CC BY
843
© Е.И. Еременко, 2008 УДК 576.8.078:579.841.31
ГРУППА БАКТЕРИЙ «BACILLUS CEREUS» - ПРОБЛЕМЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ И ТАКСОНОМИИ
Е.И. Еременко
Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
Bacillus anthracis, B. cereus, B. mycoides, B. pseudomycoides, B. thuringiensis и B. weihenstephanensis составляют таксономическую группу «Bacillus cereus». У них много общих морфологических свойств, высокая гомология и сходная организация геномов, отличающаяся относительно низким содержанием ГЦ-пар и наличием больших плазмид, способных в эксперименте к меж - и внутривидовой передаче. Эти шесть видов бацилл нелегко различить на основе фенотипических и генетических особенностей [25, 41, 44]. Они занимают общие экологические ниши, а пять из них оказывают существенное влияние на здоровье и деятельность человека [8].
B. anthracis - возбудитель сибирской язвы у людей и животных и один из самых опасных агентов биологического оружия и терроризма [17, 28]. Плазмиды pXO1 и pXO2 сибиреязвенного микроба кодируют компоненты двух экзотоксинов - отечный фактор (ОФ), летальный фактор (ЛФ) и протективный антиген (ПА), а также капсулу, являющихся основными факторами патогенности [29, 16].
B. cereus, продуцирующий энтеротоксин и рвотный токсин, вызывает пищевые интоксикации, а также ряд оппортунистических инфекций у пациентов с иммуно-дефицитными состояниями [21]. Несколько крупных плазмид ассоциированы с продукцией рвотного токсина, патогенностью штаммов, выделенных из периодонта [37] устойчивостью к ртути и способностью к мобилизации [6].
B. thuringiensis в процессе споруляции синтезирует параспоральный кристаллический энтомоцидный токсин и является патогеном насекомых. Он широко используется как средство биологической защиты посевов от вредителей [40]. Продукция токсина, ко-нъюгативность и способность к мобилизации других плазмид связаны с функцией ряда крупных плазмид
B. thuringiensis [45, 39, 5].
B. weihenstephanensis, психротолерантная бактерия, недавно выделенная в отдельный вид, часто обнаруживается в пастеризованном молоке, и, вероятно, вызывает порчу продуктов [46].
B. mycoides обнаруживается в ассоцииации с корнями хвойных деревьев и способствует их росту [33].
Особенно близки B. anthracis, B. cereus и B. thuringiensis, что дало основание для проведения, начиная с 2003 года, 3-х объединенных международных конференций и семинаров по сибирской язве и мо-
лекулярной биологии этих бактерий, которые ранее проходили независимо друг от друга. Произошедшее объединение свидетельствует о реальности существования и актуальности общих для трех бацилл проблем. Вопросы, обсуждаемые на этих форумах, связаны с накоплением новых экспериментальных данных о геномике, протеомике, эпидемиологии и экологии, токсинах, взаимодействии «патоген-хозяин», развитии бактерий, регуляции генов, разработке вакцин и средств терапии. Прогресс исследований таков, что заставляет задуматься о пересмотре некоторых устоявшихся представлений, касающихся, в частности, эволюции, идентификации и таксономии этих микроорганизмов.
Экология и геномика. Все представители группы «Bacillus cereus» имеют общую среду обитания. B. cereus в изобилии населяет почву и колонизирует корни растений, оказывая глубокое воздействие на структуру микробного сообщества [15]. Некоторые штаммы B. cereus являются антагонистами патогенных протис-тов растений - оомицетов. Штаммы с такой активностью вырабатывают новый необычный антибиотик цвит-термицин А, угнетающий рост протистов и некоторых грамположительных и грамотрицательных бактерий [42]. В дополнение к широкой антибактериальной активности цвиттермицин А действует также как мощный синергист токсина B. thuringiensis [30]. Геномный анализ ассоциированных с растениями штаммов B. cereus показывает, что они значительно отличаются от штаммов, вызывающих пищевые токсикоинфекции и могут составлять отдельный филогенетический кластер [20].
Замкнутый, повторяющийся жизненный цикл сибиреязвенного микроба складывается из длительного пребывания в почве в виде спор, активного размножения в организме чувствительных животных, которые заражаются при контакте с контаминированной спорами почвой во время выпаса и повторного попадания в почву с выделениями больных животных, при разделке их туш и захоронении трупов [17, 2].
