CC BY
88
УДК 582.28
ГРИБЫ ФИЛЛОПЛАНЫ В ГОРОДСКОЙ СРЕДЕ
М.С. Зеленская1, М.В. Сидельникова2, Е.Г. Панова1, А.А. Паутов1, Е.Г. Крылова1, Я.О. Пагода1, Д.Ю. Власов1, 3
1 Санкт-Петербургский государственный университет, 2 Санкт-Петербургский государственный аграрный университет и 3 Ботанический институт РАН, Санкт-Петербург, Россия
Эл. почта: marsz@yandex.ru, kapa0505@mail.ru, elena-geo@list.ru, a.pautov@spbu.ru, egkrilova@yandex.ru, ianinapagoda@gmail.com, dmitry.vlasov@mail.ru Статья поступила в редакцию 28.04.2017; принята к печати 05.06.2017
Изучен состав микроскопических грибов на поверхности листьев древесных и кустарниковых растений в центре и пригородах Санкт-Петербурга. Выявлено 30 видов грибов и стерильные формы светлого и темного мицелия. Показано, что на листьях постоянно обитают микромицеты, формирующие сообщества определенной структуры. Основу таких сообществ составляют темноокрашенные анаморфные микроскопические грибы всего нескольких видов. Они формируют гифы и микроколонии, распределение которых может быть связано со структурными особенностями листьев. Микромицеты филлопланы проявляют антагонистические отношения с возбудителями мучнистой росы, которые также развиваются на поверхности листьев. Состав микобиоты филлопланы зависит как от территориального расположения насаждений, так и от состава растений. Показано, что филлофильные биопленки ассоциируются с пылевыми частицами различной формы и размеров, что приводит к формированию органоминеральных наслоений на поверхности листьев. В формирующихся биокосных системах могут развиваться процессы кристаллизации и минералообразования. В целом, особенности формирования микобиоты филлопланы во многом определяются экологической ситуацией на конкретных территориях. Ключевые слова: микромицеты, городская среда, поверхность листьев, деревья и кустарники, биокосные взаимодействия, антропогенное влияние.
PHYLLOPLANE FUNGI IN THE URBAN ENVIRONMENT M.S. Zelenskaya1, M.V. Sidelnikova2, Ye.G. Panova1, A.A. Pautov1, Ye.G. Krylova1,
Ya.O. Pagoda1, D.Yu. Vlasov1 3
1 Saint-Petersburg State University, 2 Saint-Petersburg State Agrarian University, and 3 Botanical Institute of the
Russian Academy of Sciences, Saint Petersburg, Russia
E-mail: marsz@yandex.ru, kapa0505@mail.ru, elena-geo@list.ru, a.pautov@spbu.ru, egkrilova@yandex.ru, ianinapagoda@gmail.com, dmitry.vlasov@mail.ru
The species composition of microscopic fungi (micromycetes) on the foliage surface of wood and shrub plants in the center and suburbs of Saint Petersburg was studied. Thirty species of fungi and the sterile forms of light and dark mycelium were detected. Different micromycetes permanently inhabit plant foliage and form communities having characteristic structures. The basis of these communities is constituted by dark-colored anamorphic microscopic fungi referred to a few species. They form hyphae and microcolonies, the distribution of which may be related to the structural features of foliage. Micromycetes of phylloplane fungi show antagonistic relationships with powdery mildew pathogens, which also develop on foliage surfaces. The composition of phylloplane mycobiota depends on the spatial arrangement of plantations as well as on their composition. Phyllophilic biofilms associated with dust particles of various shapes and sizes form organo-mineral layers on foliage surfaces. As a result, fungi are involved in the formation of bio-inert systems and in crystallization and mineral formation. In general, the specific features of phylloplane mycobiota development are largely determined by ecological situations in specific areas. Keywords: micromycetes, urban environment, leaf surface, trees and shrubs, bio-inert interactions, anthropogenic impact.
ВВЕДЕНИЕ
На листовой пластинке формируются сложные по составу микробные сообщества бактерий, грибов (мицелиальных и дрожжевых) и микроскопических водорослей [11, 17, 36], образующих так называемую филлоплану. К грибам филлопланы относят микромицеты, обитающие на поверхности листьев. Основны-
ми источниками питания для них служат выделения растений, а также вещества, оседающие из атмосферы [25]. Грибы филлопланы подвергаются воздействию абиотических факторов, таких как уровень доступно -сти влаги и питательных веществ, инсоляция, колеба -ния температуры, загрязнение воздушной среды [18, 30]. Формирование сообществ филлопланы связано с физиологическими изменениями, происходящими в
самом растении в процессе онтогенеза или под воздействием на растение патогенных организмов, а также внешних факторов [17]. Грибы филлопланы выделяют в самостоятельную экологическую группу. Они слабо изучены относительно других групп грибов, на -пример патогенных, которые развиваются в тканях листа [1, 2, 11, 32]. По мнению ряда авторов, микроми-цеты филлопланы не наносят вреда растению [14, 27]. Они обитают преимущественно на верхней поверхно -сти листьев, хотя иногда способны развиваться и на нижней стороне листовой пластинки [35].
Сравнительно недавно грибы филлопланы рассматривали в составе сборного вида Fumago vagans (сажистый грибок или чернь). Описания, представленные в различных определителях, свидетельствовали о размытых таксономических признаках данного вида, которые скорее подходили сразу к нескольким видам грибов, а наиболее близки были к грибам рода Cladosporium [8]. Однако исследователи этой группы пришли к пониманию того, что грибы филлопланы представляют собой сложный комплекс видов, присутствие которых обусловлено совокупностью экологических факторов, трофических особенностей микромицетов, а также их взаимодействиями в фил-лофильном сообществе. Вместе с тем, все еще можно встретить упоминание названия Fumago vagans для темноокрашенных грибов, обнаруженных на поверхности органов растений [6].
В ряде работ рассмотрено видовое разнообразие грибов филлопланы, их роль в жизни растений, динамика и структура микробных сообществ на поверхности листа. Наиболее распространенными обитателями филлопланы считаются следующие грибы: Alternaría alternata, Cladosporium cladosporioides, Gliocladum vírídae, Mucor racemosus, Penicillum chrysogenum. Эти микромицеты встречаются на поверхности листьев большого числа видов растений по всему миру [11, 17, 22, 25]. Роль грибов филлопланы в жизни растений весьма существенна. Они могут защищать растения от вредных организмов, а также участвовать в разложении листьев после их опадения [32]. Некоторые из них способны к лизису компонентов целлюлозы и играют важную роль в деградации тканей растений [11].
