CC BY
15
DOI: 10.14258/jcpim.2021028314
УДК 615.322
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЦИКЛОСИВЕРСИОЗИДА F
© М.А. Агзамова*, Р.М. Халилов, А.А. Жанибеков
Институт химии растительных веществ им. акад. С.Ю. Юнусова АН РУз, ул. Мирзо Улугбека, 77, Ташкент, 100170 (Узбекистан), e-mail: agzamova_manzura@mail.ru
Растение Astragalus pterocephalus Bunge, произрастающее в Узбекистане, является источником тритерпеновых гликозидов. Основным гликозидом циклоартанового ряда по содержанию является циклосиверсиозид F. Разработаны оптимальные условия выделения и разделения суммы экстрактивных веществ с целью получения индивидуального гли-козида. Для получения индивидуального биологически активного соединения с 95% чистотой предложена методика экстракции метанолом, концентрирование и разбавление равным объемом воды. Затем последовательное извлечение из водного экстракта хлороформом, этилацетатом и бутанолом. Далее - хроматографическое разделение очищенной суммы экстрактивных веществ на колонке с силикагелем, выделение субстанции и осаждение из системы растворителей с последующей перекристаллизацией и сушкой.
Установлена подлинность исследуемого соединения с помощью ТСХ в сравнении с аутентичным образцом. Чистоту циклосиверсиозида F подтвердили снятием спектров ЯМР 'Н и 13С. Методом ВЭЖХ проведен количественный анализ гликозида.
Ключевые слова: циклосиверсиозид F, астрагалозид IV, Astragalus pterocephalus, Tragacantha pterocephala, кар-диопротектор, ТСХ, ВЭЖХ, КХ, этанол, метанол, бутанол.
Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства Инновационного развития Республики
Узбекистан по гранту № И-ФА-2019-27.
Производство субстанции лекарственных препаратов из растительного сырья является процессом трудоемким, разделенным на несколько этапов. Современный уровень медицинских и фармацевтических исследований требует получения индивидуальных природных соединений с высоким процентом чистоты, экстрагируемых из объектов животного и растительного происхождения. Поставленная задача актуальна для различных областей химии и медицины, но в большей степени - для биохимических и фармакологических исследований.
Правильный выбор метода разделения экстракта и очистки конечного продукта влияет на качество субстанции и экономические показатели технологического способа выделения.
Для достижения цели необходимо в определенной последовательности использовать комбинацию известных или новых приемов обработки. Особое значение имеют сорбенты и хроматографические методы разделения, позволяющие качественно осуществить выделение и препаративное накопление органических соединений различных классов [1].
Введение
Агзамова Манзура Адхамовна - кандидат химических наук, старший научный сотрудник лаборатории химии гликозидов, e-mail: agzamova_manzura@mail.ru Халилов Равшанжон Муратджанович - доктор технических наук, ведущий научный сотрудник экспериментально-технологической лаборатории, e-mail: r.m.khalilov@mail.ru Жанибеков Абдульазиз Адилханович - кандидат химических наук, старший научный сотрудник экспериментально-технологической лаборатории, e-mail: j.aziz@mail.ru
Хроматографический метод очистки биологически активных соединений - один из распространенных методов разделения суммы экстрактивных веществ с близкими химическими структурами и степени полярностей.
Astragalus pterocephalus Bunge (Tragacantha pterocephala Boriss) семейства Leguminosae - астрагал крылатоголовый (трагакант крылатоголовый) -
* Автор, с которым следует вести переписку.
H
HO
OH
Циклосиверсиозид F
HO
H2COH HO'—f
Рис. 1. Химическая структура циклосиверсиозида F (астрагалозид IV)
произрастает на щебнистых и мелкоземистых склонах на высотах 1500-3000 м над уровнем моря. Распространен в Центральной Азии, Западном Тянь-Шане и Памиро-Алае; в Узбекистане - в Ташкентской, Ферганской, Самаркандской, Кашкадарьинской и Сурхандарьинской областях [2].
