CC BY
66
© Коллектив авторов, 2018 г. doi: 10.5281/zenodo.1194868
Удк 576.895.42 (Приморский край)
М.В. Берлизова1, В.А. Лубова1, А.В. Курловская2, Г.Н. Леонова1
иксодовые клещи как переносчики возбудителей ПрИродно-оЧАГовыХ заболеваний в эпидемический сезон 2017 Г. на территории приморского края
1 Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова, Владивосток
2 Дальневосточный Федеральный университет, Владивосток
На территории Приморского края функционируют природные очаги клещевого энце фалита (КЭ) и иксодовых клещевых боррелиозов (ИКБ), а также регистрируются случаи выявления моноцитарного эрлихиоза человека (МЭЧ) и гранулоцитарного анаплазмоза человека (ГАЧ). Все это указывает на необходимость ежегодного мониторинга эпидемической обстановки в отношении трансмиссивных клещевых инфекций. Целью исследования была оценка зараженности возбудителями трансмиссивных клещевых инфекций иксодовых клещей, снятых с людей на различных административных территориях Приморского края в эпидемический сезон 2017 г. Проанализировано 1035 экземпляров иксодовых клещей, снятых с пострадавших от укусов клещей людей на территории Приморского края. Методом иммуноферментного анализа (ИФА) было исследовано 808 экз. иксодовых клещей. Методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) - 372 экз. Показана наибольшая эпидемиологическая значимость клещей вида Ixodes persulcatus, доля которых составила 91,9%. По итогам исследования, 13,3% клещей оказались зараженными различными возбудителями. Выявлены инфекционные агенты: Borrelia burgdorferi sensu lato в 99 экз. клещей (26,6%), Anaplasma phagocytophilum в 15 экз. (4%), Ehrlichia muris / Ehrlichia ^affeensis в 6 экз. (1,6%), вирус клещевого энцефалита (КЭ) в 4 экз. клещей (1,1%). Антиген вируса КЭ обнаружен в 24 экз. клещей (3%). Верифицированы случаи микст-инфицирования клещей, чаще выявлялись комбинации ИКБ + ГАЧ, реже - ИКБ + МЭЧ. Проанализирован материал с 31 административного района Приморского края. Наибольшее число обращений приходилось на Владивостокский ГО и Надеждинский район. Возбудители клещевых инфекций обнаружены на всех территориях Приморья, при этом уровень инфицированности клещей варьировался в зависимости от района. Проведенный анализ указывает на необходимость ежегодного мониторинга эпидемической обстановки в отношении трансмиссивных клещевых инфекций на территории Приморского края.
Ключевые слова: трансмиссивные клещевые инфекции, иксодовые клещи, Приморский край. Для цитирования: Берлизова М.В., Лубова В.А., Курловская А.В., Леонова Г.Н. Иксодовые клещи как переносчики возбудителей природно-очаговых заболеваний в эпидемический сезон 2017 года на территории Приморского края // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2018; 1(73): 4-12. doi: 10.5281/zenodo.1194868
Для корреспонденции: Берлизова М.В., e-mail: [email protected]
Поступила 19.12.17
M.V. Berlizova1, V.A. Lubovа1, A.V. Kurlovskaya2, G.N. Leonova1 IKSODETIC TONGS AS THE CARRIAGE OF THE FORGIVERS OF NATURAL-FOCAL DISEASES TO THE EPIDEMIC SEASON 2017 IN THE TERRITORY OF THE PRIMORSK REGION
1 Somov Institute of Epidemiology and Microbiology, Vladivostok, Russia
2 Far Eastern Federal University, Vladivostok. Russia
Natural foci of tick-borne encephalitis (TBE) and ixodid tick-borne borreliosis (ICB) function in the territory of the Primorye Region, and cases of detection of monocytic human ehrlichiosis (MEC) and granulocyte human anaplasmosis (GAC) are recorded. All this indicates the need for annual monitoring of the epidemic situation with regard to vector-borne tick infections. The aim of the study was to assess the infectiousness of pathogenic tick-borne infections of ixodid mites, taken from people in various administrative territories of the Primorsky Region in the epidemic season of 2017, by pathogens. 1035 specimens of ixodid ticks taken from people who have suffered from tick bites in the Primorsky Region were analyzed. Using the enzyme immunoassay (ELISA), 808 specimens were examined. Ixodes ticks. The method of polymerase chain reaction in real time (PCR-RV) - 372 copies. The greatest epidemiological significance of ticks of the species Ixodes persulcatus is shown, their share being 91.9%. According to the results of the study, 13.3% of ticks were infected with various pathogens. Infectious agents have been identified: Borrelia burgdorferi sensu lato in 99 specimen's ticks (26.6%), Anaplasma phagocytophilum in 15 specimens. (4%), Ehrlichia
muris / Ehrlichia chaffeensis in 6 specimens. (1.6%), tick-borne encephalitis virus (TBE) in 4 specimens. ticks (1.1%). The antigen of the CE virus was detected in 24 specimen's ticks (3%). The cases of mixed infection of mites were verified, combinations of ICB + GAC were more often detected, and ICB + MECs were less frequent. The material from 31 administrative districts of Primorsky Region has been analyzed. The greatest number of appeals accounted for Vladivostok GO and Nadezhdinsky district. Pathogens of tick-borne infections were found in all territories of Primorye, while the level of infection of mites varied depending on the area. The analysis indicates the need for annual monitoring of the epidemic situation with regard to vector-borne tick-borne infections in Primorsky Region.
