CC BY
38
Журнал ГрГМУ 2008 № 3
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
УДК 616.65-006-018.2-037
ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКСПРЕССИИ ГЛАДКОМЫШЕЧНОГО АКТИНА В РАКЕ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
А.К. Триб; В.А. Басинский, д.м.н., профессор
УО «Гродненский государственный медицинский университет»
По данным иммуногистохимического и морфометрического исследования, в низкодифференцированныхраках обнаружено нарушение формирования гладкомышечного каркаса сосудов, что отражает несовершенство неоан-гиогенеза и может являться одним из прогностических маркеров новообразования.
Ключевые слова: рак предстательной железы, иммуногистохимия, гладкомышечный актин
Based оп the data yielded by immunohistochemical and morphometric research it was revealed, that in low-grade cancers disturbance ofthe formation ofvessels 'smooth muscle skeleton, which reflect imperfection ofneoangiogenesis and can be a prognostic marker of a neoplasm.
Key words: prostate cancer, immunohistochemistry, smooth muscle actin.
В последнее десятилетие активно изучается роль стромального микроокружения новообразований различной степени дифференцировки и локализаций [6]. Проведенные исследования наглядно подтверждают значение стромы в злокачественной трансформации эпителия или прогрессирова-нии уже имеющегося новообразования. Значительное количество работ посвящено роли стромы как индуктора опухолевого роста [1]. С другой стороны, некоторые компоненты стромы могут оказывать тормозящий эффект на опухолевый рост. Так, в ряде работ было отмечено, что рак предстательной железы развивается в анатомических зонах простаты, где количество гладкомышечных клеток значительно снижено, в других исследованиях были отмечены существенные изменения в составе стромального микроокружения рака предстательной железы по сравнению с доброкачественной гиперплазией и простатической интраэпите-лиальной неоплазией [2, 3, 5].
Целью исследования стало определение роли уровня экспрессии одного из важных составляющих стромы и сосудов рака предстательной железы - гладкомышечного актина - и оценка его роли в метастатическом потенциале и прогнозе новообразования. Материалом для исследования стали 47 наблюдений рака предстательной железы, выявленных после трансуретральной резекции простаты. Для выявления гладкомышечного компонента стенки сосудов и стромы использовали антитела к глад-комышечному актину (клон 1А4).
Исследовались общая площадь, занимаемая гладкомышечным актином, количество отдельных гладкомышечных волокон и средний размер глад-комышечного волокна. Для морфометрического исследования экспрессии гладкомышечного актина в стенке сосудов микропрепараты фотографировались с использованием объектива 40, выбирались сосуды, которые имели четкий поперечный
срез и диаметр 40-50 мкм. Толщина стенки измерялась в 4 взаимно перпендикулярных точках сосудистой стенки. Изучены толщина гладкомышечного составляющего стенки сосуда, его площадь и площадь просвета сосуда. Подсчет вышеуказанных параметров производили с использование анализатора изображений WCIF ImageJ. Полученные результаты обработаны статистически с использованием программы STATISTICA 6.0 (StatSoft, 2001 г.).
Окраска микропрепаратов рака предстательной железы с использованием антител к гладкомышеч-ному актину позволила четко выявить гладкомы-шечную составляющую стромы и мышечную стенку сосудов микроциркуляторного русла. Нами были исследованы: общая площадь экспрессии гладко-мышечного актина на единицу исследуемой площади, количество гладкомышечных волокон, толщина гладкомышечного слоя стенки сосудов, площадь экспрессии гладкомышечного актина в стенке сосуда и площадь просвета сосуда. При морфо-метрическом анализе уровня экспрессии гладкомы-шечного актина оценивались площадь, занимаемая гладкомышечным актином в строме опухоли, количество гладкомышечных волокон в единице площади, толщина гладкомышечного слоя стенки сосуда и площадь гладкомышечного актина в стенке сосуда.