Циклосиверсиозид F, или астрагалозид IV - три-терпеновый гликозид циклоартанового ряда, аглюкон которого известный в литературе циклосиверсигенин. В молекуле соединения имеются два сахарных остатка в виде ксилопиранозы и глюкопиранозы, присоединенные по С-3 и С-6 соответственно (рис. 1). Гликозид встречается и был изолирован из 12 видов растений рода Astragalus. Наибольший выход циклосиверсиозида F отмечен в следующих видах: A. pterocephalus, A. kuhitangi (Nevski) Sirj., A. leiosemius (Lipsky) M.Pop и А. pycnanthus Boriss [3-7].
Тритерпеновые гликозиды показали ряд физиологических активностей: обладают выраженными анти-гипоксическими свойствами [8, 9], восстанавливают биохимические процессы в клетках миокарда. При внутривенном введении больным с застойной сердечной недостаточностью улучшают сократительную функцию левого желудочка и замедляют частоту сердечных сокращений и in vitro на культуре эндотелиальных клеток пупочной вены человека, стимулируют пролиферацию и миграцию [9-11], проявляют иммуностимулирующий эффект [12].
Исследовано влияние циклосиверсиозида F на обменные процессы сердечной мышцы (углеводный, липидный, энергетический) интактных животных в сравнении с классическим метаболическим препаратом - рибоксином. Гликозид нормализирует нарушения липидного обмена при атеросклерозе [13, 14], положительно влияет на метаболические процессы. Повышает энергетический пул миокарда животных (увеличение содержания гликогена, креатинфосфата, АТФ), усиливает процессы аэробиоза, позитивным сдвигам со стороны липидного обмена сердечной мышцы в виде уменьшения содержания в миокарде холестерина и триг-лицеридов [15-19], оказывает действие на свертываемость крови в сравнении с курантилом [20].
Циклосиверсиозид F был изолирован из растения A. pterocephalus, который является потенциальным источником сырья для производства субстанции. Выход гликозида составил 1.45% от веса сухого растительного сырья [3, 4].
В настоящее время в Институте химии растительных веществ разрабатывается способ получения кар-диопротекторного препарата из растения флоры Узбекистана.
Анализируя способы получения циклосиверсиозида F из различных видов растений рода Astragalus [3-7], нами сделан выбор на технологический способ получения циклосиверсиозида F из растения A. pterocephalus. Экстрагирование метанолом, затем концентрирование и получение густого экстракта, отгонка на роторном испарителе и разбавление остатка объемом воды. Далее последовательное извлечение из водной суммы экстрактивных веществ хлороформом, затем этилацетатом и бутанолом в системе жидкость-жидкость. Следующий этап - хроматографическое разделение на колонке с силикагелем, выделение субстанции и осаждение циклосиверсиозида F из системы растворителей: метанол-этилацетат с последующей сушкой.
Цель исследования - подбор оптимальных условий процесса проведения колоночной хроматографии на силикагели и перекристаллизации циклосиверсиозида F.
Исследование направлено на разработку технологического способа получения субстанции циклоси-версиозида F 95% чистоты.
Экспериментальная часть
Растение A. pterocephalus было заготовлено в августе 2019 года в Кашкадарьинской области Республики Узбекистан, бассейн реки Кашкадарья, в окрестностях села Джауз. Провели анатомо-морфологическое исследование надземных органов растения [21].
Воздушно-сухую надземную часть измельчали до размеров частиц 2-6 мм.
В экстрактор объемом 200.0 л загружали измельченное растительное сырье A. pterocephalus (25 кг) и заливали 100.0 л метанола. Экстракцию проводили при комнатной температуре в течение 6 ч. После экстрагирования метанольный экстракт в количестве 70.0 л сливали в сборник. В экстрактор заливали новую порцию 70,0 л метанола и проводили вторую экстракцию. Экстракцию проводили еще три раза. Объединенные сливы экстрактов отфильтровывали через нутч-фильтр, заправленный фильтром из сукна, и порциями подавали в вакуумно-циркуляционный аппарат (Simax, Чехия), где растворитель отгоняли при температуре не выше 60 °С и вакууме 0.04-0.08 МПа (0.4-0.8 кгс/см2). В вакуумный испарительный аппарат заливали 10.0 л воды и продолжали концентрирование экстракта до полного удаления метанола из раствора.