Формируя спороношение на поверхности листьев, микромицеты филлопланы могут существенно увеличивать содержание спор в окружающей воздушной среде [30]. Дождь является самым важным фактором диссеминации спор грибов, обитающих на поверхности листьев [29, 30]. Однако известно, что в мангровых лесах распространение спор происходит преимущест -венно с помощью ветра, а дождь и высокая влажность могут наоборот затормозить расселение грибов [28].
Сравнительные исследования состава грибов фил-лопланы и окружающего воздуха были проведены на примере древесных пород Ulmus americana и Quercus
palustris [30]. В пробах с поверхности листьев и из воз -душной среды были обнаружены виды родов Alternaria, Aspergillus, Cladosporium, Curvularia, Drechslera, Epicoccum, Fusarium, Nigrospora, Penicillum, Phoma, Pithomyces. Полученные данные свидетельствуют о том, что в воздухе находится большое количество пропагул грибов, которые обычно попадают на поверхность листа случайно. Адгезия спор при взаимодействии с наружной кутикулой листовой пластинки происходит с помощью химических механизмов, а также зависит от морфологических особенностей взаимодействующих организмов [12]. Дальнейшее развитие мицелия зависит от свойств гриба, а также условий, складывающихся в конкретном местообитании. Поверхность листа содержит вещества, стимулирующие или ингибирующие прорастания спор, рост мице -лия и последовательную биологическую колонизацию [17]. По некоторым данным, микромицеты филлопланы способны успешно конкурировать за питательные вещества с фитопатогенами и подавлять их, секрети-руя антибиотики и токсины [16]. Микромицеты фил-лопланы риса, хлопка, цитрусовых и других растений проявляют антагонистическую активность по отношению к патогенным организмам и предотвращают заражение растений ими [17, 33, 37-39].
У грибов, обитающих на поверхности листьев растений, наблюдаются разные пики разнообразия в те -чение года, что в первую очередь связано с сезонными изменениями климата, а также доступностью органических веществ [11, 14, 32, 40]. Явления смены видового состава грибов филлопланы в течение года (сезонные сукцессии) изучены в разных экологических условиях [17, 19, 36]. Например, число видов и интенсивность колонизации листьев грибами в дождливый период обычно выше, так как дожди и высокая влажность являются факторами успешного прорастания спор грибов. Встречаются виды микромицетов, присутствие которых стабильно в течение всего года. Например, Alternaria alternata является постоянно встречающимся грибом в филлоплане Jartropa curcas или на поверхности листьев Ricinus communis [15, 17, 40]. Есть виды грибов филлопланы, характерные для определенных природных зон. К примеру, Cladosporium oxyporum является общим видом для растений тропического пояса. Кроме поверхности листа он развивается на мертвых частях листьев и стволах травянистых и древесных растений [20, 21, 28]. В филлоплане растений умеренного климата чаще других встречается Cladosporium cladosporioides [28].
В целом, исследования грибов филлопланы в большей степени затрагивали растения, произрастающие в тропическом климате в естественных биоценозах [12, 13, 18, 26, 28, 34]. Вместе с тем, интерес вызывают микромицеты данной группы в городской среде. Исследования, проведенные в нескольких городах Рос-
>
сии с умеренным климатом, показали, что в них формируется особый состав аэромикоты (значительную долю составляют условно патогенные грибы), что в свою очередь может быть связано с составом грибов филлопланы [1, 3—5, 7]. Динамика микобиоты фил-лопланы липы и клена изучалась в Самаре, где было показано, что 13% выявленных видов являются доказанными аллергенами, а 75% - условными патогенами человека [7].
В воздушной среде городов содержится большое ко -личество пыли, которая оседает на поверхности листь -ев деревьев. Частицы пыли могут иметь как природное, так и техногенное происхождение. Источником частиц природного происхождения являются продукты выветривания облицовочного камня и архитектурных построек, а также почвы. Техногенные частицы поступают в атмосферу преимущественно в виде выбросов предприятий и автомобильного транспорта. В состав пыли (пепла и сажи) входят токсичные элементы, такие как свинец, олово, хром, кобальт, никель, стронций, бериллий, ниобий, вольфрам, молибден, цинк, марганец и медь. Суммарные выбросы в атмосферу из постоянных и точечных источников в Санкт-Петербурге составили в 2012 г. - 492,3 т, включая твер -дые примеси - 2,9 т, SO2 - 7,6 т, СО - 358 т, Шх - 65,7 т, СНх - 10,6 т1. Установлено, что в воздухе присутствуют микроколичества меди, цинка, титана, сурьмы, бериллия, висмута, хрома, кобальта, цезия, лития, магния, никеля, рубидия, селена, стронция, и ванадия, которые относятся к токсикантам первой и второй групп опасности. Химические элементы в воздухе могут вступать в реакции с другими загрязнителями в результате фотохимических процессов [10, 23, 31]. Кроме того, в атмосферном воздухе всегда присутствует органический материал. К органическим загрязнителям воздушной среды относятся частицы раститель -ного и животного происхождения (древесины, шерсти, волос и др.), а также химического (частицы пластмасс, химических волокон и др.). К органическим компонентам пыли можно отнести и микроорганизмы (бактерии, микроскопические грибы и водоросли), которые адсорбируются на пылевых частицах и переносятся воздушными потоками вместе с ними.
Состав пыли может оказывать влияние на формирование микобиоты филлопланы и сами растения. Очевидно, что при оседании твердых частиц на поверхность листьев они могут взаимодействовать не прямо с покровами листа, а с микробными сообществами филлопланы, которые часто плотно покрывают листовую пластинку. Осаждение пылевых частиц
1 Доклад об экологической ситуации в Санкт-Петербурге в 2012 году (http://www.nacc.spb.ru/files/static-writable-ckeditor-uploads-2013-06-19-dok2012.pdf); Защита строительных конструкций, зданий и сооружений от агрессивных химических и биологических воздействий окружающей среды (https://gov.spb.ru/static/css/docs/1281426847.pdf).
способно приводить к формированию органомине-ральных пленок (наслоений) на поверхности листьев. Далеко не ясно, как эти процессы могут сказаться на растении в целом.
Для оценки возможного антропогенного влияния на формирование микобиоты филлопланы особый интерес могут представлять сравнительные исследования в тех районах мегаполиса, которые различаются по уровню антропогенной нагрузки на экосистемы. К таким мегаполисам можно отнести Санкт-Петербург с окружающими его историческими парками. Стоит отметить, что микобиота древесных и кустарниковых растений в Санкт-Петербурге и пригородах изучается давно, однако целенаправленные исследования грибов филлопланы до последнего времени практически не проводились.
