CC BY
22
www.sibac.info
3. Сазонкин В.Н., Уласов В.И., Домский И.А. Оценка антигенности и иммуно-генности вакцин против чумы собак // Реф. журнал Ветеринария. - М., 2006. 6. - С. 30.
4. Distribution of inclusion bodies in tissue from 100 dogs infected with canine distemper virus / T. Kubo, Y. Kagawa, H. Taniyama, A. Hasegawa // Vet. Med. Sc., 2007. 69 (5). - P. 527-529.
5. Grone A., Doherr M.G., Zurbriggen A. Canine distemper virus infection of canine footpad epidermis // Vet. Dermatology. 2004. 15. - P. 159-167.
6. Rudd P.A., Cattaneo R., von Messling V. Canine distemper virus uses both the anterograde and the hematogenous pathway for neuroinvasion // Virology. 2006. 80. - Р. 9361-9370.
7. Vimentin-positive astrocytes in canine distemper—a target for canine distemper virus especially in chronic lesions? / F. Seehusen, E. Orlando, K. Wewetzer, W. Baumgartner // Acta Neuropathol. 2007. 114. - P. 597-608.
8. Wunschmann A., Kremmer E., Baumgartner W. Phonotypical characterization of T and B cell areas in lymphoid tissue of dogs with spontaneous distemper // Vet. Immunology and Immunopathology. 2000. 73. - P. 83-98.
ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ ПРИ ЧУМЕ СОБАК
Алдаяров Нурбек Сайдиллаевич
канд. ветеринар. наук, доц. Кыргызско-Турецкого университета «Манас», Кыргызская Республика, г. Бишкек E-mail: kirgiz. nurbek@gmail.com
Лыхина Людмила Юрьевна
канд. ветеринар. наук, и.о. доц. Кыргызского национального аграрного университета им. К.И. Скрябина, Кыргызская Республика, г. Бишкек E-mail: lykhina_L_67@mail.ru
Марасулов Абдирашит Абдыганиевич
канд. биол. наук, и.о. доц. Кыргызского национального университета им. Ж. Баласагына, Кыргызская Республика, г. Бишкек E-mail: rashid. marasulov@gmail.com
■www.sibac.info
HISTOLOGICAL AND IMMUNOHISTOCHEMICAL STUDY OF LYMPH NODES IN CANINE DISTEMPER
Nurbek Aldaiarov
candidate of Vet. Sciences, Assistant Professor, Kyrgyz-Turkish Manas
University, Kyrgyzstan, Bishkek
Lyudmila Lykhina
candidate of Vet. Sciences, Acting Assistant Professor, of Kyrgyz National Agrarian University named after K.I. Scriabin, Kyrgyzstan, Bishkek
Abdirashit Marasulov
candidate of Biol. Sciences, Acting Associate Professor, Kyrgyz National
University named after J. Balasagin, Kyrgyzstan, Bishkek
АННОТАЦИЯ
С помощью гистологии и отдельных маркеров иммуногисто химии (CD3, CD79acy, MAC387, PCNA, AK10H3) изучено морфофункцио-нальное состояние лимфатических узлов при чуме собак. Отмечены глубокие деструктивные изменения как в корковом, так и в мозговом веществах органа. Пролиферативная активность иммунных клеток фолликулярной и паракортикальной зон низкая, обнаруживались множественные клетки в состоянии апоптоза и мелкие апоптосомы. Вирусосодержащие клетки наблюдались в массовом виде В-зоне, в виде диффузной инфильтрации в Т-зоне коркового вещества и мозговом веществе.
ABSTRACT
The study was carried out by using histological method and immune-histochemical markers (CD3, CD79acy, MAC387, PCNA and AK10H3) studied morphofunctional state of lymph nodes in canine distemper. There were determined deep destructive alterations in cortex and medulla of organs. Proliferative activities of immune cells in follicular and paracortical zones were low and observed significant number of apoptotic cells and small apoptosomes. Massive virus inclusion cells were revealed in B-zone, and diffuse infiltration in T-zone of cortex and medulla of lymph node.
