CC BY
34
УДК 616.98:579.841.95(571.122)
В.М.Павлов1, И.И.Козлова2, А.Н.Мокриевич1, О.Д.Шутко2, В.С.Тимофеев1, Р.И.Миронова1, Т.С.Кузнецова2, н.м.файзуллина2, Т.Ю.кудрявцева1, Т.и.комбарова1, и.А.Дятлов1
характеристика штаммов туляремийного микроба, выделенных от больных людей и мелких грызунов во время эпидемии туляремии В Ханты-Мансийске В 2013 г.
'ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», Оболенск, Российская Федерация; 2ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Ханты-Мансийском автономном округе - Югре», Ханты-Мансийск, Российская Федерация
В работе приведены данные о выделении культур Francisella tularensis от людей и грызунов во время эпидемии туляремии среди жителей Ханты-Мансийска в августе-сентябре 2013 г. Все выделенные штаммы F. tularensis (шесть культур туляремийного микроба от больных и четыре - от мелких грызунов, отловленных в городе и его окрестностях) относятся к голарктическому подвиду, высоковирулентны для лабораторных мышей, устойчивы к эритромицину, ампициллину и цефалоспоринам, но чувствительны к амикацину, тетрациклину, доксициклину и гентамицину. Методом MLVA по 25 локусам показано, что исследованные штаммы располагаются одним кластером на филогенетическом дереве вместе со штаммами F. tularensis, выделенными ранее на территории Южного Урала и Казахстана. Все штаммы из очага являются близкородственными и, по данным анализа гипервариабельного локуса Ft-M3, подразделяются на четыре группы. Штаммы, выделенные от людей, образуют три группы, а штаммы, выделенные от мелких грызунов - две, причем в одну из групп ханты-Мансийского кластера попали штаммы, выделенные как от людей, так и грызунов.
Ключевые слова: туляремия, Francisella tularensis, однопраймерное типирование, MLVA-типирование, антибиотики.
V.M.Pavlov1, I.I.Kozlova2, A.N.Mokrievich1, O.D.Shutko2, V.S.Timofeev1, RLMironova1, T.S.Kuznetsova2, N.M.Faizullina2, T.Yu.Kudryavtseva1, T.I.Kombarova1, I.A.Dyatlov1
Characteristics of Tularemia Agent strains Isolated from Patients and small Rodents during Tularemia Epidemic in Khanty-Mansiisk in 2013
'State Research Center of Applied Microbiology and Biotechnology, Obolensk, Russian Federation; 2Center of Hygiene and Epidemiology in the Khanty-Mansiisk Autonomous District - Yugra, Khanty-Mansiisk, Russian Federation
The paper contains the data on isolation of Francisella tularensis cultures from humans and rodents during tularemia epidemic in Khanty-Mansiisk in August-September, 2013. All the obtained F. tularensis strains (six cultures of tularemia microbe from patients, and four cultures - from small rodents caught in the territory of the city and its suburbs) fall under Holarctic subspecies, are highly virulent for the laboratory mice, resistant to erythromycin, ampicillin, and cephalosporin, but sensitive to amikacin, tetracycline, doxycycline, and gentamycin. Using 25-locus-MLVA typing it is demonstrated that the strains under study form a common cluster on the phylogenetic tree along with F. tularensis strains previously isolated in the territory of the Southern Urals and Kazakhstan. All the strains from the foci are closely related ones, and based on the investigations of hyper-variable Ft-M3 locus, fall into four groups. The strains, isolated from humans, combine into three groups, and the strains isolated from rodents - into two, and notably that one of the groups of Khanty-Mansiisk cluster comprises the strains isolated from both humans and rodents.
Key words: tularemia, Francisella tularensis, single-primer typing, MLVA-typing, antibiotics.
Туляремия - острое инфекционное заболевание животных и человека, вызывается бактериями Francisella tularensis. В Российской Федерации возбудитель туляремии обнаруживается на территории практически всех краев, областей и республик.
Ханты-Мансийский автономный округ расположен в природном очаге туляремии пойменно-болот-ного типа, где основным резервуаром являются водяная полевка, красная полевка, ондатра, красно-серая полевка. Переносчиками служат комары и слепни, которые обильно населяют округ в силу особенностей его гидрографии.
Анализ многолетней заболеваемости свидетельствует о высокой активности и стойкости природного очага. В 30-50-х годах прошлого века вспышки туляремии регистрировались на всей территории округа.