Ризосфера почвы может поддерживать рост B.anthracis, а смешанные культуры штаммов могут обмениваться генетическими маркерами [23]. Независимо от того, имеет ли значение рост в почве для накопления вирулентных спор, очевидно, что в процессе вегетирования появляется возможность для переноса генов и, вероятно, для создания новых патогенных штаммов.
Исследование с использованием ПЦР 15000 образцов почвы и воздуха естественного происхождения, собранных в пределах США, выявило присутствие членов группы «Bacillus cereus» в пробах и нуклеотидные последовательности, очень схожие с таковыми возбудителя сибирской язвы. Близкие «родственники» B. anthracis, широко распространенные в окружающей среде, не вызывали сибирской язвы, но легко могли быть ошибочно приняты за истинный сибиреязвенный микроб при индикации [23].
Об их генетическом родстве также свидетельствует почти 100 %-процентная гомология хромосомной ДНК по результатам гибридизационного анализа [43, 22], сравнительного анализа 16S рРНК [3] , 23S рРНК [4] и 16S-23S спейсерных областей [7, 18].
Описаны изоляты B. cereus, несущие факторы вирулентности B. anthracis [9, 21]. Эти штаммы ассоциировались с тяжелой и даже фатальной инфекцией у пациентов без явных условий для ее развития. Один из четырех независимо выделенных штаммов B. cereus содержал плазмиду pXO1, почти идентичную плазмиде B. anthracis. Из этих сообщений становится очевидным, что «классические» гены B. anthracis не ограничиваются в своем распространении основным кластером B. anthracis. В большинстве случаев подобные штаммы могут быть филогенетически независимы от B. anthracis и формироваться в результате акта горизонтальной передачи генов. В одном из описанных случаев вполне возможно, что плазмида pXO1 была передана из основного кластера B. anthracis в родственный B. cereus, который, вероятно, стал более вирулентным, чем это обычно присуще патогенным B. cereus.
Большие плазмиды бацилл группы «Bacillus cereus» имеют много общего. Плазмиды рХО1 и рХО2 B. anthracis несут гены, ответственные за синтез основных факторов патогенности - токсинов и капсулы. Плазмида B. thuringiensis pAW63 близка плазмиде pXO2 [45], другие плазмиды этих бацилл имеют больше всего сходства с плазмидой pXO1 B. anthracis [38]. Приводятся аргументы в пользу существования консервативного генетического пула в пределах группы «Bacillus cereus», так как исследованные плазмиды обнаруживают сходную структуру - «спинной хребет», единый для них и других плазмид, обнаруживаемых у патогенов этой группы. Многие исследователи соглашаются в том, что может быть и хромосомный элемент, необходимый для сохранения и стабильности этих плазмид. Хотя существует значительное разнообразие и фенотипическая вариабельность, зависящие от содержания плазмид, присутствует консервативный генетический элемент, имеющий ограниченное распространение только в пределах группы. Возможными функциями плазмид-ных генов может быть осуществление конъюгативных свойств, которые предстоит подтвердить и изучить. Предполагаемый механизм репликации этих плазмид имеет хромосомный компонент.
Поскольку патогенность трех близких видов - B. anthracis, B. cereus и B. Thuringiensis определяется прежде всего их плазмидным составом, важно изучить эволюцию этих имеющих общий «скелет» плазмид. В поисках рХО1-подобных плазмид B. anthracis среди 69 штаммов B. cereus и B. thuringiensis определили наличие шести консервативных плазмидных генов, которые обнаружились у 23 из них. Мультилокусное секвени-рование (MLST) и филогенетический анализ показали, что их эволюция не происходит в русле эволюции хромосомы, не совпадает с ней и отличается иной скоростью. В общем, они эволюционируют быстрее, чем хромосомные «гены домашнего хозяйства» [25].
Фенотипическая и генотипическая идентификация. Устоявшиеся схемы идентификации бацилл опираются на характерные фенотипические признаки и генетические особенности. В основе фенотипической идентификации сибиреязвенного микроба и дифференциации его от других бацилл группы «Bacillus cereus» лежат способность к образованию in vivo и in vitro при культивировании на питательных средах, содержащих бикарбонат, в атмосфере с 5-50% СО2, капсулы из поли^-глутаминовой кислоты и двух экзотоксинов, факторов, определяющих его патогенность для широкого спектра хозяев-млекопитающих, чувствительность к пенициллину и сибиреязвенным бактериофагам, отсутствие р-гемолиза на кровяном агаре, активности щелочной фосфатазы и подвижности [17, 28].