Водный концентрат в количестве 6.0 л сливали в смеситель объемом 25.0 л и сумму тритерпеновых соединений шестикратно экстрагировали бутанолом по 6.0 л. Бутанольное извлечение суммы экстрактивных веществ в количестве 36 л порциями подавали на ротационный испаритель, где упаривали экстракт до остатка в 5 л при температуре воды 50-60 °С и вакууме 0.04-0.08 МПа (0.4-0.8 кгс/см2). Густую сумму экстрактивных веществ перемешивали с 5.0 кг силикагеля, высушивали в сушильном шкафу и получили 6.25 кг сухой массы с содержанием 6.8% субстанции циклосиверсиозида F, которую разделяли на 25 порций (по 0.25 кг).
Подбор соотношения высоты сорбционного слоя к диаметру колонки. Хроматографические колонки (5 штук) различных размеров заполняли по 1.0 кг силикагеля (размер частиц 50-100 |im, марка КСК, Чехия), варьируя соотношение высоты сорбционного слоя к диаметру колонки на уровнях: 15 : 1, 20 : 1, 25 : 1, 30 : 1, 35 : 1. Затем первые пять порций сухой суммы экстрактивных веществ по 0.25 кг загружали в хроматогра-фические колонки, при этом соотношение сорбента к сумме тритерпеновых гликозидов составило (20 : 1). Сумму, содержащую циклосиверсиозид F, промывали системами растворителей: хлороформ - метанол - вода (70 : 23 : 4) по 1.5 л при скорости потока 25 л/чм2. Элюат упаривали досуха и анализировали.
Подбор скорости элюирования циклосиверсиозида F. Следующие пять порций суммы экстрактивных веществ загружали в колонки (каждая колонка имела одинаковый размер: длина - 1500 мм, внутренний диаметр - 50 мм), соотношение высоты сорбционного слоя к диаметру колонки 25 : 1. Сумму тритерпеновых гли-козидов промывали системой растворителей: хлороформ - метанол - вода (70 : 23 : 4) в количестве по 1.5 л при различной скорости элюирования: 30, 35, 40, 45, 50 л/чм2. Элюаты, содержащие тритерпеновый глико-зид - циклосиверсиозид F, упаривали досуха и проводили анализ количественного содержания в процентах от веса сухого сырья.
Подбор и соотношение сорбента и суммы экстрактивных веществ, наносимой в колонку. В колонку загружали силикагель и сумму экстрактивных веществ в различных весовых соотношениях: 1 : 55, 1 : 10, 1 : 15, 1 : 20, 1 : 25, далее колонку промывали со скоростью 40 л/чм2. Элюаты, содержащие циклосиверсиозид F, упаривали досуха и анализировали выход циклосиверсиозида F в процентах от веса сухого сырья.
Подбор растворителя для перекристаллизации циклосиверсиозида F. Пять хроматографических колонок длиной 1500 мм, внутренним диаметром 50 мм заполняли по 1.0 кг силикагеля. Затем следующие пять порций по 0.25 кг сухой массы экстрактивных веществ загружали на хроматографические колонки в весовом соотношении сорбента к сумме гликозидов 15 : 1. Циклосиверсиозид F элюировали системой растворителей: хлороформ - метанол - вода (70 : 23 : 4) в количестве по 1.5 л при скорости потока 40 л/чм2. Элюаты из каждой колонки упаривали досуха в отдельных колбах. Каждую колбу заливали по 100 мл различными системами растворителей: метанол - хлороформ (1 : 9), метанол - этилацетат (1 : 9), этанол - хлороформ (1 : 9), этанол - этилацетат (1 : 9) и пропанол-2 - этилацетат (1 : 9). В колбах с обратными холодильниками нагревали растворы на водяной бане при температуре 60 °С до полного растворения сухой субстанции (далее в тексте - технический продукт). Растворы вылили в стаканы на 200 мл и охлаждали до 10 °С. Кристаллы сушили и анализировали.