Keywords: transmissible tick-borne infections, ixodid mites, Primorsky Region.
For citation: Berlizova M.V., Lubova VA., Kurlovskaya A.V., Leonova G.N. Iksodetic tongs as the carriage of the forgivers of natural-focal diseases to the epidemic season 2017 in the territory of the Primorsky Region. Health. Medical ecology. Science. 2018; 1(73): 4-12. doi: 10.5281/zenodo.1194868
For correspondence: Berlizova M.V., e-mail: [email protected] Conflict of interests. The authors are declaring absence of conflict of interests.
Financing. The work was carried out within the framework of the scientific project (0545-2014-0011) of the Federal Agency of Scientific Organizations.
Received 19.12.17 Accepted 23.01.18
Введение
Во многих регионах Российской Федерации актуальной проблемой для науки и практического здравоохранения являются природно-очаговые трансмиссивные инфекции, переносимые иксодовыми клещами [4, 10]. По официальным данным, в 2017 г. в медицинские организации страны по поводу присасывания клещей обратились более 498 тысяч человек [16]. Известно, что с иксодовыми клещами связано существование и передача человеку целого ряда возбудителей заболеваний вирусной, бактериальной и протозойной природы [10]. При этом в последние десятилетия отмечается не только увеличение количества эндемичных территорий, но и расширение спектра микроорганизмов, которые передаются ик-содовыми клещами, вызывая не только моно-, но и микст-формы клещевых инфекций [7, 9, 19].
Приморский край является эндемичным регионом относительно разных трансмиссивных клещевых инфекций [1, 3, 14]. Благодаря оптимальным природ-но-экологическим условиям на территории края поддерживается высокая численность переносчиков и их прокормителей, что создает возможность для циркуляции возбудителей и способствует формированию и функционированию известных и широко распространенных природных очагов клещевого энцефалита (КЭ) и иксодовых клещевых боррелиозов (ИКБ) [8, 11]. В настоящее время эпидемиологическая ситуация по клещевому энцефалиту в Приморском крае расценивается как относительно благополучная, в то время как заболеваемость иксодовыми клещевыми боррелиозами и клещевыми риккетсиозами ежегодно превышает среднероссийские показатели [2, 5, 15]. Помимо этих возбудителей, в последние годы на территории Приморья доказана инфицированность иксодовых клещей моноцитарным эрлихиозом человека (МЭЧ) и гранулоцитарным анаплазмозом чело-
века (ГАЧ) [5, 13]. Кроме того, в 2015 г. впервые были верифицированы случаи заболевания, вызванного Borrelia miyamotoi - патогеном, ранее не встречавшимся на юге Дальнего Востока России [12].
Для естественных и антропогенно-преобразованных биоценозов территорий Приморского края установлено распространение шести массовых видов иксодовых клещей семейства Ixodidae, относящихся к трем родам: Ixodes (I. persulcatus, I. pavlovskyi), Haemaphysalis (H. japonica, H. concinna, Н. longicornis) и Dermacentor (D. silvarum) [11]. Наиболее значимым в эпидемиологическом отношении является доминирующий на территории края таежный клещ (I. рersulcatus) - основной переносчик возбудителей клещевых инфекций [6]. Преимущественно встреча людей с этими членистоногими происходит в естественных биотопах обитания иксодовых клещей, а также в антропургических очагах, включая городские территории, пригородные зоны, дачные участки, места массового отдыха и сбора дикоросов. Ежегодно в Приморском крае регистрируются около 7 тыс. случаев присасывания клещей, при этом география обращаемости по поводу укусов и выявления патогенов охватывает большинство районов Приморья [14, 17]. Все это указывает на необходимость ежегодного мониторинга эпидемической обстановки в отношении трансмиссивных клещевых инфекций.
Цель исследования: оценить зараженность возбудителями трансмиссивных клещевых инфекций иксодовых клещей, снятых с людей на различных административных территориях Приморского края в эпидемический сезон 2017 г.
Материалы и методы
Иксодовые клещи. В ходе проведенной работы в эпидемический сезон 2017 г. нами было исследовано 1035 экземпляров иксодовых клещей, снятых с пострадавших от укусов клещей людей на 31 административной
территории Приморского края. Исследование было проведено на базе Лаборатории флавивирусных инфекций (ЛФВИ) «НИИЭМ им. Г.П. Сомова» (г. Владивосток).
Иммуноферментный анализ (ИФА). Выявление антигена вируса КЭ в гомогенатах клещей проводилось методом ИФА с использованием набора «ВектоВ-КЭ-антиген» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск) по инструкции производителя тест-системы. Методом ИФА было исследовано 808 экз. иксодовых клещей.
Обратная транскрипция (ОТ) с последующей ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ). Материал исследовали на наличие ДНК/РНК вируса клещевого энцефалита (КЭ), Borrelia burgdorferi sensu lato, Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia muris/Ehrlichia сhaffeensis методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) с использованием набора «АмплиСенс TBEV, B. burgdorferi s.l., A. phagocytophilum, E. chaffeensis / E. muris-FL» (ЦНИИ эпидемиологии, Москва) согласно инструкции производителя на амплификаторе с флуорисцентной детекцией «ROTOR-GENE Q» (QIAGEN, Германия). По итогам ОТ-ПЦР-РВ, полуколичественная оценка результатов по выявлению генетических маркеров возбудителей была проведена на основе полученных значений величин пороговых циклов (Ct). Методом ОТ-ПЦР-РВ было исследовано 372 экз. иксодовых клещей.
