CC BY
40
УДК 612.112:616.36 (470.2)
HLA-АНТИГЕНЫ I ИII КЛАССА ПРИ АУТОИММУННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПЕЧЕНИ В СЕВЕРО-ЗАПАДНОМ РЕГИОНЕ РОССИИ
А.Ю. Барановский, У.А. Мительглик, К.Л. Райхельсон, Н.В. Марченко, А.С. Зубарева, Н.В. Семенов,
О.А. Герасимова
Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования,
ФГУ «Российский научный центр радиологии и хирургических технологий», Санкт-Петербург, Россия
HLA-ANTIGENES CLASS I AND II IN AUTOIMMUNE LIVER DISEASES IN THE NORTH-WESTERN REGION OF RUSSIA
A.Y. Baranovsky, U.A. Mitelglik, K.L. Raikhelson, N.V. Marchenko, A.S. Zubareva, N.V. Semenov, *OA. Gerasimova
Saint-Petersburg Medical Academy of Postgraduate Studies,
*Russian Scientific Center of Radiology and Surgical technologies, Saint Petersburg, Russia
© Коллектив авторов, 2010 г.
Предрасположенность индивидуума к развитию аутоиммунных заболеваний печени генетически детерминирована HLA-комплексом и выявление определенных его аллелей используется в качестве дополнительных диагностических критериев. HLA-типирование I и II класса проведено у 54 больных, из них 18 — с аутоиммунным гепатитом 1 типа (АИГ), 22 — с первичным билиарным циррозом (ПБЦ), 14 — с перекрестным синдромом АИГ/ПБЦ. Группа контроля (100 человек) соответствовала популяционной выборке. Выявлено достоверное повышение частоты встречаемости следующих аллелей: при АИГ — А24(9), В27, DRB1*04, DQA1*0301, DQB1*0201 и 0302, гаплотипа DRB1*03-DQA1*0501-DQB1*0201; при ПБЦ — А30(19), DRB1*08 и 16(2), DQA1*0301 и 0401, DQB1*0302; при АИГ/ПБЦ — В35, DRB1*14(6), DQA1*0301, DQB1*0603. Также обнаружена про-тективная роль DRB1*11(5) в развитии ПБЦ. Результаты следует учитывать при диагностике заболеваний в данном регионе.
Ключевые слова: HLA I и II класса, генетическая предрасположенность, аутоиммунный гепатит, первичный билиарный цирроз, аутоиммунные заболевания печени.
Genetic susceptibility to autoimmune liver diseases is associated with HLA and determination some of its alleles is useful as the additional diagnostic criteria. HLA genotyping for class I and II was done in 54 patients (18 with autoimmune hepatitis type 1 (AIH), 22 with primary biliary cirrhosis (PBC), 14 with overlap syndrome of AIH and PBC)) and 100 healthy controls. It was found significant increasing of such alleles frequency as А24(9), В27, DRB1*04, DQA1*0301, DQB1*0201 и 0302, haplotype DRB1*03-DQA1*0501-DQB1*0201 — for AIH; А30(19), DRB1*08 and 16(2), DQA1*0301 and 0401, DQB1*0302 — for PBC;
В35, DRB1*14(6), DQA1*0301, DQB1*0603 — for AIH/PBC. Also protective role of DRB1*11(5) was revealed for PBC. These results should be considered in AIH and PBC diagnosis in that region.
Key words: HLA genes, genetic susceptibility, autoimmune hepatitis, primary biliary cirrhosis, autoimmune liver diseases.
Введение. Главный комплекс гистосовместимости играет значимую роль в наличии генетической предрасположенности к развитию аутоиммунных заболеваний печени (АИЗП). В настоящее время в мировой литературе широко изучены и описаны наиболее характерные ассоциации ИЬА-антигенов I и II класса с данной группой заболеваний преимущественно для европейской и североамериканской популяций. Выявление некоторых аллелей является дополнительным критерием диагностики АИЗП, особенно аутоиммунного гепатита (АИГ). Для российской популяции, к сожалению, таких данных нет.
Целью нашего исследования явилось изучение частоты встречаемости ИЬА-антигенов I и II класса у пациентов с АИЗП, проживающих в Северо-Западном регионе России.
Материалы и методы. Были обследованы 54 больных с АИЗП, из них 18 — с аутоиммунным гепатитом
1 типа (АИГ), 22 — с первичным билиарным циррозом (ПБЦ), 14 — с перекрестным синдромом АИГ и ПБЦ (АИГ/ПБЦ). Диагноз АИЗП устанавливали на основании данных анамнеза, лабораторных и морфологических исследований. Группа контроля соответствовала популяционной выборке и составила 100 человек.
