CC BY
1318. Топтыгина А.П., Метельская В.А., Воропаева Е.А. и др. Изменение в цитокиновом профиле сыворотки крови и слюны детей при остром и хроническом бронхите. Российский иммунологический журнал. 2011, 5 (14; 2): 145-149.
19. Хаитов Р.М. Физиология иммунной системы. М., ВИНИТИ РАН, 2001.
20. Pioli P.A., Amiel E., Schaefer T. M. et al. Differential expression of toll-like receptors 2 and 4 in tissues of the human female reproductive tract. Infect. Immun. 2004, 72 (1): 5799-5806.
Поступила 20.01.14
Контактная информация: Алешкин В.А., 125212, Москва, ул. адмирала Макарова, 10
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014
А.В.Карсонова1,3, А.Е.Шульженко2,3, А.В.Караулов1
ИММУНОДИАГНОСТИКА НАРУШЕНИЙ В СИСТЕМЕ ИФН^/Ш-КЛЕТКА У ПАЦИЕНТОВ С ЧАСТО РЕЦИДИВИРУЮЩИМ ПРОСТЫМ ГЕРПЕСОМ
1Первый Московский медицинский университет им. И.М.Сеченова, 2Московский государственный медицинский стоматологический университет им. А.И.Евдокимова, 3ГНЦ Институт иммунологии, Москва
Цель. Изучение особенностей ответа NK-клеток на действие рекомбинантного ИФН-а в комплексе с оценкой способности к синтезу собственного ИФН-а у больных часто рецидивирующим простым герпесом (ЧРПГ). Материалы и методы. Под наблюдением находились 48 пациентов с диагнозом ЧРПГ генитальной (n=31), лабиальной (n=10) и смешанной локализации (n=7). Контрольную группу составил 31 здоровый донор. МНК культивировали в присутствии рекомбинантного человеческого ИФН^2Ь в концентрации 10, 100 и 1000 Ед/мл в течение 24 ч. Через 24 ч ответ NK-клеток на действие ИФН-а оценивали с помощью проточной цитометрии по реакции дегрануляции и в тесте на NK-активность. Синтез ИФН-а оценивали в супернатан-тах клеток, стимулированных ВПГ-1, ВПГ-2 и вирусом болезни Ньюкасла, методом ИФА. Результаты. Установлено, что пациенты с ЧРПГ являются гетерогенной группой по показателям в системе ИФН-а/ цитотоксичность NK-клеток. Идентифицировано два типа ответа NK-клеток на стимуляцию рекомбинантным ИФН-а. Тип А характеризуется снижением ответа NK-клеток на ИФН-а в фазу ремиссии и не имеет такого дефекта в фазу обострения. Синтез собственного ИФН-а в ответ на вирусные индукторы при типе А сопоставим с таковым у здоровых доноров в обе фазы. Напротив, тип В, имея нормальную чувствительность NK-клеток к ИФН-а в фазу ремиссии, характеризуется падением данного показателя в фазу обострения, более чем в 3 раза. Синтез собственного ИФН-а в ответ на вирусные индукторы при типе В повышен в фазу ремиссии и снижен в фазу обострения. Заключение. При проведении иммунокорригирующей терапии при ЧРПГ необходим персонализированный подход с учетом особенностей ответа NK-клеток на ИФН-а, поскольку типы А и В имеют принципиальные отличия по параметрам цитотоксич-ности NK-клеток и их изменению под влиянием ИФН-а, а также по показателям синтеза ИФН-а в ответ на вирусные индукторы в различные фазы клинического процесса.
