CC BY
87
УДК Б18.11-00Б.Б:Б15.37
ИММУНОФЕНОТИП СИНДРОМА ВТОРИЧНОГО ИММУНОДЕФИЦИТА ПРИ РАКЕ ЯИЧНИКОВ
И.И. Антонеева, Т.В. Абакумова, Т.П. Генинг, О.С. Воронова, Д.Р. Долгова, С.О. Генинг,
ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет»
Антонеева Инна Ивановна - e-mail: [email protected]
Оценивали цитокиновый статус, метаболизм и экспрессию рецепторов нейтрофилов периферической крови, субпопуляционный состав и апоптоз лимфоцитов больных распространенным раком яичников. Установлено существенное изменение иммунного статуса у больных раком яичников на III—IV стадиях заболевания. При возрастании общего количества нейтрофилов периферической крови снижается их способность к завершенному фагоцитозу. На фоне снижения общего количества лимфоцитов, снижения относительного количества Т-лимфоцитов (CD3+) и их субпопуляции (CD4) имеет место возрастание уровня экспрессии на лимфоцитах активационных маркеров (CD25+, CD71+, CD95+) и HLA-DR. Также установлена повышенная чувствительность лимфоцитов больных раком яичников к апоптозу. Показано значимое увеличение в сыворотке крови уровня IL-ip, Б, 10, TNF-a и IFN-7. Полученные данные характеризуют иммунофенотип вторичного иммунодефицита при раке яичников.
Ключевые слова: нейтрофилы, NK-клетки, лимфоциты, цитокины, рак яичников, вторичный иммунодефицит.
Cytokine status, metabolism and receptor's expression of peripheral blood neutrophils and apoptosis of subpopulations of lymphocytes of patients with advanced ovarian cancer was assessed. Significant changes in the immune status of patients with ovarian cancer at stage III—IV disease were established. The neutrophil's ability to a complete phagocytosis decreases with an increase in the total number of peripheral blood neutrophils. There is an increase in the level of expression of activation markers on lymphocytes (CD25 +, CD71 +, CD95 +) and HLA-DR with the reduction in the total number of lymphocytes, the relative number of T lymphocytes (CD3 +) and their subsets (CD4). Also we installed increased sensitivity of lymphocytes of patients with ovarian cancer to apoptosis. A significant increase in serum levels of IL-ip, Б, 10, TNF-a and IFN-7 was showed. These data are characterize the immunophenotype of secondary immunodeficiency in ovarian cancer.
Key words: neutrophils, NK-cells, lymphocytes, cytokines, ovarian cancer, secondary immunodeficiency.
Рак развивается на фоне иммунодефицита и приводит к дальнейшей супрессии иммунной системы. Приобретенные формы иммунодефицитов (ВИД), развивающиеся на фоне онкопатологии, характеризуются не только количественными нарушениями компонентов адаптивного и врожденного иммунитета, но и изменением функций иммунокомпетентных клеток [1]. В связи с чем расшифровка иммунофенотипа синдрома ВИД может играть не только патогенетическую роль, но и иметь кли-
ническое значение при разработке терапевтических и реабилитационных мероприятий.
Целью исследования была оценка фенотипа синдрома вторичного иммунодефицита при раке яичников.
