CC BY
31
Научная статья
https://doi.org/10.23934/2223-9022-2023-12-2-217-223
Химико-токсикологическая диагностика острых отравлений доксиламином, залеплоном и феназепамом
М.В. Белова1,2 3 Д.В. Дроздовская2, ЕА. Клюев1, Е.С. Мельников2
Отделение острых отравлений и соматопсихиатрических расстройств
1 ГБУЗ «Научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В. Склифосовского ДЗМ» Российская Федерация, 129090, Москва, Б. Сухаревская пл., д. 3
2 ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» (Сеченовский Университет) МЗ РФ
Российская Федерация, 119048, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2
3 ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» МЗ РФ Российская Федерация, 125993, Москва, ул. Баррикадная, д. 2/1, стр. 1
Н Контактная информация: Белова Мария Владимировна, доктор биологических наук, доцент, ведущий научный сотрудник отделения острых отравлений и соматопсихиатрических расстройств ГБУЗ «НИИ СП им. Н.В. Склифосовского ДЗМ». Email: [email protected]
м
АКТУАЛЬНОСТЬ
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ
Ключевые слова: Ссылка для цитирования
Рынок снотворных и седативных лекарственных препаратов обновляется в связи с высокой токсичностью барбитуратов и ограничениями их использования. В настоящее время для терапии тревожных состояний и инсомнии часто назначают более безопасные лекарства, такие как I-препараты, доксиламин и некоторые производные бензодиазепина, которые, однако, тоже могут вызывать острые отравления при передозировке или немедицинском применении.
Создание доступной экспрессной методики тонкослойной хроматографии (ТСХ) для предварительного скринингового обнаружения доксиламина, феназепама и залеплона с целью диагностики острых отравлений.
Использовали методы ТСХ и газовой хроматографии с масс-селективным детектированием (ГХ-МС). Пробоподготовку образцов мочи пациентов с симптомами острых отравлений доксиламином, залеплоном, феназепамом и модельных образцов мочи проводили с помощью жидкость-жидкостной экстракции при рН 9,0 хлороформом для анализа методом ТСХ и смесью этилаце-тат-диэтиловый эфир (1:1) для ГХ-МС.
Разработана ТСХ-методика обнаружения доксиламина, залеплона и феназепама, которая позволяет на этапе предварительного исследования быстро выявить их наличие в моче больного, а также отличить друг от друга в случае однотипной симптоматики отравления. Для подтверждающего анализа использовался метод ГХ-МС. По сравнению с подтверждающими методами разработанная методика ТСХ-скрининга обладает экспрессностью, не требует использования дорогостоящего высокотехнологичного оборудования, при этом позволяет дифференцировать доксиламин, залеплон и феназепам от других токсикологически значимых психоактивных веществ, обнаруживаемых при общем скрининге.
доксиламин, залеплон, феназепам, острые отравления, ТСХ, ГХ-МС
Белова М.В., Дроздовская Д.В., Клюев Е.А., Мельников Е.С. Химико-токсикологическая диагностика острых отравлений доксиламином, залеплоном и феназепамом. Журнал им. Н.В. Склифосовского Неотложная медицинская помощь. 2023;12(2):217-223. https://doi.org/10.23934/2223-9022-2023-12-2-217-223
Конфликт интересов Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов
Благодарность, финансирование Исследование не имеет спонсорской поддержки
ГХ-МС — газовая хроматография с масс-селективным — коэффициент подвижности
детектированием 2-препараты — общее название снотворных препаратов
ТСХ — тонкослойная хроматография 3-го поколения (залеплон, зопиклон, золпидем) УФ-свет — ультрафиолетовый свет
© Белова М.В., Дроздовская Д.В., Клюев Е.А., Мельников Е.С. М., 2023
ВВЕДЕНИЕ
Отравление лекарственными препаратами снотворного и седативного действия является на сегодняшний день достаточно актуальной проблемой. Это связано как с терапией инсомнии, так и с немедицинским применением таких препаратов. Использование многих из них даже с лечебными целями может вызывать привыкание и развитие толерантности [1-3], что обуславливает их постоянное применение, иногда во все возрастающих дозах. Следствием этого становятся передозировки и острые отравления.
После значительного ограничения применения бар -битуратов и бензодиазепинов первого поколения для терапии инсомнии стали широко применяться небезо-диазепиновые гипнотики — так назывемые 7-препа-раты, например залеплон, антигистаминный препарат с седативным действием — доксиламин, относительно новые представители класса бензодиазепинов, в частности, феназепам [2-6]. Однако встречаются острые отравления данными препаратами при использовании их с суицидальной [7-9] и иными немедицинскими целями. Отмечены случаи злоупотребления ими в повышенных дозах среди лиц, страдающих наркозависимостью, что приводит к острым отравлениям [7]. Следует также отметить, что наиболее известными осложнениями при приеме бензодиазепиновых транквилизаторов являются развитие лекарственной зависимости, синдром отмены, дневная сонливость и спутанность сознания у некоторых групп пациентов даже при терапевтическом дозировании. Например, у лиц пожилого и старческого возраста возможен высокий риск падений вследствие терапии [10-12]. Залеплон вызывает быстрое, но кратковременное снотворное действие, и у большинства пациентов не приводит к дневной сонливости и снижению работоспособности [13]. Тем не менее, в литературе упоминаются случаи как смертельных, так и несмертельных отравлений залеплоном и другими 7-препаратами, несмотря на их низкий, по сравнению с бензодиазепинами, летальный токсический индекс [7, 14, 15].