Журн. микробиол., 2014, № 3, С. 27—34
Ключевые слова: рецидивирующий простой герпес, иммунокорригирующая терапия, ИФН-а, NK-клетки
A.V.Karsonova1,3, A.E.Shulzhenko2,3, A.V.Karaulov1
IMMUNE DIAGNOSTICS OF DISORDERS IN THE IFN-A/NK-CELL SYSTEM IN PATIENTS WITH FREQUENTLY RECURRENT HERPES SIMPLEX
1Sechenov First Moscow Medical University, 2Evdokimov Moscow State Medical Stomatological University, 3State Scientific Centre Institute of Immunology, Moscow, Russia
Aim. Study of features of NK-cell response to the effect of recombinant IFN-а in complex with evaluation of the ability to synthesize inherent IFN-а in patients with frequently recurrent herpes simplex (FRHS). Materials and methods. 48 patients with genital (n=31), labial (n=10) and mixed
localization (n=7) FRHS diagnosis were observed. 31 healthy donors composed the control group. MC were cultivated in the presence of a recombinant human IFN-a2b at the concentration of10, 100 and 1000 U/ml for 24 hours. NK-cell response to the effect of IFN-a was evaluated after 24 hours using flow cytometry by degranulation reaction and in the NK-activity test. IFN-a synthesis was evaluated in HSV-1, HSV-2 and Newcastle disease virus stimulated cell supernatants by EIA method. Results. Patients with FRHS were established to be a heterogeneous group by parameters in the IFN-a/NK-cell cytotoxicity system. 2 types of NK-cell response to the stimulation by recombinant IFN-a were identified. Type A is characterized by a decrease of NK-cell response to IFN-a in the remission phase and does not have this defect in the exacerbation phase. Synthesis of inherent IFN-a in response to viral inductors for type A was comparable with the response in healthy donors in both phases. On the contrary type B having normal sensitivity of NK-cells to IFN-a in the remission phase is characterized by a decrease of this parameter in the exacerbation phase for more than 3 times. Synthesis of inherent IFN-a in response to viral inductors during type B is increased in the remission phase and decreased in the exacerbation phase. Conclusion. During immune-correcting therapy of FRHS a personalized approach taking into account features of NK-cell response to IFN-a is necessary, because types A and B have principal differences by cytotoxicity parameters of NK-cells and their change under the effect ofIFN-a, as well as by parameters of IFN-a synthesis in response to viral inductors at various phases of the clinical process.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2014, No. 3, P. 27—34
Key words: frequently recurring herpes simplex, immune-correcting therapy, IFN-a, NK-cells ВВЕДЕНИЕ
Согласно клиническим рекомендациям стандартом фармакотерапии пациентов с ЧРПГ является эпизодическая или супрессивная терапия ациклическими нуклео-зидами, высокая эффективность которых в терапии различных форм герпесвирус-ных инфекций (ГВИ) доказана многочисленными исследованиями. Однако монотерапия противовирусными препаратами зачастую не позволяет добиться контроля над инфекцией. Частые рецидивы ГВИ, вторичный иммунодефицит, развивающийся вследствие длительной персистенции вируса, определяют необходимость патогенетического лечения, направленного на коррекцию дефектов иммунного ответа. На сегодняшний день имеется широкий спектр препаратов иммуномодулирующей направленности, список которых постоянно пополняется новыми препаратами. В последнее время широко применяются препараты рекомбинантного ИФН-a и индукторы ИФН-a как с лечебной, так и с профилактической целью. Огромное количество публикаций посвящено применению препаратов данной группы в комплексной терапии ЧРПГ [1, 2, 6, 7]. Однако именно назначение иммуномодулирующей терапии является наиболее сложным вопросом в терапии ЧРПГ. Этому способствует несовершенство современных подходов к методологии назначения иммунокор-ригирующей терапии, которая сегодня очень часто назначается эмпирически и провоцируется отсутствием иммунодиагностического комплекса, позволяющего оценивать вариабельность чувствительности пациента к этим препаратам в динамике клинического процесса, предусматривать индивидуальный подход к назначению иммуномодуляторов, оценивать индивидуальный характер выраженности вторичного иммунодефицита и его динамику на фоне назначенной иммунокорри-гирующей терапии.