Качественный анализ циклосиверсиозида F. При проведении экспериментов по выделению гликозида подлинность циклосиверсиозида F установили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ), который заключается в следующем: образец (точная навеска 1 мг) циклосиверсиозида F растворяют в 0.5 мл системе растворителей хлороформ - метанол (1 : 1). Из приготовленного раствора капилляром наносят на пластинку, покрытую силикагелем с 13% содержанием гипса. Подвижной фазой хроматограммы является система растворителей: хлороформ - метанол - вода (70 : 23 : 4). Вещество на хроматограмме проявляют опрыскиванием 20% спиртовым раствором фосфорновольфрамовой кислоты и с последующим нагреванием при 110 °С в термостате в течение 5-7 мин. Циклосиверсиозид F проявляется в виде пятна кирпично-красного цвета,
которое через некоторое время приобретает коричневый оттенок. В вышеуказанных условиях Rf составляет 0.3 (рис. 1).
Количественный анализ циклосиверсиозида F. Хроматографию проводили на ВЭЖХ-хроматографе марки Agilent 1100 с колонкой - Zorbax Eclipse XDB - C18 (внутренний диаметр - 3 мм, длина 10 см, дисперсность сорбента 3.5ц или аналогичный). УФ-детекция при длине волны X 205 нм. Время удерживания 23.62 мин (рис. 2).
В качестве мобильной фазы использовали растворители, приведенные в таблице 1.
Время анализа - 10 мин; скорость потока - 0.5 мл/мин; объем вводимого образца - 20 мкл.
Приготовление раствора стандартного образца циклосиверсиозида F осуществляли следующим образом: 0.01 г (точная навеска) стандартного образца циклосиверсиозида F растворяют в 10 cм3 метанола при постоянном перемешивании (1 мг/мл, раствор А). Затем раствор А (2.5 cм3) доводили до 25 cм3 в мерной колбе, разбавляя метанолом (0.1 мг/мл, раствор В).
Содержание циклосиверсиозида F (x) в образце вычисляют по формуле
х = -
S ■ C ■ P
шЪ std '-sti
S ■ C
std sub
где - площадь пика вещества в субстанции; Б^а - площадь пика вещества в стандартном растворе; С^а -концентрация стандартного раствора (мг/мл); Сшь - концентрация раствора субстанции (мг/мл); Рх1а - процентное содержание стандарта.
Обсуждение результатов
При экстрагировании тритерпеноидов циклоартанового ряда из водного раствора бутанолом остаются водорастворимые примеси в водной фазе, а в органический растворитель переходят сопутствующие соединения, генины и малополярные гликозиды - циклосиверсиозиды С и Е. Наиболее рациональным способом разделения циклосиверсиозида F от других соединений с близкой химической структурой является колоночная хроматография с силикагелем.
При разделении методом колоночной хроматографии наблюдается максимальный выход циклосивер-сиозида F с минимальным количеством сопутствующих веществ. В качестве элюента использована система растворителей: хлороформ - метанол - вода (70 : 23 : 4) [2-6].
Как сдедует из таблицы 2, при увеличении высоты сорбционного слоя выход циклосиверсиозида F уменьшается, а содержание основного действующего вещества в конечном продукте увеличивается. Таким образом, наилучший результат был получен при соотношении высоты сорбционного слоя к диаметру колонки, как 25 : 1, так как в этих условиях выход циклосиверсиозида F как основного действующего вещества наибольший.
Рис. 2. ВЭЖХ-хроматограмма циклосиверсиозида F
Таблица 1. Градиент растворителей
Растворитель Время, мин.
0.00 5.00 10.00
Вода, % 70 50 30
Ацетонитрил, % 30 50 70
Из экспериментальных данных, приведенных в таблице 3, следует, что разделение циклосиверсиозида Б от других тритерпеноидов происходит с высоким выходом основного соединения при большей скорости элюирования. С уменьшением скорости элюирования выход субстанции увеличивается, но содержание циклосиверсиозида Б уменьшается.
