CC BY
192
10. Шалимов А.А., Шалимов С.А., Полигцук В.Т. Вмешательство на воротной вене при резекциях поджелудочной железы // Вестн. хирургии. - 1987. -Т. 139, № 11. - С. 52-56.
11. Farnell M.B., Pearson R.K., Sarr M.G. et al. A prospective randomized trial comparing standard pancreatoduodenectomy with pancreatoduo-denectomy with extended lymphadenectomy in resectable pancreatic head adenocarcinoma // Surg. - 2005. - Vol. 138. - P. 618 - 630.
12. Fortner J.G., Klimstra D.S., Senie R.T., Maclean B.J. Tumor size is the primary prognosticator for pancreatic cancer after regional pancreatectomy // Ann. Surg. -1996. - Vol. 223, N 2. - Р. 147-153.
13. Fuhrman G.M., Leach S.D., Staley C.A. et al. Rationale for en bloc vein resection in the treatment of pancreatic adenocarcinoma adherent lo the superior mesenteric-portal vein confluence // Ann. Surg. -1996. - Vol. 223, N 2. - Р. 154-162.
14. Horsch S.D., Knoefel W.T., Metz S. et al. Early lymfa-tic cancer: frequency and prognostic significance // Pancreas. - 1997. - Vol. 15, N 2. - P. 154-159.
15. Hwang S.I., Kim H.O., Son B.H. et al. Surgical palliation of unresectable pancreatic head cancer in elderly patients // World J. Gastroenterol. - 2009. - Vol. 28. N 15. - Р. 978-982.
16. Leach S.D., Lee J.E., Charnsangavej C. et al. Survival following pancreaticoduodenectomy with resection of
the superior mesenteric-portal vein confluence for adenocarcinoma of the pancreatic head // Brit. J. Surg. - 1998. - Vol. 85, N 5. - P. 611-617.
17. Nimura Y., Nagino M., Kato H. et al. Regional versus extended lymph node dissection in radical pancreatoduodenectomy for pancreatic cancer: A multicenter, randomized controlled trial // HPB. - 2004, Vol. 6 (Suppl. 1). - P. 2.
18. Shibata C., Kobari M., Tsuchiya T. et al. Pancreatectomy combined with superior mesenteric-portal vein resection for adenocarcinoma in pancreas // World J. Surg. - 2001. - Vol. 25, N 8. - P. 1002-1005.
19. Takahashi S., Ogata Y., Aiura K. et al. Combined resection of the portal vein for pancreatic cancer: preoperative diagnosis of invasion by portogaraphy and prognosis // Hepatogastroenterology. - 2000. -Vol. 47, N 32. - P. 545-549.
20. Van Geen R.C., Ten Kate F.J., De Wit L.T. et al. Segmental resection and wege excision of the portal superior mesenteric vein during pancreaticduodenectomy // Surgery. - 2001. - Vol. 129, N 2. - P. 158-163.
21. Yeo C.J., Cameron J.L., Lillemoe K.D. et al. Pancreaticoduodenectomy with or without distal gastrectomy and extended rertoperitoneal lymphadenectomy for periampullary adenocarcinoma, part 2. Randomized controlled trial evaluating survival, morbidity, and mortality // Ann. Surg. - 2002. - Vol. 326. -P. 355-368.
УДК 616-002.3-08:615.454.1
ИММОБИЛИЗОВАННЫЕ ФОРМЫ АНТИСЕПТИКОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНЫХ РАН
В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
© Григорьян А.Ю., Бежин А.И., Панкрушева Т.А., Иванов А.В., Жиляева Л.В.,
Кобзарева Е.В., Мишустин В,Н.
Кафедра оперативной хирургии и топографической анатомии, кафедра фармацевтической технологии, кафедра гистологии, эмбриологии и цитологии, кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии Курского государственного медицинского университета, Курск
E-mail: arsgrigorian@mail.ru
В статье представлен анализ использования иммобилизованных в энтеросгеле антисептиков фурацилина, хлор-гексидина биглюконата и гексэтидина для лечения экспериментальных гнойных ран. Выполнено 5 серий экспериментов, в 1-й проводилось моделирование гнойной раны без лечения, во 2-й проводилось лечение 70% гелем энтеросгеля, в 3-й - лечение иммобилизованной формой фурацилина, в 4-й - лечение иммобилизованной формой хлоргексидина биглюконата, в 5-й - лечение иммобилизованной формой гексэтидина. Течение раневого процесса оценивалось на основании внешних клинических, планиметрических, микробиологических и гистологических данных. Выявлена эффективность иммобилизованных форм исследуемых антисептиков для лечения гнойных ран в первую и вторую фазы раневого процесса.