По разности параметров оценивали средние и относительные величины, полученные для разных групп сравнения. Полученные данные представлены в виде средней ± ошибки среднего (X ± m). Достоверность различия средних величин из разных генеральных выборок оценивали на основе параметрического критерия Стьюдента (t) и непараметрического критерия Манна-Уитни. Достоверность разности полученных значений, полученных при выборочных исследованиях, интерполировали на соответствующие генеральные совокупности. Достоверными считали доверительные границы р = 95% и более.
Результаты и обсуждение
По итогам изучения инфицированности клещей нами было установлено, что 13,3% из 1035 исследованных экземпляров оказались зараженными различ-
ными возбудителями. В результате анализа методом ОТ-ПЦР-РВ вирус КЭ в клещах был выявлен в 4 случаях (1,1%), ИКБ в 99 случаях (26,6%), МЭЧ - 6 случаев (1,6%), ГАЧ - 15 случаев (4%). Методом ИФА антиген вируса КЭ был выявлен в 24 случаях (3%) (табл. 1). Среди инфицированных клещей в 6,6% случаев были выявлены сочетанные формы клещевых инфекций. Во всех исследованных микст-формах идентифицированы боррелии группы B. burgdorferi s.l., что обусловлено высокой частотой встречаемости данного возбудителя в популяции иксодовых клещей в Приморском крае. В большинстве случаев установлены комбинации B. burgdorferi s.l. + A. phagocytophilum, реже -B. burgdorferi s.l. + E. chaffeensis /E. muris.
Сезонная активность и зараженность иксодовых клещей.
Для инфекций, передаваемых иксодовыми клещами, характерна выраженная весенне-летняя сезонность. В 2017 г. первое обращение в связи с укусом клеща зарегистрировано 22 марта, последнее - 30 октября. Продолжительность эпидемического сезона составила 28 недель. Наибольшее количество обращений приходилось на май - 309 случаев (38,2%) и июнь - 242 случая (29,9%), наименьшее на март - 3 случая (0,4%).
Наибольшее число случаев выявления антигена ВКЭ методом ИФА было зафиксировано в мае - 14 случаев (4,5%). На остальные месяцы приходилось значительно меньшее количество случаев: в апреле - 4 (5,6%), в июне - 3 (1,2%), в июле - 2 (2%), в августе - 1 случай (2,2%). При исследовании клещей методом ОТ-ПЦР-РВ генетические маркеры вируса КЭ были выявлены в 2 экз. клещей в июне (1,4%), а также по 1 случаю зафиксировано в мае и апреле, что составило 1,1% и 3,2%, соответственно. Генетические маркеры ИКБ были идентифицированы в 48 случаях в июне (34,8%), в 21 случае в мае (23,9%), и в одном случае в сентябре (7,7%). ДНК ГАЧ и МЭЧ в 2017 г. была выявлено в 15 экз. (4%) и 6 экз. клещей (1,6%), соответственно. При этом, чаще всего возбудители МЭЧ выявлялись в июне - 3 случая (2,2%), а генетический материал возбудителей ГАЧ в мае - 4 случая (4,5%) и в июле - 5 случаев (7,6%) (табл. 1).
Таблица 1
Сезонное распределение случаев обращения лиц, пострадавших от укуса клеща, и выявление возбудителей в снятых клещах методами ИФА и ОТ-ПЦР-РВ в 2017 г
Месяц обращения Исследовано методом ИФА Исследовано методом ОТ-ПЦ Р-РВ, абс.(%)
абс.(%) Антиген положительные пробы, абс.(%) абс.(%) КЭ ИКБ МЭЧ ГАЧ
Январь 0 0 0 0 0 0 0
Февраль 0 0 0 0 0 0 0
Март 3 (0,4) 0 2 (0,5) 0 0 0 1 (50)
Апрель 72 (8,9) 4 (5,6) 31 (8,3) 1 (3,2) 6 (19,4) 0 1 (3,2)
Май 309 (38,2) 14 (4,5) 88 (23,7) 1 (1,1) 21 (23,9) 1 (1,4) 4 (4,5)
Июнь 242 (29,9) 3 (1,2) 138 (37,1) 2 (1,4) 48 (34,8) 3 (2,2) 2 (1,4)
Июль 99(12,3) 2 (2) 66 (17,7) 0 15 (22,7) 1 (1,5) 5 (7,6)
Продолжение таблицы 1
Август 46 (5,7) 1 (2,2) 32 (8,6) 0 8 (25) 1 (3,1) 2 (6,3)
Сентябрь 28 (3,5) 0 13 (3,5) 0 1 (7,7) 0 0
Октябрь 9 (1,1) 0 2 (0,5) 0 0 0 0
Ноябрь 0 0 0 0 0 0 0
Декабрь 0 0 0 0 0 0 0
Всего 808 24 (2,97) 372 4 (1,1) 99 (26,6) 6 (1,6) 15 (4)
Обращаемость по поводу присасывания клещей среди различных половозрастных групп.