Следует отметить, что при химико-токсикологическом анализе возникают трудности при идентификации указанных препаратов, особенно при их совместном присутствии.
Ранее были предложены подходы для раздельного обнаружения доксиламина, залеплона и феназепама при скрининговом исследовании методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) [7, 16-21]. Однако предлагаемые подвижные фазы и способы детектирования неселективны для обнаружения представленных веществ. Иммунохимические методы для доксилами-на и 7-препаратов не разработаны и не применяются. Существующие тест-системы на производные 1,4-бен-зодиазепина обладают групповой специфичностью и не всегда обнаруживают феназепам [22-25].
Таким образом, актуальна разработка доступных информативных скрининговых методов для обнаружения этих препаратов в биологических средах при острых отравлениях.
цель исследования: разработать методику ТСХ для предварительного скринингового обнаружения доксиламина, феназепама и залеплона с целью диагностики острых отравлений ими.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
В исследовании использовали: субстанцию-порошок феназепама (Усолье-Сибирский ХФЗ, степень чистоты 99,0%), таблетки шипучие «Донормил» по 15 мг («Бристол-Майерс Сквибб Компани», Франция, годен до 11.2022) и капсулы «Анданте» по 10 мг (ОАО «Гедеон Рихтер», Венгрия, годен до 05.2022).
Исходный стандартный раствор феназепама с концентрацией 0,5 мг/мл готовили, растворяя точную навеску 5 мг субстанции в 10 мл этанола.
Исходный раствор доксиламина с концентрацией около 1,5 мг/мл готовили путем растворения шипучей таблетки препарата «Донормил» в количестве 15 мг в дистиллированной воде с извлечением вещества двукратной экстракцией хлороформом при значении pH, равном 9 (регулятор pH — 10% раствор аммиака) [18], полученный хлороформный слой отделяли центрифугированием, объединенные хлороформные экстракты упаривали в токе азота досуха, а сухой остаток перерастворяли в 10 мл этанола. Для определения предела обнаружения получали растворы доксиламина с концентрациями 0,5 мг/мл и 1,0 мг/мл путем соответствующего разведения исходного раствора этанолом.
Исходный раствор залеплона с концентрацией 0,5 мг/мл готовили из содержимого капсулы «Анданте» в количестве 10 мг, залеплон извлекали из порошка двукратной экстракцией хлороформом при значении pH, равном 10 [21], хлороформный слой отделяли центрифугированием, объединенные экстракты упаривали в токе азота досуха, а сухой остаток перерастворяли в 20 мл этанола.
Исходный смешанный раствор готовили путем смешивания по 2 мл каждого из растворов с концентрациями доксиламина 1,5 мг/мл, залеплона 0,5 мг/мл и феназепама 0,5 мг/мл. Результирующая концентрация веществ представлена в табл. 1.
Для приготовления модельного образца мочи к 1 мл исходного смешанного раствора добавляли 9 мл интактной биологической жидкости. Результирующие концентрации веществ указаны в табл. 1.
В качестве неподвижной фазы в ТСХ-исследова-нии использовали пластины TLC SilicaGel 60 F254 на гибкой алюминиевой подложке (Merck). Сравнивали следующие подвижные фазы: этилацетат-этанол-25% раствор аммиака (10:30:1), толуол-ацетон-метанол-25% раствор аммиака (45:45:7,5:2,5), этилацетат-мета-нол-25% раствор аммиака (17:2:1), метанол-диэти-ламин (9,5:0,5) и хлороформ-метанол-диэтиламин (9,5:0,5:0,25). Для детектирования применяли ультрафиолетовый свет (УФ-свет) с длиной волны 254 нм,
Таблица 1
Концентрация доксиламина, залеплона и феназепама в стандартных образцах
Table 1
The concentration of Doxylamine, Zaleplon and Phenazepam in standard samples
Название Концентрация, мг/мл препарата
Исходные Исходный Модельный
растворы смешанный раствор образец мочи
Доксиламин 0,5; 1,0; 1,5 0,5 0,05
Залеплон 0,5 0,17 0,017
Феназепам 0,5 0,17 0,017
реактив Драгендорфа и реакцию образования азокра-сителя. Для получения азокрасителя хроматографи-ческие зоны обрабатывали раствором серной кислоты в этаноле (1:1) и подвергали гидролизу при температуре 130°C в течение 20 минут, далее на пластинку наносили последовательно 0,1% раствор натрия нитрита и 0,1% раствор (ЛТ-1-нафтил)-этилендиамина дигидрохлорида и наблюдали окрашивание хрома-тографических зон. Для установления параметров Rf хроматографирование образцов в выбранной системе проводили в трех повторностях.
В качестве подтверждающих методов при анализе проб мочи пациентов с острым отравлением использовали ГХ-МС.
