CC BY
100
IFNa-ИнДУЦИРОБАннЫЕ ДЕнДРИТнЫЕ КЛЕТКИ у больных множественной миеломой
О.Ю. Леплина, Г.В. Насонова, М.А. Тихонова, И.В. Крючкова,
И.А. Лисуков, А.А. Останин, Е.Р.Черных
НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск 630099, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14, e-mail: [email protected]
Проведено сравнительное исследование фенотипических и функциональных свойств дендритных клеток (ДК), генерированных in vitro в присутствии GM-CSF и IFN-a, у здоровых доноров (n=34) и больных множественной миеломой (n=12). Показано, что по своему составу (количеству зрелых/незрелых ДК и клеток промежуточной степени зрелости) популяция ДК больных в целом была сопоставима с ДК здоровых доноров. ДК больных множественной миеломой (ММ) не отличались от ДК доноров по уровню продукции IFN-y и TNF-а. В то же время ДК больных характеризовались более низким содержанием активированных CD25+клеток в сочетании с повышенной продукцией IL-10, что, по-видимому, обусловливало ослабление их стимуляторной активности в СКЛ. Тем не менее ДК больных ММ сохраняли свою способность к запуску Thl-ответа, что проявлялось 5-кратным увеличением количества CD3+IFN-y+ Т-клеток. Полученные данные аргументируют возможность клинического применения ДК у больных ММ в качестве клеточных вакцин (особенно в сочетании с адъювантной цитокинотерапией) с целью повышения эффективности противоопухолевого иммунного ответа.
Ключевые слова: множественная миелома, дендритные клетки, Th1/Th2 цитокины, СКЛ.
IFN-a-INDUCED DENDRITIC CELLS IN PATIENTS WITH MULTIPLE MYELOMA O.Yu. Leplina, G.V Nasonova, M.A. Tikhonova, I.V Kryuchkova, I.A. Lisukov, A.A. Ostanin, E.R. Chernykh Research Institute of Clinical Immunology, Siberian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Novosibirsk 14, Yadrintsevskaya Street, 630099-Novossibirsk, e-mail: ct_lab@mail/ru
The phenotypical and functional properties of dendritic cells (DCs), generated in vitro with GM-CS and IFN-a, were studied in the healthy donors (n=34) and patients with multiple myeloma (MM, n=12). The normal quantity of mature/non-mature and semi-mature cells was found in DCs population, generated in patients with MM. The level of IFN-y and TNF-а production by DCs of patients was comparable with healthy donors. However, DCs of patients with MM were characterized by low percentage of activated CD25+cells coupled with enhance IL-10 production, which obviously cause the decrease of DCs stimulatory activity in mixed lymphocyte culture (MLC). Nevertheless, DCs of patients were able to induce Th1 response that was accompanied by 5-fold increase of CD3+IFN-y+ Т-cells relative number in MLC. Our data argue the possibility of clinical application of DCs in patients with MM (in the form of cellular vaccines, particularly, in combination with adjuvant cytokine therapy) with the aim to enhance the efficiency of anti-tumor immune response.
Key words: multiple myeloma, dendritic cells, Th1/Th2 cytokines, MLC.
Множественная миелома (ММ) является В-клеточным лимфопролиферативным заболеванием, которое характеризуется клональной пролиферацией в костном мозге (реже - в экстрамедуллярных очагах) атипичных плазматических клеток, продуцирующих моноклональный иммуноглобулин и/или свободные моноклональные легкие цепи иммуноглобулинов (к или Я). В структуре гемобластозов доля ММ составляет 10%, при этом в России ежегодно погибает более 10 000 больных с данной патологией. Современные подходы в лечении ММ предполагают использование высокодозной полихимиотерапии (ПХТ) мелфаланом с последующей аутотрансплантацией периферических
стволовых кроветворных клеток (СКК). Другой подход заключается в проведении повторных курсов ПХТ с трансплантацией аутологичных СКК после каждого курса химиотерапии («тандемная» трансплантация). Но даже такая комплексная терапия не предотвращает развитие рецидивов.