Ключевые слова: гнойная рана, лечение ран, энтеросгель, фурацилин, хлоргексидина биглюконат, гексэтидин.
IMMOBILIZED FORMS OF ANTISEPTICS FOR TREATMENT OF EXPERIMENTAL PURULENT WOUNDS
Grigoryan A. Yu., Bezhin A.I., Pankrusheva T.A., Ivanov A. V., Zhilyaeva L. V., Kobzareva E. V., Mishustin V.N.
Department of Operative Surgery & Topographic Anatomy, Department of Pharmaceutical Technology, Department of Histology, Embryology and Cytology, Department of Microbiology, Virology, Immunology
of the Kursk State Medical University, Kursk
The article presents the analysis of using the immobilized forms of antiseptics Furacilin, Chlorhexidine bigluconate, Hex-etidine for the treatment of experimental purulent wounds. The 5 series of experiments were performed: in the 1st one purulent wounds without any treatment were simulated, in the 2nd - the wounds were treated with 70% Enterosgel, in the 3d - the treatment of the immobilized form of Furacilin was provided, in the 4th - we administered the treatment with the immobilized form of Chlorhexidine bigluconate, and in the 5th - the treatment with the immobilized form of Hexetidine was provided. During the wound healing the process was being evaluated on the basis of the external clinical, planimetric, microbiological and histological methods. The effectiveness of the immobilized forms of the investigated antiseptics for managing purulent wounds in the first and second phases of wound healing was revealed.
Keywords: purulent wound, healing of wounds, Enterosgel, Furacilin, Chlorhexidine bigluconate, Hexetidine.
Актуальной проблемой современной хирургии является увеличение численности гнойновоспалительных заболеваний мягких тканей и послеоперационных гнойных осложнений.
По данным некоторых авторов, от всех хирургических заболеваний гнойные осложнения составляют 30-35%, а летальность от них достигает 25% [2, 5, 7]. Поэтому одной из важнейших проблем является проблема лечения гнойных осложнений ран.
Гнойные осложнения являются основной причиной затяжного течения послеоперационного периода, и существенного увеличения материальных затрат на лечение, что приобретает большую социально-экономическую значимость в масштабах страны [3, 6].
В настоящее время в связи с массовым, а нередко и бесконтрольным применением антибактериальных препаратов большинство современ-
ных микроорганизмов - возбудителей гнойной инфекции - стали либо резистентными, либо мало чувствительными к антибиотикам [1].
На фоне выявленных серьезных недостатков антибиотикотерапии все больше возрастает интерес к антисептикам, широко известным и хорошо зарекомендовавшим себя в хирургической практике при лечении местных гнойновоспалительных процессов [8].
Одним из перспективных направлений в лечении гнойных ран является использование сорбентов. Применение сорбционного дренажа при остром и хроническом воспалении приводит к снижению нагрузки на лимфатическую систему, так как при перевязках вместе с гранулами сорбента элиминируются большие фрагменты нежизнеспособных тканей, антигены и белковоклеточные конгломераты.
В качестве дренирующих препаратов предла-
гают использовать углеродные сорбенты. Одним из известных является энтеросгель, который оказывает детоксицирующее действие, адсорбирует микроорганизмы, вирусы и их продукты [4].
В связи с изложенным цель нашего исследования - изучить в сравнительном аспекте ранозаживляющие свойства иммобилизованных в энте-росгеле антисептиков фурацилина, хлоргексидина биглюконата, гексэтидина в первую (I) и вторую (II) фазы раневого процесса.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалом для исследования послужили мази, составы которых разработаны совместно коллективами кафедр фармацевтической технологии и оперативной хирургии и топографической анатомии им. профессора А.Д. Мясникова КГМУ: Состав 1
• Фурацилин 0,2 г
(ФС 42-2522-88)
• Энтеросгель 70,0 г
(ФСП 42-0533540704)
• Вода очищенная 29,8 г (ФС 42-2619-97)
Состав 2
• Раствор хлоргексидина биглюконата
0,05% 30,0 г
(ТУ 9158-002-76922630-2005)
• Энтеросгель 70,0 г
(ФСП 42-0533540704)
Состав 3
• Гексэтидин 30,0 г
(НД 42-59737)
• Энтеросгель 70,0 г
(ФСП 42-0533540704)
В процессе исследования и разработки составов мазей применяли лекарственные и вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению и отвечающие требованиям действующей нормативно-технической документации.
Эксперименты in vivo выполнены на 150 белых крысах-самцах Вистар массой 180±20 г. Для исследования отбирались животные без внешних признаков заболевания, прошедшие карантин в виварии КГМУ.
