает за ремоделирование компонентов внеклеточного матрикса и регулируется эндогенными тканевыми ингибиторами металлопротеиназ, а также TGF-ß1, взаимосвязь которых в коже после облучения исследована недостаточно [17; 24].
После начальной реакции на радиационные повреждения клетки межклеточного вещества приступают к регенерации поврежденных структур. Наиболее частым исходом этого процесса считается производство коллагеновых волокон, то есть фиброз. Причем, в некоторых случаях этот про-
цесс, вероятно, может протекать бесконтрольно в результате срыва регуляторных механизмов после облучения в высоких дозах при тотальном поражении глубоких слоев кожи, что было подтверждено результатами нашего исследования после однократного облучения электронами в дозе 40 Гр (III группа) и фракционного облучения электронами в суммарной дозе 78 Гр (IV группа) и согласуется с мнением других авторов [16].
По результатам иммуногистохимического исследования увеличение дозы и кратности облучения привело к гиперактивации синтеза коллагена вследствие интенсификации сигнальных путей, вероятно ответственных за фиброз [18; 22]. В нашем исследовании было выявлено увеличение ниммуномечения на коллагены I и III типов во тфрагментах кожи после облучения электронами в высоких дозах, причем фракционное облучение в СОД 78 Гр привело к наиболее активной продукции коллагеновых волокон, плотность которых в этой группе оказалась достоверно выше по сравнению с контрольной группой. Такой результат воздействия облучения был описан в единичных исследованиях кожи и называется радиационно-индуцированным фиброзом [18].
Таким образом, после локального облучения электронами однократно в низкой дозе (8 Гр) риск развития РИФ минимален, так как, c высокой долей вероятности, остаются интактными глубокие слои кожи, в которых располагаются фибробласты и происходит синтез коллагеновых волокон. Однако, при увеличении дозы облучения по результатам гистологического и иммуногистохимиче-ского исследований наблюдали интенсификацию коллагенообразования и признаки радиационно-индуцированного фиброза кожи как исхода РИД, максимально выраженные в группе фракционного локального облучения электронами, причем важную роль играло не только разрушение глубоких слоев кожи с нарушением регуляции коллагеноо-бразования, но и, вероятно, длительность воздействия повреждающего фактора.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
На фоне локального облучения электронами во фракционном режиме в СОД 78 Гр происходит значительное увеличение экспрессии коллагенов I и III типов и развитие признаков радиационно-индуцированного фиброза кожи. В то же время, после однократного облучения в РОД 8 Гр и 40 Гр описанные иммуногистохимические изменения были незначительными и напрямую коррелировали с дозой ионизирующего излучения.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Conflict of interest. The authors have no conflict of interests to declare.
0,8
#
0,7
#
0,6
0,5
S о 0,4
3 К
0,3
D
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES
1. Perez M., Abisaad J. A., Rojas K. D., Marchetti M. A., Jaimes N. Skin cancer: Primary, secondary, and tertiary prevention. Part I. J Am Acad Dermatol. 2022;87(2):255-268. doi:10.1016/j. jaad.2021.12.066.
2. Cives M., Mannavola F., Lospalluti L. Non-Melanoma Skin Cancers: Biological and Clinical Features. Int J Mol Sci. 2020;21(15):5394. doi:10.3390/ijms21155394.
3. Pashazadeh A., Boese A., Friebe M. Radiation therapy techniques in the treatment of skin cancer: an overview of the current status and outlook. J Dermatolog Treat. 2019;30(8):831-839. doi:10.1080/09546634.2019.1573310.
4. Chua B., Jackson J. E., Lin C., Veness M. J. Radiotherapy for early non-melanoma skin cancer. Oral Oncol. 2019;98:96-101. doi:10.1016/j. oraloncology.2019.09.018.
5. Locke J., Karimpour S., Young G., Lockett M. A., Perez C. A. Radiotherapy for epithelial skin cancer. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2001;51(3):748-755. doi:10.1016/s0360-3016(01)01656-x.
6. Jackson S. P., Bartek J. The DNA-damage response in human biology and disease. Nature. 2009;461(7267):1071-1078. doi:10.1038/ nature08467.
7. Mehta S. R., Suhag V., Semwal M., Sharma N. Radiotherapy: Basic Concepts and Recent Advances. Med J Armed Forces India. 2010;66(2):158-162. doi:10.1016/S0377-1237(10)80132-7.