С целью контроля минимальной остаточной болезни и для поддержания ремиссии после ВДХ назначается интерферон-а (1КК-а). Несмотря на то, что поддерживающая терапия позволяет в ряде случаев увеличивать продолжительность ремиссии, достичь увеличения продолжительности жизни при этом не удается. Общий прогноз при множественной миеломе неблагоприятный.
Это делает актуальным поиск новых подходов к лечению данного заболевания.
Известно, что ключевую роль в распознавании опухолевого антигена и презентации его специфическим цитотоксическим Т-клеткам играют дендритные клетки (ДК), способные инициировать иммунный ответ [5, 13]. Соответственно, создание лечебных вакцин на основе ДК рассматривается в качестве одного из новых подходов в комплексной терапии опухолевых заболеваний [3, 4, 9, 20].
Как правило, ДК получают in vitro из прилипающей фракции мононуклеарных клеток (МНК) периферической крови. Классическим считается протокол генерации ДК путем культивирования моноцитов крови в присутствии GM-CSF и IL-4 в течение 5-7 дней (незрелые ДК) с последующей стимуляцией их созревания в течение 24-48 ч с различными факторами (зрелые ДК) [18]. В последние годы в литературе появились данные о возможности быстрой генерации частично зрелых ДК с помощью GM-CSF и IFN-a [16]. Отличительными особенностями данного типа ДК (IFN-ДК) являются высокая способность к захвату антигена; высокая миграционная активность за счет экспрессии хемокинового рецептора CCR7; функциональная стабильность в отсутствие ростовых факторов; способность индуцировать как Th1-, так и г1Ъ2-ответ; а также секретиро-вать IFN-a, обладающий противовирусной и противоопухолевой активностью [11]. Тем не менее исследование возможности генерации и характеристика IFN-ДК при ММ ранее не проводилось. Исходя из этого, целью работы явилось изучение фенотипических и функциональных свойств IFNa-индуцированных ДК у больных множественной миеломой.
Материал и методы
Группа обследованных больных ММ включала 12 человек (5 мужчин и 7 женщин), которые поступили в клинику НИИ клинической иммунологии СО РАМН в период с 2000 по 2007 г. В табл. 1 приведены данные о возрасте пациентов, изотипе секретируемых парапротеинов, относительном количестве плазматических клеток в костном мозге, стадии заболевания, состоянии здоровья и особенностях терапии в момент
проведения исследования. Стадию заболевания определяли согласно классификации Durie & Salmon (1975). Контрольную группу составили 34 донора крови, сопоставимых по полу и возрасту. Обследование всех пациентов проводилось с их информированного согласия.
МНК выделяли из гепаринизированной венозной крови центрифугированием в градиенте плотности фиколла-верографина. Моноциты выделяли на чашках Петри (Nuclon, Дания) путем прилипания к пластику МНК (2-5*106 клеток/мл) в присутствии 10 % сыворотки крови АВ (IV) группы. Для генерации ДК моноциты культивировали во флаконах (BD Biosciences Falcon, Великобритания) в течение 3 сут в среде RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, США), дополненной 0,3 мг/мл L-глутамина, 5мМ HEPES-буфера. 100 мкг/мл гентамицина и 5 % сыворотки плодов коровы («БиоЛот», СПб.), в присутствии GM-CSf (40 нг/мл, Sigma-Aldrich, США) и INF-a (1000 Ед/мл, Роферон-А, Roche, Швейцария) с последующим дозреванием с липопо-лисахаридом (10 мкг/мл, LPS E. coli 0114:В4, Sigma-Aldrich, США) в течение 24 ч.
