CC BY
113
УДК: 618.11-006.6:612.112.94
характеристика регуляторных т-клеток у вольных раком яичников
Е.В. Курганова1, М.А. тихонова1, В.А. Лебедева2, Е.Г. Ласкавая2,
В.Ф. Коваленко2, А.А. останин1, Е.р. Черных1
ГУ «НИИ клинической иммунологии СО РАМН», г. Новосибирск1 Городская муниципальная клиническая больница № 1, г. Новосибирск2 630099, Россия, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14,
ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, е-mail: ctlab @ mail.ru
Охарактеризованы регуляторные Т-клетки (Treg) у 10 больных раком яичника (РЯ) III-IV стадии. Установлено, что по сравнению с периферической кровью в асцитической жидкости больных РЯ повышено количество CD4+CD25+/ CD4+CD25hi8hTreg. Выявленный факт может свидетельствовать о направленной миграции и накоплении естественных Treg в зоне опухолевого микроокружения. Увеличение CD4+FOXP3+ и CD8+FOXP3+ регуляторных Т-клеток имеет более генерализованный характер и регистрируется как в периферической крови, так и в асцитической жидкости. Больные РЯ характеризуются выраженным 14-кратным снижением баланса соотношения цитотоксических CD8+Pfn+Т-лимфоцитов и CD4+FOXP3+Treg - 0,4 ± 0,1 против 5,7 ± 2,0 у здоровых женщин (pU<0,01). Количественный дефицит цитотоксических CD8+Pfn+Т-клеток в сочетании с увеличением доли различных популяций супрессорных Treg, очевидно, является одним из возможных механизмов снижения эффективности противоопухолевого иммунного ответа.
Ключевые слова: регуляторные Т-клетки, FOXP3, цитотоксические Т-лимфоциты, рак яичников.
REGULATORY T- CELLS IN OVARIAN CANCER E.V Kurganova1, M.A. Tikhonova1, V.A. Lebedeva2, E.G. Laskavaya2, V.F. Kovalenko2, A.A. Ostanin1, E.R. Chernykh1
Institute of Clinical Immunology RAMS SB 1,
Municipal clinical hospital № 1, Novosibirsk2
The aim of the study was to investigate the regulatory T cells (Treg) in the patients with stage III-IV ovarian cancer (OC, n=10). It was revealed that the level of CD4+CD25+/CD4+CD25high Treg in OC patients was increased in ascites compared to that in peripheral blood. These data strongly suggest the directional traffic and accumulation of natural Treg in tumor microenvironment. The level of CD4+FOXP3+ and CD8+FOXP3+ cells was increased both in ascites and in peripheral blood of patients with OC. Our results indicate that expansion of these Treg subsets is more generalized. It was also shown, that patients with OC are characterized by marked (14-fold) decrease of CD8+Pfn+/CD4+FOXP3+ ratio (0,4±0,1 vs 5,7±2,0 in healthy woman, py<0,01). Therefore, it is highly possible that quantitative deficiency of cytotoxic CD8+Pfn+Т-cells coupled with enhance level of different subsets of suppressive Treg represent the important mechanism of of anti-tumor immune response decrease.
Key words: regulatory T cells, FOXP3, cytotoxic T lymphocytes, ovarian cancer.
Известно, что опухолевые клетки могут распознаваться и уничтожаться иммунной системой. Однако в условиях клинической манифестации и прогрессии опухоли иммунный ответ оказывается несостоятельным, а эффективность иммунотерапии регистрируется лишь в ограниченных случаях. Одна из причин неадекватного иммунного ответа и низкой эффективности иммунотерапии связана с возрастанием количества регуляторных Т-клеток с супрессорной активностью (Т^) [24].
