Иммунофенотипические особенности лимфоидной популяции тимуса плодов с признаками задержки внутриутробного развития от матерей, страдающих сахарным диабетом i типа Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

young and middle-aged rats: comparison between left and right ventricular adaptations to oxidative stress. // J. Comp. Physiol. [B].-2006. - V.176, №8. -P.749-762.

15. Rayment N.B., Haven A.J., Madden B., Murday A. et.al.Myocyte loss in chronic heart failure. // J. Pathol. - 1999. - V.188, №2. -P.213-219.

16. Nascimento A.P., Costa A.M.. Overweight induced by high-fat diet delays rat cutaneous wound healing. // Br. J. Nutr. - 2006. - V.96, №6. - P.1069-1077.

17. WHO (World Health Organization). 2005. www/who.int/

Реферат

ПАТОМОРФОЛОГ1ЧН1 ОСОБЛИВОСТ1 М10КАРДА Л1ВОГО ШЛУНОЧКА СЕРЦЯ ПРИ Г1ПЕРТОН1ЧН1Й ХВОРОБ1 3 ОЖИР1ННЯМ

СорокЫ Д.1., Марковський В.Д.

Ключов1 слова: артер1альна ппертенз1я, ожиршня, кардюмюцит, апоптоз, колагеноутворення, л1пофусциноз.

В морфогенез! «ппертензивного серця» при артер1альнм ппертензи у сполучены з ожирнням роз-виваеться ппертроф1я л1вого шлуночка серця яка призводить до ремоделювання мюкарда в сполу-чены з ¡нтерстицальним лтоматозом та склерозом, на фоы зменшення числа функцюнально спро-можних кардюмюцит1в \ зростання ¡нтенсивност1 апоптозу, а також лтофусцинозу. Особливють ¡нтер-стицального колагеноутворення у ппертрофнному мюкард1 л1вого шлуночка при АГ та ожиршы поля-гас у переважання молодого ¡нтерстицального колагена Ш типу, що може бути пов'зано як з зааль-ною пперл1пщем1сю, так \ з мюцевим розростанням жировоТ тканини.

УДК: 616.438-053.1-091.8-02:618.3-06:616.37-008.64

ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЛИМФ0ИДН0Й ПОПУЛЯЦИИ ТИМУСА ПЛОДОВ С ПРИЗНАКАМИ ЗАДЕРЖКИ ВНУТРИУТРОБНОГО РАЗВИТИЯ ОТ МАТЕРЕЙ, СТРАДАЮЩИХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ I ТИПА

Сорокина И.В., Куприянова Л.С.

Харьковский государственный медицинский университет

Иммуногистохимическим методом изучены иммунофенотипические особенности лимфоидной популяции тимуса плодов с признаками ЗВРП от матерей, страдающих сахарным диабетом I типа, в сравнении с тимусами плодов от здоровых матерей. Установлено, что лимфоидный компонент тимуса плодов от матерей с СД I типа отличается незрелостью, обусловленной нарушением процессов пролиферации, созревания и дифференцировки лимфоцитов. Это связано с особенностями строения эпителиального компонента тимуса, нарушением коллагенообразова-ния, а также изменением интерлейкин-продуцирующей активности желез плодов с признаками ЗВРП от матерей с СД I типа. Выявленные особенности лимфоидной популяции в дальнейшем онтогенезе могут проявляться развитием иммунопатологических состояний.

Ключевые слова: беременность, сахарный диабет I типа (СД), плод, задержка внутриутробного развития плода (ЗВРП), тимус, иммуногистохимия.