В 60-е годы, с началом массовой вакцинации на-
селения округа, произошло резкое снижение заболеваемости. Кроме того, на активность очага оказало влияние сокращение численности водяной полевки и ондатры из-за интенсивного освоения восточных районов округа в связи с разработкой нефтегазовых месторождений.
В то же время в западных и центральных районах (Кондинский, Ханты-Мансийский, Октябрьский районы) сохранялась высокая активность природного очага, что на фоне снижения объемов иммунизации привело к крупным вспышкам в 1983-1985 гг. Данную эпидемию удалось ликвидировать в результате сплошной вакцинации населения.
За последние 20 лет заболеваемость регистрировалась в 5 муниципальных образованиях. С 1993 г. зарегистрировано 34 случая заболевания, в том числе 2 групповых: пгт. Березово в 2007 г. - 22 случая,
Октябрьский район в 1998 г. - 6 случаев. В Ханты-Мансийске последний случай туляремии зарегистрирован в 2001 г. В 2012 г. случаев туляремии в округе не регистрировали.
В 2010-2012 гг. наблюдали нарастание эпизоотической активности природных очагов туляремии в Ханты-Мансийском, Сургутском, Нефтеюганском, октябрьском районах и городах ханты-мансийск, Нижненевартовск, Нягань, Сургут, Пыть-Ях. Серологический анализ биологического материала, взятого от рыжих и красных полевок, показал наличие специфических титров у большинства исследованных животных от 1:20 до 1:80.
В 2013 г. произошло резкое обострение эпизоотической ситуации по туляремии на значительной части территории округа. По данным Иркутского НИПЧИ, при исследовании методом ИФА 189 экземпляров грызунов на туляремию получено 107 положительных (56,6 %) серологических результатов в реакции РНГА с эритроцитарным туляремийным диагно стикумом.
Обширная эпизоотия в пойменных очагах Округа способствовала массовому заражению туляремией жителей Ханты-Мансийска. За август-сентябрь 2013 г. заболели туляремией, по официальным данным, 1005 человек, в том числе 156 детей. Масштабы эпидемии заставили объявить в городе и на прилегающих территориях режим чрезвычайной ситуации, который был отменен только в октябре 2013 г.
заболевание характеризовалось повышением температуры до 40,0 °С, ознобом, слабостью, недомоганием, ломотой в теле, у всех больных отмечалось увеличение периферических лимфоузлов, болезненных при пальпации. У многих больных отмечен гиперемированный след укуса насекомого с просветлением в центре, у некоторых - язвочка или вскрывшийся фурункул.
При анализе по месту заражения установлено, что 34,42 % заболевших заразились в городской черте, 36,13 - при отдыхе и постоянном проживании на дачных участках, 11,95 - на рыбалке, 9,96 - в местах массового отдыха, 7,25 - при нахождении на территории Ханты-Мансийского района, 0,28 - на охоте.
В данной работе проведен анализ образцов биологического материала, отобранного из пустул пациентов Окружной больницы Ханты-Мансийска с диагнозом «туляремия»; мелких грызунов, отловленных на территории окружного центра и его окрестностей в период с 23.08.2013 по 29.09.2013 г., на наличие возбудителя туляремии. Выделенные культуры изучены микробиологическими и биологическими методами, а также методами однопраймерного ПЦР и MLVA по 25 локусам.
Материалы и методы
В работе использовали 10 штаммов, выделенных от пациентов и мелких грызунов в Ханты-Мансийске. Для однопраймерного ПЦР-типирования использо-
вали праймер СШ^ [2]. Для MLVA-анализа использовали праймеры, последовательности которых приведены в работе AJohanson et а1. [6].
Бактерии выращивали на среде FT-агар (ФБУН ГНЦ ПМБ) с добавлением полимиксина В (Рт) в концентрации 100 мкг/мл-1 при температуре 37 °С. Определение антибиотикочувствительности туляре-мийного микроба проводили диско-диффузионным методом в соответствии с МУК 4.2.2495-09 [5]. На засеянный агар (по 0,2 мл из суспензии, стандартизованной по отраслевому стандартному образцу мутности 5 ед. (ОСО 42-28-86 П) наносили диски с эритромицином 15 мкг, ампициллином 10 мкг, цеф-триаксоном 30 мкг, цефуроксимом 30 мкг, цефокси-тином 30 мкг, цефтазидимом 30 мкг, цефотаксимом 30 мкг, цефепином 30 мкг, амикацином 30 мкг, тетрациклином 30 мкг, доксициклином 10 мкг и гентами-цином 10 мкг.
