CC BY
23
MORPHOLOGICAL RESEARCHES OF CAPSULES AND LARVAE OF T. SPIRALIS AT A BADGER. FEATURES OF DIAGNOSTICS AND PREVENTIVE MAINTENANCE
Zhdanova O.B., Okulova I.I., Holkina P.J., Perestoronina A.E., Ruhljadeva E.A.,
Uspensky A.V., Domsky I.A. Summary
Trichinellosis is the most dangerous zoonosis of badger. Contamination of Meles meles and Meles leucurus an T. spiralis of Kirov area is investigated. It has been studied badger meat naturally infected with T. spiralis of the Kirov region. Trichinella larvae were found in all investigated slides of diafragm. Meles as a source of infection play the leading role in the synantropic infection. Methods of trichinelloscopy can be used for postmortal-diagnostics of trichinellosis is aimed at detection of sources of infection and prevention of helminth zoonosis in human.
DOI 10.31588/2413-4201-1883-245-1-50-55 УДК 615.454.547: 615.9
ГРАМИН И ЕГО ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА
Ивановский А.А. - д.вет.н., профессор, Тимкина Е.Ю. - к.с.-х.н., доцент
ФГБОУ ВО «Государственный агротехнологический университет»
Ключевые слова: грамин, острая токсичность, субхроническая токсичность, кумуляция, белые мыши
Keywords: gramin, acute toxicity, subchronic toxicity, cumulation, white mice
Одной из проблем, существующих в животноводстве, является борьба с имму-нодефицитами, в особенности среди молодняка сельскохозяйственных животных. В связи с этим разработка препаратов -стимуляторов иммунорезистентности приобретает актуальное значение. Особый интерес вызывают препараты, получаемые из естественных источников. К таким относятся биоинфузин, гистоген, пробиотиче-ские комплексы и фитокомплексы широкого спектра действия на организм животных [1, 3, 5, 7, 8, 10]. Одним из методов борьбы, направленных на создание специфического иммунитета, являются массовые вакцинации. Однако, наряду с формированием иммунного ответа, у животных часто отмечают появление стрессовых реакций. Стресс запускает в организме ряд негативных процессов, влияющих на продуктивность и формирование обшей резистентности [2].
Препарат грамин был создан в лаборатории ветбиотехнологии ФГБНУ ФАНЦ Северо-Востока, города Киров, для коррекции неспецифической резистентно-
сти организма животных, в том числе, и при введении вакцин [патент РФ № 2100028 от 27.12.1997]. Основой для создания препарата грамин послужил мик-ромицет Drechslera (D) gramínea. Гриб относится к фитопатогенам ячменя, вызывая у последнего полосатую пятнистость листьев. В процессе разработки грамина был установлен биостимулирующий эффект метаболитов D. graminea на организм теплокровных животных [3]. Проявление био-стимулирующих свойств у D.graminea отмечались после многократных пересевов выделенного штамма гриба на питательных средах. Одним из главных требований, при создании препаратов различной направленности, является изучение параметров их токсичности для лабораторных животных [6, 11].
Цель настоящих исследований заключалась в изучении острой и субхронической токсичности препарата грамин на белых мышах. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: наработать препарат грамин в лабораторных условиях; определить пара-
метры токсического действия грамина на белых мышах в остром и субхроническом опытах при парентеральном введении; определить летальные дозы (ЛД50 и ЛД100), рассчитать коэффициент кумуляции грамина.