Ключевые слова: лимфатические узлы; морфофункциональное состояние; маркеры иммуногистохимии; чума собак.
www.sibac.info
Keywords: lymph nodes; morphofunctional state; immunohistochemistry markers; canine distemper.
Введение. Чума плотоядных является одной из коварных вирусных болезней собак, которая способна заражать большое количество диких и домашних животных [2, с. 277].
Вирус чумы плотоядных (ВЧП) - пантропный, не чувствительный к различным раздражителям вирус c одиночно-скрученной РНКой, относящиеся к роду морбилливирусов и семейству парамиксо-вирусов [6, с. 421; 9, с. 83]. Морбилливирусы, включая вирусов кори человека, чумы плотоядных, крупного рогатого скота и несколько других вирусов этого семейства, являются причиной многих опасных болезней человека и животных.
Одним из характерных свойств вируса чумы собак является эпите-лиотропизм, лимфотропизм и иммуносупрессорная природа [8, с. 5842], и благодаря такой способности вирус заражает практически все органы систем, тем самым вызывая мультисистемное поражение организма собаки.
K. Hirama и другие (2003) изучали цитотоксические Т-лимфоциты, специфические для протеина гемагглютинина ВЧП у собак. По мнению отдельных авторов [3, с. 450; 5, с. 10; 7, с. 11390; 8, с. 5848], специфический вход вируса вовнутрь лимфоцитов через универсальный рецептор морбилливирусов SLAM (signaling lymphocytic activation molecule, CD 150) является определяющим фактором иммуносупрессии.
Лимфатические узлы расположены в разных участках организма на границе внутренней и внешней среды на путях возможного внедрения в организм антигенов [1, с. 5].
Суть данной научной работы - анализ морфофункционального состояния лимфатических узлов при заражении вирусом чумы собак с применением гистологических и иммуногистохимических методов микроскопирования.
Объекты и методы исследования. Данная работа выполнялась в Кыргызском национальном аграрном университете им. К.И. Скрябина (Кыргызская Республика), Институте ветеринарной патологии высшей ветеринарной школы города Ганновера (ФРГ, 2004) и в Институте ветеринарной патологии Цюрихского университета (Швейцария, 2007-2008).
Тканевые пробы от лимфатических узлов были получены от 58 собак, больных чумой, в течение 2004-2007 года в г. Бишкеке и зафиксированы в 10 %-ном водном растворе нейтрального формалина. Обезвоживание кусочков производилось в специальной машине в вакууме.
Серийные срезы готовились на полуавтоматическом микротоме новой модификаций толщиной 2-4 мкм.
Для общего обзора гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Для иммуногистохимии восстановление антигена производили с помощью автоклава Паскаль (20 минут, +980С и 2 минуты при +1250С под давлением) при использовании антиген восстанавливающих буферных растворов PH 9.0 (EDTA или основной буферный раствор PH 9.0) и цитратный буфер (PH 6.0) в соответствии с инструкцией производителя. Был использован SABC (Streptavidin and Biotinylated horseradish peroxidase macro-molecular Complex) метод иммуногистохимии.
Для выявления Т-лимфоцитов использовали антитело Polyclonal Rabbit Anti-Human T cell, CD 3; для выявления В-лимфоцитов - антитело Monoclonal Mouse Anti-Human B cell, CD 79á cy; для выявления макрофагов - антитело Monoclonal Mouse Anti-Human Myeloid/Histocyte Antigen, Clon MAC 387; для выявления пролиферацию клеток -антитело Monoclonal Mouse Anti-Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA); для выявления ВЧП использовали антитело - mono AK 10H3.
Окрашивание производили вручную в специальной влажной камере. Срезы дополнительно окрашены гематоксилином Майера. При положительной реакции клетки были окрашены в красный или коричневый цвета.