В настоящей работе представлены результаты сравнительных исследований микобиоты филлопланы в районах Санкт-Петербурга, различающихся по степе -ни антропогенной нагрузки (центр города и пригородная парковая зона) и охарактеризованы особенности колонизации грибами поверхности листьев некоторых деревьев и кустарников в городской среде.
Объекты и методы исследования
Сбор материала проводили в летне-осенние периоды 2015-2016 гг. в различных районах Санкт-Петербурга и пригородов. В историческом центре были выбраны два участка: парк Обуховской больницы (Адмиралтейский район) и Летний сад (Центральный район). В пригородах пробы отбирали в парках, расположенных к югу и юго-западу от Санкт-Петербурга: Павловском и Екатерининском (Пушкинский район); Петергофском и Ораниенбаумском (Петродворцовый район). Обследование осуществлялось маршрутным методом вдоль аллей и дорожек. При отборе проб отмечали особенности произрастания растений и тип посадки (шпалера, одиночные деревья или кустарники и др.).
Материалом служили живые листья с поверхностным налетом, характерным для грибов филлопланы. Такой налет обычно имеет черный цвет. В качестве объектов исследования выбраны древесные и кустарниковые растения, произрастающие в центре города и пригородах (липа, дуб, карагана и сирень). Всего были отобраны и изучены 64 пробы листьев, каждая из которых была взята не менее чем в трехкратной повторности.
Первичный анализ образцов и световая микроскопия
Первичный анализ образцов включал фотофиксацию, бинокулярное исследование (в диапазонах увеличений от ><10 до ><200), составление описаний. Поверхность листовой пластины исследовали с по-
мощью бинокулярного стереомикроскопа Leica с фотонасадкой. Обращали внимание на структуру поверхности листа, наличие особенностей покровов, которые могли бы влиять на распределение грибов филлопланы, а также предварительно оценивали интенсивность поверхностного налета и наличие в нем частиц пыли. Обследовали как верхнюю, так и нижнюю поверхность листьев. Увеличения, получаемые при использовании обычного бинокуляра, позволяют определять характер колонизации грибами листовой пластинки, а также фиксировать наличие загрязнений на поверхности листа. Для детального исследования вырезали кусочки листа размером 0,5—1,0 на 0,5-1,0 см, которые в дальнейшем исследовали с использованием сканирующего электронного микроскопа, а также методом конфокальной микроскопии.
Выделение в культуру грибов с поверхности листьев проводилось несколькими способами.
1. Часть проб составили отпечатки с поверхности листьев на питательную среду Чапека-Докса, полученные с использованием стерильных бакпечаток однократного применения. Появившиеся колонии микромицетов пересевали на среду Чапека-Докса в чашки Петри диаметром 90 мм для дальнейшего определения.
2. Метод смыва с поверхности листа, с последующим посевом суспензии на среду Чапека-Докса.
3. Посев мазком с поверхности листа на питательную среду (стерильным ватным тампоном).
Сочетание различных методов изоляции микромицетов позволяет получить наиболее полную и объективную картину видового разнообразия грибов фил-лопланы, а также их встречаемости в пробах.
Для первичной изоляции, поддержания в культуре и идентификации микромицетов использовали среду Чапека-Докса. Получаемые культуры инкубировали в термостате при температуре +25 °С до получения спороношения, после чего проводилось изучение колоний с использованием световой микроскопии. Видовую принадлежность большинства полученных изолятов определяли при наличии выраженного спо-роношения с использованием отечественных и зарубежных определителей. Микроскопию препаратов мицелия и спор осуществляли с помощью лабораторного микроскопа Leica DM 500.
Верификацию видов в соответствии с современной номенклатурой проводили с использованием электронной базы данных Index fungorum (http://www. indexfungorum.org/NAMES/NAMES.asp).
Конфокальная микроскопия
Съемку проводили на лазерном конфокальном микроскопе Leica TCS SPE в Ресурсном центре микроскопии и микроанализа СПбГУ. В качестве источника
света на данном микроскопе служат лазеры, обладаю -щие высокой интенсивностью и монохроматичностью излучения. В систему входят четыре твердотельных лазера с длиной волны 405, 488, 532 и 635 нм. Благодаря возможностям данного метода мы планировали оценить распределение грибов на поверхности листо -вой пластинки (без приготовления специальных препаратов), обратив особое внимание на послойное расположение структур микромицетов в филлофильном сообществе.
Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ)
В целях изучения особенностей развития и взаимодействия грибов на поверхности листовой пластины (дуба, липы, караганы, сирени) использовали метод сканирующей электронной микроскопии. Образцы листьев деревьев и кустарников (размером 1*1 см) с поверхностным налетом, предварительно отобранные при бинокулярном исследовании, подготавливали для микроскопии по следующей методике:
- фиксация образцов 4% глутаральдегидом в 0,1 М фосфатном буферном растворе в течение 2 часов;
- отмывание после фиксации в 0,1 М буферном растворе в течение 1,5 часа;
- обезвоживание с помощью проводки по этаноло-вой серии;
- высушивание до критической точки;
- монтаж образцов на столиках для сканирующего электронного микроскопа при помощи углеродного скотча;
- напыление золотом поверхности образцов (слой напыления проводящего покрытия 20 нм).
Образцы просматривали в сканирующем электронном микроскопе Tescan МЖА3 LMU с приставкой для энергодисперсионного микроанализа в ресурсном центре «Развитие молекулярных и клеточных технологий» СПбГУ Использование данной приставки позволяет осуществлять точечный элементный анализ поверхностных загрязнений (пылевых частиц), оседающих на поверхности листа.
Статистическая обработка данных проводилась в программе Statistica 10. Для сравнения сообществ грибов филлопланы на разных породах и в разных районах города использовали метод главных компонент.
Результаты и их обсуждение
В результате проведенных исследований на поверхности листьев деревьев и кустарников в Санкт-Петер -бурге и пригородах выявлено 30 видов микромицетов из 19 родов, а также отмечены стерильные формы светлого и темного мицелия (табл. 1). Встреченные на поверхности листьев паразитические микромице-ты (например, мучнисто-росяные и ржавчинные грибы) не учитывались. Абсолютным доминантом на
>
л
Виды микромицетов, выявленные в филлоплане деревьев и кустарников в центре города и пригородных парках Санкт-Петербурга (2015—2016 гг.)