Материал и методы исследований. Работа выполнялась на базе лаборатории ветбиотехнологии ФГБНУ ФАНЦ Северо-Востока города Киров. Гриб D.graminea выращивали на жидкой среде Чапека в термостате при t = 26-26 °С в течение 30 суток, затем отделяли мицелий от культуральной жидкости для получения целевого продукта. Методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) в системе растворителей хлороформ - этанол (соотношение 19:5) на пластинах «Силуфол» ЦУ-254 осуществляли идентификацию полученного продукта [«Технические условия на промышленное производство грамина» - ТУ 9337-001-22940614-00]. Опыты по определению острой токсичности препарата грамин проводили на беспородных белых мышах (самцы) массой 19-21 грамм. Препарат вводили животным интрапери-
тонеально, однократно в дозах от 4000 до 24000 мг/кг. На каждую дозу использовали по 6 мышей. За состоянием животных наблюдали в течение 14 дней, учитывая при этом число павших животных, клиническую и патологоанатомическую картину отравления. Определяли абсолютно смертельную дозу (ЛД100) и дозу, которая вызывает гибель 50 % животных (ЛД50). ЛД50 вычисляли методом Кербера. Токсиген-ность препарата оценивали в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества, классификация, требования безопасности».
Исследование субхронической токсичности грамина проводили в течение 30 дней, препарат вводили 10 мышам ежедневно внутримышечно. В первые 4 дня эксперимента инъецировали грамин в дозе 0,1 ЛД50 (133 мг/кг), а затем через каждые 4 дня дозу увеличивали в 1,5 раза и в конечном итоге она составляла 1520 мг/кг. Для определения кумулятивных свойств препарата на белых мышах использовали тест «субхронической токсичности» [12]. Коэффициент кумуляции вычисляли по формуле:
К =
ЛД По
ЛД
5о
где К - коэффициент кумуляции; ЛД50 и ЛД50п - средне летальные дозы при однократном и п-суммарном многократном введениях [4].
Результат исследований. Грамин представлял собой прозрачную жидкость светло-коричневого цвета. После дегидратации оставался коричневый осадок 40 мг/мл, хорошо растворимый в 96 градусном этаноле, но слабо растворимый в воде. Идентификация целевого продукта методом ТСХ показала, что показатель ЯГ (отношение расстояния, пройденного веществом к расстоянию, пройденному растворителем) соответствует 1 . Характер флуоресценции, при длине волны 254 пт, желто-голубое пятно. Данный результат подтверждал идентичность полученного продукта препарату грамин.
Опыты по определению летальности мышей после введения грамина пока-
зали пороговые дозы его острой токсичности (Таблица 1).
Доза грамина 400 мг/кг вызывала незначительные отклонения в поведении мышей (снижение активности и аппетита), проходящие в течение суток. Летальных случаев не отмечено. Доза 800 мг/кг угнетающе действовала на аппетит и активность животных в течение 2 суток, на 4 сутки пало 1 животное в группе (16,6 %). Доза 1200 мг/кг подавляла активность мышей, аппетит отсутствовал в течение суток. Потребление воды увеличилось, затем клиническое состояние у выживших мышей, постепенно, в течение 5 суток, приходило в норму. Гибель 50 % животных наблюдали на третьи сутки. Доза 1600 мг/кг характеризовалась выраженными признаками острого отравления. Гибель 66,6 % отмечали на вторые сутки, у выживших животных наблюдали сильную
депрессию, полное отсутствие аппетита, одышку и озноб. Животные начинали потреблять в больших объемах воду и ограниченно корм на 3 сутки. Полная нормализация поведения выживших мышей отмечалась на 5 сутки.
Гибель мышей от дозы 2000 мг/кг составляла 83,3 %, а от дозы 2400 мг/кг -100 %. Клиническая картина оказалась одинаковой в данных группах. Летальный исход регистрировали в первые двое суток
наблюдений, при этом у половины животных через 2 часа после инъекции отмечалось угнетенное состояние, отказ от корма и воды, отсутствие движений, а через 1 -2 суток терминальная фаза и смерть. У выжившей мыши на протяжении 7 дней наблюдали сниженное потребления корма и увеличенное потребления воды, на этом фоне депрессивное состояние, сильное истощение, аллопеция.