На основании приведенных данных для выделения циклосиверсиозида Б методом колоночной хроматографии установлена оптимальная скорость элюирования в пределах 40-45 л/чм2.
Из таблицы 4 следует, что оптимальная сорбция примесей достигается при соотношении суммы и сорбента как 1 : 15. Необходимо отметить, что увеличение количества сорбента незначительно улучшает чистоту циклосиверсиозида Б.
После хроматографического разделения суммы тритерпеновых гликозидов и отгонки растворителя содержание циклосиверсиозида Б в сухом остатке составляет 87-90%. Для получения соединения 95% чистоты при проведении перекристаллизации подобраны соотношения из различных растворителей (табл. 5).
В таблице 5 приведен высокий процент выхода индивидуального гликозида, циклосиверсиозида Б в опытах 2 и 4, причем выход субстанции в опыте 2 больше, чем 4. Для перекристаллизации технического продукта -циклосиверсиозида Б выбрана система растворителей метанол - этилацетат в соотношении (1 : 9).
Таблица 2. Влияние размеров колонки на хроматографическое разделение циклосиверсиозида Б
Соотношение высоты сорбционного слоя к диаметру колонки Выход субстанции циклосиверсиозида Б, % от веса сухого сырья Содержание циклосиверсиозида Б в конечном продукте, %
15 1 92.2 70.3
20 1 91.9 74.6
25 1 90.6 78.7
30 1 88.8 78.9
35 1 87.1 79.4
Таблица 3. Динамика разделения циклосиверсиозида Б методом колоночной хроматографии
Скорость элюирования, л/чм2 Выход субстанции циклосиверсиозида Б, % от веса сухого сырья Содержание циклосиверсиозида Б в конечном продукте, %
30 93.1 72.4
35 92.4 75.3
40 91.8 79.7
45 88.8 79.9
50 86.5 80.2
Таблица 4. Выход циклосиверсиозида Б в зависимости от соотношения суммы к сорбенту
Соотношение суммы экстрактивных веществ к сорбенту в колонке Выход субстанции циклосиверсиозида Б %, от веса сухого сырья Содержание циклосиверсиозида Б в конечном продукте, %
1 : 5 93.8 65.4
1 : 10 93.1 73.3
1 : 15 91.6 80.7
1 : 20 89.7 80.9
1 : 25 85.3 81.2
Таблица 5. Система растворителей для перекристаллизации циклосиверсиозида Б
№ опыта Система растворителей Выход субстанции Содержание циклосиверсиозида Б в субстанции, %
в г в % к весу сухого сырья
1 Метанол - хлороформ (1 : 9) 15.4 1.54 93.2
2 Метанол - этилацетат (1 : 9) 14.5 1.45 98.6
3 Этанол - хлороформ (1 : 9) 13.3 1.33 92.4
4 Этанол - этилацетат (1 : 9) 12.0 1.20 96.5
5 Пропанол-2 - этилацетат (1 : 9) 13.9 1.39 90.5
Выводы
1. Для разделения циклосиверсиозида F методом колоночной хроматографии с силикагелем в качестве селективного элюата предложена система растворителей: хлороформ - метанол - вода (70 : 23 : 4).
2. Максимальный выход циклосиверсиозида F с минимальными затратами сорбента достигается при соотношении высоты сорбционного слоя к диаметру колонки, как (25 : 1); скорость элюирования в интервале 40-45 л/ч м2; соотношение суммы экстрактивных веществ и сорбента (1 : 15).
3. Для получения циклосиверсиозида F с 95%-ным выходом и выше необходима перекристаллизация из системы растворителей: метанола-этилацетат (1 : 9).
Благодарность старшему научному сотруднику Сасмакову С.А. в проведении ВЭЖХ-анализа.
Список литературы
1. Сухих А.С., Кузнецов П.В. Применение сорбента универсального назначения сефадекса LH-20 в современных медико-биологических исследованиях // Медицина в Кузбассе. 2009. №4. С. 3-12.