У всех обследуемых проводилось ИЬА-типирова-ние I и II класса. ИЬА-антигены I класса определяли в стандартном двухступенчатом микролимфоцитото-ксическом тесте по Terasaki (лимфоциты из периферической крови выделяли по методу Воуит). Результаты реакции учитывали по количеству погибших прокрашенных лимфоцитов. Гены ИЬА II класса (DRB1, О0А1, ЭЦВ1) типировали путем обратной дот-блот гибридизации продукта полимеразной цепной реакции (ПЦР) с панелью аллель-специфичес-ких олигонуклеотидных зондов, фиксированных на мембране. Применение нерадиоактивной метки (био-
тин) и хромогенного субстрата (3,3’, 5,5’-тетраметил-бензидин) позволило детектировать результаты гибридизации в ходе цветной ферментативной реакции. Данный метод обеспечил «низкоразрешающее» типи-рование HLA-DRB1 гена с точностью до «групповых специфичностей», или «групп аллелей», а также ти-пирование генов HLA-DQA1, DQB1 на уровне «высокого разрешения» (с точностью до аллелей).
Для оценки выраженности взаимосвязи между антигеном или гаплотипом и заболеванием определяли частоту их встречаемости, а также показатель относительного риска (RR), рассчитанный по формуле Haldane — Woolf. Статистическую обработку результатов проводили методом %-квадрат.
Результаты и их обсуждение. Согласно данным североамериканских [1-3] и европейских источников [4, 5] среди HLA-антигенов I класса наиболее характерно наличие ассоциативной связи с антигеном В8 при АИГ и АИГ/ПБЦ, особенно в виде гаплотипа А1-В8. При этом при ПБЦ не отмечена взаимосвязь с HLA-антигенами I класса.
Согласно нашим данным о распределении HLA-антигенов I класса (табл. 1), А1 и В8 встречались с час-
по сравнению с контролем было недостоверно значимым. При перекрестном синдроме носительство данных антигенов наблюдалось только в форме гаплоти-па А1-В8. Обнаруженное нами достоверное увеличение частоты антигена А24(9) при АИГ в сравнении с группой контроля (0,5000 против 0,1200, р<0,01) в литературе нам не встречалось. Среди больных ПБЦ и АИГ/ПБЦ частота выявления А24(9) сопоставима с показателями контрольной группы. Также отмечено выраженное увеличение частоты встречаемости антигена А30(19) при ПБЦ по сравнению с популяционным контролем (0,1818 против 0,0400, RR=5,22, р<0,05).
При исследовании антигенов ИЬА-В выявлено, что В27 встречался достоверно чаще при АИГ по сравнению с группой контроля (0,2778 против 0,0800, р<0,05). Полученные данные аналогичны выявленным в индийской популяции [6]. Частота В27 также увеличивалась при АИГ/ПБЦ (0,2143 против 0,0800 в популяции), в то время как у больных с ПБЦ этот антиген обнаружен не был. Кроме того, при перекрестном синдроме достоверно чаще встречался В35 (0,5000 против 0,19000 в группе контроля, р<0,05).