Популяция регуляторных Т-клеток является достаточно гетерогенной. Наибольший интерес в последние годы привлекают естественные регуляторные СD4+СD25+Т-клетки. которые играют важную роль в поддержании периферической толерантности к собственным антигенам за счет подавления аутореактивных
Т-лимфоцитов [18, 19]. Поскольку опухолевые клетки экспрессируют аутоантигены, рост опухоли сопровождается появлением аутореактивных Т-клеток, что непременно влечет за собой компенсаторное возрастание [1]. Наряду с естественными Т^, имеющими тимическое происхождение, выделяют также индуцированные регуляторные Т-клетки, которые могут генерироваться из СD4+ и СD8+Т-клеток периферической крови [15, 18].
В экспериментальных моделях показано, что опухолевый рост сопровождается увеличением численности регуляторных Т-клеток. Причем их истощение приводит к отторжению или уменьшению массы опухоли у мышей, что демонстрирует ингибирующий эффект на противоопухолевый иммунный ответ [19, 21]. Возрастание уровня регуляторных
СD4+CD25+Т-клеток показано также у больных с различными формами солидных опухолей и гемобластозов. Увеличение этих клеток выявляется как в локальном опухолевом микроокружении, так и в периферической крови, что свидетельствует о генерализованном характере опухоль-индуцированной супрессии [4, 6, 12, 29]. Причем, по данным ряда авторов, количество Treg коррелирует с показателями выживаемости. Поэтому их определение в клинической практике может иметь прогностическое значение [3, 10, 16, 20, 25].
Традиционно Treg оценивают как CD4+CD25+ клетки, поскольку они ко-экспрессируют молекулу CD25. Однако у человека популяция CD4CD25+ клеток включает не только естественные, но и индуцированные Т reg, а также активированные CD4+Т-лимфоциты [4, 18, 27]. Определенным прогрессом на пути идентификации Treg стало выявление транскрипционного фактора FOXP3. Оказалось, что данный транскрипционный фактор является критическим для развития регуляторных Т-клеток и детерминирует появление у них супрессорной активности [11, 26]. Поэтому экспрессия FOXP3 рассматривается на сегодняшний день в качестве наиболее специфичного маркера Treg [9, 14, 17].
Исследованиями Treg при раке яичников показано, что возрастание CD4CD25+ клеток выявляется исключительно в зоне опухолевого микроокружения (в асцитической жидкости и среди опухольинфильтрирующих лимфоцитов), но не в периферической крови [7]. Однако популяция CD4FOXP3+ клеток при раке яичников до сих пор не оценивалась. Отсутствуют данные и о численности регуляторных CD8+FOXP3+ Т-клеток, возрастание которых описано при некоторых других локализациях злокачественных опухолей [13]. Исходя из этого, целью данной работы стало изучение различных субпопуляций регуляторных Т-клеток в периферической крови и асцитической жидкости у больных раком яичников.
Материал и методы
В исследование были включены 10 пациенток, больных раком яичников (РЯ) III-IV стадии. Возраст обследуемых варьировал от 25 до 76 лет (в среднем 56,7 ± 4,5 года). Для иммунологиче-
ского исследования у больных перед операцией проводили забор 20 мл периферической крови, во время операции - асцитической жидкости. Все пациентки были обследованы после получения информированного согласия. Контрольную группу составили 20 здоровых женщин, сопоставимых по возрасту.
Мононуклеарные клетки (МНК) выделяли из гепаринизированной венозной крови центрифугированием в градиенте плотности фиколла-верографина. Клетки асцитической жидкости (АЖ) получали путем центрифугирования в течение 10 мин при 1500 об/мин. МНК в концентрации 0,1х106/лунку культивировали в 96-луночных круглодонных планшетах в среде RPMI-1640 (Sigma-Aldrich), дополненной 0,3 мг/мл L-глютамина, 5мМ HEPES-буфера, 100 мкг/мл гентамицина и 10 % инактивированной сыворотки доноров АВ (IV) группы крови при 370С в СО2-инкубаторе. Для стимуляции клеток использовали моноклональные анти-CDS антитела ICO-90 (анти-CD3, «Медбиоспектр», Москва) в концентрации 1 мкг/мл. Интенсивность пролиферации оценивали через 72 ч по включению 3Н-тимидина (1 мкКи/лунку), вносимого за 18 ч до окончания культивирования.