Группа № Доза (мг/кг) Летальность животных
голов %
1 400 0 0
2 800 1 16,6
3 1200 3 50,0
4 1600 4 66,6
5 2000 5 83,3
6 2400 6 100
Таблица 1 - Влияние грамина на белых мышей в остром опыте (n=6 в группе)
Таблица 2 - Масса внутренних органов белых мышей при однократном введении грамина (п = 6 в группе)
Доза грамина, мг/кг Масса внутренних органов (г) M±m
печень селезенка почки
400 1,14+0,02 0,18+0,005 0,14+0,004
800 1,13+0,04 0,19+0,007 0,14+0,005
1200 1,12+0,05 0,19+0,005 0,14+0,004
1600 1,20+0,05* 0,21+0,003 0,15+0,002
2000 1,25+0,03* 0,25+0,01* 0,15+0,006
2400 1,24+0,05* 0,25+0,002* 0,19+0,008*
Контроль(интактные) 1,12+0,02 0,19+0,004 0,14+0,001
Примечание: * - при p < 0,05 в сравнении с контролем
В результате установлено, что среднесмертельная доза (ЛД50) грамина для белых мышей составляет 1334 мг/кг, ЛД100 - 2400 мг/кг. Таким образом, в соответствии с классификацией параметров токсичности по К.К. Сидорову [9], грамин относится к ряду малотоксичных веществ. Данные о влиянии грамина на массу внутренних органов приведены в таблице 2.
Доза грамина 400 мг/кг приводила к увеличению (p>0,05) по сравнению с контролем печени, с одиночными мелкоточечными кровоизлияниями, остальные внутренние органы оставались без изменений.
Доза 800 мг/кг негативно действо-
вала на внутренние органы. При вскрытии отмечали увеличенные в размере и по массе печень, селезенку, почки (р>0,05) с наличием мелкоточечных кровоизлияний.
Доза 1200 мг/кг характеризовалась точечными кровоизлияниями на капсулу печени и почек. Масса исследуемых внутренних органов достоверно не увеличивалась по сравнению с контролем (р>0,05).
Дозы 1600, 2000 и 2400 мг/кг приводили к увеличению массы печени на 711 % в сравнении с контролем (р<0,05). На органе обнаруживали точечные кровоизлияниями под капсулой. Селезенка достоверно (р<0,05) увеличивалась на 31 % при введении грамина в дозах 2000- 2400 мг/кг,
а масса почек достоверно (р<0,05) превышала результата в контроле на 35 % после введения грамина в дозе 2400 мг/кг. При исследовании субхронической токсичности грамина, начиная с 5 дня опыта после введения грамина в дозе 450 мг/кг, клиническое состояние мышей ухудшалось, но случаев гибели зафиксировано не было. При этом отмечали взъерошенность шерсти, угнетенное состояние, повышенное потребление воды, резкое снижение двига-
Исследования субхронической токсичности грамина показали, что дозы препарата от 133 до 450 мг/кг не вызывали видимых изменений в клиническом статусе лабораторных мышей, а выраженный токсигенный эффект начинал проявляться с дозы 675 мг/кг и продолжал нарастать после дальнейшего повышения доз грамина (1013-1520мг/кг), вызывая при этом летальность, достигающую уровня 50 %.
Заключение. Установлено, что при интраперитонеальном введении ЛД50 грамина для белых мышей составляет - 1334 мг/кг, что характеризует препарат как малотоксичный. Коэффициент кумуляции грамина соответствует - 1,13, что относит его к группе препаратов с выраженной кумуляцией.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Андреева, С.Д. Применение био-инфузина в ветеринарии / С.Д. Андреева, А.А. Ивановский // Успехи современного естествознания. - 2014. - № 12. - С. 543545.
2. Галочкин, В.А. Взаимосвязь нервной, иммунной, эндокринной систем и факторов питания в регуляции резистентности и продуктивности животных / В.А. Галочкин, К.С. Остренко, В.П. Га-
тельной активности. Летальность начинали фиксировать после введения доз: 675 мг/кг (10 %); 1013 мг/кг (20 %) и 1520 мг/кг (50 %). У животных наблюдалось сопорозное состояние, отсутствие аппетита, мочеиспускание, дефекация и смерть (Таблица 3).
Расчет коэффициента кумуляции показал, что его величина соответствует 1,14. Данный результат указывал на выраженный кумулятивный эффект грамина.