Таблица 1
Частота антигенов HLAI класса (А и В) у больных с аутоиммунными заболеваниями печени
Антигены АИГ (п=18) ПБЦ (n=22) АИГ/ПБЦ (n= 14) Группа контроля (п=100)
частота (абс.) RR частота (абс.) RR частота (абс.) RR частота (абс.) RR
А1 0,2222 (4) 1,08 0,1818(4) 0,85 0,1429 (2) 0,70 0,2200 (22) —
А2 0,5000 (9) 0,79 0,4091 (9) 0,55 0,5714 (8) 1,03 0,5600 (56) —
АЗ 0,1111 (2) 0,30 0,2273 (5) 0,61 0,5714 (8) 2,52 0,3400 (34) —
АН 0(0) — 0,0455 (1) 0,74 0,1429 (2) 2,18 0,0800 (8) —
А23(9) 0(0) — 0,0455 (1) 0,80 0,1429 (2) 4,29 0,0400 (4) —
А24(9) 0,5000 (9) 7,08" 0,1818(4) 1,72 0,0714 (1) 0,79 0,1200(12) —
А25(10) 0,1667 (3) 1,60 0,1364 (3) 1,28 0,2143 (3) 2,10 0,1200(12) —
А26(10) 0(0) — 0,1364 (3) 1,73 0,0714 (1) 1,07 0,0900 (9) —
А29(19) 0(0) — 0,0909 (2) 3,4 0(0) — 0,0300 (3) —
А30(19) 0,1111 (2) 3,25 0,1818(4) 5,22* 0(0) — 0,0400 (4) —
В7 0,2222 (4) 0,92 0,2273 (5) 0,94 0,1429 (2) 0,60 0,2500 (25) —
В8 0,2778 (5) 2,64 0,0909 (2) 0,80 0,1429 (2) 1,30 0,1300(13) —
ВІЗ 0,2222 (4) 2,42 0,1818(4) 1,90 0,0714 (1) 0,86 0,1100(11) —
В14 0(0) 0,0455 (1) 1,94 0,0714 (1) 3,10 0,0300 (3) —
В18 0,1111 (2) 0,78 0,1818(4) 1,25 0,2143 (3) 1,56 0,1600 (16) —
В27 0,2778 (5) 4,44* 0(0) — 0,2143 (3) 3,32 0,0800 (8) —
В35 0,3333 (6) 2,17 0,2273 (5) 3,42 0,5000 (7) 4,18* 0,1900(19) —
В41 0(0) — 0,1364 (3) 3,85 0,0714 (1) 2,38 0,0400 (4) —
В44(12) 0,2222 (4) 1,48 0,0455 (1) 0,33 0,0714 (1) 0,53 0,1700 (17) —
В49(21) 0,0556 (1) 3,38 0(0) — 0,0714 (1) 4,38 0,0200 (2) —
В57(17) 0(0) — 0,1364 (3) 3,12 0,1429 (2) 3,48 0,0500 (5) —
В60(40) 0,0556 (1) 1,06 0,2273 (5) 3,92 0,0714 (1) 1,39 0,0700 (7) —
А1-В8 0,2222 (4) 3,38 0,0455 (1) 0,76 0,1429 (2) 2,18 0,0800 (8) —
Примечание: RR (relative risk) — относительный риск, * — достоверность различий (р) <0,05, ** — р<0,01; АИГ — аутоиммунный гепатит; ПБЦ — первичный билиарный цирроз печени.
тотой, сопоставимой с группой контроля, а увеличе- Принимая во внимание ведущую роль ИЬА-анти-ние частоты гаплотипа А1-В8 при АИГ и АИГ/ПБЦ генов II класса в формировании генетической пред-
расположенности, наибольший интерес представляло изучение частоты встречаемости аллелей и групп аллелей локусов ЭК и ЭО,. Распределение групп аллелей НЬА-ЭКВ1 представлено в табл. 2.
0,2727 (р<0,05) и 0,3571 (р<0,025) соответственно. Хотелось бы отметить, что для других популяций не описано наличие ассоциации данной аллели с развитием АИЗП.
Частота встречаемости групп аллелей DRB1
Таблица 2
DRB1 АИГ (и =18) ПБЦ (п=22) АИГ/ПБЦ (п=14) Группа контроля (п=100)
частота (абс.) RR частота (абс.) RR частота (абс.) RR частота (абс.) RR
01 0,2222 (4) 1,08 0,1364 (3) 0,63 0,2857 (4) 1,50 0,2200 (22) —
03(17) 0,4444 (8) 3,18 0,1818 (4) 0,96 0,0714(1) 0,44 0,2000 (20) —
04 0,4444 (8) 4,15** 0,2727 (6) 2,01 0,3571 (5) 2,96 0,1600(16) —
07 0,2778 (5) 0,86 0,2727 (6) 0,83 0,2857 (4) 0,9 0,3200 (32) —
08 0,0556 (1) 1,84 0,2273 (5) 6,74*** 0,0714(1) 2,38 0,0400 (4) —
11(5) 0,2222 (4) 0,83 0,0455 (1) 0,19* 0,2143 (3) 0,81 0,2700 (27) —
13(6) 0,0556 (1) 0,41 0,2273 (5) 1,94 0,2857 (4) 2,04 0,1700(17) —
14(6) 0(0) — 0,0455 (1) 4,63 0,1429 (2) 13,27* 0,0100(1) —
15(2) 0,1111 (2) 0,53 0,1364 (3) 0,63 0,2143 (3) 1,06 0,2200 (22) —
16(2) 0,0556 (1) 2,39 0,2273 (5) 8,76*** 0,0714(1) 3,10 0,0300 (3) —
Примечание: RR (relative risk) — относительный риск, * — достоверность различий (р) <0,05, ” — р<0,025,' р<0,01; АИГ — аутоиммунный гепатит; ПБЦ — первичный билиарный цирроз печени.