Вид микромицетов Встречаемость (%) Группа патогенности * Условно-патогенные грибы**
1. Acremonium sp. 12,5 IV (род) +(р°д)
2. Alternaria alternata (Fr.) Keissl. 87,5 IV (род) +
3. Arthrobotrys oligospora Fresen. 1,5 - -
4. Aureobasidium pullulans (de Bary & Löwenthal) G. Arnaud 100 IV +
5. Cladosporium cladosporioides (Fresen.) G.A. de Vries 60,9 - +
6. Cladosporium herbarum (Pers.) Link 37,5 - +
7. Cladosporium sphaerospermum Penz. 9,3 - +
8. Coniosporium sp. 25,0 - -
9. Epicoccum nigrum Link 7,8 - +
10. Fusarium chlamydosporum Wollenw. & Reinking 3,1 IV (род) +
11. Fusarium oxysporum Schltdl. 10,9 IV (род) +
12. Fusarium solani (Mart.) Sacc. 6,2 IV (род) +
13. Fusarium sp. 4,6 IV (род) -
14. Mortierella lignicola (G.W. Martin) W. Gams & R. Moreau 1,5 - +(род)
15. Mucor racemosus Fresen. 3,1 IV (род) +
16. Paecilomyces divaricatus (Thom) Samson, Houbraken & Frisvad 15,6 IV (род) +
17. Penicillium brevicompactum Dierckx 1,5 IV (род) -
18. Penicillium dipodomyis (Frisvad, Filt. & Wicklow) Banke, Frisvad & S. Rosend. 1,5 IV (род) +
19. Penicillium citrinum Thom 3,1 IV (род) +
20. Penicillium commune Thom 1,5 IV (род) -
21. Penicillium decumbens Thom 14,1 IV (род) -
22. Penicillium expansum Link 4,6 IV (род) -
23. Penicillium herquei Bainier & Sartory 6,2 IV (род) -
24. Purpureocillium lilacinum (Thom) Luangsa-ard, Houbraken, Hywel-Jones & Samson 1,5 IV (род) +
25. Phoma sp. 1,5 IV (род) +(род)
26. Rhizopus stolonifer (Ehrenb.) Vuill. 1,5 IV (род) +(род)
27. Scytalidium lignicola Pesante 3,1 - -
28. Sydowia polyspora (Bref. & Tavel) E. Müll. 65,6 - +
29. Trimmatostroma sp. 3,1 - -
30. Ulocladium chartarum (Preuss) E.G. Simmons 15,6 IV (род) +(род)
31. Неспороносящий светлоокрашенный гриб 67,2 - -
32. Неспороносящий темноокрашенный гриб 18,7 - -
Примечания.
* Группа патогенности приведена по СП 1.3.2322-081.
** Условная патогенность по [11, 27]. (+) - отмечен как условный патоген; (-) - патогенные свойства неизвестны.
1 Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08. Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителей паразитарных болезней.
листьях всех изученных растений в разных местообитаниях является Aureobasidium pullulans. Этот гриб был отмечен во всех изученных пробах. К числу часто встречающихся видов можно отнести Alternaria alter-nata, Cladosporium cladosporioides, Cladosporium herbarum, Sydowiapolyspora. Кроме того, высокой встре-чаемостью характеризовались изоляты стерильного светлоокрашенного мицелия. Перечисленные виды формируют ядро микобиоты филлопланы обследованных территорий. Оно мало меняется в зависимости от местообитания, породы дерева или кустарника. Доминирующим по видовому разнообразию оказался род Penicillium (6 видов), за которым следуют род Fusarium (4 вида) и род Cladosporium (3 вида). При этом встречаемость представителей рода Cladosporium оказалась несопоставимо выше, чем для других
родов. Больше трети выявленных видов составили темноокрашенные микромицеты.
Данные табл. 1 свидетельствуют о том, что среди микромицетов, выявленных в филлоплане деревьев и кустарников, большую часть составляют условные патогены человека по СП 1.3.2322-082. При этом все они отнесены к организмам IV группы патогенности (на уровне рода, за исключением Aureobasidium ри11и-1аш). Ряд видов, не вошедших в число условных патогенов по СП 1.3.2322-08, отнесены к этой группе другими авторами [11, 27].
Наибольшее разнообразие грибов филлопланы зафиксировано в Павловском парке, за которым следуют Летний сад и Екатерининский парк. Наименее богатой оказалась микобиота филлопланы парка Ораниенбаум.
Табл. 2
Факторная структура состава грибов филлопланы изученных локалитетов
Вид микромицетов Factor 1 Factor 2 Factor 3
Acremonium sp. -145 -901 213
Arthrobotrys oligospora 145 901 -213
Cladosporium sphaerospermum 516 390 023
Epicoccum nigrum 820 -384 417
Fusarium chlamydosporum -679 -457 -338
Fusarium oxysporum 882 309 234
Fusarium solani 820 -384 417
Fusarium sp. 220 -632 -322
Mortierella lignicola 243 -076 911
Mucor racemosus -216 -369 702
Paecilomyces divaricatus 324 -163 -114
Penicillium brevicompactum -343 -189 -405
Penicillium citrinum 357 -473 -624
Penicillium commune 794 -410 -384
Penicillium decumbens 516 390 023
Penicillium dipodomyis 794 -410 -384
Penicillium expansum -048 -737 -605
Penicillium herquei -743 -389 472
Phoma sp. 794 -410 -384
Purpureocillium lilacinum -343 -189 -405
Rhizopus stolonifer 145 901 -213
Scytalidium lignicola 743 389 -472
Trimmatostroma sp. 820 -384 417
Ulocladium chartarum -243 076 -911
Неспороносящий темноокрашенный гриб 664 179 -072
FD, % 31,9 22,9 22
Примечание. Здесь и в табл. 3 СБ - суммарная факторная дисперсия. Ноль и точка перед десятичными разрядами коэффициентов корреляции опущены. Жирным шрифтом выделены связи | г | > 0,7.
Рис. 1. Видовое разнообразие микромицетов филлопланы садов и парков Санкт-Петербурга (стерильные формы светлого и темного мицелия учтены как отдельные виды)
2.0
1,5 1,0 0,5
¿м
-а 0.0
со
U.