Фенотипический анализ ДК проводили методом одноцветной или двуцветной проточной цитофлюориметрии (FACSCalibur, Becton Dickinson, США) с использованием FITS- или PE-меченных моноклональных антител (CD83, CD1a, CD 11c, CD14, CD25, CD123; PharMingen, США). Аллостимуляторную активность ДК оценивали в смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ). В качестве отвечающих клеток использовались МНК доноров (0,1х106/лунку), которые культивировали в 96-луночных круглодонных планшетах для иммунологических исследований в среде RPMI-1640 (как описано выше) с 10 % инактивированной сыворотки крови АВ (IV) группы при 37°С в СО2-инкубаторе. Стимуляторами служили аллогенные IFN-ДК здоровых доноров или больных ММ в соотношении МНК:ДК = 10:1. Пролиферативный ответ в СКЛ оценивали на 5 сут радиометрически по включению 3Н-тимидина (1 мкКю/лунку), вносимого за 18 ч до окончания культивирования.
В культуральных супернатантах, генерированных IFN-ДК, определяли концентрацию IFN-y, IL-4, IL-10 и TNF-a с помощью соответствующих тест-систем для иммуноферментного
ШМА-ИНДУЦИРОВАННЫЕ ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ у БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОй
----------------------------------------------------------------------------------- 39
Таблица 1
Клиническая и гематологическая характеристика больных ММ
№ паци- ента Пол Возраст Изотип парапротеина Плазматические клетки в костном мозге, % Стадия Состояние здоровья Терапия
1 Ж 67 65 III Ремиссия Cy/Dexa+Велкейд
2 Ж 61 30 ШБ Ремиссия Велкейд
3 М 49 IgG 11,5 ША Ремиссия PAD
4 Ж 50 IgG 31 II Ремиссия Нет
5 Ж 69 76 III Прогрессия Зомета
6 М 49 IgG 10 III Ремиссия Велкейд
7 Ж 50 2 III Частичная ремиссия Нет
8 М 63 IgA 48 III Частичная ремиссия Нет
9 М 46 IgA 27 III Частичная ремиссия Нет
10 М 56 IgA 6 III Частичная ремиссия Нет
11 Ж 67 IgG 29,5 ШБ Прогрессия VMmP
12 Ж 48 IgG 8 III Прогрессия Нет
анализа в соответствии с инструкцией фирмы-производителя («Вектор-Бест», Новосибирск).
Оценку экспрессии внутриклеточных ци-токинов в популяции CDS+Т-лимфоцитов. стимулированных ДК, проводили методом трехцветной проточной цитометрии (FACSCalibur, «Becton Dickinson», США). Для этого МНК, истощенные от моноцитов, культивировали в 96-луночных планшетах в полной культуральной среде с 10 % сыворотки плодов коровы в отсутствие (контроль) и в присутствии (опыт) ДК в соотношении 10:1 в течение 72 ч. За 18 ч до конца инкубации в культуру добавляли брефел-дин (10 мкг/мл, «ICN», США), затем клетки отмывали и инкубировали 15 мин при комнатной температуре с APC-меченными моноклональными анти-CD3-антителами (Becton Dickinson, США). Далее проводили пермеабилизацию клеток с помощью 0,2 % раствора Твин-20 и инкубировали их с моноклональными FITC-конъюгированными анти-INF-y антителами и PE-меченными анти-^-4 (Becton Dickinson, США). В культурах МНК, истощенных от моноцитов (МНК0) и активированных ДК (МНК + ДК) здоровых доноров и больных ММ, определяли относительное содержание CD3+Т-клеток с внутриклеточной экспрессией IFN-y и IL-4, при
этом рассчитывали соответствующие индексы влияния ДК (ИВ) на количество Т-клеток, экспрессирующих №N-7 и ^-4, по формуле ИВДК = опыт/контроль.
Математическую обработку полученных результатов проводили с помощью пакета программ Statistica 6.0.