Исследовали субполяционный состав лимфоцитов (Лф) у 120 первичных больных раком яичников (РЯ) (III-IV клиническая стадия по FIGO) и 80 доноров с использованием моноклональных антител к молекулам CD3, CD4, CD8, CD16, CD25, CD71, CD95 и HLA-DR (ООО «Сорбент»,
IVh
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
Москва) методом непрямой иммунофлуоресценции. Для оценки спонтанного и индуцированного апоптоза лимфоцитов клетки, выделенных с интерфазы 1,007, культивировали в среде RPMJ-1640 (Flow) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 200 мгк/мл L - глутамина («Ligma»), 100 мкг/мл гентамицина, интерлейкина 2 (2074/ml) («Sigma») при t 370С в СО2 - инкубаторе (5% СО2) («Joan») в течение 1-8 суток, инкубировали с декса-метазоном (Дн) («Sigma») (10-6М), фитогеммаглютини-ном (ФГА) («Serva»), моноклональными антителами (мкАТ) к Fas-рецептору («Phar Mingen») и анти Fas-AT (1 мкг/мл) («Ortho»). Оценку апоптоза лимфоцитов осуществляли методом проточной цитофлуориметрии на приборе «Facscan» («Becton Dickcinson») по проценту клеток, обнаруживаемых в гиподиплоидной зоне гистограммы, где локализуются клетки, подвергшиеся апоптозу; изменению величины митохондриального потенциала (Дф); экспрессии фосфатидилсерина (ФС) и уровню экспрессии Fas-рецептора (CD95).
В нейтрофилах периферической крови (Нф) методом иммуноферментного анализа (МКА «Сорбент», Москва) оценивали экспрессию CD 11a, CD 11b, CD 15 и CD95. Цитохимически в Нф определяли уровень миелоперокси-дазы (МПО), содержание катионных белков (КБ), активность в НСТ-тесте и фагоцитарную активность. Концентрацию TNF-a, IL-1p, IL-6, IL-10 в сыворотке крови измеряли методом иммуноферментного анализа. Статистическую обработку данных проводили с использованием U-критерия Манна-Уитни и коэффициента корреляции Спирмена.
Было установлено, что у больных РЯ имеет место значимое снижение абсолютного количества Лфф (2,01+0,02 х109/л против 2,73+0,01 х109/л в контроле). При анализе экспрессии поверхностных маркеров Лф отмечается значимое снижение количества Т-Лф (CD 3) и их субпопуляции (CD 4) при тенденции к увеличению CD 8-клеток у больных РЯ по сравнению с контрольной группой (рис. 1).
Данные литературы относительно фенотипа Лф при злокачественных опухолях яичников достаточно противоречивы. Если авторы в большинстве своем указывают на лимфоцитопению и снижение CD 3 и CD 4, то относительно изменения количества CD 8+ и CD 16+-клеток единого мнения не существует, хотя количество именно Лф с этими дифференцировочными маркерами в существенной мере будет определять выбор иммунотерапии на различных стадиях опухолевого процесса.
Содержание CD 25 Лф, а также количество CD 71- и CD 95-Лф у больных РЯ на III-IV клинических стадиях заболевания был существенно и достоверно повышено по сравнению с контролем (рис. 2).
Количество Лф, несущих HLA-DR-маркеры, у больных РЯ характеризовалось волнообразными изменениями: существенно и достоверно возрастало на III клинической стадии с тем, чтобы на IV стадии снизиться практически до показателей контрольной группы.
Известно, что в норме HLA-DR экспрессируются на поверхности В-Лф и на активированных Т-Лф. Таким образом, увеличение количества HLA-DR клеток у больных РЯ может быть связано как с увеличением количества В-клеток, что не подтверждается данными литературы, так
и с активацией Т-Лф, что, по мнению ряда авторов [2], может быть связано с активным метастазированием на III клинической стадии заболевания.
С процессами развития и роста опухоли может быть связано и увеличение количества СЭ 25+-клеток [3,4]. Увеличение количества СЭ 71+ Лф периферической крови больных РЯ может свидетельствовать об активной пролиферации этих клеток иммунной системы [5].
Существует мнение, что ускользание опухоли от иммунного надзора происходит в том числе и потому, что опухолевая клетка приобретает способность индуцировать апоптоз в цитотоксических Лф [6].
Результаты оценки спонтанного и индуцированного апоптоза представлены на рис. 3.
