CC BY
1INTERNATIONAL SCIENTIFIC AND PRACTICAL CONFERENCE "STATUS AND DEVELOPMENT PROSPECTS OF FUNDAMENTAL AND APPLIED MICROBIOLOGY: THE VIEWPOINT OF YOUNG SCIENTISTS" _25-26 SEPTEMBER, 2024_
ИММУНОГЕНЕЗ И МИКРОФЛОРА КИШЕЧНИКА ПРИ ПАТОЛОГИИ СМЕШАННОЙ ЭТИОЛОГИИ И ПУТИ ИХ
КОРРЕКЦИИ
1Борецкая Алиса Сергеевна, 2Расулов Фозилжон Хасанович, 3Рузалиев Комилжон Носирович, 4Хасанов Нодиржон Фозилжон уFли
1Ассистент кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Ферганского медицинского института общественного здоровья
2Доцент, заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии и иммунологии Ферганского медицинского института общественного здоровья 3Старщий препадователь кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Ферганского медицинского института общественного здоровья 4Студент Ферганского медицинского института общественного здоровья https://doi.org/10.5281/zenodo.13838580
Аннотация. Микробная флора кишечника участвует во многих жизненно важных процессах микроорганизма, являющейся для него средой обитания.Одна из основных функций нормальной микрофлоры-защитная. Одной из важнейших функций микрофлоры организма человека является её участие в формировании иммунобиологической реактивности организма. Учитывая, большую роль состояния иммунной системы в патогенезе многих заболеваний, а также болезней инфекционного происхождения создаются новые препараты растительных источников, не обладающих побочным действием. Актуальной проблемой остаётся поиск новых перспективных для клиники иммуномодуляторов, воздействующих одновременно на иммунную и пищеварительную системы организма.
Ключевые слова: микрофлора кишечника, дисбектериоз, анемия, вторичный иммунодефицит, настой барбариса, коррекция, иммуногенез, гемопоэз.
Микробная флора кишечника участвует во многих жизненно важных процессах микроорганизма, являющейся для него средой обитания.Одна из основных функций нормальной микрофлоры-защитная.Участие нормальной микрофлоры кишечника в обменных процессах организма человека определяется, с одной стороны, утилизацией кишечными микроорганизмами непереваренных пищевых соединений и инактивацией биологически активных веществ, выделяющихся с пищеварительным соками, а с другой стороны, синтезом представителей нормофлоры кишечника витаминов группы В, витамина К, никотиновой и фолиевой кислоты, биологически активных соединений: эстрогенов, промазина, колхицина, дигоксина и др. Одной из важнейших функций микрофлоры организма человека является её участие в формировании иммунобиологической реактивности организма.
Учитывая, большую роль состояния иммунной системы в патогенезе многих заболеваний, а также болезней инфекционного происхождения создаются новые препараты растительных источников, не обладающих побочным действием. В последнее время авторы работ [1,2,5] уделяют недостаточное внимание на значение применения растительного сырья в получении новых иммуностимулирующих препаратов и их фармакологическое использование.
INTERNATIONAL SCIENTIFIC AND PRACTICAL CONFERENCE "STATUS AND DEVELOPMENT PROSPECTS OF FUNDAMENTAL AND APPLIED MICROBIOLOGY: THE VIEWPOINT OF YOUNG SCIENTISTS" _25-26 SEPTEMBER, 2024_
Актуальной проблемой остаётся поиск новых перспективных для клиники иммуномодуляторов, воздействующих одновременно на иммунную и пищеварительную системы организма.
Цель исследования. Изучение иммуногенеза и микрофлоры кишечника при патологии смешанной этиологии и пути коррекции выявленных нарушений.
Материал и методы. Экспериментировали над белыми беспородными мышами 23-месячного возраста массой 20-22 гр. На 1-ом этапе исследования в течение 8-дней с интервалом через день лабораторным животным внутрижелудочно вводили Proteus mirabilis (103 микробных тел на 20 г массы).
На втором этапе - на 10-день эксперимента для моделирования фенильгидразиновой анемии лабораторным животным внутрибрюшинно в течение трёх дней вводили сернокислый фенильгидразин в дозе 30 мг/кг. На 4-день для определения напряженности иммунитета мышей однократно иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) в дозе 2x108. На 5-й день после иммунизации определяли количество антителообразующих клеток (АОК) в селезёнке по методу N.Jerne., A.Nordin [4], микрофлору кишечника и форменные элементы крови.