Условия анализа методом ГХ-МС: газовый хроматограф ThermoTraceGCUltra с масс-спектрометри-ческим детектором DSOIL Колонка TR-5MS, длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки неподвижной жидкой фазы — 0,25 мкм. Газ-носитель — гелий. Температурная программа колонки: 50°C — 3 минуты, нагрев 100°С/мин до 100°C, 100°C — 1 минута, нагрев 15°С/мин до 280°C, 280°C — 20 минут. Температура инжектора — 220°C. Детектирование по полному ионному току в диапазоне m/z 45-650, ионизация электронным ударом с энергией 70 eV. Длительность анализа — 18 минут.
Пробоподготовка при анализе методом ТСХ. 5 мл исследуемой пробы мочи или модельного образца подщелачивали 10% раствором аммиака до рН, равного 9, добавляли 5 мл хлороформа и экстрагировали в течение 3 минут, слои разделяли центрифугированием в течение 5 минут при 3500 об/мин. После центрифугирования слой органической фазы упаривали досуха в токе азота. Сухой остаток перерастворяли в 0,5 мл этанола. На линию старта пластинки наносили 50 мкл пробы и по 30 мкл каждого из исходных растворов индивидуальных веществ.
Пробоподготовка для анализа методом ГХ-МС. К 3 мл мочи добавляли 1 г хлорида натрия, 50 мкл 25% раствора аммиака, 50 мкл раствора дифениламина (внутренний стандарт в концентрации 100 мкг/мл) и 2,5 мл смеси этилацетат-диэтиловый эфир (1:1). Экстрагировали в течение 10 минут при перемешивании в шейкере, затем разделяли слои центрифугированием в течение 10 минут при 3500 об/мин. Органический слой переносили в стеклянные виалы, упаривали досуха под вакуумом и растворяли остаток в 100 мкл этилацетата. В хроматограф вводили 2 мкл полученного раствора.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ТСХ-ОБНАРУЖЕНИЯ ДОКСИЛАМИНА, ЗАЛЕПЛОНА И ФЕНАЗЕПАМА
Выбор подвижной фазы проводили с учетом влияния состава и полярности на подвижность веществ и разрешающую способность хроматографической системы. Результаты значений коэффициентов подвижности доксиламина, залеплона и феназепама в сравниваемых системах, установленные в ходе эксперимента, представлены в табл. 2.
Исходя из данных табл. 2, среди исследованных систем нами была выбрана система толуол-ацетон-метанол-25% раствор аммиака (45:45:7,5:2,5), поскольку она обеспечивает полное разделение всех трех изучаемых веществ, так как хроматографические зоны имеют четкие контуры. Длительность хроматографи-рования составила 15 минут, что удовлетворяет требованию экспрессности. Эта система рекомендована для ТСХ-исследования и некоторых других токсикологически значимых веществ основного характера [26], что позволяет обнаруживать указанные вещества, не нарушая общего хода исследования. В остальных системах коэффициенты подвижности всех веществ или пары залеплон и феназепам имели близкие значения и не позволяли четко разделять их при одновременном присутствии.
Применяемые способы детектирования хромато-графических зон исследуемых веществ и минимально обнаруживаемые концентрации представлены в табл. 3.
По результатам, представленным в табл. 3, можно прийти к выводу, что залеплон обладает собственной флюоресценцией, а доксиламин гасит флюоресценцию, таким образом, они могут быть обнаружены. После проведения гидролиза доксиламин и феназепам образуют продукты, которые можно обнаружить по характерной флюоресценции в УФ-свете. Последующая обработка хроматографических зон залеплона и феназепама 0,1% раствором натрия нитрита и 0,1% раствором (ЛТ-1-нафтил)-этилендиамина дигидрохлорида приводила к образованию окрашенных продуктов. Для феназепама — это известный продукт азосочетания [16, 26], а для залеплона структура продукта не определена, что требует его дальнейшего изучения. Реактив Драгендорфа являлся универсальным детектором для всех трех веществ так как при его использовании без предварительного гидролиза коэффициенты подвижности (Я) имели устойчивые значения при анализе
Таблица 2
Значения коэффициента подвижности (Rf) доксиламина, залеплона и феназепама в сравниваемых подвижных фазах для тонкослойной хроматографии
Table 2
Rf values of Doxylamine, Zaleplon and Phenazepam in compared mobile phases for thin layer chromatography
Название вещества
Значение Rf в системе растворителей
Этилацетат-этанол-25% раствор аммиака (10:30:1)
Толуол-ацетон-метанол-25% раствор аммиака (45:45:7,5:2,5)
Этилацетат-метанол-25% раствор аммиака (17:2:1)
Метанол-диэтиламин Хлороформ-метанол-(9,5:0,5) диэтиламин (9,5:0,5:0,25)
Доксиламин
Залеплон
Феназепам
Длительность хроматогра-фирования, мин
0,29±0,02 0,85±0,04 0,87±0,04 27
0,46±0,02 0,52±0,02 0,63±0,03 15
0,47±0,03 0,78±0,05 0,88±0,04 20
1,0 0,88 0,91 25
0,96±0,04 0,88±0,04 0,85±0,05 26
как растворов индивидуальных веществ, так и их в смешанном растворе.
При хроматографировании образца, содержащего все три исследуемых соединения, значения Rf практически не менялись по сравнению с таковыми при хроматографировании исходных растворов индивидуальных веществ, укладываясь в рассчитанные и приведенные в табл. 2 отклонения.