Было установлено, что у Лф доноров снижение величины Дф и появление ФС на поверхности клеток происходит в первую очередь и практически одновременно. Упорядоченная фрагментация ДНК начинается несколько позже. Снижение Дф и уровня экспрессии ФС на поверхности Лф больных РЯ в указанные сроки инкубации были достоверно более выражены, по сравнению с Лф доноров, и нарастали при прогрессировании опухоли. Процесс упорядоченной фрагментации ДНК в этих Лф начинался раньше, чем в Лф доноров, усиливался в процессе опухолевой прогрессии и у больных в IV клинической стадии заболевания более чем в 3 раза превышал показатели для Лф доноров (рис. 3а, Ь, с).
Инкубация с Дн индуцировала в Лф выше перечисленные изменения. Однако, их динамика и степень выражен-
3
2,5
2
' 1,5
1
0,5
О
Sí
IIIL^
т Щ§ t
доноры 111 стадия IV стадия
Ш всего Лф £ CD3 & CD4 ® CD8
РИС. 1.
Количество Лф, несущих дифференцировочные маркеры, у больных РЯ.
РИС. 2.
Количество Лф (%), несущих активационные маркеры, у больных РЯ.
ности в Лф доноров и в Лф больных РЯ были различными. Было установлено, что снижение Дф при инкубации с Дн в Лф больных РЯ было существенно и достоверно более выражено, нежели в Лф здоровых женщин, и нарастало в динамике опухолевой прогрессии (рис. 3с1).
Выявлена четкая обратная зависимость между величиной Дф и уровнем экспрессии ФС. Показано, что Лф с нормальной величиной митохондриального потенциала практически не экспрессируют ФС на своей поверхности. Снижение Дф, как спонтанное, так и индуцированное Дн, предшествует появлению ФС на поверхности Лф (рис. 3е).
Дн также индуцирует фрагментацию ДНК Лф больных РЯ после 72 часов инкубации. В Лф доноров этот процесс
начинается несколько позже - после 96 часов инкубации. При этом количество клеток с упорядоченной фрагментацией ДНК среди Лф больных было достоверно выше по сравнению с Лф доноров только после 72 часовой инкубации (рис. 3^.
Инкубация Лф с индуктором апоптоза - ФГА вызвала более выраженные, нежели инкубация с Дн, изменения изучаемых параметров на всех сроках инкубации. При этом достоверно выше, по сравнению с донорами, в Лф больных РЯ было падение Дф, уровень экспрессии ФС и фрагментация ДНК (рис. 3).
Наличие на клеточной поверхности РаБ-рецепторов (Сй 95) данного семейства определяет готовность клетки к РаБ-
РИС. 3.
Динамика показателей Лф больных РЯ на Ш-1У клинических стадиях при спонтанном (рис. а, Ь, с) и индуцированном Дн (рис. d, е, /), ФНА (рис. д, И, 1) и анти-Рае (рис. к, I, т) апоптозе.
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
индуцированному апоптозу при контакте с соответствующим лигандом. Данные рецепторы являются важнейшим сигнальным путем запуска апоптоза такими различными факторами, как цитокины, свободные радикалы, гормоны, цитостатики, моноклональные антитела (анти-РаБ) и другие специфические лиганды [7].
В результате проведенных исследований было установлено, что экспрессия Сй 95 имела место на 66,5+11,2% клеток доноров и, соответственно, 74,1+10,9% - в III стадии и 75,0+13,7% - в IV клинической стадии заболевания. Изменения в ядре и клеточной мембране после инкубации Лф с анти-РаБ-АТ показали, что если для Лф доноров величины Дф, уровня экспрессии ФС и фрагментации ДНК достоверно не отличаются от таковых при инкубации без анти-РаБ-АТ, то для Лф больных РЯ указанные показатели достоверно выше и существенно превышают таковые как при «чистой инкубации», так и при инкубации с Дн и ФГА (рис. 3к, I, т).
Полученные результаты, видимо, могут свидетельствовать о повышенной чувствительности Лф больных РЯ к
апоптозу, нарастающей в динамике опухолевой прогрессии.