Интерфероны I типа являются ключевыми факторами естественной противовирусной резистентности, обладая как прямым противовирусным, так и иммуномоду-лирующим действием. В частности, ИФН-a является важнейшим активатором ци-тотоксичности NK-клеток. Одними из основных эффекторных клеток, противодействующих репликации вируса простого герпеса (ВПГ) в организме, являются NK-клетки. При ЧРПГ описано снижение продукции ИФН-a [3, 8 — 10]. Однако до сих пор трудно объяснить наблюдаемые в клинической практике расхождения между высокой продукцией ИФН-a и тяжелым течением ЧРПГ, остаются неясными при-
чины неодинаковой эффективности применения препаратов рекомбинантного интерферона и индукторов ИФН у пациентов с ЧРПГ.
На данный момент становится очевидным, что при выборе вектора иммунокор-рекции необходим персонализированный подход с учетом чувствительности целевого показателя иммунной системы пациента к потенциальному лечебному воздействию.
Целью данной работы стало изучении влияния рекомбинантного ИФН-а на функциональную активность NK-клеток в комплексе с оценкой способности к синтезу собственного ИФН-а у пациентов с ЧРПГ для выявления возможных вариантов иммунологических нарушений в системе ИФН-а/КК-клетка.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Под наблюдением находились 48 пациентов (9 мужчин, 39 женщин) в возрасте 29 — 63 лет с верифицированным диагнозом ЧРПГ. В исследование были включены пациенты с генитальной (п=31), лабиальной (п=10) и смешанной локализацией процесса (п=7). Длительность заболевания у 40 пациентов составляла более 5 лет, у 8 чел. — от 2 до 4 лет. Частота обострений на момент обследования была 6 и более раз в год. В стадию обострения (в пределах 48 ч с момента появления высыпаний) обследованы 35 человек; из них 18 обследованы также в стадию ремиссии (более 2 недель с момента появления высыпаний); 13 человек обследованы только в стадию ремиссии. Контрольную группу составил 31 здоровый донор в возрасте 22 — 57 лет (13 мужчин и 19 женщин). Критериями включения в группу контроля являлось отсутствие острых и хронических инфекционных и воспалительных заболеваний, в том числе ВПГ, в течение минимум 1 месяца до момента взятия крови. От всех исследуемых получали по 15 мл венозной гепаринизированной крови.
МНК выделяли из венозной крови на градиенте плотности фиколл-урографина, отмывали средой 199 и ресуспендировали в полной культуральной среде (ПКС): RPMI с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки и 2 мМ L-глутамина (Панэко, Россия). МНК культивировали в полипропиленовых пробирках (2х106/мл/пробирку) в присутствии рекомбинантного человеческого ИФН-а2Ь (Invitrogen, Великобритания) в концентрации 10, 100 и 1000 Ед/мл в течение 24 ч в СО2-инкубаторе (5% СО2, 37°С). Контрольные клетки культивировали без ИФН-а. Через 24 ч МНК отмывали и ресуспендировали в ПКС для исследования дегрануляции КК-клеток и КК-активности.
Дегрануляцию КК-клеток, культивированных 24 ч с ИФН-а или без него, оценивали с помощью проточной цитометрии по экстернализации маркера CD107a. Использовали методику [4] с некоторыми изменениями: 1) вместо FITC-меченных моноклональных антител к CD107a использовали РС5-меченные (BD РИагш^еп, США); 2) поскольку метка РС5 нечувствительна к рН, то моненсин, использованный ранее для ингибирования закисления эндосом [4, 5], не добавляли. В качестве индуктора дегрануляции использовали клетки К562 (соотношение МНК:К562=1:1). Результаты представляли как процент CD107a+ КК-клеток по отношению ко всем CD3-CD56+ КК-клеткам после инкубации без индукторов дегрануляции и с клетками К562. Рассчитывали следующие параметры: дегрануляция КК-клеток = (% CD107a+ КК-клеток в присутствии клеток К562) — (% CD107a+ КК-клеток в отсутствии индукторов дегрануляции) при данной концентрации ИФН-а.
