CC BY
70
ИММУНОГЕННЫЕ И ПРОТЕКТИВНЫЕ СВОЙСТВА КОЛИСАЛЬМОНЕЛЛЕЗНОЙ
АНАТОКСИН-ВАКЦИНЫ
А.А. Евглевский, А.М. Коваленко, Р.А. Мерзленко, Е.Г. Яковлева, К.В. Татарников, Е.А. Стебловский
Аннотация. Рассмотрены иммуногенные и протек-тивные свойства колисальмонеллезной анатоксин-вакцины.
Ключевые слова: колибактериоз, сальмонеллез, этоний, формальдегид, глутаровый альдегид, анатоксины.
Существующие способы изготовления колисальмо-неллезной анатоксин-вакцины основаны на выращивании Е.соИ и сальмонелл и мясопептонном или казеино-гидролизатном бульоне и использование формальдегида для детоксикации и полимеризации токсинов и ртутьсодержащего мертиолята в качестве консерванта. Однако и этот вариант вакцины до 80-90% импортируется из других стран, но в основном из Израиля. При этом штаммы микроорганизмов не соответствуют биологическим особенностям региональных возбудителей. Поэтому существует необходимость изъятия мясо и казеиногидролизатных сред, использование региональных культур с иммуногенными и протективными свойствами и рациональных средств детоксикации и полимеризации экзо-, эндо- и суперэнтеротоксинов. Ранее разработанные способы получения коли- и сальмонел-лезной анатоксин-вакцин создали основу изготовления комплексной анатоксин-вакцины.
Целью исследований явилось конструирование синтетической среды для выделения и выращивания Е.соИ и сальмонелл и апробация способа получения и применения колисальмонеллезной анатоксин-вакцины.
В ходе исследований произведена замена мясопеп-тонного глицеринового бульона на разработанную синтетическую питательную среду, обеспечивающую стабильный рост и высокое накопление сальмонелл и кишечной палочки до 70,0±10,0 миллиардов микроорганизмов в 1 мл в течение 2-3-суточного выращивания (Евглевский Д. А., 2008, 2010 г.)
Детоксикацию экзо-, эндо и энтеротоксинов проводили вначале 0,2-0,3% раствором формальдегида при 40-43°С в течение 3-5 суток, а затем 0,2-0,3% раствором этония или «Биопаг-Д» в том же режиме при изъятии канцерогенного ртутьсодержащего консерванта-мертиолята.
Полученную вакцину применяли по традиционному методу путем подкожного двукратного введения супоросным свиноматкам за 30-40 дней до опороса и 20-25-суточным телятам и поросятам в объеме 5-7 мл, а в последующем путем ежедневного выпаивания с водой в течение 5-7 суток по 15-20 мл.
Изготовление инактивированной анатоксин-вакцины проводили из свежевыделенных с широким спектром Е.соИ и сальмонелл от больных колибакте-риозом и сальмонеллезом телят и поросят по схеме, представленной на рисунке 1.
Изучение безвредности анатоксин-вакцины проводили на белых мышах массой 18-20 г и 16 поросятах
10-30-дневного возраста и 60 цыплятах путем 2-3-кратного введения 0,3-0,5 и 5-10 мл соответственно.
Выращивание сальмонелл в 2-х литровых бибутылях с СПС в течение 2-3 суток до концентрации 70,0 млрд/мл Выращивание кишечных палочек в 2-х литровых бибутылях с СПС в течение 2-3 суток до концентрации 70,0 млрд/мл
1 г 1 г
Автоклавирование суспензии, выращенных сальмонелл при 1,0 атм в течение 30 минут Автоклавирование кишечных палочек, выращенных сальмонелл при 1,0 атм в течение 30 минут
1_1
Первая детоксикация сальмонеллезных токсинов 0,2-0,3% раствором формальдегида при 42-43°С в течение 3-5 суток Первая детоксикация ко-либактериозной токсинов 0,2-0,3% раствором формальдегида при 42-43°С в течение 3-5 суток
1 г 1 г
Вторая детоксикация сальмонеллезных токсинов 0,2-0,3% раствором этония при 42-43°С в течение 3-5 суток Вторая детоксикация ко-лисальмонеллезной токсинов 0,2-0,3% раствором этония при 42-43°С в течение 3-5 суток
1 Г
Смешивание в равных объемах сальмонеллезной и ко-либактериозной анатоксин-вакцин с последующей сорбцией на гидроокиси алюминия из расчета 3-5 мг/мл, расфасовка препарата по флаконам и автоклави-рование при 1,0 атм. в течение 30 минут_
Рисунок 1 - Изготовление инактивированной анатоксинвакцины
При наблюдении в течение 10-15 суток все животные оставались клинически здоровыми без видимых изменений на месте введения препарата.