Всем животным под эфирным наркозом в стерильных условиях моделировали гнойную рану по методике П.И. Толстых (1976). Для этого на спине на выбритом от шерсти и обработанном антисептиком участке иссекали кожу с подкожной клетчаткой размером 15x15 мм, затем в рану вводили марлевый шарик, содержащий 1 млрд. микробных тел суточной культуры Staphylococcus aureus 592 и рану ушивали. На 3-и сутки (через 48
ч) после моделирования у всех животных формировался абсцесс со всеми характерными признаками воспаления. После снятия швов края раны разводили, марлевый тампон удаляли, эвакуировали гной. Для стандартизации условий лечения, предупреждения деформации раны, а также для предупреждения высыхания, загрязнения раневой поверхности и укусов другими животными над раной подшивали к коже «Устройство для защиты ран» (патент РФ на полезную модель № 94844 от 10.06.2010 года).
В качестве контроля для опытных серий использовали лечение 70% гелем энтеросгеля, а для контроля эффективности лечения 70% гелем эн-теросгеля использовали модель нелеченой раны.
В зависимости от способа лечения экспериментальной гнойной раны животные были распределены на 5 серий по 30 в каждой.
В 1 -й серии животным производили ежедневную обработку раны только 3% раствором перекиси водорода.
Во 2-й серии ежедневно производили обработку раны 3% раствором перекиси водорода и наложение марлевой салфетки с 70% гелем энте-росгеля.
В 3 -й, 4-й и 5-й сериях ежедневно производили обработку раны 3% раствором перекиси водорода и наложение марлевой салфетки с мазью состава 1, 2 и 3, соответственно.
Течение раневого процесса у экспериментальных животных оценивали клиническим методом: фиксировали сроки ликвидации отека окружающих тканей, сроки очищения раны, появления грануляций, начала краевой эпителизации и полного заживления раны.
Планиметрический метод исследования. Для объективной оценки скорости заживления раны использовали метод Л.Н. Поповой. На рану накладывали простерилизованный лист целлофана, на котором маркером обрисовывали ее контуры. Целлофан с полученным контуром клали на миллиметровую бумагу и определяли площадь раны до начала лечения. Аналогичным способом проводили исследования на всех сроках лечения, вычисляя среднюю площадь ран, процент уменьшения площади раны от исходного (формула 1) и скорость заживления раны (формула 2):
где ПУП - процент уменьшения площади, 80 -исходная средняя площадь ран на начало лечения, 8 - средняя площадь ран на момент измерения.
где СЗ - скорость заживления, ПУП1 - процент уменьшения площади ран от исходной на момент измерения, ПУП0 - процент уменьшения площади ран при предыдущем измерении, Т - количество дней между измерениями.
Животных выводили из эксперимента на 1-е,
3-и, 5-е, 8-е, 10-е, 15-е сутки путем передозировки эфирного наркоза.
Микробиологическое исследование включало количественное определение микроорганизмов в динамике в 1 г ткани инфильтрата по следующей методике. После выведения животного из эксперимента в стерильных условиях очищали рану от остатков нанесенного препарата, затем осуществляли забор участка инфильтрата раны массой 0,1-0,5 г, взвешивали и вычисляли коэффициент пересчета на 1 г ткани (К). Затем участок инфильтрата раны растирали в стерильной ступке и суспензировали в изотоническом растворе натрия хлорида из расчета 1:10. Далее делали десятикратные разведения суспензии в изотоническом растворе натрия хлорида до 10-3, а при необходимости и более. Из каждого разведения производили посев 0,1 мл суспензии в чашки Петри с плотной питательной средой (агар). Посевы инкубировали в термостате при температуре (37±1)°С в течение 20 ч, затем 1 сут выдерживали при комнатной температуре. После этого производили подсчет колоний, выросших на чашке, и делали соответствующий пересчет на 1 г ткани. Подсчет колоний производили на тех чашках, где колонии росли изолированно и количество их не превышало 300.
Количественное содержание микроорганизмов в 1 г ткани определяли по формуле:
N = п х 10 х 10 (или 100, или 1000) х К,
где N - количество микроорганизмов в 1 г биоптата, п - количество микроорганизмов, выросших на чашке, 10 - пересчет на 1 г суспензии, 10, 100 или 1000 - разведение материала, засеянного на чашку, с которой ведут подсчет колоний, К - коэффициент пересчета навески на 1 г биоп-тата.
Гистологическую оценку раневых биоптатов производили на 1-е, 3-и, 5-е, 8-е, 10-е сутки от начала лечения после выведении подопытного животного из эксперимента путем передозировки наркоза. Забор материала осуществляли путем иссечения участка мягких тканей дна и прилежащего края раны лезвием. Приготовленные парафиновые срезы окрашивали гематоксилин-эозином. При оценке препаратов обращали внимание на выраженность воспалительных реакций, сроки появления грануляционной ткани, возникновение краевой эпителизации, а также структурную полноценность вновь образованного эпите-
лия. Морфометрическое исследование инфильтрата проводили на 3-и, 5-е, 8-е и 10-е сутки от начала лечения. На выбранном участке, в пределах раневого дефекта, под лейкоцитарнофибринозным струпом производили подсчет 100 клеток (фибробласты, гранулоциты, лимфоциты и макрофаги). Клеточный состав выражали в процентах.