.0,5 -1.0 -1,5 •2,0
• Парк Обуховской больницы
Ораниенбаум
Летний сад # Екатерининский парк • (Пушкин)
• Верхний сад (Петергоф) • Павловский парк
-20 -1,5 -1,0 -0,5 0,0 0,5 1 р 1,5 2,0
Factor 1
Рис. 2. Распределение парков по наличию в филлоплане древесных растений микромицетов первой (Factor 1) и второй (Factor 2)групп
Сопоставление микобиоты филлопланы изученных парков проведено с использованием компонентного анализа. Из него были исключены виды грибов, встречающиеся на всех обследованных территориях. Анализ позволил выявить три группы микромицетов (табл. 2). В состав первой из них на уровне | r | > 0,7 во -шли Epicoccum nigrum, Fusarium oxysporum, F. solani, Penicillium commune, P. dipodomyis, P. herquei, Phoma sp., Scytalidium lignicola, Trimmatostroma sp. (табл. 2, Factor 1). Вторая группа включает на обозначенном уровне связи Acremonium sp., Arthrobotrys oligospora, Penicillium expansum, Rhizopus stolonifer (табл. 2, Factor 2), третья - Mortierella lignicola, Mucor racemosus и Ulocladium chartarum (табл. 2, Factor 3).
Распределение парков в пространстве первых двух факторов представлено на рис. 2. По наличию в составе сообществ филлопланы микромицетов первой группы наиболее сильно различаются, с одной стороны, Павловский парк, с другой - Верхний сад (Петергоф) и в несколько меньшей степени - парк Ораниенбаума и Летний сад. В составе сообществ филлоплан древесных растений Павловского парка присутствуют Epicoccum nigrum, Fusarium oxysporum, F. solani, Penicillium commune, P. dipodomyis, Phoma sp., Scytalidium lignicola, Trimmatostroma sp. Они не встречены на листьях растений Верхнего сада в Петергофе, парка Ораниенбаума и Летнего сада.
По второй группе микромицетов наиболее сильно различаются сообщества филлопланы парка Обухов-ской больницы, с одной стороны, Верхнего сада (Петергоф) и Павловского парка - с другой. Для парка Обуховской больницы характерны, в частности, Лг№гоЬ&гу$ oligospora и Rhizopus stolonifer, и, напротив, не свойственны Лcremonium 8р. и РетсШшт ехратит.
Обращает на себя внимание определенное сходство сообществ филлопланы в локалитетах, расположенных относительно недалеко друг от друга (Павловско -го и Екатерининского парков, а также парка Ораниенбаума и парка Петергофа). При этом можно отметить своеобразие сообществ филлопланы удаленного от них парка Обуховской больницы. Исключение составляет сообщество филлопланы Летнего сада, демонстрирующее близость с филлофильными сообще -ствами Петергофа и Ораниенбаума. Отличие между ними, в основном, по третьей группе микромицетов.
Сравнение сообществ грибов филлопланы на разных породах деревьев и кустарников показало, что наибольшее количество видов микромицетов зафиксировано на листьях липы (рис. 3), где часто отмечался плотный темный поверхностный налет, который в ряде случаев практически полностью покрывал листовую пластинку.
Сопоставление микобиоты филлопланы изученных деревьев и кустарников с использованием компонентного анализа позволило выявить три группы микромицетов. В состав первой из них на уровне | r | > 0,7 входят Acremonium sp., Epicoccum nigrum, Fusarium sp., Penicillium expansum, Trimmatostroma sp. (табл. 3, Factor 1), второй - Arthrobotrys oligospora, Cladosporium sphaerospermum, Penicillium brevicompactum, P. citrinum, Purpureocillium lilacinum, Rhizopus stolonifer (табл. 3, Fac-tor 2), третьей - Fusarium chlamydosporum (табл. 3, Factor 3). Результаты сопоставления сообществ грибов филло -планы деревьев и кустарников показаны на рис. 4.
Табл. 3
Факторная структура сообществ грибов филлопланы на древесных и кустарниковых растениях изученных локалитетов
Виды микромицетов Factor 1 Factor 2 Factor 3
Acremonium sp. 775 -172 -063
Arthrobotrys oligospora 635 755 -154
Cladosporium sphaerospermum -003 -897 -441
Epicoccum nigrum -962 -061 -252
Fusarium chlamydosporum -446 -342 -819
Fusarium solani -543 680 -463
Fusarium sp. 962 061 252
Mortierella lignicola 543 -680 463
Mucor racemosus -318 -133 -617
Paecilomyces divaricatus 631 -344 -694
Penicillium brevicompactum 635 755 -154
Penicillium citrinum 003 897 441
Penicillium commune 543 -680 463
Penicillium dipodomyis 543 -680 463
Penicillium expansum 775 -172 -063
Penicillium herquei 631 -344 -694
Phoma sp. -228 -286 -386
Purpureocillium lilacinum 635 755 -154
Rhizopus stolonifer 635 755 -154
Scytalidium lignicola 258 508 -630
Trimmatostroma sp. -702 048 252
Неспороносящий темноокрашенный гриб 631 -344 -694
FD, % 36,1 30,2 20,8
Рис. 3. Видовое разнообразие микромицетов в филлоплане различных деревьев и кустарников (стерильные формы светлого и темного мицелия учтены как отдельные виды)
1,5
1,0
0,5
0,0
-0,5
-1,0
-1,5 -1,5
Липа
•
Сосна
•
Сирень
Д^б
-1,0
-0,5
0,0 Factor 1
0,5
1,0
1,5
Рис. 4. Распределение древесных растений по наличию в их филлопланах микромицетов первой (Factor 1) и второй (Factor 2) групп
По наличию в филлоплане микромицетов первой группы резко различаются между собой сосна и липа с дубом. Для филлопланы широколиственных деревь -ев типичны Acremonium sp., Fusarium sp., Penicillium expansum, которых нет в филлоплане сосны. В свою очередь, на поверхности хвои обитают Epicoccum nigrum и Trimmatostroma sp., отсутствующие на листьях дуба и липы. Отметим сходство по первой группе микромицетов филлопланы сирени и караганы, а также липы и дуба. Два последних вида различаются по второй группе микромицетов (рис. 4).
Результаты компонентного анализа в целом свидетельствуют о том, что состав сообществ микроми-цетов филлопланы зависит как от территориального расположения парков, так и от состава их зеленых насаждений. Главная особенность микобиоты филлопланы состоит в выделении четко обособленного ядра доминирующих видов. В его составе есть абсолютный доминант - Aureobasidium ри1Шат, который был встречен во всех изученных пробах, а также три вида, встречаемость которых превысила 60% (АЫег-папа alternata, Cladosporium cladosporioides, Sydowia
роУрога). При этом большую часть всего видового списка составили виды, для которых встречаемость не превышала 10%. Все виды-доминанты принадлежали к темноокрашенным анаморфным грибам, обладающим высокой устойчивостью к неблагоприятным внешним воздействиям.