Для оценки применимости методики для обнаружения веществ после выделения из биологической жидкости (мочи) экстракции подвергали модельные образцы мочи, содержащие смесь доксиламина, залеп-лона и феназепама в указанных концентрациях (см. табл. 1). Эксперимент проводили в трех повторностях. Извлечение и проявление образцов проводили по описанной выше методике. Отклонение Rf не превышало 10% от установленных на растворах индивидуальных веществ величин.
Разработанная нами методика была использована при исследовании проб мочи пациентов с подозрением на отравление доксиламином, феназепамом или залеплоном. Во всех экспериментах пятна, соответствующие изучаемым веществам, на хроматограммах экстрактов из мочи пациентов с острыми отравлениями имели окраску и значения Rf, подобные установленным в модельном эксперименте. Результаты приведены в табл. 4.
Полученные результаты были подтверждены при ГХ-МС-исследовании биологических проб.
Как видно из табл. 4, среди проанализированных проб в двух было подтверждено наличие доксиламина и феназепама, обнаруженных с помощью разработанной нами методики ТСХ. При этом их обнаружение не осложнялось наличием в пробе других токсикантов. В одной из исследованных проб предложенная методика
ТСХ дала отрицательные результаты на доксиламин, в то время как он был обнаружен при подтверждающем исследовании. Причиной ложно-отрицательного результата, скорее всего, послужила низкая концентрация препарата в пробе. Поскольку в биосредах данного пациента был также обнаружен этанол — 1,85 г/л в крови и 2,48 г/л в моче, — тяжесть состояния пациента, вероятно, была обусловлена сочетанным синергичным воздействием терапевтической дозы доксиламина и этанола.
По сравнению с подтверждающими методами разработанная методика ТСХ обладает простотой проведения, экспрессностью и не требует использования дорогостоящего высокотехнологичного оборудования, при этом она позволяет уверенно обнаружить в одной смеси доксиламин, залеплон и феназепам, что может наблюдаться при острых отравлениях.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Предложенная методика обнаружения доксилами-на, залеплона и феназепама методом тонкослойной хроматографии, включающая хроматографирова-ние в системе толуол-ацетон-метанол-25% раствор аммиака (45:45:7,5:2,5), использование в качестве детектора ультрафиолетового света с длиной волны 254 нм с последующей обработкой пластины реактивом Драгендорфа, а также образование окрашенных продуктов по реакции азосочетания после гидролиза залеплона и феназепама на пластинке, может быть использована для скринингового исследования при острых отравлениях доксиламином, феназепамом и залеплоном благодаря экспрессности, информативности, достаточной чувствительности, относительной простоте и доступности.
Таблица 3
Оценка различных способов детектирования феназепама, залеплона и доксиламина
Table 3
Evaluation of different detection methods for Phenazepam, Zaleplon and Doxylamine
Название вещества, предел
обнаружения Уф 254 нм Смесь кониентРиРованной
серной кислоты и этанола (1:1)
Доксиламин 10 мкг Гашение флюоресценции -
Залеплон 10 мкг Ярко-голубая флуоресценция Светло-зеленое окрашивание
Феназепам 10 мкг - Желтое окрашивание
Примечание: УФ - ультрафиолетовый свет Note: УФ - ultraviolet light
Детекторы
УФ, 254 нм после Реакция образования Реактив Драгендорфа
гидролиза азокрасителя
Ярко-оранжевая флуо- - Оранжевое окрашивание
ресценция
Зеленая флуоресценция Розовое окрашивание Оранжевое окрашивание
Зелено-голубая флуо- Фиолетовое окрашивание Оранжевое окрашивание ресценция
Таблица 4
Результаты исследования биологических проб пациентов с подозрением на отравления доксиламином и феназепамом
Table 4
The results of analyzing biological samples of patients with suspected Doxylamine and Phenazepam poisoning
№ пробы Обнаружение других веществ
ТСХ ГХ-МС Этанол в крови, г/л Этанол в моче, г/л Другие вещества Примечания
1 Доксиламин, феназепам Доксиламин, феназепам н/о н/о Бисопролол, верапамил
2 Доксиламин, феназепам Доксиламин, феназепам 2,37 4,65
3 н/о Доксиламин 1,85 2,48 Низкая концентрация в пробе
Примечания: ГХ-МС - газовая хроматография с масс-селективным детектированием; н/о - не определено; ТСХ - тонкослойная хроматография Notes: ГХ-МС - gas chromatography with mass selective detection; н/о - not detected; ТСХ - thin Layer chromatography
ВЫВОДЫ
1. Разработана методика тонкослойной хроматографии обнаружения доксиламина, залеплона и феназепама в биологической жидкости (моче), пригодная для экспресс-диагностики острого отравления этими препаратами.
2. Предложенная методика проста в использовании, доступна, не требует сложного оборудования и
СПИСОК ИСТОЧНИКОВ
1. Оковитый С.В., Титович И.А. Фармакологические принципы терапии инсомнии. Медицинский совет. 2018;(6):26-32. https://doi. org/10.21518/2079-701x-2018-6-26-32
2. Шавловская О. Особенности терапии инсомнии у лиц пожилого возраста. Врач. 2012;(9):46-49.