КК-активность МНК, культивированных 24 ч с различными концентрациями ИФН-а, исследовали методом проточной цитометрии по киллингу клеток-мишеней К562, меченных CFSE (5-,6-карбоксифлуоресцеиндиацетат-сукцинимидиловым эфиром) [4]. Использовали соотношение эффектор:мишень, равное 50:1. КК-активность х 100% была равна (% погибших мишеней в опыте — % спонтанной гибели) : (100% — % спонтанной гибели).
Синтез ИФН-а оценивали по способности мононуклеарных клеток крови синте-
зировать ИФН-а in vitro в ответ на суточное культивирование в присутсвии таких индукторов ИФН, как ВПГ-1, ВПГ-2 и вирус болезни Ньюкасла (ВБН). Оценивали уровень ИФН-а в супернатантах стимулированных клеток (ИФА, «Цитокин», Санкт-Петербург).
Данные представляли как медиану (10 — 90 процентиль), кроме случаев, отмеченных отдельно. Статистическую обработку данных проводили с помощью программы SPSS 11.5 для Windows. Для оценки достоверности различий между двумя группами использовали критерий Манна-Уитни (U-тест).
РЕЗУЛ ЬТАТЫ
По данным нашего исследования процент NK-клеток, дегранулирующих в присутствии клеток-мишеней К562 (% CD107a+CD3-CD56+ клеток), снижается с возрастом, причем снижение анализируемого показателя у здоровых людей начинается уже после 35 лет. Суточная стимуляция in vitro рекомбинантным ИФН-а в трех различных концентрациях приводила к дозозависимому увеличению процента деграну-лирующих NK-клеток в среднем примерно на 20% (19,3±1,1%). Однако каждый из ИФН-стимулированных показателей, также как и исходный, снижался после 35 лет. Необходимо отметить, что данное снижение является скорее относительным, поскольку влияние ИФН-а в нашем исследовании выражалось в виде 20% увеличения процента дегранулирующих NK-клеток в независимости от исходного (снижен или нормален). Другими словами, ответ на цитокин в абсолютных цифрах с возрастом не меняется, с возрастом падает исходный показатель, а следовательно, и ИФН-стимулированный показатель в итоге оказывается низким.
Учитывая выявленную у здоровых доноров зависимость исходного процента де-гранулирующих NK-клеток от возраста и зависимость ИФН-стимулированных показателей от исходных нестимуированных показателей, для корректной оценки влияния суточной стимуляции рекомбинантным ИФН-а in vitro на дегрануляцию NK-клеток у пациентов с ЧРПГ мы разделили группу пациентов по медиане возраста (44 года) на две возрастные группы: «молодые» (<44) и «пожилые» ( >45) (далее — молодые и пожилые). Самый высокий процент NK-клеток, дегранулирующих в присутствии К562 (% CD107a+CD3-CD56+ клеток) оказался в группе молодых доноров. Медиана данного показателя составили 22,2. В остальных анализируемых подгруппах данный показатель был достоверно вдвое снижен по сравнению с молодыми донорами. Так, медиана в группе молодых пациентов с ЧРПГ составила 11,1 и 11,4 в обострение и в ремиссию соответственно; в группе пожилых с ЧРПГ — 11,3 и 11,6 в обострение и в ремиссию соответственно; в группе пожилых доноров 11,2. Суточная стимуляция рекомбинантным ИФН-а in vitro в трех используемых концентрациях приводила к дозозависимому увеличению процента NK-клеток, дегранулирующих в присутствии клеток-мишеней К562 (% CD107a+CD3-CD56+ клеток). Как и в случае со здоровыми донорами, в группе пациентов с ЧРПГ показатель увеличивался в целом по группе также на 20% (в группе молодых доноров дегрануляция увеличилась с 22,2 до 43%; в группе пожилых доноров — с 11,2 до 31,4%; в группе молодых пациентов с ЧРПГ — с 11,1 — 11,4 до 33,3 — 28,4% в фазы обострения / ремиссии соответственно; в группе пожилых пациентов с 11,3 — 11,6 до 28,9 — 29,4% в фазы обострения/ремиссии соответственно).