Относительное содержание CD4CD25+ и CD4+CD25high Т-клеток определяли методом проточной цитофлюориметрии на лазерном клеточном сортере-анализаторе FACSCalibur (Becton Dickinson, США) с использованием фикоэретрин (РЕ)-меченных анти-CD4 ( «Сорбент», Москва) и FITC-меченных анти-CD25 моноклональных антител (BD PharMingen, США). Для оценки экспрессии внутриклеточного транскрипционного белка FOXP3 в CD4+ и CD8+Т-клетках, а также перфорина (Pfr) в CD8+Т-лимфоцитах МНК обрабатывали FITC-меченными aнти-CD4 или анти-CD8-антителами («Сорбент», Москва). Пермеаби-лизацию клеток проводили с использованием 0,2 % раствора Твин-20, после чего клетки культивировали 30 мин с PE-меченными анти-FOXP3-антителами (eBioscience, США) или с РЕ-меченными анти-Pfr-антителами (BD PharMingen, США). Для оценки CD4+FOXP3+CD25+ клеток использовали PerCP-меченные анти-CD4, РЕ-меченные анти-FOXP3 и FITC-меченные анти-CD25-антитела. Математическую обработку
полученных результатов проводили с использованием программы <^айзйса 6.0».
Результаты и обсуждение
Известно, что увеличение количества/активности Тге§ при онкопатологии приводит к развитию иммунной недостаточности, одним из проявлений которой является угнетение пролиферативного потенциала Т-клеток. Оценка уровня анти-СБ3-стимулированной пролиферации Т-клеток показала (табл. 1), что у здоровых доноров этот показатель варьировал от 6162 до 6895Э имп/мин, составляя в среднем 32700±6990 имп/мин. Интенсивность анти-СБЭ-стимулированного ответа у больных РЯ была в
1,5 раза ниже (от 686 до 48271 имп/мин). Таким образом, циркулирующие Т-лимфоциты больных характеризовались признаками угнетения функциональной активности, что может быть связано с накоплением Тге§.
Таблица 1
Пролиферативная активность Т-клеток доноров и больных РЯ
Стимул Уровень пролиферации МНК периферической крови (имп/мин)
Доноры (п=15) Больные (п=10)
0 270 ± 50 240 ± 40
Анти-СБЭ 32700 ± 6990 22110±4570*
сти больных (п=5; рис. 1В) в 2 раза превышало содержание таковых в периферической крови.
Известно, что субпопуляция СБ4+СБ25+ клеток является гетерогенной по интенсивности экспрессии СБ25 и функциональной активности. При этом показано, что супрессорной активностью обладают преимущественно СБ4 Т-клетки с высокой экспрессией СБ25 молекулы - так называемые СБ4+СБ25Ыё11 клетки [2].
Примечание: * - достоверность различий показателей по сравнению с донорами, ри <0,05 (и - критерий Вилкоксона-Манна-Уитни).
Для анализа Тге§ в периферической крови на первом этапе была проведена оценка относительного и абсолютного количества Т-клеток с фенотипом СБ4+СБ25+. У здоровых женщин (рис. 1А) относительное содержание СБ4+СБ25+ клеток в периферической крови варьировало от 3,0 до 11,0 %, составляя в среднем 5,4 ± 0,5 %, что согласуется с данными литературы [8, 28].