2. Коровин Е.П. Введенский А.В. Флора Узбекистана. Ташкент: АН УзССР, 1955. Т. 3. 684 с.
3. Agzamova M.A., Isaev I.M. Chemical constituents of plant Astragalus pterocephalus // Chemistry of Natural Compounds. 2016. Vol. 52. Pp. 501-502. DOI: 10.1007/s10600-016-1687-3.
4. Agzamova М.А., Isaev M.I., Gorovits M.B., Abubakirov N.K. Triterpene glycosides of Astragalus and their genins. XIX. Cycloartane compounds and sterols from Astragalus pamirensis and A.pterocephalus // Chemistry of Natural Compounds. 1986. Vol. 22. N1. Pp. 115-116. DOI: 10.1007/BF00574606.
5. Agzamova M.A., Isaev M.I., Mal'tsev I.I., Gorovits M.B., Abubakirov N.K. Triterpene glycosides of Astragalus and their genins. XXIX. Cycloartanes of Astragalus kuhitangi // Chemistry of Natural Compounds. 1988. Pp. 755-756. DOI: 10.1007/BF00598208.
6. Agzamova M.A., Isaev I.M., Ibragimov T.F. Cycloartane Glycosides from Astragalus leiosemius // Chemistry of Natural Compounds. 2014. Vol. 50. N5. Pp. 959-960. DOI: 10.1007/s10600-014-1133-3.
7. Agzamova M.A., Isaev M.I. Cycloartane Triterpenoids from Astragalus pycnanthus // Hacettepe University J. of Faculty of Pharmacy. 1999. Vol. 19. N1. Pp. 45-55.
8. Zhang L., Liu Q., Lu L., Zhao X., Gao X., Wang Y. Astragaloside IV stimulates angiogenesis and increases hypoxia-inducible factor-1a accumulation via phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2011. Vol. 338. N2. Pp. 485-491. DOI: 10.1124/jpet.111.180992.
9. Luo H.M., Dai R.H., Li Y. Nuclear cardiology study on effective ingredients of Astragalus membranaceus in treating heart failure // Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 1995. Vol. 15. Pp. 707-709.
10. Chen L.X., Liao J.Z., Guo W.Q. Effects of Astragalus membranaceus on left ventricular function and oxygen free radical in acute myocardial infarction patients and mechanism of its cardiotonic action // Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 1995. Vol. 15. Pp. 141-143.
11. Patent 57165400 (JP). Saponins from Astragali root / A. Kadota, Y. Uchida. - 1983.
12. Bedir Е., Pugh N., Calis I., Pasco D.S., Khan I.A. Immunostimulatory effects of cycloartane-type triterpene glycosides from Astragalus species // Biological and Pharmaceutical Bulletin. 2000. Vol. 23. N7. Pp. 834-837. DOI: 10.1248/bpb.23.834.
13. Царук А.В., Хушбактова З.А., Сыров В.Н., Агзамова М.А., Касимова Г.М. Фармакокоррекция нарушений ли-пидного обмена у кроликов с атеросклерозом циклоартановым гликоздом циклосиверсиозидом F // Фармацевтический журнал. 2008. №1. С. 72-75.
14. Царук А.В., Хушбактова З.А., Мамедова Р.П., Сыров В.Н. Влияние циклосиверсиозида F на показатели энергетического обмена миокарда животных // Фармацевтический журнал. 2007. №4. С. 93-95.
15. Khushbaktova Z.A., Agzamova M.A., Syrov V.N. et al. Influence of cycloartanes from plants of the genus Astragalus and their synthetic analogs on the contractive function of the myocardium and the activity of Na,K-ATPasе // Chemistry of Natural Compounds. 1994. Vol. 30. Pp. 469-473. DOI: 10.1007/BF00630402.
16. Хушбактова З.А., Сыров В.Н. Сравнительное изучение влияния циклоартановых и сердечных гликозидов на некоторые показатели метаболизма миокарда у животных // Украинский биохимический журнал. 1993. Т. 65. С. 71-75.