Полученные данные обработаны статистически с помощью электронных таблиц "Microsoft Excel" и "Биостатистика": вычисляли средние арифметические (М), средние ошибки средних (m), достоверность между контролем и опытными сериями оценивали по критерию Стьюдента, достоверность между опытными сериями оценивали по критерию Стьюдента с поправкой Бонферро-ни.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В результате экспериментального моделирования ран все животные выжили, они содержались в одинаковых условиях, доступ к пище и воде был свободный.
На 1 -е сутки после моделирования во всех сериях раны выглядели следующим образом: отек, гиперемия и инфильтрация окружающих тканей и краев ран, отмечалось обильное гнойное отделяемое, дно ран покрыто налетом фибрина с участками некроза.
Сравнительный анализ динамики изменения клинического течения раневого процесса (табл. 1) свидетельствует, что во 2-й серии по сравнению с 1-й сокращались сроки: купирования отека и начала эпителизации в 1,2 раза, очищения раны и начала появления грануляций (в! 1,3 раза.
Купирование отека в 3-й и 5-й сериях по сравнению со 2-й наступало в 1,6 раза быстрее, в 4-й - в 1,5 раза.
Очищение ран и начало появления грануляций в 3 -й серии по сравнению со 2-й наступало в
1.4 раза раньше, в 4-й - в 1,3 раза, в 5-й - в
1.5 раза раньше.
Начало эпителизации в 3-й и 5-й сериях наступало в 1,3 раза раньше по сравнению со 2-й, а в 4-й - в 1,2 раза раньше.
Все представленные различия статистически достоверны (р<0,05).
Достоверных различий по клиническим признакам течения раневого процесса между 3-й,
4-й и 5-й сериями не выявлено.
Результаты изучения динамики изменения площади ран и скорости заживления представлены в табл. 2 и 3.
Анализ данных показал, что исходные экспе- площади (250,5±5,5 мм2). Во время исследования
риментальные раны были сопоставимы по своей
Таблица 1
Динамика клинического течения раневого процесса (М ± т)
Серии Способ лечения Клинические признаки (сутки
исчезновение перифокаль-ного отека очищение раны появление грануляций начало краевой эпителизации
1 Модель гнойной раны (лечение 3% перекисью водорода) 8,4±0,31 10,1±0,24 10,8±0,32 10,2±0,23
2 Контрольная серия (лечение 3% перекисью водорода и 70% гелем энтеросгеля) 6,9±0,241 8,1±0,321 8,6±0,211 8,8±0,231
3 Опытная 1 (лечение 3% перекисью водорода и мазью состава 1) 4,2±0,242 5,8±0,112 6,1±0,242 6,9±0,212
4 Опытная 2 (лечение 3% перекисью водорода и мазью состава 2) 4,6±0,322 6,1±0,232 6,5±0,322 7,4±0,232
5 Опытная 3 (лечение 3% перекисью водорода и мазью состава 3) 4,3±0,112 5,4±0,242 5,8±0,312 6,8±0,342
Примечание: 1р<0,05 (2-я серия сравнивалась с 1-й серией); 2р<0,05 (3-я, 4-я, 5-я серии сравнивались со 2-й серией)
Таблица 2
Динамика изменения площади (8) и процента уменьшения площади (ПУП) ран у экспериментальных животных в процессе лечения (М±т)
Серии Пара- метры 1 сут 3 сут 5 сут 8 сут 10 сут 15 сут
п=30 п=25 п=20 п=15 п=10 п=5
1 8 раны (мм2) ПУП (%) 249,9±0,97 1,9±0,83 223,4±1,31 11,5±1,64 175,8±2,62 26,9±2,84 131,7±2,74 46,8±2,33 114,5±2,54 54,8±1,25 69,0±2,92 72,2±1,23
2 8 раны (мм2) ПУП (%) 239,2±2,231 3,0±2,13 154,1±2,841 32,7±2,931 138,0±2,711 42,5±0,741 124,5±2,68 46,0±2,42 113,5±2,23 51,9±2,01 32,4±1,121 86,0±0,511
3 8 раны (мм2) ПУП (%) 241,5±2,23 3,3±1,42 125,0±3,432 47,1±2,832 79,7±3,422 65,5±3,312 38,0±2,232 81,9±3,132 12,2±1,812 95,7±1,212 1,8±0,432 99,2±0,232
4 8 раны (мм2) ПУП (%) 245,1±0,632 2,5±0,32 163,8±1,532 32,4±0,64 123,5±0,742 51,3±0,232 96,5±1,552 61,5±0,612 47,7±1,212 81,4±0,452 5,2±1,042 97,9±0,432