На сегодня в литературе нет единой точки зрения на роль 1\1К в контроле за ростом первичных и метастатических опухолей. Одни авторы полагают, что их роль сводится лишь к предупреждению появления опухолевых клеток, а на растущую опухоль они влияют слабо. Другие, исходя из того, что большинство опухолей человека являются спонтанными и низкоиммуногенными, а эффекторы системы естественного иммунитета распознают клетки любых опухолей, независимо от экспрессии специфических опухолевых антигенов, считают \К основным и универсальным механизмом защиты организма против опухолей различного происхождения [8]. При изучении количества Сй 16+ клеток у больных злокачественными новообразованиями различной локализации одни авторы отмечают их повышение на всех стадиях заболевания независимо от вида опухоли, другие не обнаруживают отличий со здоровыми [9]. В то же время при РЯ отмечено выраженное снижение канцеролитической и комплементарной активности сыворотки крови, обратно пропорциональное стадии заболевания. С другой стороны, данные эксперимента показывают, что быстро наступающий и прогрессирующий недостаток \К в течение развития ряда перевивных и спонтанных опухолей обусловлен не их исчезновением, а их инактивацией.
У больных РЯ было показано возрастание количества \К (Сй 16) (22,6+0,9% на III стадии и 19,0+0,7% на ^стадии против 16,2+0,4% в контроле).
В свете вышеизложенного наблюдаемое в нашем исследовании повышение \К (Сй 16+) может свидетельствовать в пользу селекции \К-резистентных вариантов опухолевых клеток. При этом неоплазма в процессе опухолевой прогрессии может приобретать новые антигены, экспрессия которых ассоциируется с уменьшением или полной утратой цитотоксичности \К к этим клеткам. Опухолевые клетки также сами могут синтезировать факторы, ингибирующие активность \К путем блокирования рецепторов на эффекторной клетке [10].
При сохранении общего количества лейкоцитов периферической крови у больных РЯ значимо повышается
количество Нф (4,1+0,1 х109/л и 4,9+0,1 х109/л соответственно против 3,7+0,1 х109/л в контроле). При этом фагоцитарный индекс и фагоцитарное число изменялись в пределах коридора нормы, но значимо возрастал абсолютный фагоцитарный индекс (АФИ), отражающий абсолютное число фагоцитирующих клеток в 1 л крови (3,1+0,2 х109/л и 3,6+0,1 х109/л соответственно против 2,8+0,2 х109/л в контроле). Это может свидетельствовать о способности организма на определенных этапах опухолевой прогрессии усиливать ослабленные механизмы фагоцитарных реакций путем увеличения абсолютного количества потенциальных фагоцитов в 1 л крови.
При оценке метаболизма Нф установлено, что у больных РЯ, но без признаков инфекционного процесса, значимо не изменяется число клеток, активных как в спонтанном, так и в индуцированном НСТ-тесте.
ТАБЛИЦА 1.
Динамика экспрессии дифференцировочных и активационных маркеров Нф периферической крови на поздних стадиях РЯ
0011а, % СР11Ь, % СР15, %
доноры 60,9+2,9 64,0+3,0 61,8+3,7
III стадия 48,0+12,2 63,5+3,1 46,0+11,5
IV стадия 71,2±4,2 60,7+6,5 37,0+5,6*
Примечание: * - данные, статистически значимо отличающиеся от контроля.
Описанные изменения окислительного метаболизма Нф при развитии неоплазмы дают представление об изменении способности этих клеток осуществлять кислородзави-симую цитотоксичность. Установлено, что киллерный эффект Нф обусловлен также секрецией миелопероксида-зы (МПО), которая с Н2О2 в сочетании с внеклеточными галогенидами образует реакционноспособные оксиданты, повреждающие клетки-мишени. Нами установлено, что активность МПО в Нф больных РЯ снижена (1,44+0,07 СЦК и 1,30+0,04 СЦК соответственно против 2,03+0,01 СЦК соответственно).