У больных РЯ (рис. 1Б) содержание этих клеток было в 2 раза ниже - 2,7 ± 0,3 % (ри=0,0009) с диапазоном от 1,5 до 4 %. Абсолютное количество СБ4+СБ25+ клеток в периферической крови больных РЯ составило 46 ± 8 клеток/мкл и было также достоверно меньше, чем у здоровых женщин, - 95 ± 7 клеток/мкл (ри=0,001). В то же время относительное содержание СБ4+СБ25+ клеток среди лимфоцитов асцитической жидкоСИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2008. №6 (30)
40 2,4
52 6
»•"*, . У ' - ■ .
- ■ ’ , 1
■ "■ *
,п° 1п1 ' 1(1^ 1Г|3 1 г
Рис. 1. Индивидуальные значения относительного количества СБ4+СБ25+ клеток: А - МНК периферической крови донора; Б - МНК периферической крови больной раком яичников;
В - лимфоциты асцитической жидкости этой же пациентки. СБ4+СБ25+ определяли среди свежевыделенных МНК
А
Б
В
Анализ данной субпопуляции при раке яичников ранее не проводился, поэтому параллельно с оценкой СБ4+СБ25+ Т-клеток, было исследовано относительное содержание СБ4 Т-клеток с высокой экспрессией СБ25. Относительное количество СБ4+СБ25ЫбЬ клеток у здоровых доноров (п= 15) варьировало от 1 до 2,1 %, в среднем - 1,1 ± 0,1 %. У больных РЯ (п=8) количество СБ4+СБ25ЫбЬ клеток в периферической крови было достоверно ниже - 0,8 ± 0,3 % (ри=0,02). При этом содержание Сб4+СБ25Ь1вЬ клеток среди лимфоцитов асцитической жидкости почти в 2 раза превышало таковое в периферической крови - 1,4 ± 0,2 % (ри=0,05).
Полученные результаты свидетельствуют о возможном перераспределении популяции СБ4+СБ25+ у больных РЯ и согласуются с данными Сиг1е1 е! а1., которые впервые продемонстрировали накопление СБ4+СБ25+ клеток в асцитической жидкости женщин с РЯ [7]. Авторы показали, что направленная миграция СБ4+СБ25+ клеток в асцитическую жидкость обусловлена взаимодействием хемокина С^22, продуцируемого опухолевыми клетками и макрофагами, с его рецептором CCR4 на поверхности естественных регуляторных Т-клеток [22]. Выявленное нами более высокое содержание СБ4+СБ25ЬщЬ клеток в асцитической жидкости по сравнению с периферической кровью является еще одним аргументом в пользу миграции естественных в зону опухолевого микроокружения. Кроме того, данный факт позволяет предполагать, что уменьшение доли СБ4+СБ25+ Т-клеток периферической крови связано не только с уменьшением в циркуляции активированных Т-лимфоцитов (на фоне опухоль-индуцированной иммуносупрессии), но и естественных регуляторных Т-клеток. С другой стороны, учитывая угнетение пролиферативного потенциала Т-лимфоцитов у больных РЯ, можно полагать, что в циркуляции возрастает число других субпопуляций Т^, в том числе характеризующихся низкой экспрессией или отсутствием на поверхности молекулы СБ25. Чтобы проверить это предположение, параллельно с оценкой СБ4+СБ25+ Т-клеток мы исследовали содержание СБ4+Т-клеток с внутриклеточной экспрессией FOXP3, являющегося маркером не только естественных, но и индуцированных Т^.
В периферической крови здоровых доноров (п=20) относительное количество СБ4+РОХР3+ клеток варьировало от 1 до 8 %, составляя в среднем 3,3 ± 0,5 % (рис. 2). У больных РЯ (п=10) содержание этих клеток колебалось в пределах от 3 до 16 %, и в среднем более чем в два раза превышало показатель у доноров -
8,5 ± 2,4 % (ри=0,01). Абсолютное количество СБ4+РОХР3+ клеток у больных РЯ было также повышенным - 15 ± 57 клеток/мкл против 70 ± 19 клеток/мкл у доноров (ри=0,05). Доля СБ4+РОХР3+ клеток среди лимфоцитов асцитической жидкости составила в среднем 6,2 ± 0,9 % (п=5). Таким образом, относительное содержание СБ4+РОХР3+ клеток среди лимфоцитов периферической крови и асцитической жидкости больных было сходным и значимо превышало количество этих клеток в периферической крови здоровых женщин.