5 8 раны (мм2) ПУП (%) 249,7±0,642 2,3±0,24 139,6±1,432 46,5±0,532 95,9±2,422 63,9±1,032 43,7±2,022 82,2±0,542 8,7±0,642 96,5±0,232 0,4±0,232 99,8±0,142
Примечание: 1р<0,05 (2-я серия сравнивалась с 1-й серией); 2р<0,05 (3-я, 4-я, 5-я серии сравнивались со 2-й серией) 28
Таблица 3
Динамика изменения скорости заживления ран у экспериментальных животных в процессе лечения (М±т)
Серии Скорость заживления (%/сут)
1-3 сут 3-5 сут 5-8 сут 8-10 сут 10-15 сут
п=25 п=20 п=15 п=10 п=5
1 4,8±0,84 7,7±0,96 6,6±1,13 4,0±0,64 3,5±0,85
2 14,8±0,921 4,9± 1,12 1,2±0,421 2,9±0,71 6,8±0,931
3 21,9±0,822 9,2±0,522 5,5±1,232 6,9±1,342 0,7±0,312
4 14,9±0,84 9,5±1,542 3,4±1,23 9,9±0,722 3,3±0,542
5 22,1±0,942 8,7±1,252 6,1±1,122 7,2±0,832 0,7±0,322
Примечание: 1р<0,05 (2-я серия сравнивалась с 1-й серией); 2р<0,05 (3-я, 4-я, 5-я серии сравнивались со 2-й серией).
во всех сериях происходило постепенное уменьшение площади ран в сравнении с предыдущим сроком наблюдения. Во 2-й серии по сравнению с 1-й достоверное различие по уменьшению площади ран отмечается до 5-х суток. Начиная с 8-х суток достоверных различий по данному показателю между 1-й и 2-й сериями не выявлено. В 3-й,
4-й и 5-й сериях по сравнению со 2-й, а также в 3-й и 5-й по сравнению с 4-й достоверное различие по уменьшению площади ран отмечается на всех сроках наблюдения. Достоверных различий между 3-й и 5-й сериями не выявлено.
К 15-м суткам площади ран уменьшились: в
1-й серии - на 72,2±1,23%, во 2-й серии - на 86,0±0,51%, в 3-й серии - на 99,2±0,23%, в 4-й серии - на 97,9±0,43%, в 5-й серии - на 99,8±0,14%.
Таким образом, анализ полученных данных свидетельствует о более быстром уменьшении площади ран при лечении разработанными иммобилизованными формами антисептиков. Так, к 10-м суткам от начала лечения сокращение площади ран в 3-й серии было на 43,8% больше, чем во 2-й серии, в 4-й серии - на 29,5% больше, чем во 2-й серии, а в 5-й серии - на 44,6% больше, чем во 2-й серии.
Динамика изменения скорости заживления экспериментальных ран представлена в табл. 3.
Анализ полученных результатов свидетельствует, что с 1 -х по 10-е сутки наблюдения скорость заживления ран достоверно выше в 3-й и
5-й сериях по сравнению со 2-й серией, в 4-й -выше, чем во 2-й серии на временных отрезках
3-5-е и 8-10-е сутки, а в 3-й и 5-й - достоверно выше, чем в 4-й серии на временном отрезке
1-3-и сутки.
Для количественной оценки микробной об-семененности ран производили забор раневого биоптата. Результаты исследования представлены в табл. 4.
Во всех сериях микробная обсемененность ран на 1-е сутки составляла 14,0±1,44х107 КОЕ/г. В 1-й серии она остается достоверно выше на всех сроках наблюдения по сравнению со 2-й.
При заборе раневого биоптата у животных в
3-й, 4-й и 5-й сериях на протяжении всего срока наблюдения микробная обсемененность ран достоверно меньше, чем во 2-й. Так, в 3-й серии на 10-е сутки она в 21,3 раза меньше, чем во 2-й, в
4-й - в 8,5 раза меньше, в 5-й - в 75,3 раза меньше.
В 3-й серии по сравнению с 4-й достоверные различия по микробной обсемененность ран отмечаются лишь на 10-е сутки. В 5-й серии по сравнению с 3-й и 4-й различия по данному показателю достоверны на протяжении всего срока наблюдения, за исключением 5-х суток. На 15-е сутки в 3-й и 5-й сериях осуществить забор материала для микробиологического исследования не
представлялось возможным, поскольку площадь ^ 2
ран составляла менее 2 мм .