Существующая на сегодня информация о том, что эффективность убивания бактерий в аэробных и анаэробных условиях существенно не различается, позволяет предполагать существование независимых от кислорода бактерицидных механизмов. Показано, что ферменты первичных гранул Нф ответственны за переваривание того, что Нф уже поглотил. Убивание же производится, помимо оксидантов, веществами, содержащимися в гранулах, в том числе КБ.
Нами установлено, что уровень КБ в Нф периферической крови больных РЯ статистически значимо снижен (1,52+0,04 СЦК и соответственно 1,23+0,12 СЦК против 1,73+0,06 СЦК в контроле).
В процессе опухолевой прогрессии наблюдалось снижение количества Нф, экспрессирующих дифференциро-вочный маркер Сй15. Динамика Сй11а+ и Сй11Ь+клеток была разнонаправленной, а изменения, по сравнению с показателями у доноров, статистически не значимыми (таблица 1).
Наблюдаемые изменения рецепторного статуса и функционального состояния Нф на поздних стадиях РЯ могут рассматриваться как проявление системного действия опухоли на организм.
Нарушение баланса в системе цитокинов рассматривается как важный механизм развития многих патологических процессов. При этом крайне сложно определить, является ли возникновение и развитие патологического процесса причиной или следствием нарушения этого баланса. При злокачественном росте с цитокинами взаимодействуют две системы: неоплазма - цитокины и иммунная система - цитокины [11]. При этом опухолевые клетки могут как экспрессировать соответствующие рецепторы, так и продуцировать цитокины. IL-1 является медиатором как местного, так и дистантного действия на разные ткани и обладает широким спектром биологической активности. В опухолевом процессе большую роль играет IL-1ß. Фактор некроза опухоли (TNF-a) получил название по основному биологическому эффекту-лизису опухолевых клеток. Продуцировать TNF-a способны многие опухолевые клетки, в том числе и клетки рака яичников. При росте опухоли уровень содержания TNF-a в крови может повышаться как за счет его продукции опухолевыми клетками, так и в результате усиленного выделения макрофагами [12]. Интерфероны (IFN) представляют одну из самых быстро реагирующих систем иммунологической защиты. Точный механизм их противоопухолевого действия не известен. Предполагается прямое и непрямое противоопухолевое действие IFN. IL-6 является мощным провоспалительным цитокином, как и IL-1 и TNF, но продуцируется несколько позже последних, ингибируя их образование. Известно, что IL-6 стимулирует рост ряда экспериментальных опухолей: рака шейки матки, почки, толстой кишки, молочной и предстательной желёз. Имеющиеся литературные данные указывают, что при большинстве злокачественных новообразований выявляется увеличение уровня экспрессии IL-6, что сопровождается неблагоприятным клиническим течением заболевания. IL -10 - противовоспалительный цито-кин, подавляет продукцию всех провоспалительных цитокинов, интерферонов, пролиферативный ответ Т-клеток на антигены, способствует развитию гуморальной составляющей иммунного ответа. Повышение является плохим прогностическим признаком при онкопатологии. В последнее время появились данные о том, что эффект IL-10 в отношении опухолевого роста не столь однозначен: так, показано ингибирующее действие IL-10 - продуцирующих опухолевых клеток человека у иммуносупрессивных мышей. Предполагается, что эффект зависит от состояния иммунокомпетентных клеток.
В результате проведенных исследований установлено существенное и достоверное повышение уровня IL-1ß, 6,10, IFN-7 и TNF-a у больных РЯ по сравнению со здоровыми (таблица 2).
Изменения уровня TNF-a и IFN-7 обнаруживали прямую положительную корреляцию со стадией заболевания (r=0,700 и r=0,120 соответственно). Источником данных провоспалительных цитокинов, видимо, могут быть как сами опухолевые клетки, так и клетки-эффекторы, круг которых расширяется по мере прогрессирования опухоли, так как организм все в большей степени использует воспалительный тип ответа на новообразование. Кроме того, прирост концентрации, в частности TNF-a, может обеспечиваться, по мнению ряда авторов [12], двумя аддитивными механизмами: селекцией клеток, резистентных к цито-
токсическому действию Т\Р-а, и тем, что экспрессируемые опухолевыми клетками антигены также индуцируют повышенную продукцию Т\Р-а. При этом ограничение чувствительности рецепторов опухолевых клеток к регуляторным молекулам также предопределяет прирост концентрации цитокинов и их выраженное побочное влияние на рецепторы нормальных клеток.