В ходе наблюдений за развитием сообществ фил-лопланы нами выявлены определенные тенденции, характеризующие локализацию колоний грибов на поверхности листа разных растений (рис. 5). Так, на верхней поверхности листьев дуба (Екатерининский парк) колонии рассеяны по всей поверхности листовой пластинки, однако отмечается их концентрация вдоль основных жилок (рис. 5а). Местами такие скопления видны невооруженным глазом, а в их соста-
ве, кроме структур грибов, хорошо заметны многочисленные включения пылевых (минеральных) частиц.
Интересно отметить, что на листьях дуба в Летнем саду на поверхности темного налета был хорошо заметен светлый тонкий мицелий, обильно разрастающийся также вдоль жилок листа (рис. 56). Сходный тип распределения колоний грибов наблюдается и на листьях липы. Однако на липах развивается более мощный темный мицелий (рис. 5 в), тогда как на листьях дуба грибные скопления преимущественно состоят из многочисленных микроколоний. Уместно отметить, что поверхность листьев липы и дуба существенно отличаются (рис. 6). У дуба она гладкая (рис. 6а), тогда как лист липы обладает складчатым микрорельефом поверхности (рис. 66).
>
Рис. 5. Локализация грибов на листьях различных видов деревьев и кустарников (световая микроскопия):
а - Екатерининский парк, дуб, приуроченность микроколоний грибов к жилкам листа; б - Летний сад, дуб, светлый стерильный мицелий развивается по поверхности черного налета грибов; в - Летний сад, липа, разрастания темного мицелия вдоль жилок листа; г - парк Обуховской больницы, липа, скопление пылевых частиц в зоне грибного налета; д - Летний сад, карагана, видна граница роста грибов филлопланы; е - Павловский парк, сосна, равномерное распределение колоний грибов на поверхности хвои
а
д
Рис. 6. Микрорельеф поверхности верхней эпидермы листа: а - дуба; б - липы. М - микромицеты. Масштабные линейки: 10 мкм
Применение метода конфокальной микроскопии подтверждает выявленные тенденции распределения микромицетов в филлоплане различных видов древесных и кустарниковых растений (рис. 7). Данный метод оказался весьма эффективным для анализа поверхности листа, колонизированной грибами, так как при нескольких режимах просмотра образцов листьев (при использовании лазера различной длины волны) темноокрашенные грибы сохраняли свой цвет (почти черный), тогда как ткани растения существенно изменяли свои цветовые характеристики. Ве -роятно, это обусловлено наличием и особенностями меланиновых пигментов, содержащихся в клеточной стенке темноокрашенных грибов. На полученных снимках хорошо видно, что на листьях караганы распределение грибов практически однородное (рис. 7а), причем заметны не только колонии, но и хорошо развитый темный мицелий. В то же время на листьях липы хорошо видна приуроченность микроколоний грибов к жилкам листа (рис. 7б). Темноокрашенные грибы были выявлены и на нижней стороне листьев липы (рис. 7в). При этом здесь преобладал темно-окрашенный мицелий, состоящий из разветвленных гиф, которые формировали плотные сплетения. Интересно отметить, что на листьях дуба, где отмечались клейстотеции мучнисто-росяного гриба Erysip-he alphitoides (Griffon & Maubl.) U. Braun & S. Takam., грибы филлопланы развивались достаточно слабо (рис. 7г). Вероятно, это можно объяснить конкурентными взаимоотношениями мучнисто-росяных грибов и эпифитных микромицетов. Подтверждением тому является практически полное отсутствие грибов филлопланы на листьях сирени с развитым налетом мучнисто-росяного гриба E. syringae Schwein. и, наоборот, отсутствие возбудителей мучнистой росы на листьях с поверхностным налетом филлофильных грибов.
Применение сканирующей электронной микроскопии позволило получить представление о существовании определенной связи в распределении скоплений пыли и колоний филлофильных грибов (рис. 8). Например, на листьях караганы в Летнем саду отмечаются многочисленные минеральные частицы, ассоциированные со структурами микромицетов (рис. 8а). При этом на срезе листа хорошо видно, что загрязнения образуют своеобразный слой, который покрывает грибную биопленку. На листьях караганы в Екатерининском парке развитие грибов филлопланы приводит к образованию биопленок слоистой структуры (рис. 86), причем в них хорошо различимы как вегетативные, так и генеративные структуры микромицетов. Пылевые частицы в филлоплане караганы в Екатерининском парке отмечены реже, чем в Летнем саду. На липах в Летнем саду микроколонии грибов филлопланы, которые расположены по жилкам листа, повсеместно ассоциированы с пылевыми частицами (рис. 8в). На срезе листовой пластинки (рис. 8г) хорошо видно, что пылевые частицы могут оказываться под слоем микромицетов. В то же время на поверхности листьев встречаются одиночные короткие гифы (цепочки клеток), которые предположительно принадлежат виду Лureobasidium ри11и1ат и также связаны с поверхностными загрязнениями (рис. 8д). Наиболее яркую картину биоминеральных взаимодействий на поверхности листьев липы удалось наблюдать в образцах, отобранных в парке Обуховской больницы (рис. 8е). Многочисленные микроколонии тесно взаимодействуют с минеральными частицами различного размера. При этом отмечено образование игольчатых кристаллов в зоне контакта клеток грибов и пылевых частиц. Вероятно, это связано с процессами кристаллизации минералов под воздействием метаболитов, выделяемых грибами. Подобную картину мы наблюдали на поверхности каменных памятников, покрытых биопленками с доминированием грибов.
>
Рис. 7. Поверхность листьев деревьев и кустарников из Летнего сада, колонизированная микромицетами (конфокальная микроскопия):
а - карагана, равномерное распределение грибов на верхней поверхности листа, красные точки соответствуют пылевым включениям; б - липа, приуроченность микроколоний грибов к жилкам на верхней стороне листа; в - липа, сеть темноокрашенных гиф на нижней поверхности листа; г - дуб, клейстотеции (светлого цвета) и мицелий мучнисто-росяного гриба Е. а/рЬЮ/'Лез при единичных (точечных) колониях темноокрашенных грибов
Нами отдельно изучена форма пылевых частиц, которые встречаются в центральной части Санкт-Петербурга. Отмечены частицы (зерна) различных очертаний: округлые (рис. 9), треугольные, прямоугольные, волокнистые, зерна неправильной формы. Треугольные зерна составляют 38%, округлые - 30, прямоугольной формы - 28, волокнистые - 2 и неправильной формы - 2%. В целом, следует отметить пре -обладание зерен остроугольной формы над окатанными частицами, что свидетельствует о значительном вкладе локальных источников пыли по сравнению с аэрозольным переносом издалека.