Проблема сахарного диабета (СД) в Украине имеет огромную медико - социальную значимость и принимает общегосударственное значение. Это обусловлено прежде всего неуклонным ростом заболеваемости среди населения. [10]. Эпидемиологический характер заболеваемости наблюдается и среди женщин детородного периода [8]. Эффективность инсулинотера-пии и применение рациональной диеты способствуют восстановлению репродуктивной функции и увеличению количества родов при данной патологии [13]. Однако крайне неблагоприятное влияние заболевания на внутриутробное развитие потомства приводит к частому развитию пороков, высокой перинатальной смертности де-

тей, а также повышенной их предрасположенности к развитию эндокринопатий и различного рода соматической патологии [2]. В связи с этим, проблема СД занимает ведущее место и находится в центре внимания как гинекологов -эндокринологов, так и акушеров, неонатологов и педиатров.

При беременности течение СД I типа характеризуется лабильностью, нестойкостью компенсации, проявлением сосудистых и метаболических осложнений заболевания [1, 11]. Наиболее неблагоприятными из них для развития плода являются гипоксия, гипергликемия и кетоацидоз. Периоды декомпенсации заболевания матери совпадают с критическими периодами закладки

* В материалах статьи представлен фрагмент комплексной научно - исследовательской работы кафедры патологической анатомии Харьковского государственного медицинского университета «Патологическая анатомия отдельных систем плода и новорожденного от матерей с осложненной беременностью» (номер государственной регистрации 0105и002760), которая входит в координационный план приоритетных направлений, утвержденный Министерством Здравоохранения Украины.

BiCHHK Украгнсъког жедичног стоматологгчног акадежШ

и формирования многих жизненно важных органов, в том числе и тимуса [3, 14]. Установлено, что степень выраженности нарушения закладки и формирования органов и тканей плода прямо пропорциональна тяжести течения материнского диабета [17].

Одним из проявлений сосудистых осложнений материнского СД является фето - плацентарная недостаточность, в результате чего плод развивается в условиях хронической гипоксии [12]. В зависимости от длительности заболевания матери, изменения в фето - плацентарном комплексе (ФПК) развиваются по типу преждевременного созревания плаценты, либо с признаками нарушения созревания [5, 9]. Соответственно изменениям в ФПК, изменяется масса тела плода: макросомия и гипотрофия (плоды с признаками ЗВРП).

Тимус новорожденного является самым крупным лимфоидным органом и к моменту рождения доношенного плода структурно и функционально сформирован полностью [4, 6]. Учитывая ведущую роль тимуса как центрального органа иммуногенеза, осуществляющего иммунологическую толерантность организма, а также координирующую роль во взаимосвязи нервной и эндокринной систем [16], можно сказать, что нарушение созревания и дифференцировки железы является ведущим звеном в развитии иммунопатологических состояний, а также дизадап-тационного синдрома у новорожденных и детей от матерей, страдающих СД [7]. Несмотря на то, что в последнее время возрос интерес к исследованию процессов морфогенеза тимуса, а также факторов, способствующих развитию иммунопатологии, изучение влияния СД I типа матери на морфофункциональные особенности тимуса плода не проводилось.

Цель исследования - изучить иммунофено-типические особенности лимфоидной популяции тимуса плодов с признаками ЗВРП от матерей, страдающих СД I типа.

Материалом исследования послужили 24 тимуса доношенных интранатально погибших плодов от матерей, страдающих СД I типа тяжелой степени, со склонностью к декомпенсации, выраженными сосудистыми и обменными нарушениями, длительностью заболевания более 20 лет. Группу контроля составили 18 тимусов доношенных интранатально погибших плодов от матерей, беременность у которых протекала физиологично (по данным медицинских карт развития беременности). Все плоды были со сроком гестации 34 - 37 недель и погибли интранатально, как следствие острого нарушения маточно - плацентарного кровообращения (преждевременная отслойка нормально расположенной плаценты), обвитие пуповины вокруг шеи и (или) туловища плода. Масса тела плодов от матерей с СД I типа в среднем по группе составила 2,168±0,32кг, масса тела плодов группы контроля 3,298±0,36кг.

Методы исследования.