3. Курушина О.В., Барулин А.Е., Багирова Д.Я. Современные подходы к лечению инсомнии в общетерапевтической практике. Медицинский совет. 2019;(6):20-26. https://doi.org/10.21518/2079-701X-2019-6-20-26
4. Бурчаков Д.И., Тардов М.В. Инсомния в практике терапевта: роль доксиламина. Медицинский совет. 2020;(2):40-48. https://doi. org/10.21518/2079-701x-2020-2-45-53
5. Левин Я.И. Инсомния: клинический опыт применения золпидема (Санвал). Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика. 2010;(3):87-90. https://doi.org/10.14412/2074-2711-2010-108
6. Ковров Г.В., Посохов С.И., Шавловская О.А. Эффективность Фена-зепама в лечении инсомний в амбулаторной практике. Consilium Medicum. 2017;19(9):31-36. https://doi.org/10.26442/2075-1753_ 19.9.31-36
7. Мусина М.Г., Килин В.В., Мингазов А.А. Смертельное отравление Залеплоном. Проблемы экспертизы в медицине. 2010;(1-2):45-46.
8. Derinoz-Guleryuz O. Doxylamine succinate overdose: slurred speech and visual hallucination. Turk J Pediatr. 2018;60(4):439. PMID: 30859772 https://doi.org/10.24953/turkjped.2018.04.015
9. Скребов Р.В. Мисников П.В., Кузьмичев Д.Е., Вильцев И.М. К проблеме суицидов. В кн.: Избранные вопросы судебно-медицинской экспертизы. Вып. 20. Хабаровск-Южно-Сахалинск; 2021. с. 133-135. URL: http://asme.nichost.ru/attachments/article/241/ 75947871.177047760351117017.1.2.pdf [Дата обращения 22 апреля 2022 г.]
10. Аведисова А.С. К вопросу о зависимости к бензодиазепинам. Психиатрия и психофармакотерапия. 1999;1(1):24-26.
11. Онегина Е.Ю. К вопросу безопасности применения феназепама в общемедицинской практике. Поликлиника. 2014;(4-2):39-41.
12. Сычев Д.А., Жучков А.В., Богова О.Т., Ильина Е.С. Падения пациентов пожилого и старческого возраста: вклад лекарственных средств. Клиническая геронтология. 2017;23(3-4):56-64.
13. Paul MA, Gray G, Kenny G, Pigeau RA. Impact of melatonin, zaleplon, zopiclone, and temazepam on psychomotor performance. Aviat Space Environmen Med. 2003;74(12):1263-1270. PMID:14692469
14. Gunja N. The clinical and forensic toxicology of Z-drugs. J Med Toxicol. 2013;9(2):155-162. PMID:23404347 https://doi.org/10.1007/s13181-013-0292-0
15. Buckley NA, McManus PR. Changes in fatalities due to overdose of anxiolytic and sedative drugs in the UK (1983-1999). Drug Saf. 2004;27(2):135-141. PMID: 14717623 https://doi. org/10.2165/00002018-200427020-00004
16. Белова М.В., Клюев Е.А., Мельников Е.С., Елисеева Д.М. Химико-токсикологическая диагностика острых отравлений феназепамом.
REFERENCES
1. Okovityi SV, Titovich IA. Pharmacotherapy treatment principles for insomnia. Medical Council. 2018;(6):26-32. (In Russ.) https://doi. org/10.21518/2079-701X-2018-6-26-32
2. Shavlovskaya O. Specific Features of Therapy for Insomnia in the Elderly. Vrach. 2012;23(9):46-49. (In Russ.)
3. Kurushina OV, Barulin AE, Bagirova DY. Modern approaches to the management of insomnia in general therapeutic practice. Medical Council. 2019;(6):20-26. (In Russ.) https://doi.org/10.21518/2079-701X-2019-6-20-26
4. Burchakov DI, Tardov MV. Insomnia in general practice: the role of doxylamine. Medical Council. 2020;(2):40-48. (In Russ.) https://doi. org/10.21518/2079-701x-2020-2-45-53
5. Levin YI. Insomnia: clinical experience with Zolpidem (Sanval). Neurology, Neuropsychiatry, Psychosomatics. 2010;2(3):87-90. (In Russ.) https://doi.org/10.14412/2074-2711-2010-108
6. Kovrov GV, Posokhov SI, Shavlovskaia OA. The efficacy of Phenazepam in the treatment of insomnia in outpatient practice. Consilium Medicum. 2017;19(9):31-36. (In Russ.) https://doi.org/10.26442/2075-1753_ 19.9.31-36
7. Musina MG, Kilin VV, Mingazov AA. Smertel'noe otravlenie Zaleplonom. Problemy ekspertizy v meditsine. 2010;(1-2):45-46. (In Russ.)
реактивов, позволяет обнаружить и дифференцировать доксиламин, залеплон и феназепам при их совместном присутствии.
3. Достаточная чувствительность и информативность разработанной методики как этапа предварительного исследования подтверждена результатами параллельного анализа проб мочи пациентов методом газовой хроматографии-масс-спектрометрии.