Биологический материал получен от пациентов с диагнозом «туляремия» и мелких грызунов, отловленных на территории окружного центра и его окрестностей. Содержимое пустул забирали с помощью стерильного ватного тампона и переносили в пробирки с 200 мкл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида. Высевы из пустул проводили на FT-агар и инкубировали в течение 6 сут.
Для выявления возбудителя туляремии в грызунах проводили вскрытие отловленных животных и забор селезенок. Высевы из селезенок проводили методом отпечатков на FT-агар и из суспензий гомогенизированных селезенок в 0,9 % раствор натрия хлорида.
гомогенат селезенок грызунов вводили подкожно по 0,1 мл трем мышам линии BALB/c (по 5 в группе, самцы и самки, возраст 6-8 недель, массой 1820 г). за мышами наблюдали в течение 21 сут. Одну мышь на 5-е сутки после заражения эвтаназировали и делали высев суспензии селезенки, полученной растиранием органа в 5 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, на чашки с FT-агаром.
DCl культур Е tularensis для мышей линии BALB/c оценивали по методу Кербера в модификации И.П.Ашмарина и А.А.Воробьева [1]. Мышей (по 5 в группе) инфицировали подкожно бактериальной суспензией в дозах 1101, 1102 и 1103 КОЕ/мышь и наблюдали в течение 21 сут.
Для определения видовой принадлежности культур использовали набор реагентов для иммунохро-матографического экспресс-выявления и идентификации возбудителя туляремии (ИХ-тест Е tularensis) (ФБУН ГНЦ ПМБ).
Выделение ДНК Е. tularensis из биомассы суточной агаровой культуры осуществляли с использованием коммерческого набора «рибо-сорб» («ИнтерЛабСервис»). Для детекции гена iglC использовали праймеры, приведенные в [3]. Однопраймерную ПЦР с праймером СЫ^ проводили, как описано ранее [2].
При амплификации использовали термоци-
клер «Apllied byosystem 2700», США. Электрофорез ПЦР-продуктов проводили в 1,8 % агарозном геле. ДНК в геле окрашивали бромистым этидием. Фотодокументирование проводили на системе для гель-документирования Vilber-Lourmat (Франция), при ультрафиолетовом освещении с помощью трансиллюминатора фирмы «Cole Parmer», США. Для определения размеров ампликонов использовали маркер молекулярных масс GeneRuler™ 100 bp Plus DNA Ladder («Fermentas», Литва).
Для VNTR-анализа использовали 25 пар прай-меров (Ft-M1-Ft-M25), последовательности которых приведены в статье A.Johanson et al. [6]. Праймеры синтезированы в ЗАО «Синтол» (Москва). Условия проведения ПЦР рассчитывали с помощью пакета программ Vector NTI. Размеры ампликонов определяли по их электрофоретической подвижности в 3 % агарозном геле по отношению к подвижности молекулярных маркеров (шаг 20 п.о., BIO-RAD, США) с помощью программы PhotoCaptMw. При анализе локусов Ft-M1 и Ft-M25 определяли нуклеотидную последовательность ампликонов.
Филогенетическое дерево строилось с использованием программного комплекса BioNumerics (Softline, США) на основе метода невзвешенного попарного арифметического среднего (UPGMA).
Результаты и обсуждение
Анализ образцов биологического материала, отобранных из пустул пациентов Окружной больницы Ханты-Мансийска с диагнозом «туляремия». Биологический материал был взят у семи пациентов. У шести пациентов при высеве содержимого пустул на FT-агар через 4 сут обнаружен рост культуры ту-ляремийного микроба. Видовая принадлежность культур подтверждена ИХ-тестом. При рассеве полученных культур до изолированных колоний оказалось, что все культуры, кроме одной, представлены однородными колониями. Для дальнейшего анализа отобрали по одной колонии из каждой культуры, обозначенные как штаммы Х-3, Х-4, Х-7 и Х-10. Культура, выделенная от одного пациента, при рассеве до изолированных колоний содержала два типа морфологически отличных колоний, различающихся по размеру: мелкие (одна из которых обозначена как штамм Х-8М) и крупные (одна из которых обозначена как штамм Х-8К). Все отобранные штаммы были высоковирулентны для лабораторных мышей (DCl<10 КОЕ).