Оценивая кривые зависимости процента дегранулирующих NK-клеток от стимулирующей концентрации ИФН-а, мы обратили внимание, что у части пациентов форма данной кривой имеет тенденцию к раннему выходу на плато после концентрации в 10 Ед/мл. Другими словами, у части пациентов дальнейшее увеличение стимулирующей концентрации ИФН-а от 10 до 100 Ед/мл не вызывало дальнейшего увеличения процента дегранулирующих NK-клеток. В связи с вышесказанным, мы ввели понятие прирост 1000 — 10 как разницу показателей процента дегранулирующих NK-клеток под влиянием максимальной и минимальной из используемых концен-
Таблица 1. Влияние ИФН-а на дегрануляцию NK-клеток пациентов с ЧРПГ
Показатели ИФН-а, Тип А Тип В Доноры
Ед/мл
обострение ремиссия обострение ремиссия
Дегрануляция 0 11,3 11,5 6,4 11,4 13,8
(% CD107a+ (6—24,6) (6,3—24,6) (2,6—29,5) (3,1—26,7) (4,3—29,6)
CD3-CD56+) 10 21,4 20,3 12,7 21,1 26,6
(12,8—38,1) (11,8—38,9) (7,7—40,8) (7,6—47,4) (7,9—46,4)
100 26,5 27,5 15,1* 23,1 31,8
(16,4—44,3) (16,9—44,4) (9,3—44,4) (7,8—50,6) (12,5—50,1)
1000 30,2 32,1 15,6* 23,9 33
(18,9—44,9) (19,8—49,9) (8,7—44,6) (10,7—51,2) (15,3—56,7)
Итоговый прирост 8,2 9,8 2,6* 2,9* 8,5
от 10 до 1000, % (4,6—14,1) (5,3—13,4) (1,0—3,9) (2,3—3,9) (3,5—12,9)
Примечание. * р<0,001 по сравнению с группой доноров и с группой А (тест Манна-Уитни); показаны медианы (10 — 90 процентиль).
траций. Показатель прироста сильно варьировал. Пациентов, имеющих такие низкие цифры по данному показателю, которые не встречаются в группе доноров <44 лет, мы объединили в отдельную подгруппу, обозначив ее подгруппа В (тип ответа В). Остальных пациентов с ответом на цитокин как у доноров мы объединили в подгруппу А (тип ответа А). Подгруппы А и В имеют достоверные отличия по показателю прироста (табл. 1).
В нашем исследовании при анализе исходных нестимулированных показателей NK-активности группа пациентов с ЧРПГ ни в фазу обострения, ни в фазу ремиссии не отличалась от здоровых доноров. Суточная стимуляции ИФН-а мононуклеарных клеток пациентов приводила к увеличению цитотоксичности NK-клеток, однако в фазу ремиссии каждый из ИФН-стимулированных показателей у пациентов с ЧРПГ был достоверно ниже, чем аналогичный показатель при соответствующей концентрации у здоровых доноров, причем данное явление отмечалось при всех трех используемых концентрациях(10, 100 и 1000 Ед). В фазе обострения статистически значимых различий по влиянию ИФН-а на цитотоксичность не выявлено (рис. 1).