Результаты и обсуждение
Популяция прилипающих к пластику клеток у больных ММ, так же как и у здоровых доноров, была представлена преимущественно СШ4+ моноцитами (77,6 ± 1,9 и 81,3 ± 2,3 % соответственно). В результате культивирования моноцитов с GM-CSF и ШК-а в течение 3-4 сут клетки теряли способность прилипать к пластику и приобретали типичные морфологические черты дендритных клеток. Сравнительный фенотипический анализ показал (табл. 2), что в группе больных ММ среди генерируемых ШК-ДК отмечается повышенное содержание СБ14+моноцитов. Тем не менее общее количество миелоидных СБПс+ДК у больных было достоверно выше, чем у доноров, при этом относительное число зрелых СШ3+ДК сохранялось на уровне нормы. Однако в популяции генерируемых №К-ДК больных отмечалось
статистически значимое снижение содержания активированных ДК, экспрессирующих СБ25 (рецептор к а-цепи ^-2).
Таблица 2
Фенотипическая характеристика IFN-ДК здоровых доноров и больных ММ
Маркеры Доноры (n=18), % Больные ММ (n=12), %
CD14 8,7 і 1,4 17,7 і 2,1*
CD1a 1Q,4 і 2,Q 7,1 і 1,35
CD11c 28,7 і 2,2 48,Q і 6,5*
CD123 24,9 і 2,6 23,8 і 4,9
СБ83 22,4 і 2,4 22,5 і 5,9
CD25 25,1 і 3,5 7,7 і 2,1*
CD83 +CD1a- 17,9 і 2,5 18,3 і 5,8
CD83 +CD1a+ 4,6 і Q,8 4,2 і Q,8
CD83 -CD1a+ 5,3 і 1,7 3,Q і 1,5
CD11o+CD123- 19,8 і 4,3 34,3 і 5,3*
CD11o+CD123+ 7,3 і 1,3 13,8 і 3,2*
CD110-CD123+ 14,3 і 2,3 8,6 і 1,6
Примечание: * - различия статистически значимые по сравнению с донорами (ри<0,05, и критерий Вилкоксона-Манна-Уитни).
Поскольку маркеры CD83 и CD1a характеризуют различные стадии созревания миелоидных ДК, дополнительно была проанализирована коэкспрессия CD83 и CD1а молекул на 1КК-ДК. Популяция генерируемых ДК больных ММ была сопоставима с ДК здоровых доноров по количеству терминально дифференцированных ДК с фенотипом CD83+CD1а", а также по числу незрелых CD83"CD1а+ДК и cD83+CD1а+ клеток промежуточной степени зрелости.
Одной из особенностей Ш^ДК является наличие на них рецептора к ^-3 (CD 123). Данный маркер высоко экспрессируется на плазмаци-тоидных ДК и практически отсутствует на ДК, генерируемых в присутствии GM-CSF и ^-4 [17]. ДК больных ММ не отличались от ДК доноров по относительному количеству СD123+ клеток (табл. 2). Результаты двуцветной цито-флюорометрии показали, что у доноров большая часть CD123+ клеток сосредоточена в популяции CD11c-негативных клеток, что позволяет отнести их к классу плазмацитоидноподобных ДК. В то же время у больных ММ CD123 маркер чаще обнаруживался среди миелоидных CD11c+ДК. Соответственно, у больных относительное количество CD11+CD123+-клеток практически
в 2 раза превышало аналогичный показатель здоровых доноров (13,8 ± 3,2 % и 7,3 ± 1,3 %; Ри<0,05).