Препараты вводили внутрибрюшинно вместе с ЭБ и на 4-й день однократно.
Настой барбариса вводили в дозе 0,01мл на мышь. Для сравнения действия настоя барбариса в 6-ой группе вводили иммуномодулин в дозе 1 мкг/кг массы.
В процессе проведения эксперимента были соблюдены требования Всемирного общества защиты животных (WSPA) и Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных целей (Страссбург, 1986).
Пробы крови, содержимое кишечника и органы иммунной системы брали после декапетации.
Для статистической обработки и анализа полученных результатов исследования, а также построения графиков по полученным данным был использован пакет прикладных программ статистического анализа Excel-2013 (Microsoft), SygmaStat 3.5, SygmaPlot 12.5 (Systat.Ins.).Для каждой выборки вычисляли средние величины (М), среднее квадратное отклонение, среднюю ошибку средней арифметической ^).Оценку нормы распределений проводили с использованием коэффициентов асимметрии и эксцесса. С целью определения достоверности (Р) разных величин сопоставляемых средних величин применялся t критерий Стьюдента и однофакторный дисперсионный анализ с вычислением F критерия Фишера. Разницу средних величин сочли достоверной при р<0,05 (3).
Результаты и обсуждение.На первых этапах опыта изучали иммуногенез животных с дисбактериозом и фенильгидразиновой анемией.В селезёнке мышей контрольной группы обнаружено 6800±212,1 АОК (табл.1).
Таблица 1
Показатели иммуногенеза у животных с дисбактериозом и фенильгидразиновой
анемией
Экспериментальн ые группы (n=5) Препа раты Число ЯСКС х106 ИС Количество АОК на
Селезёнку И С 106 клеток ИС
INTERNATIONAL SCIENTIFIC AND PRACTICAL CONFERENCE "STATUS AND DEVELOPMENT PROSPECTS OF FUNDAMENTAL AND APPLIED MICROBIOLOGY: THE VIEWPOINT OF YOUNG SCIENTISTS" 25-26 SEPTEMBER, 2024
селезёнк и
Контроль - 768,8±6,2 6800±212,1 8,8±0,3
Опыт.Proteus mirabilis 487,6±4,5а -1,6 4230±83,1а 1,6 8,7±0,1
Опыт.Proteus mirabilis +Фенильгидрози н 357,6±6,3а -2,1 2190±208,8а 3,1 6,1±0,7а -1,4
Опыт.Proteus mirabilis Барбар ис 437,6±5.6б -1,1 5080±389б 1,2 11,6±0,9б 1,3
Опыт.Proteus mirabilis +Фенильгидрози н Барбар ис 620,7±9,5В 1,7 6500±171,3В 2,9 10,5±0,4В 1,7
Опыт.Proteus mirabilis +Фенильгидрози н Иммун омоду лин 620±6,5В 1,7 5200±202,5В 2,3 8,4±0,3В 1,4
Примечание: ИС-индекс соотношения. а-достоверно по сравнению с контролем, б-достоверно по сравнению со 2-й группой, в-достоверно по сравнению с 3-ей группой, (п=5)-количество животных в группе.
У мышей с дисбактериозом, достоверно в 1,6 раза меньше количество АОК (4230±83,1).Животные с дисбактериозом, получавших фенильгидразин в селезёнке, обнаружено 2190±208,8 АОК, что свидетельствует о глубоком нарушении микрофлоры кишечника и иммунной системы. Если мышам с патологией кишечника ввести настой барбариса, число тимоцитов достоверно повысится в 1,2 раза, а при комбинированной патологии в 2,9 раза. Аналогичные результаты получены под действием иммуномодулина. Следовательно, барбарис и иммуномодулин обладают способностью достоверно повышать число АОК в селезенке (абсолютный показатель).
При расчете АОК на 1 млн. клеток селезёнки установлено, что он во 2-ой группе равен 8,7±0,1 АОК, а у животных получавших настой барбариса, достоверно возрос в 1,3 раза. У животных смешанной патологии (3-группа) АОК на 1 млн. клеток достоверно снижен в 1.4 раза по сравнению с контрольной группой. Введение настоя барбариса и Тактивина мышам смешанной патологии повысило число АОК на 1 млн. клеток в 1,7-1,4 раза, соответственно.