Кусочки тимусов фиксировали в 10,0% нейтральном формалине, проводили по спиртам и заливали в целлоидин-парафин. После этого изготовляли серийные срезы, толщиной 5-6 мкм. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, а также использовали для иммуногистохимиче-ского исследования по непрямому методу Кунса в модификации М. Brosmann (1979). Иммунные клетки дифференцировали с помощью моно-клональных антител (МКА) к CD3, CD4+, CD7, CD38, CD8+, CD95, HLA-Dr (Novocastra Laboratories Ltd, UK), а также МКА ИКО-10 (антиген Thy-1). Интерлейкины (ИЛ) типировали с помощью монокпональных антител (МКА) к ИЛ-4, ИЛ-7. В качестве люминисцентной метки использовали Fab-2 - фрагменты кроличьих антител против иммуноглобулинов мыши, меченных ФИТЦ. Коллагены в стромальном и сосудистом компонентах тимуса типировали с использованием МКА к коллагенам I, III, IV типов. Уровень продукции тималина оценивался при обработке препаратов антисывороткой к тималину.

Изучение препаратов проводилось на микроскопе «Olympus Bx-41». Морфометрия выполнялась на серийных срезах, окрашенных гематоксилином и эозином с использованием программ «Olympus DP-Soft (Version 3:1)» и «Microsoft Excel». На срезах, обработанных МКА, на ограниченной, с помощью сетки Г.Г. Автандило-ва площади среза, определяли относительные объемы основных клонов иммунных клеток. Статистический анализ проведен с помощью стандартного пакета программ «Statgraphics».

Результаты и их обсуждение.

При обзорном микроскопическом исследовании препаратов, окрашенных гематоксилином -эозином, установлено, что тимусы плодов исследуемых групп были представлены дольками различной формы и размера, в которых четко определялись основные структурные компоненты железы: субкапсулярная зона, внутренняя зона коры и мозговое вещество. Граница между корковым и мозговым веществом четко определялась вследствие разницы в плотности клеточных элементов. Так, в коре плотность клеток была максимальной, в мозговом веществе - минимальной. Характерной особенностью мозгового вещества было наличие телец Гассаля.

Иммуногистохимическим методом выявлены особенности как качественного, так и количественного состава лимфоидной популяции тимусов обеих групп с учетом стадий созревания лимфоцитов. В субкапсулярной зоне коры, во внутренней зоне коры и мозговом веществе преобладали незрелые пре - Т - лимфоциты с антигенами к Thy - 1, а также тимоциты с высокой пролиферативной активностью CD38 и клетки различной степени зрелости CD7. Причем, в тимусах плодов от матерей с СД I типа отмечалось достоверное увеличение относительных

объемов вышеуказанных клонов лимфоидных клеток [табл. 1].

В коре и мозговом веществе диффузно располагались зрелые клетки с поверхностными рецепторами к CD4 - хелперы - индукторы. Под субкапсулярной зоной, а также очагово во внутренних зонах коры и мозгового вещества в виде узкой ленты располагались CD8 - супрессоры -цитостатические. Для мозгового вещества характерным было наличие зрелых форм CD3. Характерной особенностью лимфоидного компонента тимусов плодов с ЗВРП было снижение относительных объемов зрелых форм иммунных клеток по сравнению с таковыми в контрольных наблюдениях [табл. 1].

В мозговом веществе выявлялись клетки, экспрессирующие поверхностные рецепторы к ИЛ-4. Клетки - продуценты ИЛ-7 располагались преимущественно в коре. Как известно, ИЛ-7 усиливает пролиферативную активность тимо-цитов, а ИЛ-4 стимулирует их созревание [15]. В тимусах плодов от матерей с СД I типа отмечалось увеличение относительного объема клеток - продуцентов ИЛ-7 и снижение относительного объема клеток, экспрессирующих рецепторы к ИЛ-4 [табл. 1].

Показатель относительного объема клеток, экспрессирующих на своей поверхности HLA -DR антиген в исследуемых группах был различным: так, в группе сравнения отмечалось его увеличение [табл. 1].