лочкина, Л.М. Федорова // Сельскохозяйственная биология. - 2018. - Том 53. - № 4. - С. 673-686.
3. Ивановский, А.А. Грибы и экстракты из тканей органов - основа препа-ратов-иммуномодуляторов / А.А. Ивановский // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 1995. - № 3. - С. 16-18.
4. Каган, Ю.С. Кумуляция критерии и методы ее оценки / Ю.С. Каган. - М -1970. - С. 49-85.
5. Латушкина, Н.А. Исследование химического состава и токсических свойств фитокомплекса, содержащего биологически активные вещества / Н А Ла-тушкина, А.А. Ивановский, Е.Ю. Тимкина // Аграрная наука Евро-Северо-Востока. -2017. - № 4 (59). - С. 58-62.
6. Мустафин, Р.А. К вопросу доклинического изучения мелоксикама и его лекарственных форм в экспериментах на животных / Р.А. Мустафин, Н.М. Насы-буллина, И.А. Газеев, Л.А. Поцелуева // Современные наукоемкие технологии -2010. - № 2. - С.16-19.
7. Пилип, Л.В. Совместное применение фитоэкдистероидов и пробиотиков в свиноводстве: монография / Л.В. Пилип,
Таблица 3 - Влияние грамина на летальность мышей в субхроническом опыте (n=10)
Доза грамина, День введения Летальность животных
мг/кг грамина голов %
133 4 0 0
200 8 0 0
300 12 0 0
450 18 0 0
675 22 1 10
1013 26 2 20
1520 30 5 50
А.А. Ивановский, О.В. Часовских. - Киров: Изд. «ВГСХА», 2019. - 176 с.
8. Сисягина, Е.П. Влияние фитопрепаратов на иммунобиологические параметры телят в постпрофилактический период выращивания / Е.П. Сисягина [и др.] // Ветеринария сельскохозяйственных животных. - 2015. - № 12. - С.- 13-17.
9. Сидоров, К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах введения / К.К. Сидоров // Токсикология новых промышленных веществ. - М.: Изд. «Медицина», 1973. - 475 с.
10. Тимофеев, Н.П. Биологический метод концентрирования экдистероидов в
препаратах серпухи венценосной и их эффект в фитотерапии / Н.П Тимофеев // Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования. - 2018. - № 13. - С. 652-657.
11. Фисенко, В.П. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - Москва. - 2000. - 238 с.
12. Lim, R.R. A method for the wale-cation of cumulation and subchronic median effective doss / R.R. Lim, K.J. Rink, H.J. Hass, E. Soage-Echague // Arch. Int. Pharmacodyn. - 1961. - V. 130. - P. 335353.
ГРАМИН И ЕГО ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА
Ивановский А.А., Тимкина Е.Ю.
Резюме
Цель исследований заключалась в изучении острой и субхронической токсичности препарата грамин на белых мышах. Основой для создания препарата грамин послужил мик-ромицет Drechslera graminea. Опыты по определению острой токсичности препарата грамин проводили на беспородных белых мышах (самцы) массой 18-20 граммов. Препарат вводили животным интраперитонеально, однократно в дозах от 400 до 2400 мг/кг. На каждую дозу использовали по 6 мышей. За состоянием животных наблюдали в течение 14 дней. Определяли дозу, вызывающую гибель 50 % животных (ЛД50), и абсолютно смертельную дозу (ЛД100). ЛД50 вычисляли методом Кербера. Исследование субхронической токсичности гра-мина проводили в течение 30 дней. Препарат вводили 10 мышам ежедневно внутримышечно, в первые 4 дня инъецировали грамин в дозе 0,1 ЛД50, а затем через каждые 4 дня дозу увеличивали в 1,5 раза и в конечном итоге она составляла 1520 мг/кг. Для определения кумулятивных свойств препарата на белых мышах использовали тест «субхронической токсичности». Достоверность полученных результатов учитывалась в соответствии с t-критерием Стьюден-та при p<0,05. В результате установлено, что среднесмертельная доза (ЛД50) грамина для белых мышей составляет 1334 мг/кг, ЛД100 - 2400 мг/кг. Исследования субхронической токсичности грамина показали, что препарат дозы от 133 до 450 мг/кг не вызывает существенных изменений в поведенческих реакциях лабораторных мышей. Выраженный токсигенный эффект начинал проявляться с дозы 675 мг/кг и продолжал нарастать после дальнейшего повышения доз грамина (1013-1520 мг/кг), вызывая при этом летальность, достигающую уровня 50 %. Установлено, что при интраперитонеальном введении ЛД50 грамина для белых мышей соответствует 1334 мг/кг, что позволяет относить препарат к малотоксичным веществам. Коэффициент кумуляции грамина равен 1,14, что соответствует группе препаратов с выраженной кумуляцией.