Как известно, популяция IFN-ДК является гетерогенной в отношении степени зрелости клеток, из которых только 25-30 % экспрессируют маркеры зрелых и активированных ДК (CD83 и CD25 соответственно) [11], что соответствует полученным нами данным в группе здоровых доноров. По группе обследованных нами больных ММ можно заключить, что при данной патологии в культуре in vitro генерируется популяция ДК, в целом сопоставимая с аналогичной популяцией здоровых доноров. Несмотря на то, что среди ДК больных оставалось повышенным относительное количество CD14+моноцитов, а доля активированных CD25+ДК была достоверно ниже, тем не менее у больных генерировалось большее количество миелоидных cDnc+ДК (48,0 ± 6,5 % против 28,7 ± 2,2% у доноров, pU<0,05), при этом среди них сохранялись нормальные пропорции зрелых CD83+ДК, включая терминально дифференцированные CD83+CD1а-клетки, и незрелых CD83-CD1а+ДК, а также CD83+CD^+ клеток промежуточной степени зрелости.
Особенностью ДК, генерируемых у больных ММ, является увеличение относительного количества миелоидных CDHc+клеток ко-экспрессирующих CD123 (рецептор к IL-3). Поскольку известно, что IFN-a способен блокировать снижение экспрессии CD123 на моноцитах по мере их дифференцировки в ДК, то увеличение CD11c+CD123+ клеток может быть связано с функциональными особенностями моноцитов больных ММ. Кроме того, нельзя исключить наличие среди прилипающих к пластику клеток предшественников плазмацитоидных ДК. Однако в отличие от здоровых доноров у больных ММ CD123+ клетки преимущественно локализованы среди CD1 ^+ДК, что в сочетании с более низким числом плазмацитоидноподобных CD11с-CD123+ДК снижает вероятность высказанного предположения.
Учитывая потенциальную возможность использования IFN-ДК в качестве клеточной основы при создании терапевтических вакцин для лечения гемобластозов, представлялось важным оценить функциональную активность
ШМА-ИНДУЦИРОВАННЫЕ ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ у БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОй
------------------------------------------------------------------------------ 41
Рис. 1. Аллостимуляторная активность ДК здоровых доноров и больных ММ.
МНК доноров (0,1х106/лунку) культивировали в течение 5 сут в отсутствие (МНК-0) или в присутствии аллогенных ДК здоровых доноров (п=34) или больных ММ (п=12) в соотношении 10:1.
Примечание: интенсивность пролиферации (имп/мин) в СКЛ представлена в виде М ± 8.Е. * - различия статистически значимы по сравнению с ДК доноров (ри <0,05)
ДК, генерируемых у больных ММ. С этой целью был проведен сравнительный анализ аллости-муляторной активности ДК здоровых доноров и больных ММ в СКЛ (рис. 1). Было выявлено умеренное, но статистически значимое снижение уровня пролиферативного ответа в СКЛ в присутствии ДК больных (7093 ± 913 против 12880 ± 1100 имп/мин у доноров, рц<0,05). Полученные результаты свидетельствуют о нарушении антигенпрезентирующей функции ШК-ДК, полученных от больных ММ.
Поскольку способность ДК активировать
Т-клетки во многом связана со спектром и уровнем продуцируемых ими цитокинов, дополнительно была исследована продукция ТЫ/ про- (Ш^у/ЮТ-а) и ^2/противовоспалитель-ных (1Ь-4/1Ь-10) цитокинов в культуральных супернатантах Ш^ДК (рис. 2). Оказалось, что ДК больных ММ активно секретировали №N-7 и TNF-а на достаточно высоком уровне, сопоставимом со средними значениями здоровых доноров. Продукция 1Ь-4 была минимальной и в обеих анализируемых группах находилась на нижней границе чувствительности иммунофер-ментных тест-систем (<5 пг/мл). В то же время ДК больных ММ характеризовались повышенной способностью секретировать 1Ь-10 (110 ± 36 против 82 ± 13 пг/мл у доноров, ри<0,05). При этом у 50 % обследованных больных ММ (6/12) индивидуальные значения продукции 1Ь-10 выходили за верхнюю границу квартального диапазона нормы (>93 пг/мл). Можно полагать, что выявленное ранее снижение аллостимуляторной активности ДК больных в СКЛ обусловлено не столько дефектом их антигенпрезентирующей функции, сколько повышенной супрессорной активностью, которая опосредуется через синтез 1Ь-10.