При проведении анализа влияния ИФН-а на цитотоксичность NK-клеток в двух выделенных подгруппах (А и В) мы обнаружили, что они имеют принципиальные отличия по параметрам цитотоксичности NK-клеток и их изменению под влиянием ИФН-а в различные фазы клинического процесса. Пациенты группы А в фазу ремиссии по показателям исходной NK-активности достоверно не отличались от здоровых
Кошэ+працмя ИФН-а. Ць'иг
Рис. 1. Влияние ИФН-а на цитотоксичность NK-клеток пациентов с ЧРПГ в фазу обострения и ремиссии и у здоровых доноров. Показаны медианы по группе.
В каждой группе столбцов слева направо: обострение, ремиссия, доноры; *р<0,05; **р<0,01 по сравнению с донорами.
доноров, в то время как ИФН-стимулированные показатели NK-активности были достоверно снижены по сравнению с группой здоровых доноров, причем данное явление наблюдалось при всех трех используемых концентрациях ИФН- а (табл. 2). Другими словами, в фазу ремиссии пациенты патогенетического типа А имеют дефицит ответа NK-клеток на ИФН-а. В фазу обострения ИФН-стимулированные показатели NK-активности пациентов данной группы повышались и не имели статистически значимых отличий от здоровых доноров. Напротив, пациенты патогенетического типа В в фазу ремиссии ни по исходным, ни по ИФН-стимулированным показателям NK-активности не имели статистически значимых отличий от доноров. В то время, как фаза обострения характеризовалась выраженным дефицитом функций NK-клеток, а именно, втрое сниженной по сравнению со здоровыми донорами исходной NK-активностью, а также почти в 2,5 раза сниженными ИФН-стимулированными показателями NK-активности при каждой из используемых концентраций. Более того, использование даже максимальной концентрации в 1000 Ед/мл едва позволяло добиться хотя бы уровня исходной NK-активности здоровых доноров.
В нашем исследовании пациенты с ЧРПГ как в фазу обострения, так и в фазу ремиссии по способности мононуклеарных клеток к синтезу ИФН-а в ответ на суточную стимуляцию такими вирусными индукторами, ВПГ-1, ВПГ-2, а также стандартно используемый в качестве индуктора ВБН, не имели достоверных отличий по сравнению с контрольной донорской группой ни по одному из используемых индукторов.
Мы проанализировали способность к синтезу собственного ИФН-а у пациентов с выделенными двумя типами ответов NK-клеток на рекомбинантный ИФН-а (А или В) (рис. 2). У пациентов с ответом на рекомбинантный ИФН-а типа А способность к синтезу собственного ИФН-а в ответ на вирусные индукторы была сопоставима с таковой у здоровых доноров как при ремиссии, так и при обострении. Напротив, пациенты с ответом на рекомбинантный ИФН-а типа В в фазу ремиссии не только не имели сниженной способности к интерфероногенезу, но имели тенденцию к повышению данной способности по сравнению с группой контроля, более чем в 2,5 раза в ответ на индукторы вирусов простого герпеса 1 и 2 типов, ответ на стандартный индуктор ВБН был сопоставим с таковым у доноров. В фазу обострения тип В характеризовался достоверно высоким (по сравнению с группой контроля и с типом А) уровнем спонтанного синтеза ИФН-а и достоверно сниженным уровнем синтеза ИФН-а в ответ на стандартный индуктор ВБН. При анализе исследуемых показателей в динамике клинического процесса отмечалось отсутствие какой-либо тенденции к
Таблица 2. Особенности влияние ИФН-а на цитотоксичность NK-клеток пациентов с ЧРПГ подгрупп А и В
Показатели ИФН-а, Ед/мл Тип А Тип В Доноры
обострение ремиссия обострение ремиссия
NK-активность 0 24,2 20 8* 16,2 24,9
(5,8—7,5) (2,5—58,3) (3,3—50,6) (3,9—74,2) (10,8—68,2)
10 41,9 28* 17,3# 27,9 58
(8—77,2) (4,6—63,3) (8,4—73,5) (12,5—81,9) (22,1—74,1)
100 54,1 36,1* 19,7* 26,7 54,8 (31,7—
(13,3—78,4) (7,2—70,9) (4,6—79,9) (12,5—79,2) 77,8)
1000 55,1 36,7* 24,7** 31,5 66,5
(14,6—82,5) (10,9—70,1) (8,7—81,3) (12—82,7) (37,2—81,0)
Итоговое увеличение 6,9 6,5** 1,0* 5,1* 10,6
NK-активности (-1,8—27,4) (-3,6—17,5) (-15—14) (-0,5—16,9) (-3,4—27,1)
под влиянием ИФН-а
Примечание. * р<0,05, ** р<0,01 по сравнению с группой доноров (тест Манна-Уитни); # р=0,068.