По минеральному составу в пыли центра Санкт-Пе -тербурга преобладает кварц (до 60%), доля полевых шпатов достигает 35%. Биотит и мусковит составляют около 5%. В единичных случаях были встречены следующие минералы: амфибол, пироксен, кальцит, доломит, корунд, рутил, киноварь, апатит, флюорит, тальк, хлорит, алунит, каолинит и обломки пород.
Установленное распределение минералов, вероятно, определяется использованием гранитов в облицовке зданий центра Санкт-Петербурга. Вместе с тем, в филлоплане часто преобладают техногенные частицы. Именно такую картину мы наблюдали в филлоплане древесных растений в парке Обуховской больницы, где проводился масштабный ремонт, что могло приводить к повышенному содержанию строительной пыли в воздухе и ее оседании на листьях деревьев.
В целом полученные данные указывают на то, что на поверхности листьев древесных и кустарниковых растений в центре и пригородах Санкт-Петербурга постоянно обитают микромицеты, формирующие сообщества определенной структуры. Основу таких сообществ составляют темноокрашенные анаморф-ные микроскопические грибы всего нескольких видов. Состав микобиоты филлопланы зависит как от территориального расположения насаждений, так и от особенностей листового аппарата древесных и ку-
б
а
БЕМ№/:9.0кУ \ГО:6.2Бтт МИЗАЗТЕБСА*!
1Ле*¥ Яе№ 96.7 ргп РеП1п-Веат 5Е 20 цш ЭЕМ МАО: 6.23 к* №№(тМГу]: 11/28/16
Рис. 8. Особенности развития грибов филлопланы и их связь с пылевыми загрязнениями:
а - Летний сад, карагана, срез листа, на поверхности которого виден слой грибов и пылевых загрязнений; б - Екатерининский парк, карагана, многослойная биопленка с включениями минеральных частиц; в - Летний сад, липа, грибные микроколонии и пылевые частицы вокруг жилок на верхней поверхности листа; г - Летний сад, липа, срез листа, пылевые частицы оказываются под слоем микроколоний; д - Летний сад, липа, растущая грибная гифа и поверхностные загрязнения листа; е - парк Обуховской больницы, липа, многочисленные микроколонии грибов нарастают на пылевые частицы, видны мелкие игольчатые кристаллы
Рис. 9. Округлые пылевые частицы, встречающиеся в воздухе Санкт-Петербурга
старниковых растений. Филлофильные грибы образуют сложную систему колоний и гиф, которые покрывают листовую пластинку. При их обильном развитии появляется характерный поверхностный налет различной плотности (обычно черного цвета). В этом случае они, вероятно, могут оказывать влияние на интенсивность процессов фотосинтеза и транспирации растений. В то же время присутствие грибов филло-планы способно защищать листья от заражения пато -генными микромицетами, например, от возбудителей
мучнистой росы. Формирующиеся на листьях биопленки, особенно в зонах повышенного атмосферного загрязнения, ассоциируются с пылевыми частицами, что приводит к формированию органо-минеральных наслоений, в которых развиваются процессы кристаллизации и минералообразования. Таким образом, на поверхности листьев в городской среде могут возникать своеобразные биокосные системы со своими особенностями, которые во многом определяются экологической ситуацией на конкретных территориях.
>
ЛИТЕРАТУРА
Список русскоязычной литературы
1. Благовещинская ЕЮ. Методы выявления грибов филлопланы. В кн.: Материалы VII всероссийской микологической школы-конференции с международным участием «Биотические связи грибов: мосты между царствами». Москва; 2015. с. 10-8.
2. Воронин ЛВ. Грибы филлопланы Nuphar lutea (L.) Smith в малых реках бассейна Рыбинского водохранилища. Ярославский педагогический вестник. 2010;(3):91-5.
3. Марфенина ОЕ, Иванова АЕ, Глушакова АМ, Соина ВС, Шишкова ВА, Бареева ЛФ. Грибные эпифиты древесных растений после «Ледяного дождя». Микология и фитопатология. 2012;46(6):377-84.
4. Марфенина ОЕ, Макарова НВ, Иванова АЕ. Оппортунистические грибы в почвах и приземных слоях воздуха мегаполиса (на примере района Тушино г. Москвы). Микология и фитопатология. 2011;45(5):397-407.
6.
7.
5. Марфенина ОЕ. Антропогенная экология почвенных грибов. М.: Медицина для всех; 2005. Овчаренко НС. Консортивные связи ароматических и лекарственных растений с грибами. Труды Никитского ботанического сада. 2011;133:143-51.
Овчинникова ТА, Кремс ЕВ, Корчиков ЕС. Сезонная динамика микобиоты листовой поверхности древесных растений городской среды. Вестник СамГУ. 2013;107(6):188-95.
8. Пидопличко НМ. Грибы-паразиты культурных растений. Определитель. Т. 2. Несовершенные грибы. Киев: Наукова думка; 1977.
9. Саттон Д, Фотергилл А, Ринальди М. Определитель патогенных и условно патогенных грибов. М.: Мир; 2001.
10. Сверлова ЛИ. Научные основы современного подхода к оценке уровня загрязнения атмосферного воздуха городов. Успехи современного естествознания. 2009;(7):20-32.
Общий список литературы/Reference List
1. Blagoveshchinskaya YeYu. [Methods for detection of phylloplane fungi]. In: Materialy VII Vse-rossijskoy Mikologicheskoy Shkoly-konferentsii s Mezhdunarodnym Uchastiyem «Bioticheskiye Svyazi Gribov: Mosty Mezhdu Tsarstvami». Moscow; 2015. p. 10-8. (In Russ.)
2. Voronin LV. [Phyyloplane fungi Nuphar lutea (L.) Smith in minor rivers of Rybinsk water storage basin]. Yaroslavskiy Pedagogicheskiy Vestnik. 2010;(3):91-5. (In Russ.)
3. Marfenina OYe, Ivanova AYe, Glushakova AM, Soina VS, Shishkova VA, Bareyeva LF. [Fungal epiphytes of woody plants after ice rain]. Mikologiya i Fitopatologiya. 2012;46(6):377-84. (In Russ.)
4. Marfenina OYe, Makarova NV, Ivanova AYe. [Opportunistic fungi in soils and ground air of a meg-alopolice exemplified with Tushino in Moscow]. Mikologiya i Fitopatologiya. 2011;45(5):397-407. (In Russ.)
5. Marfenina OYe. Antropogennaya Ekologiya Poch-vennykh Gribov. Moscow: Meditsyna dlya Vsekh; 2005. (In Russ.)
6. Ovcharenko NS. [Consortium associations of aromatic and medicinal plants with fungi]. Trudy Ni-kitskogo Botanicheskogo Sada. 2011;133:143-51. (In Russ.)