Генетическая идентификация сибиреязвенного микроба основывается на определении наличия плазмид, генов капсуло- и токсинообразования, а также нескольких специфических хромосомных маркеров [32, 17, 28, 35, 36].
Несмотря на существование вполне очевидных различий между бациллами, накапливается все больше данных о том, что ни одно из них не является абсолютным и определяющим. Так, сравнительный сиквенс их геномов обнаружил, что гены всех хромосомных факторов, не проявляющих активности у B. anthracis, тем не менее присутствуют в его геноме, а отсутствие их экспрессии может быть следствием единственной мутации в регуляторном элементе plcR. Восстановление функции PlcR приводит к синтезу сибиреязвенным микробом ряда экзопродуктов, таких как энтеротоксин, различные протеазы и фосфолипазы, обычно вырабатываемых B. cereus. Напротив, APlcR-вариант B. cereus, утрачивает способность к их продукции [34].
Атипичные штаммы, межвидовая дифференциация и таксономия. Штаммы сибиреязвенного микроба, лишенные одной или обеих плазмид, можно выделить из объектов окружающей среды, реже встречаются изоляты от людей и животных. В результате исследования большой коллекции штаммов в CDC (Atlanta, GA, USA) выяснилось, что в процессе длительного хранения культур на скошенном агаре под слоем масла с высокой частотой происходит утрата одной или обеих плазмид [13]. Штаммы, лишенные плазмид, утрачивают вирулентность, что нашло отражение в названии одной из статей, посвященных изучению таких штаммов: «Bacillus anthracis but Not Always Anthrax» (Сибиреязвенный микроб, но не всегда сибирская язва) [44]. По нашим данным, атипичных штаммов с такими и иными, отличающимися от типового штамма характеристиками, может быть около 10%. Как раз они являются трудными объектами для идентификации, так как лишены некоторых опорных признаков, позволяющих дифференцировать их от близкородственных бацилл группы «Bacillus cereus» [14, 1].
Чувствительность к фагу «Гамма» используется для различения B. anthracis и других бацилл группы. Большинство штаммов B. anthracis лизируется этим фагом, тогда как большинство B. cereus и B. thuringiensis к нему не чувствительно. В эксперименте был идентифицирован бактериальный белок GamR, необходимый для адгезии фага «Гамма». Он ковалентно закрепляется на пептидогликановом слое клеточной стенки при участии фермента сортазы [11]. Очевидно, специфичность фага «Гамма» обеспечивается функцией гена gamR. Редко встречающиеся штаммы B. cereus, чувствительные к фагу, имеют гены с высокой степенью сходства с геном gamR.
В противоположность фенотипическим различи-
ям, результаты мультилокусного электрофореза ферментов и анализа нуклеотидных последовательностей девяти хромосомных генов указывают на то, что B. anthracis следует рассматривать как потомка B. cereus. Такое определение является не только формальным вопросом таксономии, но и может иметь последствия в связи с вирулентостью и потенциальным горизонтальным переносом генов в пределах группы «Bacillus cereus» [19].
С целью выяснить, могут ли стандартные тесты - микробиологическая идентификация и анализ методом П^ с видоспецифическими праймерами давать ложноположительные и ложноотрицательные результаты, изучили 23 изолята Bacillus spp., при исследовании которых этими методами были получены противоречивые данные [10]. Для этого использовали наряду со стандартным протоколом мультилокусный анализ вариабельных областей генома с тандемными повторами (MLVA) и MLST. Шесть штаммов, положительно реагирующих в мультиплексной П^ в режиме реального времени, но устойчивых к фагу «Гамма», по результатам MLVA были идентифицированы как фагорезистентные штаммы B. anthracis. 17 изолятов были П^-негативны, но лизировались фагом «Гамма» и охарактеризованы как необычные фагочувствительные изоляты B. cereus, близкие между собой и B. anthracis. У одного из фагочувствительных подвижных B. cereus амплифицировались все шесть хромосомных MLVA-локусов и по результатам филогенетического анализа на основе MLST этот штамм попадал в один кластер с B. anthracis. Авторы приходят к заключению, что MLVA и MLST могут помочь в определении тех изолятов, при исследовании которых обычными методами идентификации нельзя подтвердить или исключить их принадлежность к B. anthracis. Они подчеркнули также важность использования набора тестов при идентификации B. anthracis так как, полагаясь только на один тест, можно столкнуться с проблемами, связанными с вариабельной природой микроба. В наших исследованиях также показана возможность использования MLVA для дифференциации сибиреязвенного микроба от B. cereus и других бацилл [1].
