CC BY
68
УДК 619:616.995.122:636:611.018
ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ БАЗАЛЬНЫХ МЕМБРАН ОРГАНОВ И ТКАНЕЙ ГЕЛЬМИНТОВ ДО И ПОСЛЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ АНТИГЕЛЬМИНТИКАМИ
Л.В. НАЧЕВА доктор биологических наук О.И. БИБИК кандидат биологических наук
Кемеровская государственная медицинская академия
Резюме
Изучена морфология базальной мембраны органов и тканей трематод до и после воздействия антигельминтиками. После лечения мембрана разрушается и в организм паразита проникает препарат.
Введение
Более 160 лет многими учеными изучалась роль базальных мембран, так как интерес к ним обусловлен разрушениями при самых различных патологических процессах, независимо от того вызваны они микробиологическими объектами или гельминтами. Известно, что в состав базальных мембран входит большое количество неколлагеновых белков, так называемых «структурных гликопротеидов». Из них наиболее изученными в настоящее время являются фибронектин, энтактин и ламинин. Большое значение изучению фибронектинов придают многие ученые в связи с тем, что они обладают адгезивными свойствами, обеспечивая прикрепление клеток, способствуя их направленности при перемещениях (2).
Предыдущие наши исследования показали, что в базальных мембранах гельминтов находится адгезивный белок энтактин - сульфатированный гликопротеин, синтезируемый клетками эндодермального происхождения. Доказательством этого было положи-
тельное окрашивание альциановым синим базальной мембраны тегумента и кишечного эпителия трематод, содержащих сульфатированные глико-заминогликаны. Обнаружение гиалу-роновой кислоты в базальной мембране указывает на роль базальной мембраны как полупроницаемого фильтра при транспорте веществ из эндостаций хозяина в организм паразита, на пути следования которых находятся три основных преграды: наружная цито-плазматическая часть тегумента паразита, базальная мембрана, внутренняя часть тегумента, представленная ци-тонами, погруженными в кортикальный слой паренхимы (1). Базальная мембрана в системе «паразит-хозяин» осуществляет взаимодействие между клетками двух разноименных организмов, с одной стороны - базальная мембрана тегумента паразита, с другой - базальная мембрана протоков эндостаций хозяина, которые образуются путем распознавания и адгезии с помощью активных лигандных участков. Установлено, что в основе функционирования любого белка лежит
его способность к избирательному взаимодействию с каким-либо другим веществом - лигандом. Оно может быть как низкомолекулярным, так и макромолекулярным. Лиганд присоединяется к определенному участку на поверхности белковой молекулы -центру связывания (активному центру). Поэтому базальная мембрана в системе «паразит-хозяин» осуществляет взаимодействие между клетками двух разноименных организмов с одной стороны базальной мембраной эпителия протоков эндостаций хозяина, а с другой стороны - базальной мембраной тегумента и выстилкой ротовой присоски паразита, которое образуется путем распознавания и адгезии при участии донорных атомов ли-гандов. Это доказывается однотипностью окрашивания при гистохимических реакциях базальных мембран паразита и хозяина, как при паразитиро-вании описторхов, фасциол, дикроце-лий, так и эуритрем. Базальные мембраны в процессе формирования паразитарной системы, как считают авторы, играют ведущую роль в создании динамической стабильности между половозрелым организмом паразита и средой первого порядка - различными эндостациями млекопитающих. Но, несмотря на это, значимость базаль-ных мембран в формировании паразитарной системы на уровне «марита -ткань хозяина» не изучалась достаточно и мало описана в литературе, а информации о базальных мембранах после воздействия антипаразитарными препаратами вообще отсутствует.
Целью настоящей работы было изучение с помощью гистологических и гистохимических методов повреждений базальных мембран в органах и
тканях паразита после воздействия ан-тигельминтиками.