Укусам клещей подвергались все возрастные группы населения. Анализ показал, что максимальное количество обращений отмечено среди лиц старше 60 лет - 193 случая (22,5%), минимальное - в группе 15-19 лет - 16 случаев (1,9%). Из таблицы 2 следует, что количество обращений в связи с укусом клеща возрастает, начиная с группы 30-39 лет и старше. Такое распределение может быть связано с тем, что лица среднего и пожилого возраста чаще посещают природные очаги в связи с работой на садово-огородных участках, профессиональной трудовой деятельностью, сбором дикоросов
Оценка встречаемости и зараженности иксодо-вых клещей разных видов.
В 91,9% случаев население подвергалось укусам клещей вида I. persulcatus, случаи присасывания клещей родов Dermacentor и Haemaphysalis зафиксированы в 3,5% и 4,6% случаев, соответственно. При исследовании методом ИФА антиген вируса КЭ у вида I. persulcatus был выявлен в 21 случае (2,4%), у клещей Dermacentor spp. - в 2 случаях (6,1%), у Haemaphysalis spp. - в 1 (2,3%). При исследовании методом ОТ-ПЦР-РВ генетические маркеры ВКЭ, МЭЧ и ГАЧ выявлены только в клещах I. persulcatus -4 случая (1,2%), 6 случаев (1,9%) и 15 случаев (4,7%), соответственно. Зараженность боррелиями клещей I. persulcatus составила 30,2% (97 случаев). У клещей Haemaphysalis spp ДНК B. burgdorferi s.l. выявлены в 2 случаях. В клещах рода Dermacentor боррелии обнаружены не были. Полученные данные говорят о
и отдыхом в лесных зонах. Тогда как подростки и дети, в силу современного образа жизни, занятые в учебных заведениях и проводящие свой отдых в городской среде, менее подвержены риску встречи с иксодовыми клещами.
Мужчины, по сравнению с женщинами, достоверно чаще подвергались укусам клещей. Зафиксировано 485 случаев обращения мужчин (56,5±4,7%) против 373 случаев укуса у женщин (43,5±4,7%), при Р>0,05. При этом, среди пострадавших мужчин преобладали представители группы трудоспособного возраста (30-39 лет) - 106 случаев (71,1%), а среди женщин самой многочисленной оказалась группа старше 60 лет - 104 случая (53,9%) (табл. 2).
том, что доминирующий на территории Приморского края вид клеща I. persulcatus наиболее агрессивен по отношению к человеку по сравнению с другими видами, и является основным переносчиком разных инфекций, передаваемых иксодовыми клещами.
Анализ зараженности иксодовых клещей в административных районах Приморского края.
Наибольшее число обращений в ЛФВИ со стороны пострадавшего от укусов клещей населения поступило с южных и юго-восточных районов Приморья. При этом, 32,6% случаев укусов зафиксировано на территории Владивостокского городского округа (ГО) и Надеждинского района (30,7%).
При лабораторном исследовании методом ИФА антиген ВКЭ наиболее часто выявлялся на территории Владивостокского ГО - 11 случаев (4,7%) из 233 экз. иксодовых клещей. При исследовании 149 экз. клещей на зараженность бактериальными инфекци-
Таблица 2
Обращаемость людей в связи с присасыванием клеща среди различных половозрастных групп в 2017 г
Возраст Всего обратилось Мужчины Женщины
абс./%
до 6 лет 89 (10,4) 37 (41,6) 52 (58,4)
7-14 62 (7,2) 41 (66,1) 21 (33,9)
15-19 16 (1,9) 10 (62,5) 6 (37,5)
20-29 78 (9,1) 49 (62,8) 29 (37,2)
30-39 149 (17,4) 106 (71,1) 43 (28,9)
40-49 132 (15,4) 79 (59,8) 53 (40,2)
50-59 139 (16,2) 74 (53,2) 65 (46,8)
60 и старше 193 (22,5) 89 (46,1) 104 (53,9)
Всего обследовано 857 485 (56,6±4,7) 373 (43,5±4,7)
ями методом ОТ-ПЦР-РВ на территории Владивостокского ГО возбудители ИКБ были обнаружены в 35 случаях (23,5%), МЭЧ - в 3 случаях (2%), ГАЧ -в 5 случаях (3,4%). В 1 случае (0,9%) был выявлен генетический маркер вируса КЭ.
В Надеждинском районе показатель вирусофор-ности клещей при исследовании методом ИФА со-
ставил 1,2% (3 случая) из 241 проанализированного образца. Анализ 129 экз. клещей на зараженность возбудителями клещевых инфекций выявил наличие ДНК B. burgdorferi s.l. в 38 случаях (29,5%), ДНК A. phagocytophillum в 2 случаях (1,6%). РНК вируса КЭ, а также возбудителя МЭЧ на территории На-деждинского района выделено не было (табл. 3).