Отдельные сообщения свидетельствуют о том, что результаты даже нескольких предварительных идентификационных тестов не всегда могут быть надежными. Так, в гемокультуре, полученной от больной с перекрутом яичника, была обнаружена неподвижная негемолитическая палочка по этим признакам похожая на сибиреязвенный микроб, что послужило основанием для назначения массивной антибиотикотерапии. Дальнейшее исследование показало, что культура также положительно реагировала в реакции прямой иммунофлуоресценции ^ПИФ) с флуоресцеин-мече-ными моноклональными антителами к капсуле B. anthracis. Тем не менее она была отнесена к не сибиреязвенной так как не лизировалась фагом «Гамма», давала отрицательный результат в PПИФ с моноклональными антителами к клеточной стенке сибиреязвенного микроба, и окончательно идентифицирована как B. megaterium [12].
Недавняя дискуссионная статья с названием «Anthrax, but Not Bacillus anthracis?» (Сибирская язва, но не сибиреязвенный микроб?) [31] появилась после опубликования нескольких работ, в которых описаны штаммы с характеристиками, не свойственными сибиреязвенному микробу, послужившие причиной внезапной гибели обезьян в Африке от инфекции, весьма похожей на сибирскую язву [27, 26, 24]. Эти штаммы были выделены в труднодоступных вечнозеленых тропических лесах Камеруна и Кот-д’Ивуара от шимпан-
зе и горилл. Изоляты отличались подвижностью, устойчивостью к пенициллину и бактериофагу «Гамма», продуцировали капсулу независимо от СО2 и бикарбоната, секретировали в культуральный супернатант ПА и ЛФ. Они имели плазмиды капсуло- и токсинообра-зования с размерами, соответствующими плазмидам pXO1 и pXO2 B. anthracis. Филогенетический анализ на основе данных MLVA обнаружил их принадлежность к новому кластеру F B. anthracis, однако по результатам MLST эти штаммы были близки к типичным штаммам B. anthracis и двум высоковирулентным изолятам B. cereus и B. thuringiensis. Авторы предположили, что открытые ими штаммы имеют общего предшественника с классическими B. anthracis, или что они появились недавно в результате передачи плазмид B. anthracis в штамм группы B. cereus. В цитируемой статье предложено определять такие штаммы как B. cereus/B.anthracis sensu lato, т.е. в широком смысле, в отличие от «классических» штаммов B. anthracis sensu stricto по крайней мере до тех пор, пока не будут твердо установлены их филогенетические связи и фенотипические отличия.
Заключение. Вопрос об однозначной идентификации значительного количества штаммов сибиреязвенного микроба как на основе существующих фенотипических тестов, так и с использованием внедряемых молекулярно-генетических методов пока не снят с повестки дня. Успешному решению поставленных проблем будет способствовать комплексный анализ штаммов группы «Bacillus cereus», чье систематическое положение вызывает сомнения, на основе определения наиболее специфичных фенотипических свойств в сочетании с П^ с праймерами к нескольким плазмидным и хромосомным локусам, MLVA и MLST.
Pабота поддержана грантом PФФИ № 08-04-00895а.
Литература
1. Рязанова, А.Г. Использование метода многолокусного анализа регионов генома с вариабельным числом тандемных повторов (MLVA) для идентификации атипичных штаммов сибиреязвенного микроба и дифференциации от близкородственных бацилл / А.Г Рязанова, Е.И. Еременко, О.И. Цыганкова, Е.А Цыганкова // Матер. VII Межгос. науч.-практ. конф. государств-участников СНГ (3-5 октября 2006) / Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении в решениях Санкт-Петербургского саммита «группы восьми» и санитарная охрана территорий государств-участников содружества независимых государств.- Оболенск, 2006. - С. 121-122.
2. Черкасский, Б.Л. Эпидемиология и профилактика сибирской язвы / Б.Л. Черкасский; Москва ; «ИНТЕРСЭН», 2002. - 384 с. ISBN №5-89834-077-7.