Увеличение относительного количества СБ4+РОХР3+ клеток на фоне снижения доли СБ4+СБ25+ клеток свидетельствует, что, по-видимому, не все СБ4+РОХР3+ клетки несут на своей поверхности молекулу СБ25. Действительно, проведенный в отдельной серии экспериментов анализ экспрессии молекулы СБ25 в популяции СБ4+РОХР3+ клеток периферической крови больных РЯ показал, что лишь небольшая часть этих клеток несла маркер СБ25, в то
25 □ Доноры - ПК
■ РЯ - ПК
■ РЯ-АЖ
20
С04+Р0ХРЗ+ С08+Р0ХРЗ+
Рис. 2. Относительное количество СБ4+РОХР3+ и СБ8+РОХР3+ клеток у доноров и больных раком яичников. Примечание: ПК - периферическая кровь, АЖ - асцитическая жидкость,
* - различия статистически значимы по сравнению с группой здоровых лиц (ри<0,05)
время как большинство СD4+FOXP3+Т-клеток не экспрессировали CD25 и имели фенотип СD4+FOXP3+CD25- (данные не представлены). Полученные результаты указывают на то, что CD4+CD25+ и CD4+FOXP3+ клетки у больных РЯ являются, по-видимому, различными типами регуляторных Т-клеток. Учитывая, что молекула CD25 является неотъемлемой принадлежностью естественных, но не индуцированных Treg, можно полагать, что у больных РЯ наблюдается увеличение обеих этих субпопуляций. При этом если количество естественных регуляторных CD4+CD25+ Т-клеток возрастает преимущественно в асцитической жидкости (очевидно, за счет их миграции в зону опухолевого микроокружения), то увеличение индуцированных CD4+FOXP3+CD25- Treg регистрируется как в зоне опухолевого роста, так и в циркуляции, то есть имеет более генерализованный характер.
Следует отметить, что, помимо CD4+ Treg. супрессорной способностью обладают и CD8+Т-клетки, экспрессирующие транскрипционный фактор FOXP3+ [5]. Данная популяция клеток является малоизученной и практически не охарактеризованной при онкопатологии. Исследование CD8+FOXP3+ клеток (рис. 2) показало, что в периферической крови относительное количество этих клеток у больных РЯ было повышено более чем в два раза - 19,1 ± 4,4 % против 8,5 ± 1,9 % у доноров (ри=0,04). Такое же количество CD8FOXP3+ клеток выявлялось среди лимфоцитов асцитической жидкости - 18,4 ± 5,8 %. Увеличение популяции CD8+FOXP3+ было недавно опиисано Y. Kiniwa et al. при раке предстательной железы [13]. Кроме того, S. Wei et al. обнаружили увеличение CD8+Treg, продуцирующих IL-10, в асцитической жидкости больных РЯ [23]. Однако авторы не исследовали экспрессию FOXP3 в указанной популяции клеток.