Анализ образцов биологического материала от мелких грызунов, отловленных на территории Ханты-Мансийска и его окрестностей в период с 23.08.2013 по 26.08.2013 г. Для бактериологического анализа отловлено 24 грызуна (15 красных полевок, 7 бурозубок и 2 серых домовых мыши). Возбудитель туляремии обнаружен в 4 селезенках, взятых из трех красных полевок (для анализа отобрали по одной колонии этих культур и обозначили как штаммы
Рис. 1. Электрофореграмма ампликонов, полученных с прайме-ром Chilf и ДНК:
2 - Е. tularensis виЬвр. НоЫгсИса 1045; 3 - Е tularensis Х-3; 4 - Е tularensis Х-4; 5 - Е. tularensis Х-7; 6 —Е. tularensis Х-8К; 7 - F. tularensis Х-8М; 8 -Е. tularensis Х-10; 9 — Е. tularensis виЬвр. mediasiatica 678. В дорожках 1 и 10 - маркер молекулярных масс
Х-23/1, Х-23/3, Х-25/1) и бурозубки (штамм Х-26/2). Видовая принадлежность выделенных культур подтверждена ИХ-тестом. Все отобранные штаммы были высоковирулентны для лабораторных мышей фС1<10 КОЕ).
Определение подвидовой принадлежности выделенных штаммов возбудителя туляремии. Все штаммы содержат, по данным ПЦР-анализа, видо-специфичный ген iglC Е. tularensis, что подтверждает их принадлежность к роду Еrancisella (данные не приведены). Спектр ампликонов в ПЦР с праймером СЫ^ выделенных штаммов идентичен спектру, характерному для бактерий Е.tularensis subsp. holarctica [2] (рис. 1).
Все штаммы образуют в однопраймерной ПЦР ампликоны с размерами ~280 и ~830 п.о., общие для бактерий вида Е. tularensis, что подтверждает принадлежность исследуемых штаммов к данному виду. Наличие фрагмента размером ~570 п.о. характерно для голарктического подвида. Для сравнения на рис. 1 приведена электрофореграмма ампликонов, полученных с использованием ДНК Е. tularensis sub-sp. mediasiatica.
Чувствительность к эритромицину. Все 10 штаммов, выделенных от людей и грызунов, оказались устойчивыми к эритромицину, то есть относятся к биовару II (Егуа) [4].
Генотипирование штаммов методом MLVA. Для выяснения филогенетического родства исследуемых штаммов между собой, а также со штаммами, выделенными ранее из очагов туляремии Сибири, Урала и Казахстана, проведен VNTR-анализ по схеме, предложенной AJohanson et al. [6]. По полученным данным построено филогенетическое дерево (рис. 2). VNTR-анализ подтвердил подвидовую принадлежность изучаемых штаммов туляремийного микроба к голарктическому подвиду.
Исследованные штаммы являются генетически идентичными по 24 VNTR-локусам, отличаясь между собой лишь по гипервариабельному локусу Ft-M3 (таблица). Различия в длине данного локуса позволяют разделить изучаемые штаммы на 4 индивидуальных генотипа, содержащих 9, 10, 15 и 17 повторов.