7. Ovchinnikova TA, Krems YeV, Korchikov YeS. [Seasonal dynamics of mycobiota of the foliage surfaces of woody plants in the urban environment]. Vestnik Sam arskogo Gosudartvennogo Uni-versiteta. 2013;107(6):188-95. (In Russ.)
8. Pidoplichko NM. Griby-Parazity Kulturnykh Ras-teniy. Opredelitel. T. 2. Nesovershennye Griby. Kiev: Naukova Dumka; 1977. (In Russ.)
9. Satton D, Fotergill A, Rinaldi M. Opredelitel Pato-gennykh i Uslovno Patogennykh Gribov. Moscow: Mir; 2001. (In Russ.)
10. Sverlova LI. [Scientific basis of modern approaches to estimating urban air pollution]. Uspekhi Sovremen-nogo Yestestvoznaniya. 2009;(7):20-32. (In Russ.)
11. Ajay KS, Aparajita R, Das P. Fungal colonization of phylloplane of Psidiumguineense Sw. growing in Suryamaninagar, Tripura, Northeast India. Int J Basic Applied Chem Sci. 2013;3(1):62-7.
12. Andrews JH, Buck JW. Adhesion of yeasts to leaf surfaces. In: Phyllosphere Microbiology. APS Press: St. Paul; 2002. p. 53-68.
13. Andrews JH, Spear RN, Nordheim EV. Population biology of Aureobasidium pullulans on apple leaf surfaces. Can J Microbiol. 2002;48:500-13.
14. Bakkar GR, Frampton CM, Jaspers MV, Stewart A, Walter M. Assessment of Phylloplane microorganism populations in Canterbury apple orchards NZ Plant Protect. 2002;55:129-34.
15. Blakeman JP. Pathogens in the foliar environment. Plant Pathol. 1993;42(4):479-93.
16. Blakeman JP, Fokkema NJ. Potential for biocon-trol of plant diseases on the phylloplane. Annu Rev Phytopathol. 1982;20:167-92.
17. Borogohain A, Das R, Chutia M. Fungal diversity in phylloplane of castor plant (Ricinus communis L.): the primary food plant of Eri Silkworm. Scholarly J Agricult Sci. 2014;4(2):82-6.
18. Breeze EM, Dix NJ. Seasonal analysis of the fungal community on Acer platanoides leaves. Trans Br Mycol Soc 1981;77:321-8.
19. Collado JG, Platas I, Gonzaloz-Pelaez F. New Phy-tol. 1999;144:525-32.
20. Ellis MB. Dematiaceous Hyphomycetes. Kew, Surrey, UK: Commonwealth Mycological Institite; 1971.
21. Ellis MB. More Dematiaceous Hyphomycetes. Kew, Surrey, UK: Commonwealth Mycological Institite; 1976.
22. El-Said AHM. Phyllosphere and phylloplane fungi of banana cultivated in Upper Egypt and their cel-lulolytic ability. Mycobiology. 2001;29(4):210-7.
23. Fernandez-Camacho R, Rodrigues S. Ultrafine particle and fine trace metal (As, Cd, Cu, Pb and Zn) pollution episodes induced by industrial emissions in Huelva, SW Spain. Atmospheric Environment; 2012. p. 1-11.
24. De Hoog GS, Guarro J. Atlas of Clinical Fungi. Baarn: CBS; 1995.
25. Inacio J, Pereira P, de Carvalho M, Fonseca A, Am-aral-Collaco MT, Spenser-Martins I. Estimation and diversity of phylloplane mycobiota on selected plants in a Mediterranean-type ecosystem in Portugal. Microb Ecol. 2002;44:344-53.
26. Kuthubutheen AJ. Leaf surface fungi associated with Avicennia alba and Rhizophora mucornata in Malaysia. In: Proc. Asian Symp. on Mangrove Environment, Research and Management; 1984 25-29 August. Kuala Lumpur; 1984. p. 133-71.
27. Langvad F. A simple and rapid method for qualitative and quantitative study of the fungal flora of leaves. Can J Botany. 1980;26:666-70.
28. Lee OHK, Hyde KD. Phylloplane fungi in Hong Kong mangroves: evaluation of study methods. Mycologia. 2002;94(4):596-606.
29. Levetin E. Bioaerosols in agricultural and outdoor settings. In.: Encyclopedia of Environmental Microbiology. N-Y.: John Wiley and Sons; 2002.
30. Levetin E, Dorsey K. Contribution of leaf surface fungi to the air spora. Aerobiologia. 2006;22;3-12.
31. Levine S, Schwarz S. In-cloud and below-cloud scavenging of nitric acid vapor. Atmospheric Environment. 1982;16(7):1725-34.
32. Lindow SE. Brandl MT. Microbiology of the phyllosphere. Appl Environ Microbiol. 2003;69:1875-83.
33. Maji MD, Qadri SMH, Pal SC. Evaluation of mulberry phylloplane microorganisms for biological control of bacterial leaf spot of mulberry caused by Xanthomonas campestri spv. mori. Indian J Agric Res. 2003;37(4):307-9.
34. Osono T, Bhatta BK, Takeda H. Phyllosphere fungi on living and decomposing leaves of giant dogwood. Mycoscience. 2004;45:35-41.
35. Pagoda IO, Pautov AA, Zelenskaya MS, Vlasov DYu. Cork warts on leaves of Gnetum L. (Gne-taceae) and its phylloplane fungi. Int J Botany. 2015;11(1):10-20.
36. Prabakaran M, Merinal S, Panneerselvam A. Investigation of phylloplanemycoflora from some medicinal plants. Eur J Exper Biol. 2011;1(2): 219-25.
37. Shamim S, Naher N, Haq R. Fungi as biocontrol agents in nature: interaction of fungi on phylloplane of Datura metel L. and Vignacatjang L. Bangladesh J Agric. 2012;37(3):537-41.
38. Thakur S, Harsh NSK. In vitro potential of volatile metabolites of phylloplane fungi of Piper longum as biocontrol agent against plant pathogen. Int J Sci Nat. 2014;5(1):33-6.
39. Thakur S, Harsh NSK. Phylloplane fungi as biocontrol agent against Alternaria leaf spot disease of (Akarkara) Spilanthesoleracea. Bioscience Discovery. 2014;5(2):139-144.
40. Usha Ch, Rekha P. Diversity of fungi in the phylloplane of Jatropha curcas L. during summer and winter season. Int Indexed Referred Res J. 2012;4:28-31.
>