Таким образом, при расчёте АОК, как на всю селезёнку (абсолютный показатель), так и на 1 млн. клеток селезёнки (относительный показатель) изученные препараты (настой барбариса и Тактивин) обладают способностью коррегировать иммуногенез.
В следующих этапах опыта для определения E.coli первичный посев фекалий животных производили на чашке Петри со средой Эндо. Как видно из таблицы 2, в контрольной группе колонеобразующая единица (КОЕ) E.coli и КОЕ лактопазитивных
INTERNATIONAL SCIENTIFIC AND PRACTICAL CONFERENCE "STATUS AND DEVELOPMENT PROSPECTS OF FUNDAMENTAL AND APPLIED MICROBIOLOGY: THE VIEWPOINT OF YOUNG SCIENTISTS" _25-26 SEPTEMBER, 2024_
E.coli составляют 111±13.1-111±13.1, соответственно. У животных, получавщих Proteus mirabilis 103 микробных тел достоверно увеличилась КОЕ E.coli в 7,7 и КОЕ лактопазитивные E.coli в 6.5 раз. На фоне дисбактериоза (3-группа) и получавшие фенильгидразин количество КОЕ E.coli в 6,7 и КОЕ лактопазитивные E.coli в 6.0 раз повысились по сравнению с контрольной группой.
Таблица 2
Показатели микрофлоры у животных при смешанной патологии
Эксперимен тальные группы (п=5) Препарат КОЕ E.coli КОЕ лактозапозитив ных E.coli КОЕ лактозанегатив ных E.coli
M±m И С M±m ИС M±m ИС
Контроль - 111±13,1 111±13,1 -
Опыт. Proteus mirabilis - 860±22,5а 7,7 720±20а 6,5 140±2,7 -
Опыт.Proteus mirabilis +Фенильгидрози н 746±27,6а 6,7 666±17,4а 6,0 100±2,2
Опыт.Proteus mirabilis Барбарис 260±28,1б 3,3 127±12,8б -5,7 133±16,8 -1,1
Oпыт.Proteus mirabilis +Фенильгидрози н Барбарис 578±28,5 В 1,3 448±31,2В -1,5 143±19,1в 1,4
Oпыт.Proteus mirabilis +Фенильгидрози н Иммуномо дулин 153±11,4 В 4,9 54±6.7В 12, 3 99±5,6 -
Примечание: ИС-индекс соотношения, а-достоверно по сравнению с контролем, б-достоверно по сравнению со 2-й группой, в-достоверно по сравнению с 3-ей группой, (п=5)-количество животных в группе. КОЕ-колониеобразующая единица.
Введение животным дисбактериозом (4-группа) настоя барбариса привело к понижению количества КОЕ E.coli в 3,3 раза и КОЕ лактопазитивные E.coli в 5,7 раз по сравнению с показателями 2-ой группы, что свидетельствует о нормализации микрофлоры кишечника. Животным с патологией кишечника и вторичным иммунодефицитом (5-группа) введение настоя барбариса достоверно снизило количество КОЕ E.coli на 3,3 раза и КОЕ лактопазитивные E.coli в 5,7 раз, соответственно. Введение животным с патологией кишечника и вторичным иммунодефицитом (6- группа) введения иммуномодулина достоверно снизило количество КОЕ E.coli в 4,9 раз и КОЕ лактопазитивные E.coli в 12,3 раз, соответственно.
Следовательно, при создании экспериментальной модели дисбактериоза наблюдается увеличение КОЕ E.coli и КОЕ лактопазитивные E.coli.На фоне дисбактериоза
INTERNATIONAL SCIENTIFIC AND PRACTICAL CONFERENCE "STATUS AND DEVELOPMENT PROSPECTS OF FUNDAMENTAL AND APPLIED MICROBIOLOGY: THE VIEWPOINT OF YOUNG SCIENTISTS" _25-26 SEPTEMBER, 2024_
и принимавшие фенильгидразин получены аналогичные результаты по сравнению с контрольной группой. Введение настоя барбариса животным дисбактериозом привело к нормализации микрофлоры кишечника. Подобные аналогичные результаты были получены у животных с патологией кишечника и вторичным иммунодефицитом. Введение иммуномодулина животным с патологией кишечника и вторичным иммунодефицитом достоверно нормализовало микрофлору кишечника.