3. Ash C.J. Comparative Analysis of Bacillus anthracis, Bacillus cereus, and Related Species on the Basis of Reverse Transcriptase Sequencing of 16S rRNA / C.J. Ash, A.E. Farrow, M. Dorsch [et al.] // Int. J. Syst. Bacteriol. - 1991. - Vol. 41. -P 343-346.
4. Ash, C.J. Comparative Analysis of 23S Ribosomal RNA Gene Sequences of Bacillus anthracis and Emetic Bacillus cereus Determined by PCR-Direct Sequencing / C.J. Ash, M.D. Collins // FEMS Microbiol. Lett. - 1992. - Vol. 94. - P. 75-80.
5. Battisti, L. Mating System for Transfer of Plasmids Among Bacillus anthracis, Bacillus cereus, and Bacillus thuring-iensis / L. Battisti, B.D. Green, C.B. Thorne // J. Bacteriol.
- 1985. - Vol. 162. - № 2. - P. 543-550.
6. Belliveau, B.H. Mercury Resistance Determined by a Self-Transmissible Plasmid in Bacillus cereus 5 / B.H. Belliveau, J.T Trevors // Biol Met. -1990.- Vol.3. - № (3-4). - P. 188-96.
7. Bourque, S.N. Comparative Analysis of the 16S to 23S Ribosomal Intergenic Spacer Sequences of Bacillus thuringiensis Strains and Subspecies and of Closely Related Species / S.N. Bourque, J.R. Valero, M.C. Lavoie, R.C. Levesque //
Appl. Environ. Microbiol. - 1995. - Vol. 61. - P. 1623-1626.
8. Cherif, A. Bacillus anthracis Diverges from Related Clades of the Bacillus cereus Group in 16S-23S Ribosomal DNA Intergenic Transcribed Spacers Containing tRNA Genes / A. Cherif, S. Borin, A.A. Rizzi [et al.] // Appl. Environ. Microbiol.
- 2003. - Vol. 69. - № 1. - P 33-40.
9. Cheung, D.T.L. Characterization of a Bacillus anthracis Isolate Causing a Rare Case of Fatal anthrax in a 2-Year-Old Boy from Hong Kong / D.T.L. Cheung, K.M. Kam, K.L. Hau, [et al.] // 2005. - J. Clin. Microbiol. - Vol. 43. - P. 1992-1994.
10. Chung, K. M. Molecular Approaches to Identify and Differentiate Bacillus anthracis From Phenotypically Similar Bacillus Species Isolates / K.M. Chung, J. E. Gee, T Popo-vic, A.R. Hoffmaster // BMC Microbiology. - 2006. - 6:22 doi:10.1186/1471-2180-6-22.
11. Davison, S. Identification of the Bacillus anthracis Phage Receptor / S. Davison, E. Couture-Tosi, T. Candela [et al.] // J. Bacteriol. -2005. - Vol. 187. - P. 6742-6749.
12. Dib, E. G. Nonhemolytic, Nonmotile Gram- Positive Rods Indicative of Bacillus anthracis / E.G. Dib, S.A. Dib, D.A. Korkmaz [et al.] // Emerg. Infect. Dis. - 200. - Vol. 9. -№8. - P 1013-1015.
13. Drobniewski, F.A. Bacillus cereus and Related Species / F.A. Drobniewski // Clin. Microbiol.Rev. - 1993. - Vol.
- P. 6:324-338.
14. Eremenko, E.I. Study of Atypical Strains of Bacillus anthracis / E.I. Eremenko, N.P Buravtseva, O.I. Tsygankova [et al.] // 3rd Internetional Conference on Anthrax. Plymouth, England, 1998. - P. 46.
15. Gilbert, G. S. Use of Cluster and Discriminant Analyses to Compare Rhizosphere Bacterial Communities Following Biological Perturbation / G. S. Gilbert, M. K. Clayton [et al.] // Microb. Ecol. - 1996. - Vol. 32. -P. 123-147.
16. Green, B.D. Demonstration of a Capsule Plasmid in Bacillus anthracis / B.D. Green, L. Battisti, T.M. Koehler [et al.] // Infect. Immun. - 1985 . - Vol. 49. - P. 291-297.
17. Guidelines for the Surveillance and Control of Anthrax in Human and Animals. 3rd edition. World Health Organization WHO/EMC/ZDI/98.6, 1998. - 97 p.