Следует отметить, что пролиферативный ответ МНК в присутствии ДК больных ММ был снижен в среднем на 45 % по сравнению с уровнем ответа в присутствии ДК здоровых доноров. Иными словами, примерно половина Т-клеток все-таки пролиферировала в ответ на аллоантигены, представленные дендритными клетками больных. Чтобы выяснить, какой тип
Рис. 2. Концентрация цитокинов в культуральных супернатантах ДК здоровых доноров и больных ММ. Содержание №N-7, ^-4, ^-10 и ТОТ-а (пг/мл, М ± 8.Е.) измеряли в супернатантах генерируемых культур №К-ДК здоровых доноров (п=17) и больных ММ (п=12). Примечание: * - различия статистически значимы по сравнению с ДК доноров (Р0«Ш)
Таблица 3
Влияние ДК здоровых доноров и больных мм на внутриклеточную экспрессию Т-клетками IFN-y и IL-4
Источник ДК CD3+ IFN-Y+ Т-клетки, % CD3+ IL-4+ Т-клетки, %
МНК0 МНК + ДК ИВДК МНК0 МНК + ДК ИВДК
Доноры (n=18) 1,83 ± 0,3 6,35 ± 0,61 5,4 ± 1,1 1,3 ± 0,2 1,6 ± 0,3 1,6 ± 0,3
Больные (n=12) 1,36 ± 0,1 6,11 ± 0,58 5,5 ± 1,4 1,9 ± 0,1 2,3 ± 1,1 2,0 ± 0,2
Примечание: ИВ^ - индекс влияния ДК на количество Т-клеток, экспрессирующих IFN-y и IL-4.
Т-лимфоцитов преимущественно активируется в присутствии IFN-ДК, была исследована внутриклеточная экспрессия Т-клетками ШК-у и ^-4 в СКЛ (табл. 3). Видно, что стимуляция МНК дендритными клетками здоровых доноров приводила к четкому усилению внутриклеточной продукции ШК-у в популяции Т-лимфоцитов, что проявлялось 5-кратным увеличением количества СБ3+ШК-у+ Т-клеток. В то же время активация внутриклеточной продукции ^-4 в популяции СБ3+Т-клеток была слабовыражен-ной (ИВ=1,6 ± 0,3). ДК больных ММ обладали сходной с донорами стимулирующей активностью в отношении внутриклеточной продукции ШКу (ИВДК 5,5 ± 1,4 против 5,4±1,1 расч.ед. у доноров) и такой же низкой ТЪ2-поляризующей активностью (ИВ в отношении СБ3^-4Т-клеток составил 2,0 ± 0,2 расч.ед.). Таким образом, ШК-ДК больных, так же как и ДК доноров, активируют преимущественно ТЫ ответ.
В литературе имеются противоречивые данные о количестве и функциональной активности ДК у больных ММ. Так, в отдельных работах показано, что пациенты с ММ характеризуются пониженным содержанием и/или функциональной дефектностью дендритных клеток [10,
15]. В то же время ряд других исследователей отмечают только функциональные (но не количественные) нарушения ДК [7, 8], тогда как, по данным К. Raje et а1., ДК, генерированные из МНК костного мозга или периферической крови больных ММ, вообще являются фенотипически и функционально нормальными [14].
Не менее противоречивыми являются данные относительно экспрессии маркеров зрелости и аллостимуляторной активности ДК при множественной миеломе [7, 8, 10, 14, 15].