ТАБЛИЦА 2.
Уровень цитокинов у больных РЯ на различных клинических стадиях заболевания
Группы Показатели контроль III стадия IV стадия
N=48 N=40 N=40
IL-1 ß 36,8+10,74 248,5+9,00* 230,9+15,04*
TNF-a 31,0+2,82 104,8+9,90*' 93,8+9,96*'
IFN-7 44,0+7,67 120,9+10,33*' 114,4+15,17*
IL-6 7,66+2,28 34,38+9,74* 14,81+7,21'
IL-10 0,44+0,04 8,07+2,73* 10,68+5,53*
Примечание: данные статистически значимо отличаются от аналогичных: *- в контроле; от соответствующих показателей на предыдущей клинической стадии заболевания.
Заключение
При распространенных стадиях РЯ отсутствует обеднение периферической крови субпопуляциями цитотоксиче-ских клеток, в первую очередь \К.
Опухолевая ткань может распознаваться и уничтожаться субпопуляцией Т-Лф - цитотоксическими Сй8+-клетками. Процесс Т-зависимого киллинга становится значимым на стадиях интенсивного опухолевого роста, когда оказывается недостаточным совокупный цитотоксический потенциал. Такой киллинг может играть существенную роль в противоопухолевом иммунитете, однако при распространенных стадиях РЯ субпопуляция Сй8+ клеток оказывается на уровне доноров.
Одним из путей истощения пула активных Т-клеток является нарушение их кооперативных взаимодействий с клетками моноцитарно-макрофагального ростка, связанного с недостаточностью экспрессии Н1_А-молекул. Последнее может приводить к снижению функции Т-Лф и ослаблению эффекторных реакций клеточного иммунитета. Характерным для больных РЯ на Ш-М стадии заболевания является сокращение субпопуляции общих Сй3-Лф и регуляторных Лф с фенотипом Сй4+ (клетки-хелперы). Дефицит Сй4, сопряженных с тенденцией к росту Сй8+ может являться одной из основных причин неэффективности противоопухолевого надзора за прогрессией РЯ.
Установлено, что опухолевый очаг при РЯ имеет выраженную лимфоплазмоклеточную инфильтрацию [14] Нф, при этом в инфильтрате обнаруживаются стромы и паренхимы. Возможно, это связано с секрецией клетками опухоли цитокинов, провоцирующих миграцию Сй15+Нф в опухолевый очаг, где возможны вторичные воспалительные реакции. В результате проведенных исследований нами установлено увеличение общего количества Нф периферической крови при распространенных стадиях РЯ при одновременном снижении их цитотоксичности. Последнее, на фоне возрастание ФЧ, может свидетельствовать о снижении способности Нф к завершенному фагоцитозу.
Одним из факторов развитие Т-клеточных дисфункций у онкологических больных может быть повышенная готов-
IVh
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
ность лимфоидных клеток к индукции апоптоза. Снижение Сй4+-клеток уже косвенно свидетельствует об усилении протопатической активности Т-Лф [15] при РЯ. В пользу последнего свидетельствует и повышенное по сравнению с показателями в контрольной группе содержание в крови Сй95+-Лф. О повышенной чувствительности к апоптозу Лф больных РЯ свидетельствуют также установленные нами факты снижения Дф и увеличение числа Лф с фрагментированной ДНК.
Таким образом, при распространенных стадиях РЯ имеет место опухоль-ассоциированная иммунопатология, определяющая феномен ВИД. Дальнейшее изучение субпопу-ляционного спектра периферической крови представляет интерес с точки зрения разработки новых иммуногеноте-рапевтических методов лечения и протоколов иммунореабилитации больных с РЯ.