18. Harrell, L.J. Genetic Variability of Bacillus anthracis and Related Species / L.J. Harrell, G.L. Andersen, K.H. Wilson // J. Clin. Microbiol. - 1995. - Vol. 33. - №7. - P. 1847-1850.
19. Helgason, E. Bacillus anthracis, Bacillus cereus, and Bacillus thuringiensis- One Species on the Basis of Genetic Evidence / E. Helgason, O. A. 0kstad, D. A. Caugant [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. - 2000. - Vol. 66. - № 6. - P. 2627-2630.
20. Hill, K. K. Fluorescent Amplified Fragment Length Polymorphism Analysis of Bacillus anthracis, Bacillus cereus, and Bacillus thuringiensis Isolates / K. K. Hill, L.O Ticknor, R.T Okinaka [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. - 2004. - Vol. 70.
- P. 1068-1080.
21. Hoffmaster, A.R. Identification of Anthrax Toxin Genes in a Bacillus cereus Associated with an Illness Resembling Inhalation Anthrax / A.R. Hoffmaster, J. Ravel, D.A. Rasko [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2004. - Vol. 101. P. 8449-8454.
22. Kaneko, T. Deoxyribonucleic Acid Relatedness Between Bacillus anthracis, Bacillus cereus and Bacillus thuringiensis / T. Kaneko, R. Mozaki, K. Aizawa // Microbiol. Immunol. -1978. -Vol. 22. - P. 639-641.
23. Keim, P. Meeting Review - The International Bacillus anthracis, B. cereus, and B. thuringiensis Conference, “Bacillus-ACT05” / P Keim, M. Mock, J. Young, T. M. Koehler // J. Bacteriol. - 2006. - Vol. 188. - № 10. - P 3433-3441.
24. Klee, S. Characterization of Bacillus anthracis-Like Bacteria Isolated from Wild Great Apes from Cote d’Ivoire and Cameroon / S. Klee, M. Ozel, B. Appel, C. Boesch, H. Ellerbrok, D. Jacob, G. Holland, F. H. Leendertz, G. Pauli, R. Grunow H. Nattermann // J. Bacteriol. - 2006. - Vol. 188. - № 15. - P 5333-5344.
25. Klevan, A. Evolution of pXO1 Backbone in the Bacillus cereus Group of Bacteria / A. Klevan, E. Helgason, N.J. Tourasse,
A.-B. K0lsto // Abstract book / Bacillus - aCt 2007 - International Conference on Bacillus anthracis, B. cereus and B. thuringiensis- Oslo, Norway, 2007. - P. 93.
26. Leendertz, F.H. A New Bacillus Anthracis Found in Wild Chimpanzees and a Gorilla From West and Central Africa /
F.H. Leendertz, S. Yumlu, G. Pauli, C. Boesch, E. Couacy-Hymann [et al.] // PLoS Pathog, 2006. - Vol.2(1). - P 8.
27. Leendertz, F.H. Anthrax kills wild chimpanzees in a tropical rainforest / F.H. Leendertz, H. Ellerbrok, C. Boesch [et al.] // Nature. - 2004 - Vol. 430(6998). - P. 451-452.
28. Manual for Laboratory Diagnosis of Anthrax. World Health Organization / 2003.- 67 p.
29. Mikesell, P. Evidence for Plasmid-mediated Toxin Production in Bacillus anthracis / P. Mikesell, B.E. Ivins, J.D. Ristroph, T.M. Dreier // Infect. Immun.- 1983. -Vol. 39. - P371-376.
30. Nair, J. R. Cloning and Partial Characterization of Zwittermicin A Resistance Gene Cluster from Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki Strain HD1G // J. R. Nair, J. R. Narasimman, V. Sekar // J. Appl. Microbiol. - 2004. -Vol. 97. - P. 495-503.
31. Okinaka, R., Pearson, T., Keim P (2006) Anthrax, but not Bacillus anthracis? PLoS Pathog 2(11): e122.i:10.1371/jour-nal.ppat.0020122.
32. Patra, G. Molecular Characterization of Bacillus Strains Involved in Outbreaks of Anthrax in France in 1997 / G. Patra, J. Vaissaire, M. Weber-Levy [et al.] // J. Clin. Microbiol. -1998. - Vol. 36. - P. 3412-3414.