Strain Subspecies Time Location of Isolation
1-349 holarctica Chita region 2006
1-382 holarctica Buryat Republic 1991
А-1045 holarctica Altai Territory 2011
I-305 holarctica Chita region 1972
I-346 holarctica Buryat Republic 1978
I-367 holarctica Krasnoyarsk Territory 1989
I-373 holarctica Chita region 1990
I-365 holarctica Buryat Republic 1988
I-387 holarctica Novosibirsk region 2011
I-388 holarctica Novosibirsk region 2011
I-329 holarctica Buryat Republic 1974
777 holarctica Kazakhstan, Uralsk region 1988
А-297(101) holarctica Kazakhstan, Uralsk region 1985
А-299(472) holarctica Kazakhstan 1986
Х-2/26 holarctica Khanty-Mansiysk region 2013
Х-4 holarctica Khanty-Mansiysk region 2013
Х-7 holarctica Khanty-Mansiysk region 2013
Х-8К holarctica Khanty-Mansiysk region 2013
Х-8М holarctica Khanty-Mansiysk region 2013
Х-1/23 holarctica Khanty-Mansiysk region 2013
Х-1/25 holarctica Khanty-Mansiysk region 2013
Х-3/23 holarctica Khanty-Mansiysk region 2013
Х-10 holarctica Khanty-Mansiysk region 2013
Х-3 holarctica Khanty-Mansiysk region 2013
401 holarctica Kazakhstan 1987
М-157 holarctica Chelyabinsk region ND
М-48 holarctica Astrakhan region 1986
А-408(217) holarctica Kazakhstan, Uralsk region 1978
I-288 holarctica Sakhalin 1975
I-364 holarctica Irkutsk region 1988
1-311 holarctica Sakhalin 1972
15 holarctica Live vaccine strain 1942
Miura holarctica bv. japonica Japan 1975
112 novicida USA, Utah 1955
120 mediaasiatica Middle Asia 1968
Schu tularensis USA 1941
F9693 F. philomiragia USA, Massachusetts 1986
Рис. 2. Филогенетическое родство штаммов F. tularensis, выделенных в Ханты-Мансийске, со штаммами из близлежащих очагов туляремии
Штаммы, содержащие 15 повторов в локусе Ft-M3, составляют 50 % от общего числа. Данный генотип обнаружен как в штаммах, выделенных от людей, так и от бурозубки (штамм Х-2/26). У остальных трех штаммов, выделенных от грызунов, обнаружено по 17 повторов в данном локусе. все штаммы располагаются одним кластером, проявляя при этом наибольшее родство со штаммами, выделенными ранее на территории Южного Урала и Казахстана (рис. 2).
Таким образом, все выделенные штаммы относятся к голарктическому подвиду и являются близко-
Количество тандемных повторов в локусе Ft-M3 у штаммов К Ш1агеш^, выделенных в Ханты-Мансийске
Штамм
Количество тандемных повторов в локусе Ft-M3
3 10
4 7
8K 8M 2/26 1/23 3/23 1/25
9
10 15 15 15 15 15 17 17 17
родственными, отличаясь друг от друга по гипервариабельному локусу Ft-M3.
Чувствительность к антибиотикам. Штаммы туляремийного микроба, выделенные в Ханты-Мансийске, оказались устойчивыми к эритромицину, ампициллину и цефалоспоринам, но чувствительными к амикацину (диаметр зоны подавления роста 28 мм), тетрациклину (56 мм), доксициклину (49 мм) и гентамицину (27 мм).
Бактериологический анализ биологического материала от людей и животных, взятого в разгар эпидемии в Ханты-Мансийске, позволил выделить чистые туляремийные культуры, не прибегая к биологическому методу. оказалось, что в содержимом пустулы живые бактерии сохраняются в течение не менее четырех дней с момента укуса насекомыми.
выделенные штаммы туляремийного микроба имеют, по данным MLVA-типирования, наибольшее эволюционное сродство к штаммам, циркулирующим на территории Казахстана и Челябинской области и отличаются от штаммов, типичных для сибирских очагов туляремии.
так как туляремийные культуры, выделенные в течение трех дней, имеют четыре разных MLVA-генотипа, можно предположить, что на территории Ханты-Мансийска и его окрестностей циркулировало несколько вариантов возбудителя туляремии.
Обнаружение штаммов F. tularensis с одинаковым количеством повторов в Ft-M3 локусе как у человека, так и у бурозубки, может свидетельствовать об общем источнике заражения грызунов и людей. Природа резервуара инфекции остается невыясненной.
Штаммы F. tularensis, выделенные от заболевших туляремией пациентов во время эпидемии туляремии в округе, чувствительны к антибактериальным препаратам первого ряда. Проведенный анализ 32 историй болезни показал, что в 63 % случаев в лечении применялся амикацин.
С 1959 по 1992 год на территории 8 районов автономного округа из различных объектов окружающей среды получены 94 культуры возбудителя туляремии. Наибольшее количество культур выделено в Кондинском (33 культуры), Березовском и Октябрьском районах (по 20 культур). Более 50 % культур получили из образцов воды. От водяной полевки и ее экскрементов выделили 25 культур, от ондатры - 4, от обыкновенной бурозубки - 3 и по одной культуре от рыжей полевки и полевки-экономки, тогда как возбудитель туляремии у людей не выделен. к сожалению, все ранее полученные в округе культуры не были сохранены, что не позволяет сравнивать генотип культур, выделенных в 2013 г., с вариантами туляремийного микроба, циркулировавшими в этом регионе ранее.