17. Царук А.В., Искендеров Д.А., Агзамова М.А., Хушбактова З.А., Сыров В.Н., Исаев М.И. Влияние и изучение циклоартановых гликозидов циклоорбикозида G и циклосиверсиозида А на метаболические процессы в миокарде крыс. // Химико-фармацевтический журнал. 2010. №1. C. 12-15.
18. Царук А.В., Хушбактова З.А., Сыров В.Н., Захидова Л.Т. Изменение липидного обмена миокарда крыс под действием циклосиверсиозида F в норме и условиях адреналинового миокардита. // Патология. 2007. №4. С. 21-22.
19. Царук А.В., Захидова Л.Т., Хушбактова З.А., Сыров В.Н., Исаев М.И. Фармакокорекция циклосиверсиозидом F метаболических нарушений в сердечной мышце экспериментальных животных при стрессе // Доклады АН РУз. 2011. №2. С. 59-62.
20. Tsaruk A.V., Isaev I.M., Agzamova M.A., Vypova N.L., Khushbaktova Z.A., Syrov V.N., Isaev M.I. A Study of the Effects of Cyclosiversiverside F on the Blood Coagulation System // Uzbek Biological Journal. 2010. N5. Pp. 10-12. DOI: 10.1007/s11094-010-0388-7.
21. Agzamova M.A., Duschanova G.M., Rakhmatov Kh.A., Janibekov A.A. The anatomical structure of leaves and thorns plants Astragalus pterocephalus Bunge, growing in Uzbekistan // American J. Planta Sciences. 2020. Vol. 11. N4. Pp. 569-577. DOI: 10.4236/ajps.2020.114042.
Поступила в редакцию 18 августа 2020 г.
После переработки 9 февраля 2021 г. Принята к публикации 18 февраля 2021 г.
Для цитирования: Агзамова М.А., Халилов Р.М., Жанибеков А.А. Хроматографический анализ циклосиверсиозида F // Химия растительного сырья. 2021. №2. С. 267-274. DOI: 10.14258/jcprm.2021028314.
Agzamova MA.*, Khalilov R.M., Janibekov A.A. CHROMATOGRAPHIC ANALYSIS OF CYCLOSIVERSIOSIDE F
Institute of the Chemistry of Plant Substances named after S.Yu.Yunusov Academy of Sciences, ul. M. Ulugbeka, 77,
Tashkent, 100170 (Uzbekistan), e-mail: agzamova_manzura@mail.ru
The plants Astragalus pterocephalus growing in Uzbekistan are a source of triterpene glycosides. The main triterpene glycoside, in terms of content, is a cycloartan glycoside - cyclosiversioside F. To obtain an individual biologically active compound cyclosiversioside F with 95% purity, a proposed method involves extraction with methanol, concentration and dilution with an equal volume of water, then followed by a sequential extraction from the aqueous extract with chloroform, ethyl acetate and butanol.
Then a chromatographic separation of the purified amount of extractives on a column with silica gel, isolation of the substance and precipitation from a solvent system must be performed, followed by recrystallization and drying. The optimal conditions for the isolation and separation of the amount of extractive substances have been developed in order to obtain an individual glycoside.
Cyclosiversioside F was authenticated by TLC in comparison with an authentic sample. Quantitative analysis of the glycoside was carried out by HPLC. The purity of cyclosiversioside F was confirmed by taking 'H and 13C NMR spectra.
Keywords: cyclosiversioside F, astragaloside IV, Astragalus pterocephalus, Tragacantha pterocephala, cardioprotector, TLC, HPLC, CC, ethanol, methanol, butanol.
* Corresponding author.
References
1. Sukhikh A.S., Kuznetsov P.V. Meditsina v Kuzbasse, 2009, no. 4, pp. 3-12. (in Russ.).
2. Korovin Ye.P. Vvedenskiy A.V. Flora Uzbekistana. [Flora of Uzbekistan]. Tashkent, 1955, vol. 3, 684 p. (in Russ.).
3. Agzamova M.A., Isaev I.M. Chemistry of Natural Compounds, 2016, vol. 52, pp. 501-502. DOI: 10.1007/s10600-016-1687-3.
4. Agzamova М.А., Isaev M.I., Gorovits M.B., Abubakirov N.K. Chemistry of Natural Compounds, 1986, vol. 22, no. 1, pp. 115-116. DOI: 10.1007/BF00574606.