Случаи выявления возбудителей клещевых инфекций методом ОТ-ПЦР-РВ в клещах, присосавшихся к людям на различных административных территориях Приморского края в 2017 году
Таблица 3
Административные районы Приморского края Исследовано методом ОТ-ПЦР-РВ
абс.(%) КЭ ИКБ МЭЧ ГАЧ
абс.(%)
Владивостокский городской округ 149 (41) 1 (0,9) 35 (23,5) 3 (2) 5 (3,4)
Надеждинский район 129 (35,5) 0 38 (29,5) 0 2(1,6)
Шкотовский район + Артемовский ГО 36 (9,9) 2 (5,6) 9 (25) 1 (2,8) 2 (5,6)
Хасанский район 13 (3,6) 0 5 (38,5) 0 2 (15,4)
Районы Приханкайской низменности (Спасский район Ханкайский район + Хорольский район + Пограничный район + Черниговский район + Уссурийский ГО) 11 (3) 0 2 (18,2) 1 (9,1) 0
Партизанский район + Партизанский ГО 7 (1,9) 0 1 (14,3) 0 0
Находкинский ГО 6 (1,7) 0 1 (16,7) 0 1 (16,7)
Чугуевский район + Анучинский район 6 (1,7) 1 (16,7) 3 (50) 0 0
Лазовский район 5 (1,4) 0 2 (40) 1 (20) 0
Северо-восточные районы Сихотэ-Алиня (Кавалеровский район) 1 (0,3) 0 0 0 1 (100)
Всего 363 4 (1,1) 96 (26,4) 6 (1,7) 11 (3)
Антиген ВКЭ на территориях Артемовского ГО и Шкотовкого района обнаружен не был. При исследовании 36 экз. иксодовых клещей методом ОТ-ПЦР-РВ были зарегистрированы положительные
находки: РНК вируса КЭ детектирована в 2 случаях (5,6%), ДНК боррелии обнаружены в 9 случаях (25%), анаплазмы - в 2 случаях (5,6%), эрлихии - в 1 случае (2,8%) (табл. 4).
Таблица 4
Случаи выявления антигена вируса КЭ методом ИФА в клещах, присосавшихся к людям на различных административных территориях Приморского края в 2017 году
Административные районы Приморского края Исследовано методом ИФА
абс.(%) Антиген положительные пробы, абс.(%)
Надеждинский район 241 (30,6) 3 (1,2)
Владивостокский городской округ 233 (29,6) 11 (4,7)
Находкинский ГО + ГО Большой Камень 105 (13,3) 2 (1,9)
Шкотовский район + Артемовский ГО 87 (11) 0
Районы Приханкайской низменности (Арсеньевский ГО + Спасский район + Спасский ГО + Ханкайский район + Хорольский район + Пограничный район + Черниговский район + Октябрьский район + Михайловский район) 25 (3,2) 3 (12)
Хасанский район 22 (2,8) 1 (4,5)
ГО ЗАТО Фокино 21 (2,7) 1 (4,8)
Партизанский район + Партизанский ГО 16 (2) 0
Лазовский район 11 (1,4) 0
Уссурийский ГО 9 (1,1) 2 (22,2)
Чугуевский район + Анучинский район 6 (0,8) 0
Северо-западные районы Сихотэ-Алиня (Кировский район + Дальнереченский район + Красноармейский район + Пожарский район) 6 (0,8) 0
Северо-восточные районы Сихотэ-Алиня (Тернейский район + Ольгинский район + Кавалеровский район + Дальнегорский ГО) 5 (0,6) 1 (20)
Всего 787 24 (3)
На территориях городских округов Находки и Большого Камня выявляемость антигена ВКЭ составила 1,9% (2 случая из 105 исследованных образцов). В этих районах обнаружены единичные находки генетических маркеров ИКБ и ГАЧ. При этом, случаев инфицирования клещей МЭЧ и вирусом КЭ установлено не было.
Значительно меньшее количество образцов иксодовых клещей было получено для исследования с северных территорий Приморского края (северо-западные и северо-восточные районы Сихотэ-Алиня), районов Приханкайской низменности, Хасанского, Лазовского, Партизанского, Анучинского, Чугуевского районов, а также с территорий Партизанского и Арсеньевского городских округов и пригородных зон, ЗАТО Фокино. Обращаемость в ЛВФИ по поводу присасывания клещей колебалась от 3,5% (36 случаев в Хасанском районе) до 1,2% (12 обращений из северных районов края). Антиген вируса КЭ был выявлен в единичных случаях в ГО, ЗАТО Фокино, Хасанском, Тернейском, Ханкайском районах. В Спасском районе и Уссурийском ГО было зафиксировано по 2 случая выявления антигена ВКЭ. В Партизанском, Лазовском районах, также на территориях северо-западного Сихотэ-Алиня (Кировский, Дальнереченский, Красноармейский, Пожарский районы) антиген ВКЭ не выявлен. Методом ОТ-ПЦР-РВ лишь в одном исследуемом образце из Анучинского района удалось определить генетический маркер вируса КЭ. Инфицирование клещей возбудителями ИКБ установлено на территориях Хасанского района (5 случаев), Чугуевского района (3 случая), а также по 1 случаю зафиксированно в Спасском районе и Партизанском ГО. В 2 переносчиках из Хасанского района и в единичных случаях из Кавалеровского района и Находкинского ГО обнаружена ДНК A. phagocytophillum. ДНК E. chaffeensis /E. muris идентифицирована лишь в 1 случае на территории Лазовского района (Таблица 3,4).
Полуколичественная оценка бактериальной нагрузки B. burgdorferi s.l на территории Приморского края.