При анализе влияния степени дифференциров-ки на показатели экспрессии гладкомышечного актина с использованием непараметрического критерия Крускала-Уоллиса выявлено, что с уменьшением дифференцировки рака предстательной железы достоверно уменьшалась площадь экспрессии гладкомышечного актина в строме (тест Крус-кала-Уолиса: H=25,67, p=0,00001 увеличивалось количество гладкомышечных волокон H=16,72, p=0,0001, уменьшалась толщина гладкомышечной составляющей стенки сосуда H=35,03, p=0,00001,
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Журнал ГрГМУ 2008 № 3
уменьшалась площадь экспрессии гладкомышеч-ного актина в стенке сосуда Н=38,74, р=0,00001 и увеличивалась площадь внутреннего сечения сосудов Н=20,85, р=0,00001.Использование непараметрического корелляционного анализа (корреляция Спирмена) показало такую же направленность изменений экспрессии гладкомышечного актина в строме и стенке сосудов. При анализе полученных данных выявляются обратные корелляционные связи между степенью дифференцировки опухоли по Gleason и площадью экспрессии гладкомышеч-ного актина в строме, толщиной стенки сосуда и площадью экспрессии гладкомышечного актина в стенке сосудов. Прямые корреляционные связи наблюдаются при анализе связи суммарного Gleason и количеством гладкомышечных волокон, площадью просвета сосудов. Данные морфометри-ческого исследования подтверждаются и при визуальной оценке микропрепаратов
Анализ параметров микроциркуляторного русла (микрососудистой плотности, суммарной площади микрососудистого русла, суммарного периметра и средней площади гладкомышечного актина) с показателями экспрессии гладкомышечного актина свидетельствовал об отсутствии статистически достоверной связи между параметрами мик-роциркуляторного русла и показателями экспрессии гладкомышечного актина в строме рака предстательной железы. Данный результат позволяет судить о независимой прогностической значимости экспрессии гладкомышечного актина в строме и стенках сосудов. Основываясь на этих данных, был проведен анализ влияния экспрессии гладко-мышечного актина в строме и стенках сосудов, на метастатический потенциал и выживаемость больных.
Для оценки влияния приведенных выше показателей на метастатический потенциал опухоли, использовался непараметрический критерий Ман-на-Уитни и Вальда-Вольфовица. Выявлено уменьшение гладкомышечного актина в строме рака предстательной железы у больных с наличием метастазов (и=147, р=0,009). Значительное уменьшение толщины гладкомышечной составляющей стенки сосудов также приводит к увеличению вероятности метастазирования (и=144, р=0,008). Сходные результаты получены и при анализе влияния площади экспрессии гладкомышечного актина в стенке сосудов (2= -2,45, р=0,01) и при увеличении площади просвета сосуда (2= -2,03, р= 0,04).
Для оценки влияния данных факторов на выживаемость, исследуемые параметры экспрессии были разделены на 2 группы: 1-я больше медианы, 2-я меньше медианы. Использовалась регрессионная модель Каплана-Майера, логранговый критерий. При использовании данной регрессионной
модели статистически достоверные показатели получены только по одному исследуемому признаку - площадь просвета сосудов, увеличение которой приводило достоверно к уменьшению продолжительности жизни (p=0,001). При анализе остальных параметров экспрессии гладкомышечного актина статистический уровень значимости был больше 0,05.
Однако при анализе крайних по выживаемости групп с использованием критерия Манна-Уитни были найдены статистически достоверные связи и по другим параметрам экспрессии гладкомышеч-ного актина. Отмечается уменьшение гладкомы-шечного актина в строме рака предстательной железы у больных проживших менее года по сравнению с больными, прожившими более 5 лет U=18, p=0,04, также имеется тенденция к уменьшению толщины гладкомышечного слоя в стенке сосудов у больных, проживших менее одного года U=21, p=0,08 по сравнению с больными с пятилетней выживаемостью и наблюдается уменьшение площади экспрессии гладкомышечного актина в стенке сосудов U=18, p=0,04.
Выводы
1. Экспрессия гладкомышечного актина в стро-ме рака предстательной железы значительно варьирует в зависимости от степени дифференцировки злокачественного новообразования, что наряду с оценкой эпителиального компонента по Gleason должно учитываться в оценке прогноза опухоли. Количество гладкомышечного актина значительно больше в опухолях более высокой дифференциров-ки и низкого метастатического потенциала.
2. Обнаруженные в низкодифференцированных раках нарушения формирования гладкомышечно-го каркаса сосудов со снижением его толщины, появлением прерывистости и дефектов гладкомы-шечного слоя отражают несовершенство неоанги-огенеза и могут являться одним из прогностических маркеров новообразования
Литература
1. Черкасский, Л.А. Начальные стадии рака предстательной железы / Л.А. Черкасский, Н.Н Максимова, В.Ю. Голайко // Вопросы онкологии. - 1997. - 43. - № 3. - С. 347-349.
2. Brawer, M. K. Predictors of pathologic stage in prostatic carcinoma. The role of neovascularity / M. K.Brawer M. [et al.] // Cancer (Phila.). - 1994.- Vol. 73. - P. 678 - 687.
3. Huss, W. J. Angiogenesis and prostate cancer: identification of a molecular progression switch / W.J. Huss [et al.] // Cancer Res. - 2001. -Vol. 61. - P. 2736-2743.
4. Sinha, A.A. Cathepsin B in angiogenesis of human prostate: an immunohistochemical and immunoelectron microscopic analysis / A.A. Sinha [et al.] // Anat. Rec. - 1995. - Vol. 241. - P. 353-362.
5. Tuxhorn, J.A. Reactive stroma in prostate cancer progression / J.A. Tuxhorn, G.E. Ayala, D.R. Rowley // J. Urol. - 2001. - Vol. 166. - P. 2472 -2483.
Поступила 30.06.08