Было изучено влияние настоя барбариса и иммуномодулина на гематологические показатели. У мышей, получавших Proteus mirabilis, развивается дисбактериоз, о чём свидетельствует уменьшение количество эритроцитов в периферической крови в 3,6 раза: 2,1±0,04 х 109/мл в опыте 7,5±0,06 х 109/мл; в контроле (см.табл.3).Введение животным с дисбактериозом настоя барбариса достоверно повышает число эритроцитов крови в 2,5 раза. На фоне дисбактериоза у испытуемых (3-группа) и получавших фенильгидразин количество эритроцитов достоверно снижено в 3.1 раз по сравнению с контрольной группой. Животных со смешанной патологией, получавших настой барбариса и иммуномодулина достоверно повысились количество эритроцитов в периферической крови в 3,1 раз и в 2,6 раз, соответственно.
Установлено, что изученные препараты обладают способностью повышать число эритроцитов в крови, как в моноинфекции и патологии смешанной этиологии. (см.табл.3).
Установлено, что изученные препараты обладают способностью повышать число эритроцитов в крови, как в моноинфекции и патологии смешанной этиологии. (см.табл.3).
Таблица 3
Показатели гемопоэза у животных смешанной патологии
Экспериментальные группы (n=5) Препарат Эритроциты х 109/мл ИС Лейкоциты х 106/мл ИС
Контроль - 7,5±0,06 1,3±0,03
Oпыт.Proteus mirabilis - 2,1±0,04а -3,6 0,7±0,04а -1,9
Опыт.Proteus mirabilis +Фенильгидрозин - 2,4±0,05а -3,1 1,1±0,03а -1,2
Oпыт.Proteus mirabilis Барбарис 6,1±0,07б 2,5 0,9±0,04б 1,3
Oпыт.Proteus mirabilis +Фенильгидрозин Барбарис 7,5±0.08в 3,1 1,3±0,04в 1,2
Oпыт.Proteus mirabilis +Фенильгидрозин Иммуномодулин 6,2±0,07в 2,6 1,1±0,03 -
Примечание: ИС-индекс соотношения. а-достоверно по сравнению с контролем, б-достоверно по сравнению со 2-й группой, в-достоверно по сравнению с 3-ей группой, (п=5)-количество животных в группе.
Полученные результаты свидетельствует о способности настоя барбариса коррегировать нарушения в иммунном статусе, микрофлору кишечника и систему кроветворения у мышей с патологией кишечника и смешанной патологией. Выводы:
INTERNATIONAL SCIENTIFIC AND PRACTICAL CONFERENCE "STATUS AND DEVELOPMENT PROSPECTS OF FUNDAMENTAL AND APPLIED MICROBIOLOGY: THE VIEWPOINT OF YOUNG SCIENTISTS" _25-26 SEPTEMBER, 2024_
1.Настой барбариса обладает способностью корригировать иммуногенез при нарушении нормальной микрофлоры кишечника и в патологии смешанной этиологии (дисбактериоз + фенильгидразиновая анемия).
2.Введение настоя барбариса животным приводит к нормализации микрофлоры кишечника у животных с патологией кишечника и патологей смешанной этиологии (дисбактериоз + фенильгидразиновая анемия).
3.Изученный препарат обладает способностью корригировать форменные элементы крови, как в моноинфекции, так и в патологии смешанной этиологии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бобаев И.Д., Алимова М.Т., Путиева Ж.М. и др.Экспериментальное изучение иммуностимулирующего действия фитоэкдистероидов Silene viridiflora //Теорет. и прикладная экология. Ташкент. 2012.-№1.С.55-57.
2. Бобаев И.Д., Алимова М.Т., Путиева Ж.М., Рамазонов Н.Ш.Влияние препарата «Экдисилен» на гуморальный и клеточный иммунитет //Журнал теорет. и клин, медицины. Ташкент. 2012.-№5.С.6-9.
3. Гланц С. Медико-биологическая статистика /Перевод с англ.-М.; Практика, 1999.-459 с.
4. Jerne N.K., Nordin A.A Plague formation in agar by single antibody-producing cells // Science.-1963.-Vol. 140. P.405-407.
5. Норматова Л.Ю., Алимова М.Т., Бабаев И.Д и др.Влияние экдистерона на иммунную систему.//Актуальные проблемы химии природных соединений:Научно-практическая конференция молодых ученых, посв.памяти акад.С.Ю.Юнусова.Ташкент.2012.С.19.