Изучение регуляторных Т-клеток при онкопатологии представляет особый интерес в том случае, когда данная популяция анализируется в контексте баланса Treg и цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ), играющих важную роль в противоопухолевом ответе [21]. Поскольку одним из механизмов цитотоксической активности ЦТЛ является экспрессия перфорина, была проведена оценка количества CD8+Т-клеток
с внутриклеточной экспрессией перфорина. Относительное содержание CD8+Pfr+ клеток в периферической крови здоровых женщин (n=15) и больных РЯ (n=7) было сходным и составляло в среднем 11,1 ± 1,2 % и 11,9 ± 3,8% соответственно. Содержание CD8+Pfr+Т-клеток среди лимфоцитов АЖ было таким же, как в периферической крови - 9,6 ± 2,6 % (n=5). В то же время абсолютное количество CD8+Pfr+ клеток у больных РЯ было достоверно ниже, чем у доноров, - 78 ± 30 и 208 ± 33 клеток/мкл соответственно (PU=0,04). В результате, если у женщин контрольной группы соотношение абсолютного количества ЦТЛ и Treg варьировало от 0,9 до 17, составляя в среднем 5,7 ± 2,0 (n=8), то у больных РЯ этот показатель был снижен в 14 раз - 0,4 ± 0,1 (n=8).
Суммируя полученные данные, можно заключить, что при раке яичников наблюдается увеличение различных субпопуляций Treg. Накопление естественных регуляторных Т-клеток (CD4+CD25+/CD4+CD25high) выявляется преимущественно в зоне опухолевого роста, тогда как увеличение CD4+FOXP3+ и CD8+FOXP3+ регуляторных Т-клеток имеет более генерализованный характер и регистрируется как в периферической крови, так и в асцитической жидкости больных РЯ. При этом отмечается выраженное снижение баланса соотношения ЦТЛ и CD4+FOXP3+ Treg, что может способствовать опухолевому росту.
ЛИТЕРАТУРА
1. Alleva D.G., Burger C.G., Elgert K.D. Tumor growth causes suppression of autoreactive T-cell proliferation by disrupting macrophage responsiveness to interferon-gamma // Scand. J. Immunol. 1994. Vol. 39, № 1. P. 31-39.
2. Baecher-Allan C., Hafler D.A. Suppressor T cells in human diseases // J. Exp. Med. 2004. Vol. 200, № 3. P. 273-276.
3. Bates G.J., Fox S.B., Han C. et al. Quantification of regulatory T cells enables the identification of high-risk breast cancer patients and those at risk of late relapse // J. Clin. Oncol. 2006. Vol. 24. P. 5373-5380.
4. Beyer M., Schultze J.L. Regulatory T cells in cancer // Blood.
2006. Vol. 108, № 3. P. 804-811.
5. BillerbeckE., Blum H.E., ThimmeR. Parallel expansion of human virus-specific FOXP3' effector memory and de novo-generated FOXP3+ regulatory CD8+ T cells upon antigen recognition in vitro // Immunol.
2007. Vol. 179. P 1039-1048.
6. Chattopadhyay S., Chakraborty N.G., Mukherji B. Regulatory T cells and tumor immunity // Can. Immunol. Immunother. 2005. Vol. 54. P. 1153-1161.
7. Curiel T.J., Coukos G., Zou L. et al. Specific recruitment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privilege and predicts reduced survival // Nature Medicine. 2004. Vol. 10, № 9. P. 942-950.
8. Dieckmann D., Ploettner H., Berchtold S. et al. Ex vivo isolation and characterization of CD4+CD25+ T cells with regulatory properties from human blood // J. Exp. Med. 2001. Vol. 193, № 11. P. 1303-1310.
9. Fontenot J.D., GavinM.A., RudenskyA.Y. Foxp3 programs the development and function of CD4+CD25+ regulatory T cells // Nat. Immunol. 2003. Vol. 4. P 330-336.
10. Hiraoka N., OnozatoK., Kosuge T. et al. Prevalence of FOXP3+ regulatory T cells increases during the progression of pancreatic ductal adenocarcinoma and its premalignant lesions // Clin. Cancer Res. 2006. Vol. 12. P. 5423-5434.
11. Hori S., Nomura T., Sakaguchi S. Control of regulatory T cell development by the transcription factor Foxp3 // Science. 2003. Vol. 299. P. 1057-1061.