Материалы и методы
Материалом для исследований служили Opisthorchis felineus, Eшy-trema pancreaticum, Fasciola hepatica, Dicrocoelium lanceatum. Из антигель-минтных препаратов были использованы политрем (0,2 г/кг), мебендазол (0,2 г/кг), празиквантел (0,2 г/кг), ази-нокс (0,1 г/кг), фаскоцид (0,01 г/кг), тегалид (0,03 г/кг), антитрем (0,2 г/кг). Трематоды были получены при убое от экспериментальных животных, леченных антигельминтиками. Материал фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине, спирт-формалине по Шафферу (9:1), жидкости Карнуа. Гельминтов обрабатывали по общепринятой гистологической методике и заливали в парафин. Срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином Карацци-эозином, по Романовскому-Гимза, трехцветным по Маллори, по Ван-Гизону. Из гистохимических методов были использованы окраска бромфеноловым синим по Бонхему на суммарные белки; Шик-реакция на гликоген и углеводный компонент; реакция с толуидиновым синим при рН = 4,2 для выявления гиалуроновой кислоты, а при рН = 2,2-3,0 - для определения гликозаминогликанов и мета-хроматического эффекта; реакция с Суданом черным «В» для обнаружения липоидного компонента и глико-липидов. Контрольный группой служили гельминты, взятые до лечения животных во время убоя в разных хозяйствах.
Результаты и обсуждение
Исследования, проведенные нами до воздействия антигельминтиками
на паразитов показали, что базальные мембраны тегумента и кишечного эпителия трематод имеют четыре основных биохимических компонента: коллаген (интенсивное окрашивание базальных мембран в голубой цвет по Маллори); протеогликаны (темно-синее окрашивание базальных мембран бромфеноловым синим по Бонхе-гу); гликозаминогликаны, включая сульфатированные мукополисахариды и гиалуроновую кислоту (положительная реакция с толуидиновым и альциановым синими при различных низких значениях рН, эффект мета-хромазии); липоидный компонент и гликолипиды (черное окрашивание Суданом черным «В»).
Нами были исследованы ткани гельминтов и гистохимическая реактивность их базальных мембран. Установлено, что базальные мембраны представляют собой мультифункцио-нальную систему, которая является экстрацеллюлярным образованием, связывающим все клетки организма паразита. Коллагеновые волокна в ба-зальной мембране тегумента и кишечного эпителия трематод имеют беспорядочное взаиморасположение, что необходимо для процессов механической фильтрации и для обеспечения упругости и тканевой сопротивляемости организма паразита.
После воздействия антигельмин-тиками происходит нарушение структуры тегумента и кишечного эпителия. Базальная мембрана на первых этапах воздействия препарата набухает, происходит увеличение ее объема и прокрашивание гистохимическими красителями. Ослабляется цвет окраски базальной мембраны бромфеноло-вым синим, т.е. бромфенолофилия не выражена, при этом сравнение дейст-
вия антигельминтиков показало, что самая слабая окраска была при действии гексахлорпараксилола и антитрема. Это показывает деструкцию белков базальных мембран. При использовании реактива Шиффа (Шик-реакция) было обнаружено резкое снижение окрашивания базальных мембран как тегумента трематод, так и кишечного эпителия. В место интенсивно малинового цвета базальные мембраны становятся бледно-розовыми. Это значит, что углеводный компонент падает до нуля и гликопро-теиды, которые участвуют в норме в процессах взаимодействия, отсутствуют. При сравнении действия антигельминтиков относительно реактивности тканей было установлено, что наибольшие изменения реакции ба-зальных мембран наблюдаются после лечения фаскоцидом, тегалидом и ан-титремом. При окрашивании толуиди-новым синим было обнаружено отсутствие метахромазии и тотальное прокрашивание в синий цвет. Это значит, что нарушаются тинкториальные свойства, и базальные мембраны становятся проницаемыми, особенно после лечения гексахлорэтаном, мебен-дазолом, тегалидом, антитремом и фаскоцидом. Окраска с Суданом черным «В» была отрицательной в ба-зальных мембранах, что доказывает ее морфофункциональную дегенерацию
Литература
1. Начева Л.В., Штейнпрейс Т.А. // Матер. конф. «Проблемы медицины и биологии». - Кемерово, 1998. - С. 92-93.
2. Хайнс Р.О. // В мире науки. -М.: Изд-во «Мир», 1986. - № 8. - С. 14-25.
The histochemical research of the basal membranes in the organs and tissues of helminthes before and after treatment by anthelmintics
L.V. Nacheva, O.I. Bibik
Summary
The morphology of basal membrane in the organs and tissues of trematodes before and after treatment by anthelmin-tics is investigated. After treatment the membrane destroyed and the anthelmin-tics penetrate into organism of the parasite.