GRAMIN AND ITS TOXICOLOGICAL ASSESSMENT
Ivanovskiy A.A., Timkina E.Yu.
Summary
The aim of the research was to study the acute and subchronic toxicity of the drug gramine in white mice. The micromycete Drechslera graminea served as the basis for the creation of the gramine preparation. Experiments to determine the acute toxicity of the preparation gramine were carried out on outbred white mice (males) weighing 18-20 grams. The drug was administered to animals intraperitoneally, once in doses from 400 to 2400 mg/kg. 6 mice were used for each dose. The condition of the animals was monitored for 14 days. The dose causing the death of 50 % of the animals (LD50) and the absolutely lethal dose (LD100) were determined. LD50 was calculated by the Kerber method. The study of subchronic toxicity of gramine was carried out for 30 days. The drug was administered to 10 mice intramuscularly daily, in the first 4 days, gramine was injected at a dose of 0.1 LD50, and then every 4 days the dose was increased 1.5 times and finally it was 1520 mg/kg. To determine the cumulative properties of the drug in white mice, a "subchronic toxicity" test was used. The reliability of the results obtained was taken into account in accordance with the Student's t-criterion at P <0.05. As a result, it was found that the average lethal dose (LD 50) of gramine for white mice is 1334 mg/kg, LD 100 - 2400 mg/kg. Studies of the subchronic toxicity of gramine showed that doses of the drug from 133 to 450 mg/kg did not cause significant changes in the behavioral responses of laboratory mice, and a pronounced toxigenic effect began to appear at a dose of 675 mg/kg and continued to increase after a further increase in doses of gramine (10131520 mg/kg), while causing mortality reaching the level of 50 %. It was found that gramine with intraperitoneal administration of the LD50 of gramine for white mice corresponds to 1334 mg/kg, which allows the drug to be classified as a low-toxic substance. The cumulation coefficient of gramine is 1.14, which corresponds to the group of drugs with pronounced cumulation.
DOI 10.31588/2413-4201-1883-245-1-55-60 УДК 619:616-099-02:632
ИЗУЧЕНИЕ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ НА ОРГАНИЗМ БЕЛЫХ КРЫС И КРОЛИКОВ КОМПОЗИЦИИ ЛЕЧЕБНЫХ СРЕДСТВ
Идиятов И.И. - к.б.н., Галяутдинова Г.Г. - к.б.н., Халикова К.Ф. - к.в.н., Ямалова Г.Р. - мл. науч. сотр., Маланьев А.В. - к.б.н.
ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности»
Ключевые слова: композиция, острая токсичность, белые крысы, кролики
Keywords: composition, acute toxicity, white rats, rabbits
Интенсификация промышленности приводит к росту воздействия на окружающую среду различных физических, химических, биологических и других факторов. При этом в кормах и пищевых продуктах появляются токсичные соединения, которые в дальнейшем проникают во внутреннюю среду организма [4].
Центральным органом, нейтрализующим токсические вещества и выводя-
щим их из организма является печень. Являясь самой крупной железой, данный орган выполняет огромное количество различных физиологических функций. Печень способна восстанавливать свои пораженные клетки, путем регенерации и замещения новыми, сохраняя при этом свои основные функции. Однако и эта совершенная система подвержена поражениям [1]. Механизмы ее повреждения многообраз-