5. Agzamova M.A., Isaev M.I., Mal'tsev I.I., Gorovits M.B., Abubakirov N.K. Chemistry of Natural Compounds, 1988, pp. 755-756. DOI: 10.1007/BF00598208.
6. Agzamova M.A., Isaev I.M., Ibragimov T.F. Chemistry of Natural Compounds, 2014, vol. 50, no. 5, pp. 959-960. DOI: 10.1007/s10600-014-1133-3.
7. Agzamova M.A., Isaev M.I. Hacettepe University J. of Faculty of Pharmacy, 1999, vol. 19, no. 1, pp. 45-55.
8. Zhang L., Liu Q., Lu L., Zhao X., Gao X., Wang Y. J. Pharmacol. Exp. Ther, 2011, vol. 338, no. 2, pp. 485-491. DOI: 10.1124/jpet. 111.180992.
9. Luo H.M., Dai R.H., Li Y. Zhongguo ZhongXi Yi Jie He Za Zhi, 1995, vol. 15, pp. 707-709.
10. Chen L.X., Liao J.Z., Guo W.Q. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi, 1995, vol. 15, pp. 141-143.
11. Patent 57165400 (JP). 1983.
12. Bedir Е., Pugh N., Calis I., Pasco D.S., Khan I.A. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 2000, vol. 23, no. 7, pp. 834837. DOI: 10.1248/bpb.23.834.
13. Tsaruk A.V., Khushbaktova Z.A., Syrov V.N., Agzamova M.A., Kasimova G.M. Farmatsevticheskiy zhurnal, 2008, no. 1, pp. 72-75. (in Russ.).
14. Tsaruk A.V., Khushbaktova Z.A., Mamedova R.P., Syrov V.N. Farmatsevticheskiy zhurnal, 2007, no. 4, pp. 93-95. (in Russ.).
15. Khushbaktova Z.A., Agzamova M.A., Syrov V.N. et al. Chemistry of Natural Compounds, 1994, vol. 30, pp. 469-473. DOI: 10.1007/BF00630402.
16. Khushbaktova Z.A., Syrov V.N. Ukrainskiy biokhimicheskiy zhurnal, 1993, vol. 65, pp. 71-75. (in Russ.).
17. Tsaruk A.V., Iskenderov D.A., Agzamova M.A., Khushbaktova Z.A., Syrov V.N., Isayev M.I. Khimiko-farmatsevticheskiy zhurnal, 2010, no. 1, pp. 12-15. (in Russ.).
18. Tsaruk A.V., Khushbaktova Z.A., Syrov V.N., Zakhidova L.T. Patologiya, 2007, no. 4, pp. 21-22. (in Russ.).
19. Tsaruk A.V., Zakhidova L.T., Khushbaktova Z.A., Syrov V.N., Isayev M.I. DokladyANRUz, 2011, no. 2, pp. 59-62. (in Russ.).
20. Tsaruk A.V., Isaev I.M., Agzamova M.A., Vypova N.L., Khushbaktova Z.A., Syrov V.N., Isaev M.I. Uzbek Biological Journal. 2010. N5. Pp. 10-12. DOI: 10.1007/s11094-010-0388-7.
21. Agzamova M.A., Duschanova G.M., Rakhmatov Kh.A., Janibekov A.A. American J. Planta Sciences, 2020, vol. 11, no. 4, pp. 569-577. DOI: 10.4236/ajps.2020.114042.
Received August 18, 2020 Revised February 9, 2021 Accepted February 18, 2021
For citing: Agzamova M.A., Khalilov R.M., Janibekov A.A. Khimiya Rastitel'nogo Syr'ya, 2021, no. 2, pp. 267-274. (in Russ.). DOI: 10.14258/jcprm.2021028314.