12. Ichihara F, Kono K., Takahashi A. et al. Increased populations of regulatory T cells in peripheral blood and tumor-infiltrating lymphocytes in patients with gastric and esophageal cancers // Clin. Cancer Res. 2003. Vol. 9. P. 4404-4408.
13. Kiniwa Y., Miyahara Y, Wang H.Y. CD8+FOXP3+ regulatory T cells mediate immunosuppression in prostate cancer // Clin. Cancer Res. 2007. Vol. 13. P. 6947-6958.
14. Kobayashi N., HiraokaN., Yamagami W. et al. FOXP3+ regulatory T cells affect the development and progression of hepatocarcino-genesis // Clin. Cancer Res. 2007. Vol. 13. P. 902-911.
15. Najafian N., Chitnis T., Salama A.D. et al. Regulatory functions of CD8+CD28- T cells in an autoimmune disease model // J. Clin. Invest. 2003. Vol. 112. P. 1037-1048.
16. Petersen R.P., Campa M.J., Sperlazza J. et al. Tumor infiltrating Foxp3+ regulatory T-cells are associated with recurrence in pathologic stage I NSCLC patients // Cancer. 2006. Vol. 107. P. 2866-2872.
17. RamsdellF Foxp3 and natural regulatory T cells: key to a cell lineage? // Immunity. 2003. Vol. 19. P 165-168.
18. Sakaguchi S. Regulatory T cells: key controllers of immunologic self-tolerance // Cell. 2000. Vol. 101. P. 455-458.
19. Sakaguchi S., Sakaguchi N., Asano M. et al. Immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor а-chains (CD25). Breakdown of a single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases // J. Immunol. 1995. Vol. 155. P 1151-1164.
20. Schreiber T.H. The use of FoxP3 as a biomarker and prognostic factor for malignant human tumors // Cancer Epidem. Biomark. Prevent. 2007. Vol.16. P. 1931-1934.
21. Somasundaram R., Jacob L., Swoboda R. Inhibition of cytolytic T lymphocyte proliferation by autologous CD4+CD25+ regulatory T cells in a colorectal carcinoma patient is mediated by transforming growth factor-p // Cancer Res. 2002. Vol. 62. P. 5267 - 5272.
22. Wei S., KryczekI., Zou W. Regulatory T-cells compartmentali-zation and trafficking // Blood. 2006. Vol. 108. P. 426-431.
23. Wei S., Kryczek I., Zou L. Plasmacytoid dendritic cells induce CD8+ regulatory T cells in human ovarian carcinoma // Cancer Res. 2003. Vol. 65. P. 5020-5026.
24. Wolf A.M., Wolf D., Steurer M. et al. Increase of Regulatory T Cells in the Peripheral Blood of Cancer Patients // Clin. Cancer Res. 2003. Vol. 9. P. 606-612.
25. Wolf D., Wolf A.M., RumpoldH. et al. The expression of the regulatory T cell-specific forkhead box transcription factor FoxP3 is associated with poor prognosis in ovarian cancer // Clin. Cancer Res. 2005. Vol. 11, № 23. P 8326-8331.
26. Yagi H., Nomura T., Nakamura K. et al. Crucial role of FOXP3 in the development and function of human CD25+CD4+ regulatory T cells // Int. Immunol. 2004. Vol. 16, № 11. P 1643-1656.
27. Yi H., Zhen Y., Jiang L. et al. The phenotypic characterization of naturally occurring regulatory CD4+CD25+ T cells. // Cell Mol. Immunol. 2006. Vol. 3. P. 189-195.
28. Zou L., BarnettB., Safah H. et al. Bone marrow is a reservoir for CD4+CD25+ regulatory T cells that traffic through CXCL12/CXCR4 signals // J. Cancer Res. 2004. Vol. 64. P 8451-8455.
29. Zou W. Regulatory T cells, tumor immunity and immunotherapy // Nat. Rev. Immunol. 2006. Vol. 6. P. 295-307.
Поступила 10.06.08