Проведенные гистологические исследования раневых биоптатов дали возможность более детально оценить динамику течения раневого процесса.
На 1 -е сутки после моделирования раны микроскопически во всех сериях выглядели следующим образом: поверхность ран покрыта массивными фибринозными наложениями с большим количеством погибших лейкоцитов. Подлежащая ко дну раны соединительная ткань разрыхлена, инфильтрирована сегментоядерными лейкоцитами и единичными макрофагами, резко отечна. Фибробласты имеют базофильную цитоплазму и светлые ядра с крупными ядрышками. Отмечаются расширенные кровеносные сосуды. Встречаются очаги геморрагии диапедезного характера. Отек распространяется за пределы объема экспериментальной травмы. Эпителий вокруг раны истончен, край его уплощен.
На 3-и сутки наблюдения в 1-й серии по-
верхность ран покрыта фибрином, инфильтриро- (ПЯЛ). Формирующиеся грануляции также ин-
ванным полиморфноядерными лейкоцитами фильтрированы ПЯЛ. Инфильтрат не распро-
Таблица 4
Динамика изменения микробной обсемененности ран экспериментальных животных в процессе лечения (М ± т)
(КОЕ в 1 г ткани биоптата)
Серии 3 сут 5 сут 8 сут 10 сут 15 сут
п=5
1 85,9±2,12х106 50,5±1,84х106 40,9±3,15х105 39,6±0,83х105 22,3±0,94х105
2 72,1±1,85х106(1) 8,1±2,13х106(1) 15,0±2,54х105(1) 6,1±1,54х105(1) 11,2±0,72х104(1)
3 17,9±2,14х106(2) 10,9±2,24х105(2) 10,4±1,65х104(2) 28,7±1,12х103(2) -*
4 14,0±1,93х106(2) 17,1±2,23х105(2) 12,0±1,84х104(2) 7,2±0,94х104(2) 13,6±1,12х103(2)
5 5,6±1,12х106(2) 4,2±2,65х105(2) 3,3±2,12х104(2) 8,1±1,54х103(2) -*
Примечание: 1р<0,05 (2-я серия сравнивалась с 1-й серией); 2р<0,05 (3-я, 4-я, 5-я серии сравнивались со 2-й серией)
* В 3-й и 5-й серии на 15-е сутки произвести забор материала не представлялось возможным, поскольку площадь ран составляла менее 2 мм2.
страняется в интактную дерму. Во 2-й серии отмечаются мощные грануляции, в которых определяются все слои. Поверхность ран покрыта мазью. В поверхностном слое грануляций и в слое вертикальных сосудистых петель - множественные макрофаги. В 3-й серии мощная грануляционная ткань, инфильтрат под слоем мази. В лекарственном препарате определяются ПЯЛ и макрофаги (рис. 1). Отмечаются очаги отека клетчатки. В 4-й серии инфильтрат на всю толщу грануляций с проникновением в глубокую дерму и мышцы. Слой мази пропитан ПЯЛ и макрофагами. Отмечается выраженный отек клетчатки. В 5 -й серии инфильтрат, в котором преобладают ПЯЛ на всю толщу грануляций, местами распространяется между пучками мышечных волокон. На поверхности ран - струп из фибрина и мази, инфильтрированной ПЯЛ. Очаговый отек клетчатки.
На 5-е сутки в 1-й серии существенных изменений не произошло. Раны, по-прежнему, покрыты фибрином, грануляции мощно инфильтрированы ПЯЛ, отмечается выраженный отек подлежащей клетчатки. Во 2-й серии отмечается расслоение дермы и распространение инфильтрата между слоями. В толще нанесенной мази и под ней инфильтрат, в котором преобладают ПЯЛ. Отмечается расширение лимфатических капилляров, что говорит о затруднение оттока. В 3-й серии инфильтрат на всю толщу грануляций, но плотность убывает снаружи - внутрь. Местами -инкорпорация фрагментов мази в грануляции. В
4-й серии грануляции отечны, инфильтрированы на всю толщину. Отек клетчатки значительно уменьшился. В 5-й серии толщина грануляций меньше, чем во 2-й, инфильтрат менее выражен. Сохраняются небольшие очаги отека.