8. Yoshimura M., Itasaka S., Harada H., Hiraoka M. Microenvironment and radiation therapy. Biomed Res Int. 2013;2013:685308. doi:10.1155/2013/685308.
9. Lumniczky K., Safrany G. The impact of radiation therapy on the antitumor immunity: local effects and systemic consequences. Cancer Lett. 2015;356(1):114-125. doi:10.1016/j. canlet.2013.08.024.
10. Brix N., Tiefenthaller A., Anders H., Belka C., Lauber K. Abscopal, immunological effects of radiotherapy: Narrowing the gap between clinical and preclinical experiences. Immunol Rev. 2017;280(1):249-279. doi:10.1111/imr.12573.
11. Trojanowska M., LeRoy E. C., Eckes B., Krieg T. Pathogenesis of fibrosis: type 1 collagen and the skin. J Mol Med (Berl). 1998;76(3-4):266-274. doi:10.1007/s001090050216.
12. Bentzen S., Overgaard M. Clinical Radiobiology and Normal-Tissue Morbidity after Breast Cancer Treatment. Advances in Radiation Biology. 1994;18:25-51. doi:10.1016/B978-0-12-035418-4.50006-5.
13. Scharffetter-Kochanek K., Brenneisen P., Wenk J., et al. Photoaging of the skin from phenotype
to mechanisms. Exp Gerontol. 2000;35(3):307-316. doi:10.1016/s0531-5565(00)00098-x.
14. Zhang J. A., Yin Z., Ma L. W., et al. The protective effect of baicalin against UVB irradiation induced photoaging: an in vitro and in vivo study. PLoS One. 2014;9(6):e99703. Published 2014 Jun 20. doi:10.1371/journal.pone.0099703.
15. Riekki R., Jukkola A., Sassi M. L., et al. Modulation of skin collagen metabolism by irradiation: collagen synthesis is increased in irradiated human skin. Br J Dermatol. 2000;142(5):874-880. doi:10.1046/j.1365-2133.2000.03465.x.
16. Riekki R., Parikka M., Jukkola A., Salo T., Risteli J., Oikarinen A. Increased expression of collagen types I and III in human skin as a consequence of radiotherapy. Arch Dermatol Res. 2002;294(4):178-184. doi:10.1007/s00403-002-0306-2.
17. da Silva Santin M., Koehler J., Rocha D. M., et al. Initial damage produced by a single 15-Gy x-ray irradiation to the rat calvaria skin. Eur Radiol Exp. 2020;4(1):32. Published 2020 Jun 5. doi:10.1186/s41747-020-00155-4.
18. Borrelli M. R., Shen A. H., Lee G. K., Momeni A., Longaker M. T., Wan D. C. Radiation-Induced Skin Fibrosis: Pathogenesis, Current Treatment Options, and Emerging Therapeutics. Ann Plast Surg. 2019;83(4S Suppl 1):S59-S64. doi:10.1097/SAP.0000000000002098.
19. Abramov Y., Golden B., Sullivan M., et al. Histologic characterization of vaginal vs. abdominal surgical wound healing in a rabbit model. Wound Repair Regen. 2007;15(1):80-86. doi:10.1111/ j.1524-475X.2006.00188.x.
20. Soref C. M., Fahl W. E. A new strategy to prevent chemotherapy and radiotherapy-induced alopecia using topically applied vasoconstrictor. Int J Cancer. 2015;136(1):195-203. doi:10.1002/ ijc.28961
21. Blair M. J., Jones J. D., Woessner A. E., Quinn K. P. Skin Structure-Function Relationships and the Wound Healing Response to Intrinsic Aging. Adv Wound Care (New Rochelle). 2020;9(3):127-143. doi:10.1089/wound.2019.1021.
22. Martin M., Lefaix J., Delanian S. TGF-beta1 and radiation fibrosis: a master switch and a specific therapeutic target?. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2000;47(2):277-290. doi:10.1016/s0360-3016(00)00435-1.
23. Sultan S. M., Stern C. S., Allen R. J., et al. Human fat grafting alleviates radiation skin damage in a murine model. Plast Reconstr Surg. 2011;128(2):363-372. doi:10.1097/ PRS.0b013e31821e6e90.
24. Smigiel K. S., Parks W. C. Matrix Metalloproteinases and Leukocyte Activation. Prog Mol Biol Transl Sci. 2017;147:167-195. doi:10.1016/ bs.pmbts.2017.01.003.