Работа поддержана грантом ФЦП «Научные и научнопедагогические кадры инновационной России» на 20092013 гг. и гос. заданием Минобрнауки России.
ЛИТЕРАТУРА
1. Хаитов Р.Н., Пинегин Б.В., Истаматов Х.Н. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии. Иммунология. 2001. № 4. С. 4.
2. Олейник Е.К., Шибаев М.И., Олейник В.М. Маркеры активации лимфоцитов крови (CD25, CD71, CD95, HLA-DR) у онкологических больных. Гематол. и трансфузиол. 2006. Т. 51. № 1. С. 18-22.
3. Sasada T., Kimura М., Yoshida Y. et al. CD4+CD25+ regulatory T cells in patients with gastrointestinal malignancies: possible involvement of regulatory T cells in disease progression. Cancer. 2003. Vol. 98 (5). P. 1089-1099.
4. Wang X., Xu S., Zhou Х. et al. Clinical significance of examining IL-2R in peripheral blood lymphocytes of patients with gastric cancer. Chin Med J (Engl). 2001. № 12. Р. 1320-1322.
5. Ugurel S., Uhlig D., Tilgen W. et al. Down-regulation of HLA class II and costimulatory CD86/B7-2 on circulating monocytes from melanoma patients. Cancer Immunol Immunother. 2004. № 6. Р. 551-559.
6. Дейчман Г.И. Естественный отбор и ранние изменения фенотипа опухолевых клеток in vivo: приобретение новых механизмов защиты. Биохимия. 2000. Т. 65. № 1. С. 92-111.
7. Рахлин Н.Т., Рахлин А.Н. Регуляция и проявления апоптоза в физиологических условиях и в опухолях. Вопр. онкол. 2002. Т. 48. № 2. С. 159-171.
8. Черствой Е.Д., Портянко А.С. К вопросу об иммунной ответе при опухолях. Здравоохранение. 2000. № 10. С. 32-34.
9. Лаврова В.С., Чердынцева Н.В. Нейтрофилы и злокачественный рост. Томск. 1992. 124 с.
10. Keong A., Herman J., Rabson A.R. Supernatant derived from a human hepatocellular carcinoma cell line (PLC/PRF/5) depresses natural killer (NK) cell activity. Cancer Immunol Immunother. 1983. Vol. 15 (3). P. 183-187.
11. Бережная Н.М., Чехун В.Ф. Система интерлейкинов и рак (новые аспекты взаимодействия опухоли и организма). Киев: ДИА, 2000. 224 с.
12. Рыдловская А.В., Симбирцев А.С. Функциональный полиморфизм гена TNF-a. и патология. Цитокины и воспаление. 2005. № 3. С. 28-32.
13. Антонов В.Г., Козлов В.К. Патогенез онкологических заболеваний: иммунные и биохимические феномены и механизмы. Внеклеточные и клеточные механизмы общей иммун6одепрессии и иммунной резистентности. Цитокины и воспаление. 2004. № 1. С. 8-19.
14. Антонеева И.И., Генинг Т.П., Абакумова Т.В. Лимфоплазмоклеточная инфильтрация первичной опухоли и нейтрофильные лейкоциты асцитической жидкости на поздних стадиях рака яичников. Материалы научной конференции с международным участием, посвященной 120-летию кафедры нормальной физиологии СибГМУ (ТМИ) и кафедры физиологии ТГУ «Нейрогуморальные механизмы регуляции висцеральных органов и систем в норме и при патологии». Томск. 2009. С. 115-117.
15. Чумаков В.А., Пронина О.А., Качков И.А. Особенности субпопуляцион-
ной архитектоники периферической крови у больных с глиобластами: патогенетическая и клиническая оценка. Медицинская иммунология. 2006. Т. 8. № 1. С. 37-50. ид