33. Petersen, D. J. Use of Species- and Strain-specific PCR Primers for Identification of Conifer Root-associated Bacillus spp. / D. J. Petersen, M. Shishido, F.B. Holl, C.P Chanway // 1995. - FEMS Microbiol. Lett. - Vol. 133. - P 71-76.
34. Pomerantseva, O.M. How Bacillus Cereus Could Be Bacillus Anthracis and Vice Versa / O.M. Pomerantseva, A.P Pomerantsev, S. Goldman, [et al.] // Abstract book / Bacillus
- ACT 2007 - International Conference on Bacillus anthracis,
B. cereus and B. thuringiensis- Oslo, Norway, 2007 - P. 94
35. Radnedge, L. Genome Differences that Distinguish Bacillus anthracis from Bacillus cereus and Bacillus thuringiensis // L. Radnedge, PG. Agron, K.K. Hill [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. - 2003. - Vol. 69. - № 5. - P. 2755-2764.
36. Ramisse, V. Identification and Characterization of Bacillus anthracis by Multiplex PCR Analysis of Sequences on Plasmids pXO1 and pXO2 and Chromosomal DNA / V. Ramisse,
G. Patra, H. Garringue [et al.] // FEMS Microbiol. Lett. -1996. - Vol. 145. - P. 9-16.
37. Rasko, D. A. Complete Sequence Analysis of Novel Plasmids from Emetic and Periodontal Bacillus cereus Isolates Reveals a Common Evolutionary History among the B. cereus-Group Plasmids, Including Bacillus anthracis pXO1 / D. A. Rasko, M. J. Rosovitz, O. A. 0kstad, [et al.] // J. Bacteriol.
- 2007. - Vol. 189. - № 1. - P. 52-64.
38. Rasko, D. A. Genomics of the Bacillus cereus Group of Organisms / D. A. Rasko, M. R. Altherr, C. S. Han, J. Ravel // FEMS Microbiol. Rev. - 2005. -Vol. 29. - P 303-329.
39. Reddy, A. Identification of Self-Transmissible Plasmids in Four Bacillus thuringiensis Subspecies / A. Reddy, L.T. Battisti, C. B. Thorne // J. Bacteriol. - 1987. - Vol. 169. - № 11.
- P 5263-5270.
40. Schnepf, E. Bacillus thuringiensis and Its Pesticidal Crystal Proteins / E. N. Schnepf, J. Crickmore, Van Rie, [et al.] // Microbiol. Mol. Biol. Rev. - 1998. - Vol. 62. - P 775-806.
41. Schwieger, F. A New Approach to Utilise PCR-Single Strand Conformation Polymorphism for 16S rRNA Gene-Based Microbial Community Analysis / F. Schwieger, C. Tebbe // Appl. Environ. Microbiol. - 1998. - Vol. 64. P. 4870-4876.
42. Silo-Suh, L. A. Target Range of Zwittermicin A, an Aminop-olyol Antibiotic from Bacillus Cereus / L. A. Silo-Suh, E. V. Stabb, S. J. Raffel, J. Handelsman // Curr. Microbiol. - 1998. -Vol. 37. - P. 6-11.
43. Somerville, H.J. DNA Competition Experiments Within the Bacillus Cereus Group of Bacilli / H.J. Somerville, M.L. Jones // J. Gen. Microbiol. - 1972. - Vol. 73. - P 257-261.
44. Turnbull, P C. Bacillus anthracis but not Always Anthrax / P
C. Turnbull, R. A. Hutson, M. J. Ward, [et al.] // J. Appl. Bacteriol. - 1992. - Vol. 72. - P. 21-28.
45. Van der Auwera, G. A. Conjugative Plasmid pAW63 Brings New Insights into the Genesis of the Bacillus anthracis Virulence Plasmid pXO2 and of the Bacillus thuringiensis Plasmid pBT9727 / G. A. Van der Auwera,. L. Andrup, J. Mahillon // 2005. BMC Genomics 6:103. [Online.] doi:10.1186/1471-2164-6-103.
46. von Stetten, F. Climatic Influence on Mesophilic Bacillus Cereus and Psychrotolerant Bacillus weihenstephanensis Populations in Tropical, Temperate and Alpine Soil / F. von Stetten, R. Mayr, S. Scherer // Environ. Microbiol. - 1999.
- Vol. 1. - P 503-515.