В связи с наиболее частым обнаружением возбудителей ИКБ в анализируемом материале, нами была проведена полуколичественная оценка результатов выявления генетических маркеров B. burgdorferi s.l. методом ОТ-ПЦР-РВ Величины пороговых циклов (Ct) при выявлении кДНК B. burgdorferi s.l. варьировали в диапазоне значений от 12,2 до 35,8 (что соответствует максимальной и минимальной концентрации патогенов). Среднее значение порогового цикла составило 22,5. При оценке различия значений пороговых циклов, 31,6% образцов был отнесен нами в группу с низкими показателями Ct (< 20). Для 57,1% случаев были определены значения Ct в пределах 20,1-28,9 пороговых циклов.11,2% образцов характеризовались наибольшими значениями Ct, превышающими 29 цикл.
При этом для материала, полученного из разных районов Приморского края, нами были показаны различия в значениях средних показателей пороговых циклов и было установлено варьирование распределения образцов по группам в зависимости от величины Ct. Так, на территории Надеждинского района среднее значение Ct составило 21,7. В пороговые группы со значениями Ct < 20 и 20,1-28,9 были отнесены по 16 образцов (по 42,1%). Среднее значение порогового цикла для экземпляров клещей с о. Русский составило 23,1. При этом 29,4% (5 случаев) относилось к группе с низкими показателями Ct, а в группу с диапазоном значений 20,1-28,9 вошли 58,8% образцов (10 случаев). На территории г. Владивостока превалировали показатели в пределах 20,1-28,9 циклов (76,2%), при среднем показателе Ct = 23,6. В Шкотовском районе среднее значение Ct составило 21,1, в группу < 20 было отнесено 3 образца, в группу с диапазоном 20,1-28,9 циклов отнесено 4 образца. Следует также отметить, что средние значения пороговых циклов для материала из Хасанского района, Находкинского и Партизанского городских округов не превышали 18,6. Все единичные образцы, полученные из Лазовского и Чугуевского районов, а также с территории Артемовского ГО, были отнесены в среднюю пороговую группу (Ct = 20,1-28,9).
Известно, что значения величин порогового цикла (Ct) характеризуют концентрацию генетического материала возбудителя в исследуемом материале [18]. Для значительного количества проанализированных образцов из различных районов Приморского края зафиксированы абсолютные значения Ct, находящиеся в пределах низких (< 20) и средних диапазонов (до 29 цикла), что может говорить о высокой интенсивности бактериальной нагрузки B. burgdorferi s.l. на данных территориях.
Анализ зараженности иксодовых клещей на территории Владивостокского ГО.
В силу урбанизации, и ее социально-экономических последствий, таких как увеличение площади городов, присоединение к ним близлежащих населенных пунктов, а также роста численности городского населения, городские жители чаще, чем сельские, подвергаются риску встречи с иксодовыми клещами на территориях синантропных (урбанических) очагов, расположенных непосредственно в границах городов. Владивосток с его обширной пригородной зоной является самым густо населенным районом Приморского края. При этом на территории Владивостокского ГО расположены многочисленные лесные ландшафты, которые определяют наличие очагов инфекций, передаваемых иксодовыми клещами.
Наибольшее число обращений по поводу присасывания клещей приходилось на территории, являющиеся основными местами массового отдыха жителей города и края, такие как острова - Русский,
Попова, Рейнеке (77 случаев - 26,3%), и прибрежные зоны Владивостока, включая микрорайоны Емар и окрестности бух. Лазурной (59 случаев -20,1%), а также микрорайоны Седанка, Океанская и Санаторная (42 случая - 14,3%). Частота обращения среди лиц, проживающих на территории или посещавших лесные и лесопарковые зоны пригорода Владивостока - районы Садгорода, Весенней, Спутника, поселка Трудовое - составила 11,3% (33 случая). 17 случаев присасывания клеща (5,8%) зафиксировано на территории Ботанического сада-института ДВО РАН. На территориях лесных массивов и прибрежных зон бухт Улисс, Патрокл, Тихая и Горностай от укусов клещей пострадали 11 человек (3,8%). В пределах района Дальхимпрома и нового микрорайона Снеговой пади частота обращений составила 8,2% (24 случая). 21 случай (7,2%) присасывания клеща был зафиксирован в районе лесных зон Второй речки, Зари и в окрестностях Академгородка. На внутригородских территориях (парк Минного городка, район Первой речки, а также улиц Нейбута и Некрасовская) число обращений по поводу присасывания клеща составило 9 случаев (3,1%). В 39 случаях укусов клещей,
зафиксированных на территории г. Владивостока, районы встречи с переносчиком указаны не были.
Среди исследуемых образцов иксодовых клещей, проанализированных методом ОТ-ПЦР-РВ, наиболее часто выявляемыми возбудителями были боррелии. ДНК B. burgdorferi s.l. детектирована во всех районах Владивостокского ГО. Наибольшее количество случаев (17) зафиксировано на островных территориях. На материковой части случаи выявления ИКБ колебались от 1 до 5 в различных микрорайонах г. Владивостока.
Генетические маркеры прочих бактериальных инфекций (ГАЧ и МЭЧ) были идентифицированы в материале, полученном с островов и прибрежных зон Владивостока. ДНК A. phagocytophillum - 4 случая (бух. Лазурная, микрорайон Седанка, о. Русский), ДНК E. chaffeensis / E. muris - 2 случая (о. Русский, бух. Па-трокл). РНК вируса КЭ детектирована лишь в 1 образце на территории микрорайона Снеговая падь.
