Иммуногенные и протективные свойства экспериментальной колибактериозной анатоксин-вакцины при оральной и подкожной иммунизации Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ИММУНОГЕННЫЕ И ПРОТЕКТИВНЫЕ СВОЙСТВА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ КОЛИБАКТЕРИОЗНОЙ АНАТОКСИН-ВАКЦИНЫ ПРИ ОРАЛЬНОЙ И ПОДКОЖНОЙ ИММУНИЗАЦИИ

Д.А. Евглевский, Н.В. Ванина, К.В. Татарников, Е.А. Стебловский

Аннотация. Представлены технологии получения экспериментальной колибактериозной анатоксин-вакцины и результаты изучения иммуногенных и про-тективных свойств при оральной и подкожной иммунизации свиней.

Ключевые слова: E.coli, анатоксин-вакцина, иммунизация, гемагглютинин.

Получение колибактериозной анатоксин-вакцины проводили путем выращивания лабораторных и свеже-выделенных E. coli от павших поросят в 2-х литровых биобутылях с объемом синтетической среды равной 1 литру в течение 2-3 суток. При этом концентрация микроорганизмов составляла 75±10 млрд/мл. После авто-клавирования суспензии E. coli при 1,0 атм. в течение 30 минут проводили детоксикацию и полимеризацию комплекса растворимых экзо- и эндотоксинов с микроорганизмами вначале 0,3-0,5% формальдегида или 0,2-0,3% глутарового альдегида при 40°С в течение 3-5 суток, а затем 0,2-0,3% этония. В последующем с учетом канце-рогенности формальдегида и дефицитности этония использовали для детоксикации и полимеризации токсинов 0,2-0,3% раствор глутарового альдегида с алкилдиме-тилбензиламмония хлорида, который как этоний является бесчетвертичным аммониевым соединением. Исходя из того, что 25% раствор глутарового альдегида используется в смеси с 14% и 25% алкилдиметиламмония хлорида детоксикацию и полимеризацию проводили в один этап. Общая схема получения колибактериозной анатоксин-вакцины представлена на рисунке 1.

Автоклавирование суспензии E. coli при 1 атм. в течение 30 минут

X

Детоксикация и полимеризация комплекса экзо- и эндо-, и энтеро-токсинов в суспензии с микроорганизмами 0,3% глутарового альдегидом с 0,3% алкилдиметилбензиламмония хлоридом при 40°С в течение 3-5 суток

X

Сорбция колибактериозной анатоксин-вакцины на гидроокиси алюминия 5мг/мл для подкожной вакцинации

X

Расфасовка препарата по флаконам и стерилизация при 100°С в течение 30 минут

Рисунок 1 - Способ получения колибактериозной анатоксин-вакцины

Полученную колибактериозную анатоксин-вакцину проверяли на безвредность, иммуногенность и протек-тивную активность.

Безвредность колибактериозной анатоксин-вакцины проверяли на 10 белых мышах и 15-ти дневного возраста 25 поросятах путем 3-х кратного подкожного введения с интервалом 3 суток, белым мышам в объеме 0,3-0,4 мл и поросятам в объеме 7-10 мл. При наблюдении в течение 10 суток после последнего введения вакцины животные оставались здоровыми без видимых изменений на месте введения.

Испытание колибактериозной анатоксин-вакцины на протективную активность. Вакцинацию поросят (82

головы) проводили подкожным введением колибакте-риозной вакцины двукратно с интервалом 14 суток в объеме 9-10 мл с концентрацией 70 млрд/мл микробных клеток и путем энтеральной иммунизации 172 поросят путем ежедневной выпойки в течение 7 суток колибак-териозной вакцины в объеме 25-30 мл с концентрацией 70 млрд/мл микробных клеток.

Через 15 суток после подкожной вакцинации провели инфицирование 47 поросят подкожным введением 100-150 тысяч вирулентных E. coli. Одновременно провели заражение контрольных, невакцинированных 11 поросят.

При наблюдении за подкожно вакцинированными 82 поросятами в течение 15 суток у 70 поросят не было отмечено случаев заболевания, а 12 поросят заболели. Из них 2 поросенка пало, а остальных подвергли анти-биотикотерапии с пробиотиками. В то же время все 11 контрольных поросят заболели после подкожного заражения 150т. мл E. coli. Их них 4 пало, а остальных подвергли лечению.