Авторы подтверждают отсутствие конфликта финансовых/нефинансовых интересов, связанных с написанием статьи.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз; 1962. 58 с.
2. Вахрамеева Г.М., Лапин А.А., Павлов В.М., Мокриевич А.Н., Миронова Р.И., Дятлов И.А. ПЦР дифференциация подвидов Francisella tularensis с помощью одного праймера. Пробл. особо опасных инф. 2011; 107(1):46-8.
3. Мокриевич А.Н., Тимофеев В.С., Кудрявцева Т.Ю., Уланова Г.И., Карбышева С.Б., Миронова Р.И., Вахрамеева Г.М., Губарева Т.И., Павлов В.М., Дятлов И.А. Выделение среднеазиатского подвида туляремийного микроба на территории
Алтайского края. Пробл. особо опасных инф. 2013; 115(1):66-9.
4. Олсуфьев Н.Г. Таксономия, микробиология и лабораторная диагностика возбудителя туляремии. М.: Медицина; 1975. 192 с.
5. Определение чувствительности возбудителей опасных бактериальных инфекций (чума, сибирская язва, холера, туляремия, бруцеллез, сап, мелиоидоз) к антибактериальным препаратам. МУК 4.2.2495-09. М.; 2009.
6. Johansson A., Farlow J., Larsson P., Dukerich M., Chambers E., Bystrom M., Fox J., Chu M., Forsman M., Sjostedt A. Keim P. Worldwide genetic relationships among Francisella tularensis isolates determined by multiple-locus variable-number tandem repeat analysis. J. Bacteriol. 2004; 186:5808-18.
References
1. Ashmarin I.P., Vorob'ev A.A. [Statistical Methods in Microbiological Investigations]. L.: Medgiz; 1962. 58 p.
2. Vakhrameeva G.M., Lapin A.A., Pavlov V.M., Mokrievich A.N., Mironova R.I., Dyatlov I.A. [PCR differentiation of Francisella tularensis subspecies using one primer]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2011; 107(1):46-8.
3. Mokrievich A.N., Timofeev V.S., Kudryavtseva T.Yu., Ulanova G.I., Karbysheva S.B., Mironova R.I., Vakhrameeva G.M., Gubareva T.I., Pavlov V.M., Dyatlov I.A. [Isolation of Central Asian subspecies of tularemia agent in the Altai Territory]. Probl. Osobo Opasn. Infek. 2013; 115(1):66-9.
4. Olsuf'ev N.G. [Taxonomy, Microbiology, and Laboratory Diagnostics of Tularemia Agent]. M.: Meditsina; 1975. 192 p.
5. [Determination of sensitivity in dangerous bacterial infection agents (plague, anthrax, cholera, tularemia, brucellosis, glanders, melioidosis) to anti-bacterial preparations. Methodological regulations]. MR 4.2.2495-09. M.; 2009.
6. Johansson A., Farlow J., Larsson P., Dukerich M., Chambers E., Bystrom M., Fox J., Chu M., Forsman M., Sjostedt A., Keim P. Worldwide genetic relationships among Francisella tularensis isolates determined by multiple-locus variable-number tandem repeat analysis. J. Bacteriol. 2004; 186:5808-18.
Authors:
Pavlov V.M., Mokrievich A.N., Timofeev V.S., Mironova R.I., Kudryavtseva T.Yu., Kombarova T.I., Dyatlov I.A. State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology. Obolensk, Moscow Region, 142279, Russian Federation. E-mail: [email protected]
Kozlova I.I., Shutko O.D., Kuznetsova T.S., Faizullina N.M. Center of Hygiene and Epidemiology in the Khanty-Mansiisk Autonomous District -Yugra. 72, Roznina St., Khanty-Mansiisk, 628011, Russian Federation
об авторах:
Павлов В.М., Мокриевич А.Н., Тимофеев В.С., Миронова Р.И., Кудрявцева Т.Ю., Комбарова Т.И., Дятлов И.А. Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии. Российская Федерация, 142279, Московская обл., п. Оболенск. E-mail: info@ obolensk.org
КозловаИ.И., Шутко О.Д., Кузнецова Т.С., ФайзуллинаН.М. Центр гигиены и эпидемиологии в Ханты-Мансийском автономном округе -Югре. Российская Федерация, 628011, г. Ханты-Мансийск, ул. Рознина, 72. E-mail: [email protected]
Поступила 10.02.15.