Антиген вируса КЭ был выявлен в клещах из лесных зон окрестностей Владивостока (микрорайон Спутник) - 2 случая, внутригородских территорий (микрорайон Снеговая падь, ул. Некрасовская) -2 и 1 случай, соответственно, а также в образцах с о. Рейнеке и района бух. Лазурная - по 1 случаю.
Рис. Случаи выявления возбудителей клещевых инфекций методом ИФА и ОТ-ПЦР-РВ на территории Владивостокского ГО в 2017 году
Таким образом, для территории г. Владивостока и его окрестностей показана циркуляция вируса КЭ, возбудителей ИКБ, а также новых для Приморского края инфекционных агентов МЭЧ и ГАЧ. По результатам исследования иксодовых клещей, присосавшихся к людям на территории Владивостокского ГО, нами показано, что возбудители бактериальных инфекций (B. burgdorferi s.l., A. phagocytophillum, E. chaffeensis / E. muris) наиболее часто выявлялись на о. Русском. Так, зараженность клещей боррелиями там достигала 44,7%, ДНК A. phagocytophilum выявлена в 5,3%, E. chaffeensis / E. muris - в 2,6 % случаев. Кроме того, 8,2% исследуемых клещей с данной территории оказались микст-инфицированы двумя патогенами. Сочетание B. burgdorferi s.l. + A. phagocytophillum обнаружено в 5,6% случаев, B. burgdorferi s.l. + E. chaffeensis /E. muris в 2,6%. Полученные результаты позволяют предположить, что на территории о. Русский функционируют активные природные очаги бактериальных инфекций, в том числе микст-инфекций, передаваемых иксодовыми клещами. На основании этого, о. Русский может быть отнесен к потенциально опасным районам г. Владивостока в плане заражения возбудителями ИКБ, ГАЧ, МЭЧ, что в свою очередь, говорит о необходимости дальнейшего изучения эпидемической ситуации на данной территории (рис. 1).
Генетические маркеры двух возбудителей - РНК вируса КЭ и ДНК B. burgdorferi s.l. были выявлены в новом микрорайоне Снеговая падь, к которому прилегают обширные лесные массивы. Данный микрорайон представляет собой антропогенно-преобразованный ландшафт, который в недавнем прошлом являлся естественным биотопом иксодовых клещей. Об этом говорит, как обращаемость населения по поводу присасывания клеща (8,2%), так и частота обнаружения возбудителей клещевых инфекций (в 5 из 22 проанализированных экз. клещей выявлены возбудители каких-либо инфекций).
Полученные данные свидетельствуют о функционировании природных и антропургических очагов в различных районах Владивостокского ГО, включая как жилые микрорайоны и внутригородские лесопарковые зоны, так и места массового отдыха горожан на островных и прибрежных территориях.
Заключение
На территории Приморского края функционируют активные природные и антропургические очаги инфекций, передаваемых иксодовыми клещами. Наиболее существенное эпидемиологическое значение для Приморья имеют клещи вида I. persulcatus, как основные переносчики практически всех известных возбудителей трансмиссивных клещевых инфекций. В целом, по итогам изучения инфицированности клещей, снятых с
людей, методами ИФА и ОТ-ПЦР-РВ выявлено наличие следующих инфекционных агентов: вируса клещевого энцефалита (КЭ), Borrelia burgdorferi sensu lato, Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia muris / Ehrlichia ^affeensis. Установлена высокая частота обнаружения ДНК боррелий (26,6%). ДНК анаплазм и эрлихий выявлена в 4% и 1,6% случаев, соответственно, РНК вируса КЭ детектирована в 1,1% исследованных образцов. Наличие антигена вируса КЭ методом ИФА установлено в 24 экз. клещей, что составило 3% антиген положительных из общего числа исследованных проб. Верифицированы случаи микст-инфицирования иксодовых клещей на отдельных территориях, что может свидетельствовать о функционировании сочетанных очагов клещевых инфекций и формировать возможные риски полиэтиологического заражения населения.
Проведенный анализ указывает на необходимость ежегодного эпидемиологического мониторинга инфекций, передаваемых иксодовыми клещами, в природных и антропургических очагах Приморского края. Особое внимание следует уделять густонаселенным районам юга и юго-востока Приморья и местам массового отдыха населения. Также, перспективным представляется дальнейшее мониторинговое исследование более репрезентативных выборок иксодовых клещей из отдаленных от административного центра районов Приморского края.
Таким образом, проблема природно-очаговых трансмиссивных инфекций требует всестороннего изучения для адекватной оценки сложившейся эпидемиологической ситуации и составления прогноза развития очагов новых и возвращающихся инфекций, передаваемых иксодовыми клещами.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии интересов.
Финансирование. Работа выполнена в рамках научного проекта (0545-2014-0011) Федерального агентства научных организаций.
ЛИТЕРАТУРА
1. Болотин Е. И., Ананьев В. Ю., Бурухина Е. Г. Некоторые особенности экологии клещевых инфекций в Приморском крае // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2009; 3: 63-65.
2. Воронок В.М., Загней Е.В., Бурухина Е.Г. Мониторинг за инфекциями, передающимися клещами в Приморском крае // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2016; 3(66): 84-88.