Следует отметить, что в большинстве на-
учных работ, в том числе посвященных ММ, исследуются ДК, генерированные in vitro по «классическому» протоколу с использованием GM-CSF и IL-4 [18]. Однако является ли данный путь генерации ДК физиологичным, остается спорным вопросом, поскольку продукция большого количества IL-4 в естественных условиях представляется маловероятной. Кроме того, имеются данные, что ДК, полученные с помощью GM-CSF/IL-4, характеризуются in vivo слабой миграционной активностью и низкой стабильностью в отсутствие цитокинов [19]. С этой точки зрения большой интерес представляют ДК, генерируемые в присутствии GM-CSF и IFN-a. Как известно, помимо антивирусной активности, IFN-a обладает выраженным стимулирующим эффектом на клеточный и гуморальный иммунитет и индуцирует быструю дифференцировку моноцитов в ДК с высокой миграционной активностью. Кроме того, IFN-a продуцируется в больших количествах в ответ на стимуляцию инфекционными антигенами и провоспалительными цитокинами, и, следовательно, активация системы интерферонов, возможно, отражает ранний и более физиологичный путь генерации ДК in vivo в ответ на инфекцию и опухолевую прогрессию [6, 17].
Задержка созревания и нарушение функций ДК являются характерным проявлением опухолевой иммуносупрессии при многих онкологических заболеваниях [12]. Дисфункции ДК являются, очевидно, одним из критических механизмов ускользания опухоли от иммунного ответа. Нарушение созревания ДК при опухолевом росте обычно связывают с изменением цитокинового микроокружения, в частности снижением уровня цитокинов, стимулирующих дифференцировку ДК, и увеличением кон-
IFNA-ИНДУЦИРОВЛННЫЕ ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ У БОЛЬНЫХMHОЖEСТВEHHОЙ MИEЛОMОЙ
------------------------------------------------------------------------- 43
центрации факторов, ингибирующих данный процесс. Кроме того, дефект ДК у больных гемобластозами может быть обусловлен также изменением функциональных свойств моноцитов, которые являются источником генерации ДК. Так, согласно полученным нами ранее данным, проведение ПХТ у больных лимфомами индуцирует супрессорную активность моноцитов, в том числе за счет увеличения продукции ИЛ-10 [1, 2]. В то же время хорошо известно, что дифференцировка ДК в присутствии IL-10 существенно ингибируется, а генерируемые ДК характеризуются толерогенными свойствами.
В целом проведенные нами исследования продемонстрировали возможность генерации у больных миеломной болезнью IFN-ДК, которые обладают определенными фенотипическими и функциональными особенностями. По своему составу (количеству зрелых/незрелых ДК и клеток промежуточной степени зрелости) популяция ДК больных в целом была сопоставима с ДК здоровых доноров. Отличия заключались в более низком содержании активированных CD25+клеток в сочетании с повышенной продукцией IL-10, что, по-видимому, и приводит к ослаблению их стимуляторной активности в СКЛ. Тем не менее ДК больных ММ сохраняют свою способность к запуску ТЫ-ответа, что демонстрирует принципиальную возможность их клинического применения в качестве лечебных, клеточных вакцин с целью индукции противоопухолевого иммунного ответа. Можно полагать, что действие дендритноклеточных вакцин у больных ММ может быть более эффективным в комбинации с адъювантной цитокинотерапией (например, с использованием препаратов рекомбинантного IL-2 и/или интерферона-a), которая позволит нивелировать иммуносупрессорные эффекты IL-10 и активировать in vivo дополнительное количество ДК и цитотоксических Т-лимфоцитов, участвующих в запуске и развитии противоопухолевого иммунного ответа.
ЛИТЕРАТУРА
1. ШевелаЕ.Я., Сизикова С.А., ТихоноваМ.А. и др. Механизмы и клиническое значение моноцитарно-опосредованной супрессии у больных лимфомами // Гематология и трансфузиология. 2006. № 3. С. 18-23.
2. Шевела Е.Я., Сизикова С.А., Тихонова М.А. и др.
Характеристика нарушений функциональной активности Т-клеток у больных лимфомами при проведении программной полихимиотерапии // Гематология и трансфузиология. 2QQ4. № 1. С. 15-19.