Результаты исследования. Микроскопический, основные патологические альтерации отмечаются в Т- и В-зонах коркового вещества органа. Оно сильно атрофировано, картина между фолликулярной и паракортикальной зонами стерты. Обе зоны истощены и заселены диффузной лимфоидной тканью, где встречаются большое количество клеток в состоянии апоптоза и мелкие апоптосомы, которые в основном хорошо просматриваются в фолликулярной зоне (рис. 1А). Пролиферативная активность клеток лимфоидной ткани по всей паренхиме лимфатического узла низкая (рис. 1Б). В обеих зонах диффузно и компактно отмечаются активизированные макрофаги (рис. 1В). В отдельных участках коркового вещества лимфатического узла наблюдаются некротизированные массы в местах расположений лимфоидных фолликул. На иммуногистохимический маркер ВЧП дают позитивную реакцию в массовом порядке клетки фолликулярной зоны коркового вещества (рис. 1Г), а в паракортикальной зоне и в мозговом веществе ВЧП позитивные клетки расположены диффузно. Т- и В-лимфоциты по всей паренхиме располагаются диффузно или малыми группами (рис. 1Д, Е). Из-за истощений лимфоидной ткани в паренхиме органа хорошо просматривается эндоэпителиальный остов органа.
www.sibac.info
• ! .V • V Ф&фи*- , -.узу.- ■> Б — ; V \. - . * V . '' • •' в . "
% г '(ЯП. - - А Е
Рисунок 1. Парафиновые срезы лимфатического узла собаки зараженной ВЧП
Микроструктурные изменения паренхимы лимфатического узла:. А - фолликулярная зона коркового вещества с рыхлой лимфоидной тканью. Гем. и эозин. х250; Б - низкая пролиферативная активность лимфоидной ткани органа. РСМЛ. х125; В - диффузная инфильтрация макрофагами коркового вещества органа. МЛС387. х62,5; Г - ВЧП позитивные клетки коркового вещества органа. ЛК 10Н3. х62,5; Д -истощение СБ3 позитивных клеток в паракортикальной зона коркового вещества органа. СБ3. х125; Е - В-клетки в фолликулярной зоне коркового вещества органа. СБ79асу. Х125.
В заключение анализируя данные собственных исследований и сравнивая их с данными литературных источников, можно сказать, что чума плотоядных, являясь мультисистемной болезнью, имеет очень сложный патогенез. Система местного иммунитета и основные периферические лимфоидные органы не справляются с этой болезнью за счет уникальной способности данного вируса. Лимфоидные клетки при встрече с вирусом заражаются ими и они, генетически изменяясь, не выполняют свои непосредственные функции, циркулируя по кровеносным и лимфатическим сосудам, поражают остальные периферические органы иммуногенеза. Развивается прогрессирующий иммунодефицит организма. Тому свидетельствуют морфологически количественные и качественные изменения лимфоидной ткани в лимфатических узлах.
Список литературы:
1. Сапин М.Р. Лимфатический узел как орган иммунной системы / В кн.: Современный проблемы регенерации. - Йошкар-Ола. 1982. - С. 5-13.
2. Appel M.J.G. et al. Canine distemper epizootic in lions, tigers and leopards in North America // J. Vet. Diag. Inves., 1994. 6. - P. 277-288.
3. Erlenhoefer C. et al. CD150 (SLAM) is a receptor for measles virus but is not involved in viral contact-mediated proliferation inhibition // J. Virology, 2001. 75. - P. 4499-4505.
4. Hirama K. et al. Cytotoxic T-lymphocyte activity specific for hemagglutinin (H) protein of canine distemper virus in dogs //J. Vet. Med. Sci., 2003. 65(1). -P. 109-111.
5. Hsu E.C. et al. CDw150 (SLAM) is a receptor for a lymphotropic strain of measles virus and may account for the immunosuppressive properties of this virus // J. Virology, 2001. - P. 279. 9-12.
6. Pringle C.R. Virus taxonomy // J. Arch. Virol., 1999. 142 (2). - P. 421-429.
7. Takimoto T. et al. Role of matrix and fusion proteins in budding of Sendai virus // J. Virology, 2001. 75. - P. 11384-11391.
8. Tatsuo H., Ono N., Yanagi Y. Morbiliviruses use signaling lymphocyte activation molecules (CD150) as cellular receptors // J. Virology, 2001. 75 (13). -P. 5842-5850.
9. Wunschmann A., Kremmer E., Baumgartner W. Phonotypical characterization of T and B cell areas in lymphoid tissue of dogs with spontaneous distemper // J. Vet. Immunology and Immunopathology, 2000. 73. - P. 83-98.