3. Воронок В.М., Румянцева Е.Е., Захарова Г.А. и др. Современная эпидемиологическая ситуация по клещевому вирусному энцефалиту в Приморском крае // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2010; 1-2 (41-42): 122-4.
4. Гаранина С.Б., Федорова М.В., Платонов А.Е. и др. Природно-очаговые инфекции в XXI веке в России // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2009; 2: 30-35.
5. Государственный доклад «О состоянии санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Приморском крае в 2016 году». URL: http:// 25. rospotrebnadzor.ru/c/document_ Hbrary/get_file?uuid=499405fe-0f7d-4955-b259-44e2b377dd4d&groupId=10156 (дата обращения: 05.12.17).
6. Зверева Т.В., Алленов А.В., Никитин А.Я. Видовые особенности контактов иксодовых клещей с человеком на юге Приморского края // Проблемы особо опасных инфекций. 2015; 4: 14-17.
7. Злобин В.И. Эпидемиологический мониторинг и профилактика иксодовых клещевых инфекций в условиях сочетанных природных и антропургиче-ских очагов // Эпидемиология и вакцинопрофилак-тика. 2008; 2: 10-4.
8. Иванис В.А., Леонова Г.Н., Лубова В.А. Актуальные вопросы иксодовых клещевых боррелиозов в Приморском крае. В сб.: Матер. XIII всерос. конгр. с междун. уч. М.; 2016: 114.
9. Коренберг Э.И. Изучение и профилактика микст инфекций, передающихся иксодовыми клещами. Вестник РАМН. 2001; 11: 41-45.
10. Коренберг Э.И., Помелова В.Г., Осин Н.С. Природноочаговые инфекции, передающиеся иксо-довыми клещами. Под ред.: Гинцбурга А.Л., Злоби-на В.Н. М.: Наука; 2013; 463 с.
11. Леонова Г.Н. Клещевой энцефалит в Приморском крае: вирусологические и эколого-эпидемиологи-ческие аспекты. Владивосток: Дальнаука; 1997; 190 с.
12. Леонова Г.Н., Иванис В.А., Бондаренко Е.И., Беликов С.И., Лубова В.А. Клинические случаи, вызываемые Borrelia miyamotoi на юге Дальнего Востока. В сб.: Матер. XIII всерос. конгр. по инфекц. бол. с междун. уч. М; 2016: 162.
13. Лубова В.А., Леонова Г.Н., Бондаренко Е.И. Комплексная характеристика природных очагов клещевых инфекций на юго-восточных территориях Сихотэ-Алиня. // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2017; 1(68): 30-35.
14. Нестерова Ю.В., Радченко Л.П., Бурухина Е.Г. Эпидемиологическая ситуация по клещевым инфекциям в Приморском крае // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2014; 4(58): 163-169.
15. Носков А.К., Никитин А.Я., Андаев Е.И. и др. Клещевой вирусный энцефалит в Российской Федерации: особенности эпидемического процесса в период устойчивого спада заболеваемости, эпидемиологическая ситуация в 2016 г., прогноз на 2017 г. Проблемы особо опасных инфекций. 2017; 1: 37-43.
16. О противодействии распространению инфекций, передающихся с укусом клещей [Электронный ресурс]: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителя и благополучия человека. URL: // http://www.rospotrebnadzor.ru/search/index. php. (дата обращения: 05.12.17 г.).
17. Санитарно-эпидемиологическая обстановка [Электронный ресурс]: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителя и благополучия человека по Приморскому краю. URL: http://25. rospotrebnadzor.ru/epidemiologic_situation (дата обращения: 05.12.17).
18. Чичерина Г.С., Морозова О.В., Панов В.В. и др. Сравнительный анализ зараженности голодных иксодовых клещей Ixodes pavlovsky Pomerantsev 1946 и Ixodes persulcatus Schulze вирусом клещевого энцефалита в зоне симпатрии их ареалов // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2015; 1: 20-26.
19. Ястребов В.К., Рудаков Н.В., Шпынов С.Н. Трансмиссивные клещевые природно-очаговые инфекции в Российской Федерации: тенденции эпидемического процесса, актуальные вопросы профилактики // Сиб. мед. журн. 2012; 4: 91-93.
Сведения об авторах
Берлизова Мария Владимировна - младший научный сотрудник лаборатории флавивирусных инфекций ФГБНУ «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова» (НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова); Владивосток, ул. Сельская 1, 690087; раб. тел. 8(423)244-26-04; моб. тел. 8(964) 447-83-68; е-тай: [email protected] (автор корреспондент);
Лубова Валерия Александровна - младший научный сотрудник лаборатории флавивирусных инфекций ФГБНУ «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова» (НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова); Владивосток, ул. Сельская 1, 690087; раб. тел. 8(423)244-26-04; моб. тел. 8(999)040-71-08; е-таИ: [email protected];
Курловская Александрия Владимировна - студентка ФГАОУ ВПО «Дальневосточный Федеральный университет»; Владивосток, ул. Суханова, 8, 690091; моб. тел. 8(914)070-24-28; е-mail: [email protected];
Леонова Галина Николаевна - главный научный сотрудник лаборатории флавивирусных инфекций, доктор медицинских наук, профессор. ФГБНУ «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова» (НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова); Владивосток, ул. Сельская 1, 690087; раб. тел. 8(423) 244-07-12; е-mail: [email protected].