3. Adams M., Navaba H., Jasani B. et al. Dendritic cell based therapy for cervical cancer - use of DC pulsed with tumour lysate and matured with a novel synthetic clinically non-toxic double stranded RNA analogue poly // Vaccine. 2003. Vol. 21. P. 787-790.
4. Baar J. Clinical applications of dendritic cell cancer vaccines // Oncologist. 1999. Vol. 4. P. 140-144.
5. Banchereau J., Steinmann R.M. Dendritic cells and control of immunity // Nature. 1998. Vol. 392. P. 245-252.
6. BrassardD., Grace M., Bordens R.WJ. Interferon-a as an immu-notherapeutic protein // J. Leukoc. Biol. 2002. Vol. 71. P. 565-581.
7. BrownR., MurrayA., PopeB. et al. Either IL-12 or interferon-gamma can correct the dendritic cell defect induced by transforming growth factor beta in patients with myeloma // Br. J. Haematol. 2004. Vol. 125. P. 743-748.
8. BrownR., PopeB., MurrayA. et al. Dendritic cells from patients with myeloma are numerically normal but functionally defective as they fail to up-regulate CD8Q (B7-1) expression after huCD40LT stimulation because of inhibition by transforming growth factor beta 1 and interleukin-10 // Blood. 2001. Vol. 98. P. 2992-2998.
9. Buchler T.,Michalek J., KovarovaL. et al. Dendritic cell-based immunotherapy for the treatment of hematological malignancies // Hematology. 2003. Vol. 8, № 2. P. 97-104.
10. Do T.H., Johnsen H.E., Kjaersgaard E. et al. Impaired circulating myeloid DCs from myeloma patients // Cytotherapy. 2004. Vol. 6. P. 196-203.
11. Parlato S., Santini S., Lapenta C. et al. Expression of CCR-7, MIP-3b, and Th1 chemokines in type I IFN-induced monocyte-derived dendritic cells - importance for the rapid acquisition of potent migratory and functional activities // Blood. 2001. Vol. 98. P. 3022-3029.
12. Pinzon-CharryA., Maxwell T., Lopez J.A. Dendritic cell dysfunction in cancer: a mechanism for immunosuppression // Immunol. Cell Biol. 2005. Vol. 83. P. 451-461.
13. Radford K.J., Vari F., Hart D.N. Vaccine strategies to treat lymphoproliferative disorders // Pathology. 2005. Vol. 37, № 6. P. 534-550.
14. Raje N., Gong J., Chauhan D. et al. Bone marrow and peripheral blood dendritic cells from patients with multiple myeloma are phenotypically and functionally normal despite the detection of Kaposi’s sarcoma herpes virus gene sequences // Blood. 1999. Vol. 93. P. 1487-1495.
15. RattaM., FagnoniF., Curti A. et al. Dendritic cells are functionally defective in multiple myeloma: the role of interleukin-6 // Blood. 2002. Vol. 100. P. 230-237.
16. Santini S., Lapenta C., LogozziM. et al. Type I Interferon as a powerful adjuvant for monocyte-derived dendritic cells development and activity in vitro and in HU-PBL-SCID mice // J. Exp. Med. 2000. Vol. 191. P. 1777-1788.
17. Santini S., Pucchini T., Lapenta C. et al. A new type 1 IFN-mediated pathway for the rapid differentiation of monocytes into highly active dendritic cells // Stem cells. 2003. Vol. 21. P. 357-362.
18. Thurner B., Roder C., Dieckmann D. et al. Generation of large numbers of fully mature and stable dendritic cells from leuka-pheresis products for clinical applications // J. Immunol. Meth. 1999. Vol. 223. P. 1-15.
19. ThurnherM., Zelle-Rieser C., Ramoner R. The disabled dendritic cell // FASEB. 2001. Vol. 15. P. 1054-1061.
20. Timmerman JM. Immunotherapy for lymphomas // Hematology. 2003. Vol. 77, № 5. P. 444-455.
Поступила 13.06.09