На 8-е сутки в 1-й серии раневой дефект заполняется грануляционной тканью, становятся
отчетливо различимы слой горизонтальных фиб-робластов и вертикальных сосудистых петель. Во
2-й серии явления отека выражены сильнее, чем в опытных сериях, особенно в глубоких слоях грануляций. Расширены капилляры (кровеносные и лимфатические). В большинстве случаев сохраняется лимфогистиоцитарная инфильтрация поверхностного слоя грануляций. В 3-й серии рана чистая, инфильтрат слабо выражен. Отека клетчатки не наблюдается. В 4-й серии вокруг грануляций - умеренный отек. Волокна коллагена организованы в пучки. Однако признаков эпители-зации дна раны нет. В 5-й серии слой грануляций тоньше по сравнению с 5-ми сутками. Отмечается наличие зрелого коллагена, организация его волокон в пучки. На поверхности наличие узкого слоя инфильтрата и кровоизлияний. Редко встречаются участки инкорпорации мази в грануляции в окружении инфильтративного вала.
На 10-е сутки в 1 -й серии происходит дальнейшее заполнение раневого дефекта грануляционной тканью, которая все еще покрыта фибриновыми наложениями. Инфильтрат
распространяется на всю глубину грануляций. Продолжается медленное наползание
эпителиального вала на раневой дефект. Во 2-й серии поверхностные слои инфильтрированы. Зона инфильтрата узкая. Нейтрофильные грану-лоциты мигрируют в слой нанесенной мази. Отмечаются массивный отек грануляционной ткани и клетчатки (рис. 2). В 3-й серии раны чистые. Продолжается эпителизация дна раны. Сохраняется инфильтрация с преобладанием лимфоцитов, во всех слоях грануляционной ткани большое количество юных и зрелых фибробластов с базо-фильной цитоплазмой, светлым эухроматичным ядром, крупными ядрышками, что свидетельствует о высокой активности синтетических процессов. В 4-й серии раны покрыты эпителием на всем
протяжении. Локально отмечается отек дермы, но очаги отека неболь-
шие
(рис.
3).
В
5-й
Рис. 1. Серия исследования 3. 3-и сутки после начала лечения. В ране мощная грануляционная ткань, под слоем лекарственного средства отмечается инфильтрат, в толще ткани полиморфноядерные лейкоциты и макрофаги. Локальный отек клетчатки. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофотография. Увеличение х 150.
Рис. 2. Серия исследования 2. 10-е сутки после начала лечения. Поверхностные слои раны инфильтрированы. Зона инфильтрата узкая. Нейтрофильные гранулоциты мигрируют в слой мази. Отмечается массивный отек грануляционной ткани и клетчатки. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофотография. Увеличение х 150.
Рис. 3. Серия исследования 4. 10-е сутки после начала лечения. Раневая поверхность покрыта эпителием на всем протяжении. Локально отмечаются небольшие очаги отека дермы. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофотография. Увеличение х 150.
Рис. 4. Серия исследования 5. 10-е сутки после начала лечения. Небольшие участки дермы с отечными дольками между пучками коллагеновых волокон. Эпителий почти полностью покрывает дно раны. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофотография. Увеличение х 150.
серии встречаются участки дермы с отечными дольками между пучками коллагеновых волокон. Эпителий почти полностью покрывает дно ран (рис. 4).
Для количественной оценки клеточного состава биоптатов ран в процессе лечения нами было выполнено морфометрическое исследование. Полученные результаты представлены в табл. 5.
Анализ результатов показал, что достоверные различия по клеточному составу между 1 -й и
2-й сериями выявлены лишь на 10-е сутки наблюдения. Количество фибробластов было достоверно больше в 3-й, 4-й и 5-й сериях по сравнению со 2-й серией, что указывает на более раннее начало регенерации тканей в опытных сериях. Между опытными сериями по количеству фиб-робластов достоверных различий не выявлено.
При изучении динамики изменения грануло-цитов следует отметить, что в опытных сериях их число было достоверно меньше по сравнению с контролем. Полученные данные свидетельствуют о выраженном противовоспалительном действии разработанных мазей.
Лишь в 4-й серии выявлены достоверные различия по динамике изменения количества лимфоцитов по сравнению со 2-й серией, что косвенно указывает на более раннюю смену местного клеточного иммунитета на гуморальный при использовании мази состава 2.
Таким образом, проведенные клиническое, планиметрическое, микробиологическое, гистологическое и морфометрическое исследования позволяют сделать следующее заключение.
Применение мазей составов 1 и 3 способствует сокращению течения первой и второй фаз раневого процесса в 1,3-1,6 раза, а мази состава 2 - в 1,2-1,5 раза, что подтверждает их эффективность в лечении гнойных ран.
Результаты планиметрического исследования подтверждают высокую эффективность разработанных нами лекарственных препаратов. Они способствуют увеличению скорости сокращения площади ран в 3-й, 4-й и 5-й сериях на временном отрезке 1-5-е сутки в 1,5-1,8 раза, и на 8-10-е сутки в 2,4-3,4 раза, чем во 2-й серии. Они также обладают высокой антибактериальной активностью, что достоверно способствует уменьшению микробной обсемененности ран и подтверждается результатами микробиологического исследования.