Журнал им. Н.В. Склифосовского «Неотложная медицинская помощь». 2019;7(4):319-324. https://doi.org/10.23934/2223-9022-2018-7-4-319-324
17. Поспелова А.А., Карпова Л.Н., Малкова Т.Л. Оценка возможности использования обращенно-фазной тонкослойной хроматографии в химико-токсикологических исследованиях ряда групп лекарственных и химических соединений. Токсикологический вестник. 2012;2(113):20-23.
18. Киреева А.В., Вожева А.Б., Бахтина С.М., Волченко С.В., Куклин В.Н. Химико-токсикологическое исследование доксиламина. Судебно-медицинская экспертиза. 2007;50(3):22—25.
19. Карташов В.А., Чепурная Г.П., Чернова Л.В. Определение залеплона, золпидема и зопиклона в биологических объектах. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2018;1(22):206-214.
20. Чепурная Г.П., Карташов В.А., Чернова Л.В. Изолирование и определение Z-препаратов в трупной ткани желудка и кишечника. В кн.: Инновационные технологии в фармации: сборник научных трудов. Вып. 3. Иркутск: ИГМУ; 2016. с.174-180. URL: https://ismu. baikal.ru/src/downloads/%D1%E1%EE%F0%ED%E8%EA%20%C8%ED% ED%EE%E2%E0%F6.%20%F2%E5%F5%ED%EE%EB% EE%E3%E8%E8 %20%E2%20%F4%E0%F0%EC%E0%F6%E8%E8.pdf [Дата обращения 22 апреля 2022 г.]
21. Kratzsch C, Tenberken O, Peters FT, Weber AA, Kraemer T, Maurer HH. Screening, library-assisted identification and validated quantification of 23 benzodiazepines, flumasenil, zaleplone, Zolpidem and zopiclone in plasma by liquid chromatography/mass-spectrometry with atmospheric pressure chemical ionization. J Mass Spectrom. 2004;39(8):856-872. PMID:15329838 https://doi.org/10.1002/jms.599
22. Kerrigan S, Mellon MB, Hinners P. Detection of Phenazepam in Impaired Driving. J Anal Toxicol. 2013;37(8):605-610. PMID:24022117 https://doi.org/10.1093/jat/bkt075
23. Rossi B, Freni F, Vignali C, Stramesi C, Collo G, Carelli C, et al. Comparison of Two Immunoassay Screening Methods and a LC-MS/ MS in Detecting Traditional and Designer Benzodiazepines in Urine. Molecules. 2021;27(1):112. PMID: 35011344 https://doi.org/10.3390/ molecules27010112
24. Saitman A, Park HD, Fitzgerald RL. False-positive interferences of common urine drug screen immunoassays: A Review. J Anal Toxicol. 2014;38(7):387-396. PMID: 24986836 https://doi.org/10.1093/jat/ bku075
25. Bertol E, Vaiano F, Borsotti M, Ouercioli M, Mari F. Comparison of immunoassay screening tests and LC-MS-MS for urine detection of benzodiazepines and their metabolites: results of a national proficiency test. J Anal Toxicol. 2013;37(9):659- 664. PMID: 23943436 https://doi. org/10.1093/jat/bkt063
26. Белова М.В., Лисовик Ж.А., Клюев А.Е., Колдаев А.А. Химико-токсикологическая диагностика острых химических отравлений: сборник материалов. Москва: Графикон Принт; 2007.
8. Derinoz-Guleryuz O. Doxylamine succinate overdose: slurred speech and visual hallucination. Turk J Pediatr. 2018;60(4):439. PMID: 30859772 https://doi.org/10.24953/turkjped.2018.04.015
9. Skrebov RV, Misnikov PV, Kuz'michev DE, Vil'tsev IM. K probleme suitsidov. In: Izbrannye voprosy sudebno-meditsinskoy ekspertizy. Is. 20. Khabarovsk-Yuzhno-Sakhalinsk; 2021:133-135. (In Russ.) Available at: http://asme.nichost.ru/attachments/article/241/ 75947871.177047760351117017.L2.pdf [Accessed Apr 22, 2022]
10. Avedisova AS. K voprosu o zavisimosti k benzodiazepinam. Psikhiatriya i psikhofarmakoterapiya. 1999;1(1):24-26. (In Russ.)
11. Onegina EYu. K voprosu bezopasnosti primeneniya fenazepama v obshchemeditsinskoy praktike. Poliklinika. 2014;(4-2):39-41. (In Russ.)
12. Sychev DA, Zhuchkov AV, Bogova OT, Ilyina ES. Falls of elderly and senile patients: The contribution of medicines. Clinical gerontology. 2017;23(3-4):56-64. (In Russ.)