Рис. 2. Особенности синтеза ИФН-а в ответ на индукторы вирусной природы у пациентов с ЧРПГ подгрупп А и В в фазу обострения и ремиссии. Показаны медианы по группам.
изменению показателей в зависимости от фазы клинического процесса при типе А. Пациенты группы В, напротив, достоверно отличались как от группы контроля, так и по показателям в зависимости от фазы клинического процесса. Фаза ремиссии характеризовалась повышенными показателями интерфероногенеза, достигающими статистически значимой разницы в ответ на индуктор ВПГ-2. В фазу обострения отмечался достоверно повышенный спонтанный синтез ИФН, но при этом отмечалось резкое падение способности к синтезу ИФН в ответ на индукторы по сравнению с фазой ремиссии на ВПГ-1 в 5 раз, на ВПГ-2 в 3 раза, на ВБН в 2,3 раза.
ОБСУЖДЕНИЕ
Вышеописанные выявленные иммунологические нарушения позволяют предположить различные варианты патогенеза рецидивирования у выделенных двух групп пациентов. Патогенез рецидивирования у пациентов с типом В возможно объяснить с позиции существующей «динамической гипотезы», которая предусматривает постоянную репликацию и выброс из ганглия вируса герпеса, который, достигнув кожи, вызывает микрофокусы инфекции, сдерживаемые механизмами защиты, что предупреждает рецидивы. Описанный механизм рецидивирования отражается в иммуно-диагностической картине в виде повышенного в ремиссию синтеза ИФН-а в ответ на индукторы ВПГ-1 и ВПГ-2 нормальными показателями NK-активности и нормальной чувствительностью NK-клеток к действию рекомбинантного ИФН-а. В фазу же обострения у пациентов с повышенным интерфероногенезом в ремиссию отмечалось резкое падение всех перечисленных выше показателей в 2 — 4 раза. Другими словами, причиной рецидивирования при данном типе является истощение иммунного ответа вследствие длительной стимуляции постоянно реплицирующимся вирусом. Исходя из вышеизложенного, у пациентов данной подгруппы для предупреждения рецидивов возможно предположить потенциальную эффективность противовирусной терапии в супрессивном режиме. Назначение иммуномодулирующей терапии дискутабельно, поскольку, с одной стороны, при постоянной вирусной нагрузке необходима иммуномодулирующая поддержка, однако не приведет ли это к еще более скорому истощению и не спровоцирует ли скорый рецидив при описанном варианте патогенеза?