С использованием CD95 оценена степень апоптоза тимусов обеих групп. В тимусах плодов с ЗВРП относительный объем апоптозно измененных клеток повышен по сравнению с таковым в группе контроля [табл. 1].

Таблица 1.

Относительные объемы основных клонов иммунных

клеток.

Группы сравнения Контроль СД гипотрофики

CD3 49,5±9,3% 30,0±2,0%*

CD4 64,0±11,0% 47,0±6,0%*

CD8 22,3±7,3% 16,0±2,0%*

CD7 72,4±14,6% 86,0±8,0%*

CD38 70,0±15,1% 88,0±7,0%*

Thy1 2,5±0,9% 9,0±0,94%*

HLA-Dr 1,5±0,6% 2,2±0,4%*

CD95 33,8±2,5% 38,6±3,9%*

ИЛ-7 3,1±0,97% 3,9±0,2%*

ИЛ-4 1,2±0,4% 0,9±0,05%*

р<0,05 по сравнению с группой контроля

Иммуногистохимическим методом выявлены особенности коллагенообразования в тимусах плодов исследуемых групп. В группе контроля в стромальном компоненте железы преобладали коллагены I и IV типов, что характерно для физиологической нормы [8]. Коллаген I типа относится к зрелым интерстициальным коллагенам [18]. Коллаген IV типа общепризнан какколлаген базальных мембран сосудов. В тимусе он является нормальным составляющим периваскуляр-ных пространств [19]. У плодов с ЗВРП отмеча-

лось преобладание молодого интерстициально-го коллагена III типа. Появление его выявлялось не только в строме, айв составе базальных мембран сосудов, а также в периваскулярных пространствах и в составе экстрацеллюлярного матрикса в мозговом и корковом веществе тимуса. Поскольку известно, что экстрацеллюляр-ный компонент тимуса, в состав которого и входит коллаген IV типа, стимулирует созревание лимфоидного компонента железы, дефицит данного коллагена в тимусах плодов с ЗВРП может быть одним из звеньев нарушении процессов созревания тимоцитов [19, 20].

При обработке препаратов тимусов плодов антисывороткой к тималину в тимусах плодов с ЗВРП отмечалась недостаточность тималин продуцирующей активности эпителиального компонента органа по сравнению с таковой в группе контроля [табл. 2].

Таблица 2.

Интенсивность свечения тималина.

р<0,05 по сравнению с группой контроля Выводы.

Лимфоидный компонент тимуса плодов от матерей, страдающих СД I типа, отличается незрелостью. Об этом свидетельствуют изменения показателей относительных объемов основных клонов иммунных клеток: преобладание в лимфоидной популяции незрелых форм и клеток, обладающих высокой пролиферативной активностью. Функциональная незрелость эпителиального компонента, основным проявлением которой является снижение тималин продуцирующей функции, способствует нарушению созревания лимфоидной популяции железы. Изменение интерлейкин-продуцирующей активности тимусов плодов с ЗВРП приводит к нарушению созревания тимоцитов и усилению степени выраженности апоптоза. Выявленные особенности коллагенообразования в тимусах плодов от матерей с СД I типа обуславливают нарушение созревания лимфоидного компонента железы.

Иммунофенотипические особенности лимфоидной популяции тимуса плодов от матерей, страдающих СД I типа, в дальнейшем онтогенезе могут проявляться развитием иммунопатологических состояний.

Литература

1. Алипов В.И., Потин В.В., Купцш Г.Д., Беркос A.C., Бородина В.Л. и др. Беременность и сахарный диабет // Вестник АМН СССР. -1989. - №5. - C.43-50.

2. Грязнова И.М., Второва В.Г., Себко Т.В. Сахарный диабет и перинатальная патология // Вопросы охраны материнства и детства. - 1989. - №9. - C.3-7.

3. Ивановская Т.Е., Зайратьянц О.В., Леонова Л.В., Волощук И.Н. Патология тимуса у детей. - СПб.: СОТИС, 1996. - 270с.