13. Paul MA, Gray G, Kenny G, Pigeau RA. Impact of melatonin, zaleplon, zopiclone, and temazepam on psychomotor performance. Aviation, space, and environmental medicine. 2003;74(12):1263-1270. PMID:14692469
14. Gunja N. The clinical and forensic toxicology of Z-drugs. J Med Toxicol. 2013;9(2):155-162. PMID:23404347 https://doi.org/10.1007/s13181-013-0292-0
15. Buckley NA, McManus PR. Changes in fatalities due to overdose of anxiolytic and sedative drugs in the UK (1983-1999). Drug Safety. 2004;27(2):135-141. PMID: 14717623 https://doi. org/10.2165/00002018-200427020-00004
16. Belova MV, Klyuyev EA, Melnikov ES, Yeliseyeva DM. Chemical and Toxicological Diagnosis of Acute Poisonings with Phenazepam. Russian Sklifosovsky Journal Emergency Medical Care. 2018;7(4):319-324. https:// doi.org/10.23934/2223-9022-2018-7-4-319-324
17. Pospelova AA, Karpova LN, Malkova TL. The Estimation of a Possible Use of Reversed-Phase Thin-Layer Chromatography in Chemo-Toxicological Studies of Certain Groups of Pharmaceutical and Chemical Compounds. Toxicological Review. 2012;2(113):20-23. (In Russ.)
18. Kireeva AV, Vozheva AB, Bakhtina SM, Volchenko SV, Kuklin VN. Chemicotoxicological evaluation of doxilamine. Forensic Medical Expertise. 2007;(3):22-25 (In Russ.)
19. Kartashov VA, Chepurnaya GP, Chernova LV. Definition of Zaleplon, Zolpidem and Zopiclon in Biological Objects. Drug Development & Registration. 2018;(1):206-214. (In Russ.)
20. Chepurnaya GP, Kartashov VA, Chernova LV. Izolirovanie i opredelenie Z-preparatov v trupnoy tkani zheludka i kishechnika. In: Innovatsionnye tekhnologii v farmatsii: sbornik nauchnykh trudov. Is. 3. Irkutsk: IGMU Publ.; 2016: 174-180. Available at: https://ismu.baikal.ru/src/ downloads/%D1%E1%EE%F0%ED%E8%EA%20%C8%ED%ED%EE%E2% E0%F6.%20%F2%E5%F5%ED%EE%EB% EE%E3%E8%E8%20%E2%20% F4%E0%F0%EC%E0%F6%E8%E8.pdf [Accessed Apr 22, 2022] (In Russ.)
21. Kratzsch C, Tenberken O, Peters FT, Weber AA, Kraemer T, Maurer HH. Screening, library-assisted identification and validated quantification of 23 benzodiazepines, flumasenil, zaleplone, Zolpidem and zopiclone in plasma by liquid chromatography/mass-spectrometry with atmospheric pressure chemical ionization. J Mass Spectr. 2004;39(8):856-872. PMID:15329838 https://doi.org/10.1002/jms.599
22. Kerrigan S, Mellon MB, Hinners P. Detection of Phenazepam in Impaired Driving. JAnalyt Toxicol. 2013;37(8):605-610. PMID:24022117 https://doi.org/10.1093/jat/bkt075
23. Rossi B, Freni F, Vignali C, Stramesi C, Collo G, Carelli C. Comparison of Two Immunoassay Screening Methods and a LC-MS/MS in Detecting Traditional and Designer Benzodiazepines in Urine. Molecules. 2021;27(1):112. PMID: 35011344 https://doi.org/10.3390/ molecules27010112
24. Saitman A, Park HD, Fitzgerald RL. False-positive interferences of common urine drug screen immunoassays: A Review. J Analyt Toxicol. 2014;38(7):387-396. PMID: 24986836. https://doi.org/10.1093/jat/ bku075
25. Bertol E, Vaiano F, Borsotti M, Ouercioli M, Mari F. Comparison of immunoassay screening tests and LC-MS-MS for urine detection of benzodiazepines and their metabolites: results of a national proficiency test. J Analyt Toxicol. 2013;37(9):659-664. PMID: 23943436. https://doi. org/10.1093/jat/bkt063
26. Belova MV, Lisovik ZhA, Klyuev AE, Koldaev AA. Khimiko-toksikologicheskaya diagnostika ostrykh khimicheskikh otravleniy. Moscow: Grafikon Print Publ.; 2007. (In Russ.)
ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРАХ
Белова Мария Владимировна доктор биологических наук, доцент, ведущий научный сотрудник отделения острых отравлений
и соматопсихиатрических расстройств ГБУЗ «НИИ СП им. Н.В. Склифосовского ДЗМ», доцент кафедры клинической токсикологии ФГБОУ ДПО РМАНПО МЗ РФ, профессор кафедры фармацевтической и токсикологической химии им. А.П. Арзамасцева ФГАОУ ВО «ПМГМУ им. И.М. Сеченова» (Сеченовский Университет) МЗ РФ; https://orcid.org/0000-0002-0861-5945, [email protected];
30%: научное руководство, идея и дизайн исследования, обсуждение результатов, написание статьи, утверждение окончательного варианта текста
студентка ФГАОУ ВО «ПМГМУ им. И.М. Сеченова» (Сеченовский Университет) МЗ РФ; https://orcid.org/0009-0000-0333-3546, [email protected];
30%: разработка методики и проведение анализа методом тонкослойной хроматографии, составление первичного текста статьи
врач клинической лабораторной диагностики химико-токсикологической лаборатории ГБУЗ «НИИ СП им. Н.В. Склифосовского ДЗМ»; https://orcid.org/0000-0002-9684-8764, [email protected]; 20%: проведение анализа методом газовой хроматографии-масс-спектрометрии
кандидат фармацевтических наук, ассистент кафедры фармацевтической и токсикологической химии им. А.П. Арзамасцева ФГАОУ ВО «ПМГМУ им. И.М. Сеченова» (Сеченовский Университет) МЗ РФ;
https://orcid.org/0000-0002-8993-4808, [email protected]; 20%: обсуждение результатов, корректирование текста статьи Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов
Дроздовская Дарья Владимировна
Клюев Евгений Александрович
Мельников Евгений Сергеевич
Chemical and Toxicological Diagnosis of Acute Poisoning With Doxylamine,
Zaleplon, and Phenazepam
M.V. Belova1, 2 3 D.V. Drozdovskaya2, E.A. Kluev1, E.S. Melnikov2
Department of Acute Poisoning and Somatopsychiatric Disorders
1 N.V. Sklifosovsky Research Institute for Emergency Medicine
3, Bolshaya Sukharevskaya Sq., Moscow, 129090, Russian Federation
2 I.M. Sechenov' First Moscow State Medical University (Sechenov University) 2, bldg. 4, Bolshaya Pirogovskaya Str., Moscow, 119991, Russian Federation
3 Russian Medical Academy of Continuous Professional Education 2/1, bldg. 1, Barrikadnaya Str., Moscow, 125993, Russian Federation
* Contacts: Maria V. Belova, Doctor of Biological Sciences, Associate Professor, Leading Researcher, Department of Acute Poisoning and Somatopsychiatric Disorders, N.V Sklifosovsky Research Institute for Emergency Medicine. Email: [email protected]
BACKGROUNI The market of hypnotic and sedative drugs is being updated due to the high toxicity of barbiturates and the limitations of their use. Currently, safer drugs such as Z-drugs, Doxylamine, and some benzodiazepine derivatives are often prescribed for the treatment of anxiety and insomnia, but they can cause acute poisoning if overdosed or in case of nonmedical use.
AIM To establish an affordable express thin-layer chromatography (TLC) technique for preliminary screening detection of Doxylamine, Phenazepam and Zaleplon in order to diagnose acute poisoning.
MATERIAL AND METHOD Thin-layer chromatography (TLC) and gas chromatography with mass selective detection (GC-MS) methods were used. Urine samples from patients with symptoms of acute Doxylamine, Zaleplon, Phenazepam poisoning, and model urine samples were prepared by liquid-liquid extraction at pH 9.0 with chloroform for TLC analysis, with ethyl acetate-diethyl ether mixture (1:1) for GC-MS.
RESULTS We developed the TLC method of Doxylamine, Zaleplon and Phenazepam detection which helps reveal their presence in the patient's urine, as well as distinguish one from another in case of similar toxic symptoms. The GC-MS method was used for confirmatory analysis. Compared to confirmatory methods, the developed technique of TLC screening is expressive, does not require expensive high-tech equipment, while allowing to differentiate Doxylamine, Zaleplon and Phenazepam from each other and from other toxicologically significant psychoactive substances detected in general screening. Keywords doxylamine, zaleplon, phenazepam, acute poisoning, TLC, GC-MS
For citation Belova MV, Drozdovskaya DV Kluev EA, Melnikov ES. Chemical and Toxicological Diagnosis of Acute Poisoning With Doxylamine, Zaleplon, and Phenazepam. Russian Sklifosovsky Journal of Emergency Medical Care. 2023;12(2):217-223. https://doi.org/10.23934/2223-9022-2023-12-2-217-223 (in Russ.) Conflict of interes Authors declare lack of the conflicts of interests Acknowledgments, sponsorshi| The study has no sponsorship. Affiliations
Maria V. Belova Doctor of Biological Sciences, Leading Researcher, Department of Acute Poisoning and Somatopsychiatric Disorders,
N.V. Sklifosovsky Research Institute for Emergency Medicine; Professor, A.P. Arzamastsev Department of Pharmaceutical and Toxicological Chemistry, I.M. Sechenov First Moscow State Medical University; Associate Professor, Department of Clinical Toxicology, Russian Medical Academy of Continuous Professional Education; https://orcid.org/0000-0002-0861-5945, [email protected];
30%, scientific guidance, idea and design of the study, discussion of the results, text writing, approval of the final version of the article
Daria V. Drozdovskaya Student, I.M. Sechenov First Moscow State Medical University;
https://orcid.org/0009-0000-0333-3546, [email protected];
30%, development of methodology and analysis by thin layer chromatography, drafting the primary text of the article
Evgeny A. Kluev Medical Laboratory Scientist, Chemical and Toxicological Laboratory, N.V. Sklifosovsky Research Institute for Emergency
Medicine;
https://orcid.org/0000-0002-9684-8764, [email protected]; 20%, analysis by gas chromatography-mass spectrometry
Evgeny S. Melnikov Candidate of Pharmaceutical Sciences, Assistant, A.P. Arzamastsev Department of Pharmaceutical and Toxicological
Chemistry, I.M. Sechenov First Moscow State Medical University; https://orcid.org/0000-0002-8993-4808, [email protected]; 20%, discussion of the results, text editing
Received on 01.06.2022 Review completed on 20.03.2023 Accepted on 28.03.2023
Поступила в редакцию 01.06.2022 Рецензирование завершено 20.03.2023 Принята к печати 28.03.2023