Следует отметить, что у жителей Северной Америки и ряда стран Европы среди групп аллелей НЬА-ЭКВ1 при всех АИЗП, особенно при АИГ, характерно носительство ЭК3 и ЭК4 [1, 4, 7]. При этом, например, в Италии [5] наблюдается преобладание ЭК3, особенно при АИГ, а в Центральной Америке и Японии — ЭК4 [1, 4, 8]. Частота выявления нами ЭКВ1*03 у больных АИГ была сопоставима с популяционной выборкой, а при ПБЦ и перекрестном синдроме даже меньшей. При этом носительство ЭКВ1*04 достоверно чаще отмечалось только при АИГ (0,4400 по сравнению с контролем 0,1600, КК=4,15, р<0,025).
При ПБЦ нами обнаружена взаимосвязь с ЭКВ1*08 и ЭКВ1*16(2) (в обоих случаях частота встречаемости составила 0,2273, а у здоровых 0,0400 и 0,0300 соответственно (р<0,01). Полученные результаты согласуются с данными зарубежных исследователей [1, 4]. Кроме того, при этой нозологии выявлена достоверно значимая отрицательная ассоциация с группой аллелей ЭКВ1*11(5) (частота 0,0453 против 0,2700 в группе контроля, р<0,05), что подтверждается данными Р. Inverшzzi и соавт. [9]. Интересно, что Р.Мига1оп и соавт. [5] отмечали протективную роль ЭКВ1*11(5) с развитием АИГ.
При АИГ/ПБЦ обращает на себя внимание не только достоверное увеличение частоты ЭКВ1*14(6) (0,1429 против 0,0100 в группе контроля, р<0,05), но и наиболее высокий уровень КК (13,27).
При анализе распределения аллелей локусов ЭОА1 и ЭОВ1 (таблица 3) установлено, что аллель ЭОА1*0301 достоверно чаще выявлялась во всех группах АИЗП. Наиболее высокая частота встречаемости данной аллели была при АИГ (0,5000 по сравнению с популяционным контролем 0,0900, р<0,001, КК=9,63). При ПБЦ и АИГ/ПБЦ она составила
Согласно зарубежным источникам, при АИГ характерно наличие взаимосвязи с аллелями ЭОА1*0501 и ЭОВ1*0201, особенно при их сочетании [1, 4]. В нашем исследовании аллель ЭОВ1*0201 достоверно чаще выявлялась при моноварианте АИГ, обеспечивая риск развития заболевания 5,16 по сравнению с группой контроля, а ЭОА1*0501 встречалась незначительно чаще, чем в популяции. Однако гаплотип ОКВ1*03-ВОА1*0501-ВОВ1*0201 определялся достоверно чаще (р<0,025) при АИГ (0,3889 по сравнению с контролем 0,0900, КК=6,28).
Помимо этого у больных ПБЦ достоверно чаще выявлялась аллель ЭОА1*0401 по сравнению со здоровыми (0,2273 и 0,0600 соответственно, р<0,05), что совпадает с данными, приводимыми У. Лейшнером [4].
Частота ЭОВ1*0301 была резко повышена как при ПБЦ, так и при АИГ по сравнению с контролем (соответственно 0,2778 и 0,3182 против 0,4000, р<0,01). Кроме того, отмечается выраженная ассоциативная связь аллели ЭОВ1*0603 с АИГ/ПБЦ (КК=11,94).
Таким образом, все обследованные группы имеют значительные генетические отличия. Нами выявлен ряд ассоциаций с НЬА-антигенами, не описанными для других популяций. Так, наряду с хорошо известными для АИГ антигенами (В27, ЭКВ1*04, гаплотипом ОКВ1*03-ВОА1*0501-ВОВ1*0201) нами выявлено достоверное увеличение частоты встречаемости А24(9), ЭОА1*0301, ЭОВ1*0302. При ПБЦ, помимо широко изученных групп аллелей (ЭКВ1*08, ЭШ6(2), отмечено повышение частоты А30(19), ЭОА1*0301 и *0401, ЭОВ1*0302. Также выявлено, что ОШ1(5) играет про-тективную роль для данного заболевания. При АИГ/ПБЦ наблюдалось увеличение частоты В35, ОШ4(6), ЭОА1*0301, ЭОВ1*0603, не описанное ранее.