4. Кобозева Н.В., Гуркин Ю.А. Перинатальна ендокринолопя. - М.: Медицина. - 1986. - C.163-175.

Группа Интенсивность свечения тималина (мка)

Контроль плоды 5,98±0,03

СД I тип плоды с ЗВРП 2,78±0,02

BiCHHK Украгнсъког жедичног стожатологгчног акадежШ

10.

11.

12.

Кузнецова A.B., Рыбкина Н.Л. Диабетическая фетопатия: д1аг-ностика и возможности коррекции // Акушерство и гинекология. - 1996. - №1. - С.23-24.

Луцик О.Д. та ¡н. Пстолопя людини. - Льв1в: Мир. - 1992. - С. 193-197.

Маянский Д.Н., Кутина С.Н.. Актуальные патофизиологические аспекты изучения тимуса // Патофизиология и экспериментальная терапия. - 1980. - №3. - С.77-85.

Медведь B.I. Цукровий д1абет у ваптних: особливост1 проблеми в Украш1 // Ендокринолопя. - 2003. - Т. 8, №1. - С. 4-9. Ордынский В.Ф., Макаров О.В., Постникова H.A. Оценка состояния плода у беременных с сахарным диабетом по результатам допплерометрии артериального кровотока в системе мать -плацента - плод // Акушерство и гинекология. - 2005. - №2. -С.29-35.

Паньк1в B.I. Стан ендокринолопчноТ служби Украши та перспек-тиви розвитку медичноТ допомоги хворим з ендокринною пато-лог1ею // Здоров'я УкраТни. - №147. - Август, 200б. Павлова Т.В., Петрухин В.А., Терехова H.B. и др. Клинико -морфологические исследования при сахарном диабете у матери // Вестник. - 1998. - №1. - С.25-28.

Пасиешвили Л.М., Лысикова С.И., Тихонова T.M. Особенности течения беременности при сахарном диабете // Врачебная практика. - 1998. - №5. - С.35-37.

13.

14.

15.

16.

17.

18.

19.

Солун M.H. Сахарный диабет и беременность // Терапевтический архив. - 1992. - T.64, №3. - С.119-122. Солонец Н.И. Течение беременности, родов, состояние плода и новорожденного у больных сахарным диабетом // Материнство и детство. - 1992. - T.37, №4-5. - C.20-23.

Талаев В.Ю., Лебедева И.Е., Рубцова И.Е. и др. Пролиферация T-клеток и апоптоз мононуклеарных клеток пуповинной крови: связь с состоянием новорожденных, влияние интерлейкинов 2, 4, 7 и дексаметазона на эти параметры // Иммунология. - 2001. - №3. - С.29-35.

Труфакин В.А., Шурлыгина А.В. Проблемы гистофизиологии иммунной системы // Иммунология. - 2002. - №1. - C.4-7. Хлыстова 3.C., Хмелева С.П., Калинина И.И., Работникова Е.Л. и др. Карта заселения органов иммунной системы эмбриона и плода человека T- и В-лимфоцитами и начало эндокринной функции тимуса //Иммунология. - 2002. - №2. - С. 80-82. Savin W., Dalman S. Role of extracellular matrix - mediated Interaction In thymocyte migration // Dev. Immunol. - 2000. - №7. - P.279-291.

Utsumi K., Sawada M., Narumiya S., Nagamine J., Sakata T., Iwa-gami S., et. al. Adhesion of immature thymocytes to thymic stromal cells through fibronectin molecules and its significans for the induction of thymocyte differentiation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1991. - V.1, №88 (13). - 5685-5689.

Реферат

ОЗНАКАМИ ЗАТРИМКИ

1МУНОФЕНОТИП1ЧН1 ОСОБЛИВОСТ1 Л1МФ01ДН01 ПОПУЛЯЦИ ТИМУСУ ПЛОД1В ВНУТР1ШНЬОУТРОБНОГО РОЗВИТКУ В1Д МАТЕР1В 13 ЦУКРОВИМ Д1АБЕТОМ I ТИПУ

СорокЫа 1.В., Купр1яноваЛ.С.