Патогенез рецидивирования у пациентов с типом А возможно объяснить с позиции существующей «статической гипотезы», при которой вирус герпеса находится в клетках паравертебрального сенсорного ганглия в интегрированном или свободном непродуктивном состоянии, что отражается в иммунодиагностической картине в виде спокойных показателей интерфероногенеза, нормальной NK-активности и снижении чувствительности NK-клеток к ИФН-а, что не проявляет себя клинически
3. ЖМЭИ 3 № 31
33
в виду отсутствия вирусной нагрузки. Под влиянием пускового фактора вирус активируется и перемещается из ганглия по аксону периферического нерва в эпителиальные клетки, где реплицируется, что требует увеличения цитотоксичности NK-клеток, но сниженная чувствительность NK-клеток к ИФH-a не позволяет достичь адекватного увеличения цитотоксичности. Клинически имеет место рецидив. Исходя из вышеизложенного, у пациентов данной подгруппы возможно предположить потенциальную эффективность противовирусной терапии в эпизодическом режиме и применение иммуномодулирующей терапии для скорейшего купирования рецидива (индукторы ИФH-a, препараты ИФH-a), поскольку чувствительность NK-клеток к ИФH в обострении восстанавливается.
Таким образом, пациенты с ЧРПГ являются гетерогенной группой по показателям в системе цитотоксичность NK-клеток/ИФH-a. В нашем исследовании мы выделили два типа ответа NK-клеток на стимуляцию рекомбинантным ИФH-a. При проведении иммунокорригирующей терапии необходим персонализированный подход с учетом особенностей ответа NK-клеток на ИФH-a, поскольку две выделенные группы пациентов с ЧРПГ (А и В) имеют принципиальные отличия по параметрам цитотоксичности NK-клеток и их изменению под влиянием ИФH-a в различные фазы клинического процесса, а также по показателям синтеза ИФH-a в ответ на вирусные индукторы.
ЛИТЕРАТУРА
1. Долгих Т.И., Mинакова Е.Ю., Запарий H.C. Клинико-иммунологическая оценка эффективности применения кагоцела при лечении пациентов с рецидивирующей герпетической инфекцией. Герпес. 2010, 1: 5-18.
2. Исаков В.А., Ермоленко Д.К., Коваленко А.Л. и др. Использование циклоферона в терапии рецидивирующего простого герпеса. Герпес. 2010, 1: 18-23.
3. Mезенцева M^., Шровлянский А.Н, Щербенко В.Э. и др. Оценка интерферонового статуса и цитокинового профиля у больных генитальным герпесом. Русский журнал иммунологии. 2002, 7 (2): 167-174.
4. Mуругин В.В., Зуйкова И.^, Mуругина H^. и др. Дефицит дегрануляции NK-клеток у больных хронической рецидивирующей герпесвирусной инфекцией. Иммунология. 2010, 31 (6): 284-289.
5. Mуругин В.В., Mуругина H^., Пащенков M^. и др. Дегрануляция NK- и T-клеток у лиц пожилого возраста. Иммунология. 2011, 32(5): 239-243.
6. Тутушкина Т. В., Шульженко А.Е., Шровлянский AH. и др. Терапия кагоцелом генитальной хронической рецидивирующей герпес-вирусной инфекции. Цитокины и воспаление. 2005, 4 (2): 59-65.
7. Черныш С. И., Кубанова А.А., Ершов Ф.И. и др. Клиническая эффективность и механизм действия Аллокина-альфа у больных рецидивирующим генитальным герпесом. Оппортунистические инфекции: проблемы и перспективы. 2005, 2: 115-130.
8. Kuo Y.C., Lin C.Y. Recurrent herpes simplex virus type 1 infection precipitated by the impaired production of interleukin-2, alpha-interferon, and cell-mediated cytotoxicity. J. Med. Virol. 1990, 31: 183-189.
9. Pica F., Volpi A., Gaziano R. et al. Interferon-lambda in immunocompetent individuals with a history of recurrent herpes labialis. Antivir. Ther. 2010, 15: 737-743.
10. Tsutsumi H., Bernstein J.M., Riepenhoff-Talty M. et al. Immune response to herpes simplex virus in patients with recurrent herpes labialis. II. Relationship between interferon production and cyto-toxic responses. Pediatr. Res. 1986, 20: 905-908.
Поступила 18.06.13
Контактная информация: Карсонова А.В.,
115478, Mосква, Каширское шоссе, 24, р.т.(499)617-76-49