Заключение. Больные с аутоиммунными заболеваниями печени, проживающие в Северо-Западном ре-
Частота встречаемости аллелей локусов DQA1 и DQB1
Таблица 3
АИГ (n=18) ПБЦ (n=22) АИГ/ПБЦ (n=14) Группа контроля (п=100)
частота (абс.) RR частота (абс.) RR частота (абс.) RR частота (абс.) RR
DQA1 0101 0,2222 (4) 2,67 0,0909 (2) 1,05 0,2857 (4) 3,69 0,1000 (10)
0102 0,1667 (3) 0,52 0,3182 (7) 1,12 0,2143 (3) 0,70 0,3000 (30) —
10103 0(0) 1,94 0,1364 (3) 1,27 0,2857 (4) 3,03 0,1200(12) —
0201 0,2778 (5) 1,94 0,3182 (7) 2,31 0,2857 (4) 2,04 0,1700 (17) —
0301 0,5000 (9) 9,63*** 0,2727 (6) 4,91* 0,3571 (5) 5,58* 0,0900 (9) —
0401 0,1111 (2) 2,20 0,2273 (5) 4,57* 1,62 0,0714 (1) 0,0600 (6) —
0501 0,5555 (10) 2,60 0,3636 (8) 1,24 0,2143 (3) 0,64 0,3200 (32) —
DQB1 0201 0,5555 (10) 5,16* 0,4091 (9) 2,94 0,1429 (2) 0,84 1,1900(19) _
0301 0,4444 (8) 3,38 0,1818(4) 1,02 0,2857 (4) 1,79 0,1900(19) —
0302 0,2778 (5) 8,74** 0,3182 (7) 10,38** 0,2143 (3) 6,53 0,0400 (4) —
0303 0(0) — 0,1364 (3) 2,24 0,2143 (3) 3,79 0,0700 (7) —
0402 0,0556 (1) 0,74 0,2273 (5) 2,71 0,0714 (1) 0,96 0,1000 (10) —
0501 0,2222 (4) 1,30 0,0909 (2) 0,51 0,2857 (4) 1,79 0,1900(19) —
0502 0(0) 0,2273 (5) 2,70 0(0) — 0,0900 (9) —
0503 0(0) 0(0) — 0,1429 (2) 3,47 0,0500 (5) —
0602 0,1667 (3) 0.7!) 0,1364 (3) 0,63 0,2143 (3) 1,06 0,2200 (22) —
0603 0(0) — 0,1364 (3) 5,00 0,2857 (4) 11,94** 0,0300 (3) —
Примечание: RR (relative risk) — относительный риск, * — достоверность различий (р)<0,05, ** — р<0,01,' р<0,001; АИГ — аутоиммунный гепатит; ПБЦ — первичный билиарный цирроз печени.
гионе, имеют определенные отличия в НЬА-маркерах I и II класса от описанных в мировой литературе, что следует учитывать при использовании их в качестве дополнительных диагностических критериев АИГ и ПБЦ в Северо-Западном регионе России.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Czaja A. Performance parameters of the diagnostic scoring systems for autoimmune hepatitis // Hepatology. — 2008. — V. 48. — № 5. — P. 1540-1548.
2. Czaja A., Kruger M, Santrach P. Genetic distinctions between types 1 and 2 autoimmune hepatitis. // Am. J. Gastroenterol. — 1997. — V. 92. — P. 2197-2200.
3. BittencourtP, Goldberg A., Cancado E. Genetic heterogeneity in susceptibility to autoimmune hepatitis types 1 and 2. // Am. J. Gastroenterol. — 1999. — V. 94. -P. 1906-1913.
4. Лейшнер У. Аутоиммунные заболевания печени и перекрестный синдром — Москва: Анахарсис, 2005. — 176 с.
5. Muratori P., Czaja A., Muratori L. Genetic distinctions between autoimmune hepatitis in Italy and North America. // World J. Gastroenterol. 2005. — V. 11. — № 12. — P. 1862-1866.
6. Amarapurkar D.N. HLA genotyping in type-I autoimmune hepatitis in Western India. // J. Assoc. Physicians India. — 2003. — V.51. — P967-969.
7. Beuers U., Rust C. Overlap syndromes // Semin. Liver Dis. — 2005. — V. 25. — № 3. — P. 311-320.
8. Mullarkey M., Stevens A., McDonnell. Human leukocyte antigen class II alleles in Caucasian women with primary biliary cirrhosis. //Tissue antigen. — 2005. — V. 65. — P. 199-205.
9. Invernizzi P., Battezzati P. Crosignani. HLA polymorphisms in Italian patients with primary biliary cirrhosis. // J. Hepatol. — 2003. — V. 38. — P. 401-406.