Анализ протективной активности энтеральной вакцинации с водой 172 поросят колибактериозной анатоксин-вакциной в дозе 70млрд/мл микробных клеток в течение 7 суток с последующим оральным заражением животных в дозе 150000 вирулентными E. coli выявили 13, заболевших колибактериозом, поросят. В то же время все 9 контрольных, невакцинированных поросят заболели и из них 3 пало, а остальные 6 голов подвергли лечению.

Сводные результаты протективной активности ко-либактериозной анатоксин-вакцины представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Результаты протективной активности колибактериозной анатоксин-вакцины___

№ п/п Способ вакцинации поросят Кол-во голов Способ заражения Заболело Пало

Подкожный 150т. E. coli Энтерально с водой 150т. E. coli

1 Подкожно двукратно в объеме 10 мл 79 + - 12 2

2 Контроль (невакцини-рованные) 11 + - 11 4

3 Энтерально с водой в течение 7 суток в объеме 3040мл 172 - + 13 3

4 Контроль (невакцини-рованные) 9 - + 9 3

Из данных, представленных в таблице 1, следует, что колибактериозная анатоксин-вакцина обеспечивала защиту поросят при энтеральной и подкожной вакцинации. Однако, при энтеральной вакцинации защитный эффект составил свыше 90%, а при подкожной в пределах 70%.

Изучение иммуногенной активности колибактери-озной анатоксин-вакцины проводили у поросят, после подкожной и энтеральной вакцинации путем определения титра сывороточных антител, способных вызвать реакцию агглютинации с колибактериозным антигеном, содержащих 109 микробных клеток в 1мл.

Постановку пластинчатой РА проводили путем нанесения по 1 -2 капли на чистое предметное стекло им-

Выращивание кишечной палочки на жидкой минеральной среде в 2-х литровых биобутылях равной 1 литру в течение 2-3 суток до 75±10 млрд/мл микроорганизмов

X

ВЕТЕРИНАРИЯ

мунной сыворотки от вакцинированных подкожным и энтеральным методом в разведении 1:10 и 1:100. Производственный стандартный антиген вносили петлей и перемешивали. Учет реакции проводили через 3-4 минуты, покачивая стекло.

Таблица 2 - Результаты определения титра антител

Постановку пробирочной реакции агглютинации проводили в объеме 1мл иммунной и контрольной сыворотки в разведении от 1:100, 1:200, 1:400 и 1:500. При этом суспензию антигена разводили физиологическим раствором до 5-6 млрд/мл взвеси с контролем стандарта мутности. Штатив с пробирками вначале выдерживали при 37°С в течение 12-15 часов, а затем при комнатной температуре - 18-24 часа. Учет реакции агглютинации

проводили с помощью лупы. Сводные данные представлены в таблице 2.

Из представленных в таблице данных следует, что у подкожно вакцинированных поросят колибактериозной анатоксин-вакциной сыворотка вызывала агглютинацию автоклавированных E. coli (стандартный биофабричный антиген в разведении от 1:100 до 1:400).

В то же время у энтерально вакцинированных поросят практически отсутствовали антитела, способные вызывать агглютинацию, склеивание микробных клеток E. coli.

Из полученных результатов следует, что энтераль-ная вакцинация поросят колибактериозной анатоксин-вакциной обеспечивает более эффективную защиту поросят от заражения вирулентными E. coli, но не вызывает образование агглютинирующих антител.

Проведенные исследования и полученные результаты определили рациональную технологию получения колибактериозной анатоксин-вакцины путем выращивания E. coli на минеральной жидкой питательной среде вместо гидролизатов мяса, казеина и кильки.

Информация об авторах

Евглевский Дмитрий Анатольевич, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник Курского НИИ АПП.

Ванина Наталья Владимировна, кандидат ветеринарных наук, старший преподаватель кафедры хирургии и анатомии ФГБОУ ВПО «Курская ГСХА».

Татарников Кирилл Викторович, аспирант ФГБОУ ВПО «Курская ГСХА», тел. (4712) 58-27-60.

Стебловский Евгений Александрович, аспирант ФГБОУ ВПО «Курская ГСХА».

у вакцинированных поросят в пробирочной РА

№ п/п Вид сыворотки Способ вакцинации Разведение сыворотки и результаты РА

1:100 1:200 1:300 1:400 1:500

1 Исследуемая, от вакцинированных поросят Подкожный + + + + -

2 Контрольная Не вакцинировали - - - - -

3 Исследуемая, от вакцинирован-ных поросят Энтераль-ный ± - - - -

4 Контрольная Не вакцинировали - - - - -