Ключов1 слова: ваптнють, цукровий д1абет I типу (ЦД), плщ, затримка внутр1шньоутробного розвитку (ЗВУР), тимус, ¡мунопс-тох1м1я.

1мунопстох1мнним методом вивчеы ¡мунофенотипны особливост1 л1мфощноТ популяци тимусу пло-д1в з ознаками ЗВРП вщ матер^ ¡з цукровим дебетом I типу у пороняны ¡з тимусами плод1в вщ здоро-вих матер1в. Показано, щодля л1мфощного компонента тимусу плод1в вщ матер^, хворих на ЦД I типу характерною е незртють, що обумовлена порушенням процеав пролфераци, визр1вання та дифере-нц1ювання л1мфоцит1в. Це пов'язано ¡з особливостями будови еттел1ального компонента тимусу, порушенням колагеноутворення, а також змною ¡нтерлейш-продукувальноТ активное^ залоз плод1в з ознаками ЗВРП вщ матерв ¡з ЦД I типу. Вивчеы особливост1 л1мфощноТ популяци у подальшому онтогенез! можуть сприяти розвитку ¡мунопатолопчних стаыв.

УДК 616.131.-008.331.1.-074

К0МПЕНСАТ0РН1 МЕХАН13МИ ПРИ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬН0МУ Г0СТР0Г1П0КСИЧН0МУ НАБРЯКУ ЛЕГЕНЬ В УМ0ВАХ Л1КУВАЛЬН0Г0 ЗАСТ0СУВАННЯ 1НГ1Б1Т0Р1В АНГ10ТЕНЗИН-ПЕРЕТВ0РЮЮЧ0Г0 ФЕРМЕНТУ

Тюпка Т.1.

Нацюнальний фармацевтичний уыверситет, м. Харюв

В експеримент{ на щурах досл1джет стан газообмту та паттерн дихання при гострогток-сичному набряку легень без лжування та в умовах введення з лтувальною метою Ыг1б1тору ан-гютензинперетворюючого ферменту - енапу. Встановлено, що переби пергоду вгдновлення тсля впливу гтокси обтяжувався при лжувальному застосувант енапу, про що свгдчило значне збг-льшення споживання кисню у поргвнянш з нелжованими тваринами, яке призводило до перена-вантаження системи доставки кисню г розвитку альвеолярног гтовентиляцп.

Ключов1 слова: набряк легень, паттерн дихання, газообмЫ, ¡нпб1тори ангютензинперетворюючого ферменту.

В патогенез! набряку легень важпива роль на- прессин та ¡нш1 вазоактивы речовини, як1 приво-лежить надм1рному пщвищенню гщростатичного дять до пщвищення легенево-судинного отру [2,

тиску в систем! легеневоТ мкроциркуляци [1, 10]. Воно виникас не ттьки шляхом пасивноТ передачи в мале коло тих порушень гемодинамки, як1 виникають в периферичному русл1 До легеневоТ ппертензи також може призвести спазм легеневих артерм, який е вщповщною реакцию на альвеолярну ппокаю [2, 12]. Ця реакця являс собою складний процес, мед1аторами якого можуть бути серотонн, пстамЫ, простагландини, ангютензин, молочна кислота, брадикиын, вазо-

5, 6, 13]. На тонус судин малого кола впливае також альвеолярна пперкапыя \ ппоксем1я [2].

В сучасних дослщженнях серцево-судинноТ системи важливе мюце займас вивчення рол1 рен1 н-ангютензин-ал ьдостероновоТ систем и (РААС). В л1тератур1 наводяться даны щодо и активацп при системой г1пертонИ, а також доведена роль потужного вазоконстриктора анпотензина-11 у структурному ремоделюваны судин [3]. Нажаль, роль системи вазоактивних