При двукратном введении анатоксин-вакцины 18 супоросным свиноматкам за 1,5-2,0 месяца до опороса по 7-10 мл с интервалом 12-14 суток у животных не было абортов. Введение вакцины не выявило некротических поражений, у народившихся поросят не установлено признаков диареи.
Следует отметить протективную эффективность колисальмонеллезной анатоксин-вакцины, приготовленную из региональных штаммов при выпаивании поросятам, телятам и цыплятам. Практически заболевание животных не выявлено, а кВ контрольных группах заболевание установлено у 70-90%, при падеже 35-60% от заболевших.
При изучении протективной активности инактиви-рованной колисальмонеллезной анатоксин-вакцины установлена устойчивость вакцинированных 47 телят и 58 поросят к подкожному заражению 1,0 мл суспензии сальмонелл и кишечной палочки, содержащих по 500 -1 млн микроорганизмов и при однократной выпойке с водой вакцинированным 42 телятам и 75 поросятам 2,0 суспензии сальмонелл и 2,0 мл кишечной палочки, содержащих 1,0 млрд/мл микроорганизмов.
У вакцинированных поросят в сыворотке крови обнаруживались специфические агглютинирующие антитела в течение 5-6 месяцев в титре 1:200 - 1:400.
С учетом того, что формальдегид обладает канцерогенными свойствами и уступает по бактерицидному и вирусоцидному действию глутаровому альдегиду, а также по решению комитета ВОЗ о его замене от 2001 г. (Медуницын Н.В)были проведены исследования по детоксикации и полимеризации комплекса колисальмо-неллезных токсинов с использованием других средств и способов.
В результате исследований установлено детоксици-рующие и полимеризирующие действия на колисаль-монеллезные токсины 0,2 - 0,3% раствора глутарового альдегида отдельно и в сочетании с этонием и Биопа-гом - Д, а полученная колисальмонеллезная анатоксин-вакцина вызывала у вакцинированных телят и поросят образование агглютинирующих антител в титре 1:500 -1:600 и защиту животных от заболеваний после подкожного введения 25 телятам и 29 поросятам или выпойке с водой 57 поросятам и 23 телятам 2,0 мл суспензии сальмонелл и Е.соИ, содержащих 1,0 млрд/мл микроорганизмов.
Из полученных данных следует, что инактивиро-ванная детоксикацией и полимеризацией комплекса колисальсонеллезных токсинов 0,2 - 0,3% раствором формальдегида с этонием или 0,2- 0,3 % раствором глутарового альдегида с 0,2-0,3 % раствором этония или Биопагом -Д обладает повышенными и протективными свойствами. В порядке экспериментальных исследований колисальмонеллезная вакцина применяется в хо-
зяйствах Курской и Белгородской областей для профилактики колисальмонеллеза телят, поросят и птиц.
Повышение иммунной и протективной эффективности колисальмонеллезной анатоксин-вакцин достигнуто выращиванием E. coli и сальмонелл на жидкой синтетической среде и рациональных средств и способов детоксикации и полимеризации комплекса токсинов.
Список использованных источников
1 Воробьев, А. А. Анатоксины /А. А. Воробьев.- М.: Медицина, 1965. - С. 130-350.
2 Медуницин, Н.В. Биологические препараты: - настоящее и будущее/ Н.В. Медуницин. Биопрепараты.- М., 2001.-№1.- С.2-4, 21-22.
3 Евглевский, А.А. Совершенствование диагностики специфической профилактики и терапии колибактериозом животных/ Д.А. Евглевский, В.А. Кузьмин // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии.
4 Пат. № 2392003 Российская Федерация. Способ получения сальмонеллезной вакцины/ Евглевский А. А.
5 Наставления по применению вакцины против эше-рихиоза животных (Коли - ВАК К 88, К 99 и ТС - анатоксины утверждена 20 июня 1997 года).
Информация об авторах
Евглевский Анатолий Алексеевич, доктор ветеринарных наук, профессор кафедры эпизоотологии, радиобиологии и фармакологии ФГБОУ ВПО «Курская ГСХА».
Коваленко Анатолий Михайлович, доктор ветеринарных наук, профессор кафедры инфекционной и инвазионной патологии ФГБОУ ВПО «Белгородская ГСХА».
Мерзленко Руслан Александрович, доктор ветеринарных наук, профессор ФГБОУ ВПО «Белгородская ГСХА».
Яковлева Елена Григорьевна, доктор ветеринарных наук, профессор ФГБОУ ВПО «Белгородская ГСХА».
Татарников Кирилл Викторович, аспирант ФГБОУ ВПО «Курская ГСХА».
Стебловский Евгений Александрович, студент 4 курса факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Курская ГСХА».