Оценка результатов гистологического исследования показала, что в 3-й, 4-й и 5-й сериях отмечается более быстрое очищение поверхности раны от лейкоцитарно-некротических масс и активный рост грануляционной ткани и эпителия, что наиболее выражено в 4-й серии. К 10-м суткам значительная часть ран или вся их поверхность эпителизированы, что также подверждается результатами морфометрического исследования.
Разработанные нами иммобилизованные на энтеросгеле формы антисептиков фурацилина, хлоргексидина биглюконата и гексэтидина способствует сокращению течения первой и второй фаз раневого процесса, увеличению скорости сокращения площади ран, обладают высокой противовоспалительной, регенераторной активно-
стью. На основании проведенных исследований
можно сделать следующие выводы:
Таблица 5
Динамика изменения клеточного состава инфильтрата в процессе лечения экспериментальных животных (М±т), п=5
1 серия
3 сутки 5 сутки 8 сутки 10 сутки
Фибробласты 27,8±0,58 32,4±0,75 36,8±0,66 40,2±0,37
Гранулоциты 58,2±0,58 53,4±0,40 48,0±0,84 44,0±0,45
Лимфоциты 7,0±0,32 7,2±0,37 7,8±0,66 8,6±0,51
Макрофаги 5,8±0,37 7,2±0,58 7,0±0,32 8,2±0,37
2 серия
Фибробласты 31,0±1,181 33,8±0,49 36,4±0,51 43,6±1,121
Гранулоциты 55,8±1,32 51,0±0,451 45,2±0,97 40,4±0,511
Лимфоциты 6,2±0,37 7,2±0,37 8,4±0,51 8,8±0,37
Макрофаги 6,6±0,40 8,4±0,51 8,8±0,371 6,2±0,371
3 серия
Фибробласты 35,6±0,242 41,2±0,582 45,0±0,842 47,8±0,732
Гранулоциты 50,6±0,242 45,2±0,972 39,6±0,512 34,4±0,682
Лимфоциты 6,8±0,37 8,2±0,58 9,2±0,37 10,0±0,322
Макрофаги 7,4±0,40 8,6±0,24 7,6±0,242 8,0±0,322
4 серия
Фибробласты 36,2±0,662 39,0±0,632 46,2±0,582 49,4±0,512
Гранулоциты 49,2±0,582 42,2±0,372 35,8±0,662 32,0±0,842
Лимфоциты 7,0±0,45 9,8±0,372 10,4±0,242 11,0±0,452
Макрофаги 8,4±0,242 9,2±0,37 8,6±0,24 8,2±0,372
5 серия
Фибробласты 35,4±0,512 38,8±0,372 45,2±0,582 47,6±0,512
Гранулоциты 51,0±0,322 45,0±0,842 37,2±0,582 34,8±0,372
Лимфоциты 6,6±0,51 8,4±0,51 9,4±0,51 10,2±0,49
Макрофаги 7,8±0,37 8,4±0,68 8,0±0,63 7,4±0,60
Примечание: 'р<0,05 (2-я серия сравнивалась с 1-й серией); 2р<0,05 (3-я, 4-я, 5-я серии сравнивались со 2-й серией)
1. В опыте in vivo на экспериментальной модели ран установлено, что применение иммобилизованных форм антисептиков фурацилина (состав 1), хлоргексидина биглюконата (состав 2), гексэтидина (состав 3) в I и II фазы раневого процесса ускоряет созревание грануляционной ткани, способствует раннему началу и быстрой эпителизации раневой поверхности, способствует сокращению площади ран в среднем в 1,5±0,25 раза, и уменьшению микробной обсемененности ран в 8,2-75,3 раза, по сравнению с контролем -70% гелем энтеросгеля.
2. Проведенные исследования показали, что применение разработанных иммобилизованных форм антисептиков, за счет наличия у них высокой противовоспалительной, сорбционной и бак-
терицидной активности, сокращает течение I фазы раневого процесса в 1,5±0,14 раза по сравнению с 70% гелем энтеросгеля. Во II фазу раневого процесса мази, играют барьерную (защищая рану от внешнего воздействия) и бактерицидную роль, что также ускоряет процесс регенерации ран.
ЛИТЕРАТУРА
1. Абаев А.К., Прокопчук Н.Р., Адарченко А.А. Эффективность антисептиков и значение микрофлоры в процессе раневого заживления // Детская хирургия. - 2008. - № 1. - С. 25-29.
2. Андреев Д.Ю., Парамонов Б.А., Мухтарова А.М. Современные раневые покрытия // Вестник хирургии им. И.И. Грекова. - 2009. - Т. 168, № 3. -С. 98-102.
